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文献检索:
  • 脱细胞基质骨与成骨细胞和血管内皮细胞的生物相容性 免费阅读 收费下载
  • 目的:采用自行研制的脱细胞基质猪肋骨作为支架材料,复合兔成骨细胞和血管内皮细胞,对其生物相容性、抗原性和细胞毒性进行观察。 方法:实验于2003-04/10在四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室完成。用物理、化学方法制备脱细胞基质猪肋骨。体外培养兔成骨细胞、血管内皮细胞。而后将试验分成3组进行。①成骨细胞组:将成骨细胞与脱细胞基质骨材料复合。②血管内皮细胞组:血管内皮细胞与脱细胞基质骨材料复合。③成骨细胞+血管内皮细胞组:成骨细胞+血管内皮细胞与脱细胞基质骨材料复合。④对照组:单纯成骨细胞。于培养1,3,5,7d分别用倒置相差显微镜、组织学切片和扫描电镜观察脱细胞基质异种骨的生物相容性、抗原性;用流式细胞仪检测材料对细胞周期和DNA含量的影响,了解材料对细胞有无毒性的影响。 结果:①脱细胞基质骨扫描电镜观察:脱细胞基质骨的骨小梁结构完整,骨陷窝空虚,未见细胞成分残留。②各组细胞的生长、分化和增殖情况倒置相差显微镜观察:3组细胞与脱细胞基质骨材料复合培养12h后,细胞在各组材料表面和孔隙内均可黏附和生长。③组织学观察:MASSON染色显示3组细胞在材料表面和孔隙内大量增殖,并分泌细胞外基质。以成骨细胞+血管内皮细胞组材料表面黏附的细胞数量最多。组织学切片染色显示,各组细胞沿材料边缘紧密附着,细胞与材料的组织相容性良好。④各组细胞黏附、生长、增殖和基质分泌情况扫描电镜观察:3组细胞与材料复合培养5d后,细胞紧密黏附在材料表面。成骨细胞呈梭形或多角形,相邻细胞间有突起相互连接。血管内皮细胞呈椭圆形,有角状突起,与材料附着紧密。其中,成骨细胞+血管内皮细胞组材料表面黏附大量细胞,并有较多胶原形成。血管内皮细胞组材料表面胶原形成很少。⑤细胞周期和DNA含量:成骨细胞+血管内皮细胞组1d,3dDNA合成期高于单独细胞组,无异倍体细胞。 结论:脱细胞基质骨具有良好的生物相容性、极低的抗原性、无细胞毒性和致瘤性。成骨细胞与血管内皮细胞联合培养细胞在脱细胞基质异种骨中有很强的增殖潜力。
  • FasL^+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应。 方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行。①分离制备猪软骨细胞。②制备FasL^+软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞。经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞。再经过G418筛选获得FasL^+的软骨细胞克隆,扩增培养。③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL^+的软骨细胞诱导Fas+的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率。同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照。④取FasL^+的软骨细胞与可注射性生物材料PluronicF127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下。在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应。 结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%。②FasL^+的软骨细胞具有明显诱导Fas^+细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,最大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1)。③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象。④免疫组织化学染色显示FasL^+的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致。⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少。而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞。 结论:成功构建FasL^+软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。
  • 微重力三维动态诱导骨髓间充质干细胞复合可注射型支架材料Pluronic F-127修复关节软骨缺损 免费阅读 收费下载
  • 目的:利用三维动态诱导的同种异体非软骨来源种植细胞,复合可注射型支架材料聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物Pluronic F-127修复关节软骨缺损。 方法:实验于2005-06/2006-03在哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心完成。①选取2个月龄新西兰大白兔27只,3只用于骨髓间充质干细胞的分离,剩余24只随机数字表法分为诱导细胞复合支架组、单纯支架组、空白对照组,8只(16膝)/组。可注射型支架材料Pluronic F-127为白色粉沫状,无味,其水溶液在低温4℃呈液态,37℃形成固态凝胶(sigma公司,产品批号P2443)。②兔麻醉后穿刺抽取胫骨骨髓,分离培养骨髓间充质干细胞,取3代细胞进行实验。③收集细胞,离心成团,分4组不同诱导条件。三维动态培养组:10g/L藻酸钠溶液洗涤并重新悬浮细胞,细胞浓度为5×1010L-1,滴入200mmol/L氯化钙溶液,立即形成藻酸钙凝胶微球,细胞被悬浮固定于球内部,静止5min,取出凝胶微球,置于旋转式细胞培养系统,微重力条件下动态诱导。二维动态培养组:细胞直接接种于旋转式细胞培养系统,微重力条件下动态诱导。三维静态培养组:藻酸钙凝胶微球悬浮细胞接种于培养瓶静态培养。二维静态培养组:细胞直接接种于平面培养瓶静态培养。各组细胞诱导培养2周,制备切片,分别行甲苯胺蓝染色及Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。柠檬酸钠溶液溶解藻酸钙凝胶微球,测定各组胶原和蛋白多糖含量。④各组兔的双膝均制备膝关节全层软骨缺损模型。诱导细胞复合支架组选取诱导分化最佳的骨髓间充质干细胞与25%可注射型支架材料Pluronic F-127在低温下混匀,重悬,细胞终浓度为5×10^10L-1,注入股骨内髁软骨缺损区。单纯支架组只将25%Pluronic F-127注入股骨内髁软骨缺损区。空白对照组关节软骨缺损区不作任何处理。各组分别于术后4,8,12,24周取材,大体及镜下观察关节软骨表面缺损修复情况,同时进行组织学评分。 结果:24只兔全部进入结果分析。①骨髓间充质干细胞体外诱导培养及鉴定结果:藻酸钠接触钙离子迅速形成透明凝胶微球,有光泽,凝胶微球中的细胞呈球形,核仁清晰,与正常软骨细胞立体结构相似。培养过程中各组细胞甲苯胺兰染色均呈阳性,并表达Ⅱ型胶原,但无明显Ⅰ型胶原表达。②不同体外诱导分化条件下细胞生化指标的表达:三维、二维动态培养组的胶原和蛋白多糖含量均明显高于三维、二维静态培养组,且以三维动态培养组效果最佳[(0.078±0.002),(0.048±0.002),(0.035±0.001)A,P〈0.05;(0.111±0.003),(0.069±0.003),(0.058±0.002)A,P〈0.05]。③关节软骨缺损修复情况:诱导细胞复合支架组术后12周修复软骨表面光滑,质地坚硬,为透明软骨组织结构,与周围软骨结合紧密,至24周仍保持透明软骨形态;而单纯支架组、空白对照组均未被修复。术后4,8,12,24周,诱导细胞复合支架组关节软骨组织学评分均优于单纯支架组、空白对照组(P〈0.05),且术后时间越长,修复效果越佳。 结论:微重力条件下三维动态诱导骨髓间充质干细胞可提高分化质量,获得的种植细胞复合可注射型支架材料修复关节软骨缺损能够取得稳定的长期修复效果。
  • 急性心肌梗死大鼠梗死区血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1αmRNA表达及人参皂苷Rg1的干预效应 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察人参皂苷Rg1对急性心肌梗死后血管新生及梗死区血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1αmRNA表达的影响及其机制。 方法:实验于2005-10/2006-01在中国医科大学附属第一医院循环内科实验室完成。实验分组:健康雄性Wistar大鼠104只,体质量180~220g,随机抽签法分为假手术组8只,对照组、Rg1低剂量治疗组和Rg1高剂量治疗组各32只。实验方法:建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,假手术组开胸不结扎冠状动脉,3d后处死取材;对照组、Rg1低剂量治疗组和Rg1高剂量治疗组分别于术后即刻及术后每天腹腔注射生理盐水1mL、人参皂苷Rg11mg/kg和5mg/kg,术后3,7,10,14d分别取材,每组8只。实验评估:测定血清心肌酶、心肌梗死面积、梗死区微血管密度,逆转录-聚合酶链反应检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1α的mRNA表达。 结果:纳入大鼠104只,均进入结果分析。①人参皂苷Rg1对大鼠心肌酶及心肌梗死面积的影响:Rg1低剂量治疗组、Rg1高剂量治疗组心肌酶较对照组明显降低[(62.25±10.79),(57.64±9.36),(78.63±11.34)μg/L;P〈0.05],心肌梗死面积亦明显降低[14d:(12.15±3.68)%,(10.10±3.12)%,(13.94±3.54)%;P〈0.05]。②人参皂苷Rg1对大鼠心肌梗死区微血管密度的影响:各组梗死区血管生成数量随着时间的延长呈持续增加的趋势,与对照组比较,差异有显著性意义[Rg1低剂量治疗组14d:(17.29±3.21)个/视野;Rg1高剂量治疗组14d:(23.27±3.42)个/视野;对照组14d:(9.36±3.54)个/视野;P〈0.01]。③大鼠心肌梗死区血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1αmRNA的表达:心肌梗死后血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1αmRNA表达随缺血时间的延长有增高趋势,Rg1低剂量治疗组与Rg1高剂量治疗组明显升高,14d时血管内皮生长因子的增长出现停止或下降[Rg1低剂量治疗组14d:(1.1637±0.1786);Rg1高剂量治疗组14d:(1.7230±0.3102)];而缺氧诱导因子1α继续升高[Rg1低剂量治疗组14d:(1.7263±0.3417);Rg1高剂量治疗组14d:(2.7725±0.3219)]。 结论:严重缺血可刺激心肌组织产生大量的血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1α,人参皂苷Rg1增加其表达进而刺激心肌梗死区的血管生成,减轻缺血对心肌的损伤。
  • 人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与白细胞介素1β的相关性 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与炎症因子白细胞介素1β的关系。 方法:实验于2005-05/2006-08在解放军第三○五医院老年病中心实验室完成。人冠状动脉平滑肌实验用5~7代的细胞,按2.5×108L-1密度接种于25cm2的培养瓶中,24h后换液,生长接近80%融合时进行如下处理:①20μg/L质量浓度白细胞介素1β培养0,2,4,8,24,36h后收集上清夜和细胞。②不同质量浓度(0,5,20,40μg/L)白细胞介素1β处理6h后收集上清液和细胞。采用细胞总RNATRIzol试剂提取RNA,在紫外分光光度计确定总RNA的浓度和纯度,并在12g/L的琼脂糖凝胶中电泳,凝胶成像分析RNA的质量。应用实时荧光定量聚合酶链反应的方法检测细胞内基质金属蛋白酶3基因的表达量。 结果:①细胞总RNA质量及纯度:每份样品取4μL稀释至400μL测定其A260nm/A280nm吸光度比值均在1.8~2.0之间,说明所提RNA纯度较高;电泳图片上可见RNA清晰的18S和28S的条带,无弥散,说明RNA质量较好。②目的基因的表达量:同剂量白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量在2h时开始发生上调,8h达高峰,而后开始下降;在不同剂量白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量在实验剂量范围内随着白细胞介素1β的剂量加大呈上升趋势(r=0.904,P=0.000),20μg/L和40μg/L白细胞介素1β作用下,基质金属蛋白酶3基因的表达量差异无显著性(P=0.154),其余各剂量间基质金属蛋白酶3基因的表达量差异均有显著性(P〈0.05)。 结论:炎症因子白细胞介素1β能促进冠状动脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物基质金属蛋白酶3的表达,可能是炎症在急性冠状动脉综合征发生发展中的作用机制之一。
  • 家兔动脉成形术后血管内膜增殖与普伐他汀联合阿司匹林的干预效应 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察普伐他汀、阿司匹林联用对家兔颈动脉血管成形术后内膜增殖进展的影响及其作用机制。 方法:实验于2002-03/12在北京中医药大学教育部中医内科学重点学科实验室完成。雄性日本大耳白兔30只,体质量1.8~2.0kg,动物适应性喂养1周后随机数字表法分为正常对照组(n=9)、假手术组(n=6)、模型组(n=9)、治疗组(n=6)。模型组和治疗组动物氯胺酮、速眠新混合肌注麻醉,沿气管正中切开皮肤,剥离颈总动脉,给予电刺激。术后第2天开始饲喂高脂饲料(胆固醇:0.7%,猪油:3%,普通饲料96.3%);正常对照组无任何干预措施;假手术组仅剥离颈总动脉,不做电刺激,喂高脂饲料;动物连续喂养8周后超声评价颈总动脉,根据B超选择颈总动脉有斑块或血流明显改变者作颈总动脉球囊扩张术。正常对照组、模型组、假手术组喂普通饲料,治疗组喂普伐他汀与阿司匹林含药饲料(普伐他汀5.046mg/kg,阿司匹林2.268g/kg),4周后测血脂和C-反应蛋白浓度、血清一氧化氮及转化生长因子β水平,观察颈动脉组织病理形态学改变,半定量分析增生内膜中胶原含量的变化,免疫组织化学方法分析增生内膜中巨噬细胞和平滑肌细胞阳性百分率。 结果:纳入大耳白兔30只,正常对照组中途死亡1只,死因为牙齿畸型影响进食;模型组1只因电刺激8周时超声评价颈动脉未形成斑块及血流无明显改变而剔出实验,进入分析28只。与模型组比,普伐他汀与阿司匹林联用4周后,治疗组胆固醇及三酰甘油水平明显下降[(4.12±2.30),(0.74±0.17)mmol/L;(0.47±0.27),(0.39±0.14)mmol/L;P〈0.05],血清C-反应蛋白水平和转化生长因子β水平均降低[(0.86±0.27),(0.57±0.30)mg/L;(3.45±0.77),(3.23±0.34)ng/L;P〈0.05],一氧化氮水平升高[(41.79±35.78),(90.14±32.54)mmol/L;P〈0.05],动脉内膜增殖程度明显减轻,管腔狭窄率降低,内中膜厚度及内中膜面积比降低[(71.91±14.90)%,(47.20±18.74)%;(0.41±0.17),(0.26±0.04)mm;1.66±0.63,0.78±0.34;P均〈0.05],动脉内膜胶原含量减少(30.92±10.05,21.93±5.81,P〈0.01),动脉内膜巨噬细胞阳性百分率降低[(13.94±4.91)%,(7.29±7.28)%,P〈0.05],平滑肌细胞含量无明显差异(38.37±5.67,35.79±10.68,P〉0.05)。 结论:普伐他汀与阿司匹林联用具有抑制内膜增生和减少新生内膜胶原含量的作用,其机制与两药抑制炎症反应、保护内皮功能及抑制细胞外基质生成等有关。
  • 透明质酸钠联合转化生长因子β1关节腔注射对兔膝骨关节软骨的保护效应 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察联合应用转化生长因子β1和透明质酸钠对骨关节炎的治疗作用及其对关节软骨细胞基质金属蛋白酶3表达的影响。 方法:实验于2006-03/08在东南大学临床医学院中心实验室完成。32只成年健康新西兰大白兔随机分为4组,模型组、透明质酸钠组、转化生长因子β1组、联合用药组,每组8只。参照Hulth法建立骨关节炎模型。按不同分组分别给予造模侧膝关节腔注射生理盐水、透明质酸钠、转化生长因子β1(50ng)及透明质酸钠和转化生长因子β1(含50ng转化生长因子β1)混合液各0.3mL,1次/周,共注射5周。于第16周麻醉状态处死动物,观察膝关节软骨退行性变情况,按Mankin评分标准评分并对软骨标本进行分级;并通过免疫组织化学检测关节软骨内基质金属蛋白酶3表达的变化。 结果:32只白兔全部进入结果分析。①关节软骨组织形态学观察:透明质酸钠组、转化生长因子β1组、联合用药组和模型组各8例标本平均Mankin评分分别为10.38,10.13,6.50,12.38;统计分析表明:转化生长因子β1组、透明质酸钠组和联合用药组可降低软骨组织Mankin评分(P〈0.01),其中以联合用药时Mankin评分降低最明显(P〈0.05)。②软骨细胞中基质金属蛋白酶3的表达:转化生长因子β1组、联合用药组软骨细胞基质金属蛋白酶3阳性百分数低于模型组[(44.50±4.92)%,(26.38±4.78)%,(62.13±4.52)%,t=7.457,15.375,P〈0.05),而透明质酸钠组软骨基质金属蛋白酶3表达阳性细胞数[(61.00±5.10)%]与模型组差异无显著性(P〉0.05)。 结论:关节腔内单独应用转化生长因子β1或与透明质酸钠联合应用可使基质金属蛋白酶3阳性表达的软骨细胞减少,表明可不同程度的减轻及延缓骨关节炎的形成和发展,以两者合用时效果最佳。
  • 人成纤维细胞生长因子7的基因克隆和蛋白鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建人成纤维细胞生长因子7的重组原核表达质粒pGEX-4T-3-FGF7,并诱导其基因在大肠杆菌DH5α中大量表达,纯化蛋白并检验生物学活性。 方法:实验于2006-12在本实验室完成。采用逆转录-聚合酶链反应技术,从人皮肤成纤维细胞内扩增编码人成纤维细胞生长因子7的cDNA序列,以DNA重组技术将获得的目的基因片段连接至原核表达载体pGEX-4T-3上,经抗生素筛选挑取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序。同时应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。超滤纯化蛋白后以四甲基偶氮唑盐法测定其在不同浓度作用下对人表皮角化细胞系生长的影响。 结果:克隆出的成纤维细胞生长因子7基因的cDNA包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有成纤维细胞生长因子7基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3-hFGF7在DH5α细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,成纤维细胞生长因子7基因的表达量增加,重组人成纤维细胞生长因子7蛋白主要存在于包涵体中。在所测浓度范围内该蛋白可以剂量依赖模式促进人表皮角化细胞系细胞在体外分裂增殖。 结论:人成纤维细胞生长因子7基因可以在原核细胞中获得表达并具有促角质细胞增殖的生物活性,为深入研究该蛋白在皮肤创伤愈合中的具体作用奠定了基础。
  • 髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠脑组织的表达特征 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织区域的表达特点。 方法:实验于2005-08/2006-04在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所进行。将80只成年健康雄性Wistar大鼠,采用双盲法随机分为正常对照组8只、假手术组8只、缺血再灌注组64只,缺血再灌注组分为2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d8个时间点,每个时间点8只,其中4只用于Nogo-A检测,另外4只用于胰岛素样神经生长因子受体的检测。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注动物模型,假手术组不插尼龙线,正常对照组不做任何处理。采用免疫组织化学方法检测脑组织Nogo-A与胰岛素样神经生长因子受体在神经细胞中的表达。 结果:80只大鼠均进入结果分析。①Nogo-A蛋白表达:正常对照组及假手术组皮质、海马及纹状体区凋亡细胞呈基础表达。缺血再灌注6~12h皮质区及纹状体区Nogo-A表达达高峰,海马区表达明显增加。缺血再灌注24h均开始下降。缺血再灌注48h~3d皮质区及纹状体区均二次达高峰,海马区表达恒定。缺血再灌注7~14d均降至基础水平。缺血再灌注各组Nogo-A蛋白表达均高于正常对照组及假手术组(P〈0.05)。②胰岛素样神经生长因子受体蛋白表达:正常对照组及假手术组在皮质、海马及纹状体区阳性细胞呈基础表达。缺血再灌注24h达高峰,48h恒定表达,3~14d仍维持高值表达。缺血再灌注各组胰岛素样神经生长因子受体蛋白表达均高于正常对照组及假手术组(P〈0.05)。 结论:脑缺血再灌注损伤后,大鼠脑海马、皮质、纹状体等区域Nogo-A与胰岛素样神经生长因子受体表达均增加。胰岛素样生长因子受体表达增加与损伤程度呈正相关,脑轻度损伤时胰岛素样生长因子受体表达仅限于大脑皮质区,重度损伤时弥漫整个海马及纹状体区。
  • 碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脑血肿周围组织和海马bax及bcl-2基因表达的调节 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脑出血后出血灶周围脑组织和出血侧海马bax、bcl-2基因表达的影响,探讨神经营养因子对神经细胞调亡的调控。 方法:实验于2006-01/10在广西医科大学医学科学实验中心完成。①取成年清洁级Wistar大鼠72只,雌雄各半,体质量250g左右。②采用脑内囊注射胶原酶建立大鼠脑出血模型,动物于苏醒后按Bederson法进行神经病学评分,评分〉3分后入选本实验,入选72只大鼠随机抽签法分为3组,每组24只。碱性成纤维细胞生长因子组按8μg/kg剂量肌肉注射,1次/d;生理盐水组肌肉注射等剂量的生理盐水,1次/d;模型组不作任何干预。③每组分别于干预后1,3,7d随机抽取8只大鼠,麻醉状态下取出血灶周围脑组织和出血侧海马,采用半定量反转录-聚合酶链反应检测调亡调控基因bax mRNA,bcl-2mRNA的表达。 结果:在建立脑出血模型中共5只大鼠死亡,随后对死亡动物进行解剖,发现脑内血肿量过大,致脑疝形成而导致死亡,后随机补充动物。72只大鼠进入结果分析。①血肿周围脑组织bax mRNA表达:干预后3d,7d,碱性成纤维细胞生长因子组血肿周围脑组织bax mRNA表达比生理盐水组明显减少(3d:0.54±0.19,0.76±0.23,P〈0.05;7d:0.45±0.19,0.71±0.16,P〈0.01)。②血肿周围脑组织bcl-2mRNA表达:干预后3d,7d,碱性成纤维细胞生长因子组的血肿周围脑组织bcl-2mRNA表达比生理盐水组明显增高(3d:0.68±0.25,0.39±0.19,P〈0.05;7d:0.80±0.21,0.48±0.18,P〈0.01)。③出血侧海马bax mRNA表达:干预后3d和7d,碱性成纤维细胞生长因子组的出血侧海马bax mRNA表达比生理盐水组均明显减少(3d:0.54±0.18,0.70±0.11;7d:0.43±0.24,0.69±0.18,P均〈0.05)。④出血侧海马bcl-2mRNA表达:干预后3d和7d,碱性成纤维细胞生长因子组的出血侧海马bcl-2mRNA表达比生理盐水组均明显增多(3d:0.66±0.11,0.50±0.15;7d:0.72±0.12,0.52±0.22,P均〈0.05)。 结论:碱性成纤维细胞生长因子能调节凋亡相关基因,提高大鼠脑出血后大脑脑组织和海马bcl-2mRNA的表达,降低bax mRNA的表达。
  • 胶原诱导型关节炎模型大鼠血浆血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α表达及反应停的干预效应 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察胶原诱导型关节炎大鼠病程及致病过程中两种重要炎性因子血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α在反应停干预后的影响。 方法:实验于2006-01/07在河北医科大学第二医院完成。成年雄性Wistar大鼠112只,体质量140~160g,随机数字表法分为为正常对照组、单纯造模组、反应停治疗组和甲氨蝶呤治疗组,每组28只。除正常对照组外,其余3组多点皮内注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂,诱导出关节炎模型。正常对照组作为阴性对照组每只大鼠背部及尾根部多点皮内注射等量的生理盐水。从免疫后第10天开始,正常对照组和单纯造模组大鼠给予蒸馏水0.5mL/(只·d)灌胃;反应停治疗组给予反应停200mg/(kg·d)灌胃;甲氨蝶呤治疗组给予甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周)灌胃。测定造模后7,14,21,28,35,42,60d不同时间点各组大鼠的足爪厚度、血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子的水平,进行统计学分析。 结果:纳入大鼠112只,均进入结果分析。①各组大鼠足爪肿胀程度:实验前各组大鼠之间足爪厚度无显著差异[(5.47±0.14),(5.33±0.10),(5.92±0.24),(5.35±0.23)mm,P〉0.05]。与正常对照组比较,单纯造模组、反应停治疗组及甲氨蝶呤治疗组大鼠足爪厚度均于造模后7d开始增高,21d左右达到肿胀高峰,差异有显著性意义[7d:(5.42±0.24),(5.81±0.15),(6.59±0.31),(5.54±0.33)mm;21d:(5.73±0.23),(10.78±0.53),(9.82±0.34),(10.37±0.57)mm,P〈0.01]②各组大鼠血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平及两者关系:实验前各组血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子水平均无显著差异[(2.351±0.208),(2.331±0.213),(2.280±0.171),(2.283±0.125)nmol/L;(1.807±0.094),(1.811±0.099),(1.819±0.101),(1.813±0.090)nmol/L;P〉0.05],与正常对照组相比,单纯造模组、反应停治疗组及甲氨蝶呤治疗组大鼠两者水平于造模后7d开始增高,差异具有显著性意义[(2.245±0.234),(2.450±0.026),(2.419±0.069),(2.467±0.032)nmol/L;(1.803±0.099),(2.024±0.049),(2.017±0.101),(2.055±0.056)nmol/L;P〈0.05]。两者水平呈直线相关。 结论:反应停可以降低关节炎模型大鼠血浆肿瘤坏死因子α及血管内皮生长因子浓度,可以有效减轻其足爪肿胀程度,疗效与甲氨蝶呤相同。
  • 肺纤维化模型大鼠肺组织中转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达及黄芪莪术合剂的干预效应 免费阅读 收费下载
  • 目的:分析中药黄芪莪术合剂对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的干预作用。 方法:实验于2002-10/2003-02在天津中医药大学动物实验室完成。①健康SD大白鼠60只,正常饲养1周后,随机分为正常对照组6只、模型组18只、黄芪莪术合剂组18只、强的松组18只。②经气管滴入博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型,黄芪莪术合剂组给予40.5mg/L黄芪莪术合剂,强的松组给予0.63g/L强的松盐水溶液,均采用灌胃方式给药,每次1.5mL,1次/d。正常对照组、模型组给予等量生理盐水。③模型组、黄芪莪术合剂组、强的松组分别于造模第3,7,21天每组6只麻醉下取右肺下叶组织后处死,正常对照组于第3天麻醉下取右肺下叶组织后处死。④采用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测肺组织转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达。 结果:进入结果分析大鼠55只,中途脱落5只。①转化生长因子β1表达:造模第3,7,21天模型组高于正常对照组(P〈0.01),黄芪莪术合剂组和强的松组明显低于模型组(P〈0.01~0.05)。造模第3,21天强的松治疗组低于黄芪莪术合剂治疗组(P〈0.05)。②转化生长因子β1mRNA表达:造模第3,7,21天模型组高于正常对照组,黄芪莪术合剂组和强的松组明显低于模型组(P〈0.01);第7天时,强的松治疗组低于黄芪莪术合剂治疗组,第21天时黄芪莪术合剂治疗组低于强的松治疗组,差异均有显著性意义(P〈0.05)。 结论:中药黄芪莪术合剂具有显著抑制博莱霉素致大鼠肺纤维化的作用,抑制转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达是其可能的机制之一。
  • 同种异体组织工程化软骨局部免疫豁免诱导的实验 免费阅读 收费下载
  • 背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。 目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在体内生长情况。 设计:随机对照观察。 单位:上海交通大学。 材料:选用36只同种异体新西兰兔为受者,45只新生1周龄青紫蓝兔为供者,雌雄均不限。购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;细胞培养基DMEM、胎牛血清、G418、Polybrene购自GIBCO BRL。 方法:实验于2000-01/2005-07在原上海第二医科大学完成。摸球法随机将新西兰兔分为3组:同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组。每组各12只。利用重组逆转录病毒载体转染的青紫蓝兔软骨细胞和组织工程材料pluronic F-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨。①移植物观察其大体观察与质量变化:各组均将相应材料注入新西兰白兔的皮下,移植接种后1,2,3个月取出移植物观察其大体观察与质量变化。②染色观察:移植接种后1,2,3月取出移植物,切片,行苏木精-伊红、Safranin'O、Masson's trichrome染色观察。③抗体检测:移植接种后1,2月抽血1mL,将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,于琼脂糖介质中电泳分离,与受者新西兰兔血清作用,观察有无相应抗体产生。④补体依赖细胞毒实验:将青紫蓝兔的软骨细胞制备成2×10^9L^-1的细胞悬液,接种于96孔板上,贴壁生长24h,加受者新西兰兔血清进行细胞毒试验,在显微镜下计数凋亡细胞的百分率。 主要观察指标:①两组移植物的大体观察与质量变化。②组织学变化。③抗体检测结果。④凋亡细胞的百分率。 结果:纳入实验兔81只均进入结果分析。①移植物的大体观察与质量变化:接种2周后,同种异体软骨细胞-FasL组及同种异体软骨细胞组兔接种细胞-材料复合物处,均有明显的结节形成,对照组未形成接节。同种异体软骨细胞组新生软骨组织随时间推移有逐渐缩小的趋势,并在第4个月后完全消失。同种异体软骨细胞-FasL组虽也有缩小的趋势,但7个月后尚存。同种异体软骨细胞-FasL组移植物质量高于同种异体软骨细胞组(P〈0.05)。②组织学观察:同种异体软骨细胞组软骨组织周围可见大量的淋巴细胞浸润,同种异体软骨细胞-FasL组明显减少。软骨细胞内部,未见淋巴细胞侵入。麦松染色,光镜下观察,中部小部分白色为未成熟的软骨细胞,大部分成熟软骨细胞周围有染成绿色的胶原分泌。Safranin'O染色呈强阳性反应,表明基质中富含糖胺多糖。③抗体检测:将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,与受者新西兰兔血清作用,显示相应无抗体产生。④凋亡细胞的百分率:结果同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组血清CDC凋亡细胞的百分率分别为5%,6%和1%,均为阴性。 结论:FasL基因重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨,且能延迟退化3个月。
  • 兔骨髓间充质干细胞及聚羟基乙酸支架材料构建人工软骨的可行性 免费阅读 收费下载
  • 背景:选择适合的生物支架与骨髓间充质干细胞作为新型的种子细胞复合能否构建出理想的组织工程化软骨? 目的:观察将扩增的兔骨髓间充质干细胞接种于聚羟基乙酸构建人工软骨的可行性。 设计:单一样本观察。 单位:泸州医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科。 材料:实验于2004-10/2005-10在泸州医学院完成。选用8只日本大耳兔,雌雄不拘,清洁级,二三个月龄,体质量1.5~2.0kg,常温常湿环境饲养。聚羟基乙酸由美国Albany公司生产。 方法:分离、获取、扩增实验兔骨髓间充质干细胞,将聚羟基乙酸剪成1cm×1cm×1cm大小,并以多聚赖氨酸包被,通过将扩增的骨髓间充质干细胞接种于聚羟基乙酸上,按4mL/cm^3多点播散的方式均匀地接种在预湿的聚羟基乙酸支架上,体外诱导培养3周,作为实验组。将不加入骨髓间充质干细胞的聚羟基乙酸支架作为对照组。将实验组和对照组的标本分别植入4只自体兔腹腔内,进行体内培养6~12周后,分别取出实验组与对照组的标本,对其进行大体观察。同时以100g/L中性甲醛固定,行5μm切片,采用苏木精-伊红染色观察标本的组织形态学特点,进行阿新蓝染色以观察酸性粘多糖形成,进行甲苯胺蓝染色以观察异染性基质的形成,进行免疫组织化学染色检测Ⅱ型胶原蛋白的表达。 主要观察指标:两组支架植入实验兔体内后6,12周时标本大体观察结果、不同染色观察结果及Ⅱ型胶原蛋白的表达。 结果:纳入8只实验兔均进入结果分析。①支架植入实验兔体内后6及12周标本大体观察结果:支架植入兔腹腔6周后,实验组标本均仍被腹腔大网膜包裹,剥去大网膜后,有3个标本成淡黄色,光滑,质地中,外形与植入前基本一致,1个标本呈灰黑色,质地很软,标本不能成形。12周后,实验组标本的外形仍与植入前基本一致,呈灰白色,光滑,但质地明显较硬。而第6,12周的对照组的标本大部分均被吸收,以第12周的标本更明显,且均未见软骨样组织形成。②支架植入实验兔体内后6及12周不同染色观察结果及Ⅱ型胶原蛋白的表达:苏木精-伊红染色结果显示:6周时,有软骨陷窝样结构开始形成,聚羟基乙酸支架开始降解;12周时,复合物呈现软骨组织样的形态,有较明显的软骨陷窝样结构形成,细胞排列规则,成群存在于软骨陷窝样结构内,边缘的细胞小,中央的细胞大,聚羟基乙酸基本完全消失。阿新蓝染色结果:6周时,组织内有部分区域被染成淡蓝色;12周时组织的基质被广泛染成蓝紫色,说明有大量的酸性粘多糖形成。苯胺蓝染色结果:6周时,组织内可见蓝色异染性基质;12周时组织内呈现很强的蓝色异染。免疫组织化学染色结果:6周时,胞浆内可见棕黄色阳性颗粒,基质内有少量的Ⅱ型胶原蛋白表达;12周时,胞浆、基质内均有较强的阳性表达。Ⅱ型胶原蛋白的表达:6周时,胞浆内可见深棕黄色阳性颗粒,基质内有少量的Ⅱ型胶原mRNA表达;12周时,胞浆、基质内均有强的阳性表达。对照组标本基本上已被吸收,没有成形的组织工程化标本。 结论:兔骨髓间充质干细胞在诱导剂作用下,经体外和体内培养后,可生成组织工程化类软骨。
  • 藏汉两族人群血管内皮功能的差异比较 免费阅读 收费下载
  • 背景:近年来研究认为内皮功能是动脉粥样硬化性疾病的新的独立危险因子,但藏汉两族人群内皮功能的差异尚未得到充分研究。 目的:比较藏汉两族人群内皮功能的差异,同时比较血脂及肥胖相关指标。 设计:对比分析。 单位:解放军总医院心内科和解放军西藏军区总医院心内科。 对象:选择272名藏族男性代表藏族人群,年龄(43±9)岁,均为拉萨本地居民。选择580名青藏铁路建设工人代表汉族人群,均为男性,年龄(42±11)岁;均来自四川省;且在拉萨市居住1年以上,同样生活在同一高原地区(拉萨市海拔3658m)。所有参试者均为2006-02/05在解放军西藏军区总医院进行常规健康体检者,且对检测项目知情同意。 方法:①测量身高、体质量、腰围、臀围、收缩压、舒张压,计算体质量指数(体质量/身高2)。②肱动脉舒张功能检查:采用GE公司Vivid7超声仪、10MHz高频探头扫描右臂肱动脉。先记录肱动脉基础直径,之后将袖带充气至高于受试者收缩压50mm Hg(1mm Hg=0.133kPa)以阻断动脉血流,并保持4min。在充气状态下及放气后2min时分别测量肱动脉直径。袖带放气后,血管反应性充血,此时血流量增加以适应前臂阻力血管的扩张。使用计算机辅助软件计算肱动脉直径。肱动脉内皮功能绝对变化和相对变化由Vivid 7超声仪本身附带软件自动计算得出。③生化检查:禁食12h后,采用日立7600型全自动生化分析仪测定血总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平。④计量资料比较采用方差分析,计数资料采用卡方检验。 主要观察指标:比较两组之间的体质量指数、腰臀比、血压、血脂、基础肱动脉直径和肱动脉直径变化。 结果:藏族人272名和汉族人580名均进入结果分析。①肱动脉舒张功能:藏族人群基础肱动脉直径明显大于汉族人群[(4.28±0.06),(4.03±0.04)mm,t=71.9156,P〈0.01],肱动脉绝对及相对变化分别为(0.124±0.005)mm,(2.934±0.204)%,明显小于汉族[(0.141±0.006)mm,(3.587±0.152)%,t=40.5820,52.1732,P〈0.01]。②体格检查结果:藏族人群体质量指数、腰臀比分别为(30.1±2.5)kg/m2,0.92±0.07,明显大于汉族人群[(26.5±3.4)kg/m2]。③血清三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平:藏族人群分别为(2.31±1.31),(3.49±0.91)mmol/L,明显高于汉族人群[(1.97±1.44),(3.07±0.86)mmol/L,t=3.4200,6.5223,P〈0.01]。 结论:①藏族人群肱动脉舒张功能较汉族人群差,即血管反应性差。②藏族人群腹型肥胖较汉族严重,血脂也较高。
  • 动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB表达及银杏叶提取物的抑制作用 免费阅读 收费下载
  • 背景:以往的很多研究表明高同型半胱氨酸血症通过增强氧化应激诱导动脉粥样硬化,而银杏叶提取物可以清除氧自由基。 目的:观察在同型半胱氨酸诱导细胞黏附分子表达中活性氧基团和核因子κB的作用及银杏叶提取物对这一过程的影响。 设计:随机对照动物实验。 单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。 材料:选用健康雄性家兔24只,6月龄。蛋氨酸(Sigma公司);银杏叶提取物(贵州益佰制药股份有限公司提供,粉剂)。 方法:实验于2003-02/2004-03在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室完成。①适应性喂养2周后,按随机摸球法分为3组:模型组(12只):按80mg/(kg·d)剂量皮下注射蛋氨酸;银杏叶提取物组(8只):皮下注射蛋氨酸前1h予喂饲(与食物混合)银杏叶提取物50mg/(kg·d);对照组(4只):注射与蛋白氨酸等剂量的生理盐水。连续用药7周。②光镜和透射电镜下观察动脉组织学变化;比色法(721型分光光度计)测定活性氧水平;免疫组织化学方法检测动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB的表达。高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸浓度。 主要观察指标:各组动物动脉组织学变化、活性氧水平,以及动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB的表达。 结果:家兔24只均进入结果分析。①动脉内皮细胞活性氧水平:模型组给药结束时活性氧水平明显增高(2.92±0.20,2.48±0.26,P〈0.05),银杏叶提取物组和对照组给药结束时分别为2.41±0.23和2.43±0.20,与给药前比较,差异不明显(2.31±0.27,2.47±0.32,P〉0.05)。②动脉组织学变化:模型组颈总动脉动脉组织表现为早期动脉粥样硬化形态(内皮细胞脱落,平滑肌细胞排列紊乱);对照组和银杏叶提取物组动脉壁结构基本正常。③动脉内皮细胞细胞黏附分子和核因子κB表达:模型组细胞黏附分子和核因子κB表达明显高于对照组(P〈0.05),银杏叶提取物组与对照组相近(P〉0.05)。④血浆同型半胱氨酸浓度:给药7周后,模型组与银杏叶提取物组血浆同型半胱氨酸浓度分别为(25.01±6.80),(26.71±2.36)μmol/L,高于对照组[(16.85±1.64)μmol/L,P〈0.05]。 结论:同型半胱氨酸可诱导家兔主动脉上皮细胞表达细胞黏附分子,主要由氧化应激作用激活核因子κB而介导。银杏叶提取物通过抑制活性氧水平和核因子κB活性而抑制细胞黏附分子的表达。
  • 脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达的关系 免费阅读 收费下载
  • 背景:脑受到损害可诱导脑内碱性成纤维细胞生长因子表达增加,而成纤维细胞生长因子受体在细胞的增殖、分化、血管生成、骨骼形成等进程中起着重要作用。 目的:观察大鼠脑缺血再灌注后碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体1表达对神经细胞凋亡的影响。 设计:随机分组设计、动物实验。 单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。 材料:选用28只成年健康雄性Wistar大鼠,体质量220~260g,清洁级,由山东大学实验动物中心提供。兔抗大鼠碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体1单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供。 方法:实验于2005-05/12在山东省脑病防治重点实验室完成。①摸球法将大鼠随机分为实验组(n=24)和假手术组(n=4)。应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,假手术组除不插线外,其余步骤同实验组。实验组大鼠于脑缺血1h再灌注6h、12h、1d、3d、7d、14d各时间点取4只大鼠进行标本取材,假手术组于术后24h取材。大鼠麻醉后断头完整取脑,切取视交叉后方约5mm的脑组织,连续冠状切片备用。②脑组织经苏木精-伊红染色,显微镜下观察大鼠神经细胞形态。③TUNEL法:细胞核出现棕黄色颗粒者为阳性着色,即凋亡细胞。高倍镜下在皮质区和纹状体区随机各取4个视野计数阳性细胞。④标本切片经兔抗大鼠bFGF和FGFR-1单克隆抗体染色,高倍镜下在皮质区和纹状体区随机各取4个视野计数阳性细胞。 主要观察指标:各组大鼠神经细胞凋亡情况及碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体1表达情况。 结果:纳入28只大鼠全部进入结果分析。①实验组大鼠脑缺血损伤区神经细胞数量明显减少,部分细胞出现核固缩、不规则,染色加深呈紫蓝色,核仁消失,并有许多散在的细胞碎片。②假手术组脑组织可见少量凋亡神经细胞,脑缺血后凋亡细胞明显增多,主要位于额顶叶皮质区和纹状体区。实验组大鼠缺血再灌注6h皮质区开始凋亡细胞逐渐增多,12h~3d凋亡细胞数较多,其中再灌注1d达高峰,3d开始下降,至14d时仍高于假手术组。纹状体区凋亡细胞的数量和变化趋势与皮质区相近(P〉0.05)。③假手术组大鼠脑组织神经细胞碱性成纤维细胞生长因子均有微弱表达,阳性细胞数量较少,着色较浅。实验组大鼠脑缺血后神经细胞碱性成纤维细胞生长因子表达增强,主要位于皮质区和纹状体区,实验组大鼠脑缺血再灌注后6h神经元即出现bFGF的表达,随着再灌注时间的延长逐渐增强,阳性细胞增多,着色加深,再灌注1~3d达高峰,之后逐渐减弱,至再灌注14d,皮质区和纹状体区bFGF表达分别为(5.01±1.71),(5.21±1.62)个/视野,仍高于假手术组[(2.03±1.73),(2.46±1.38)个/视野,P〈0.05]。④假手术组脑组织可见到少量着色较浅的FGFR-1阳性细胞;脑缺血再灌注6h后皮质区和纹状体区成纤维细胞生长因子受体1阳性细胞数开始增加,至再灌注1~3d最多,3d后阳性细胞逐渐减少,至14d时皮质区和纹状体区成纤维细胞生长因子受体1阳性细胞数分别为(5.01±1.41),(5.20±1.33)个/视野,高于假手术组[(2.25±1.67),(2.32±1.61)个/视野,P〈0.05]。 结论:脑缺血再灌注后,在皮质区和纹状体区可能通过激活内源性碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-1的表达,来抑制神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。
  • 胰岛素样生长因子及其受体对脑缺血再灌注后大鼠神经行为功能的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究表明胰岛素样生长因子作为一种神经营养因子,对脑缺血再灌注损伤有重要的保护作用,胰岛素样生长因子水平与缺血性脑卒中发作有关,脑缺血再灌注后胰岛素样生长因子1及其受体表达对神经行为功能的影响有待研究。 目的:观察胰岛素样生长因子1及其受体表达对大鼠脑缺血再灌注后神经功能的影响。 设计:随机对照观察。 单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。 材料:实验于2005-05/12在山东省脑病防治重点实验室完成。成年健康雄性Wistar大鼠28只,体质量220~260g,清洁级。 方法:摸球法随机将大鼠分为实验组(n=24)和假手术组(n=4)。应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,假手术组除不插线外,其余步骤同实验组。①神经功能测试:实验组大鼠分别于脑缺血1h再灌注6h、12h、24h、3d、7d、14d按Bederson评分法评分(0分:无神经功能缺失,1分:前爪曲屈,2分:不能够对抗来自对侧的推力,3分:行走时转圈,4分:摇动,5分:神志恍惚)。②标本的采集和处理:实验组分别于脑缺血1h再灌注后6h、12h、24h、3d、7d、14d取材,假手术组于术后24取材。将大鼠麻醉,断头取脑,切取视交叉后方约5mm的脑组织,切片(厚度5μm),每隔10片抽取1片,帖于多聚赖氨酸处理的玻片,晾干备用。③甲苯胺蓝组织化学染色后观察各组大鼠脑组织神经细胞形态观察。④胰岛素样生长因子1及其受体表达检测:标本采用免疫组织化学技术检测大鼠皮质区和纹状体区胰岛素样生长因子1及其受体表达,即高倍镜下随机各取4个视野进行阳性细胞记数。 主要观察指标:①神经行为功能测试结果。②各组大鼠脑组织神经细胞形态观察。③大鼠皮质区和纹状体区胰岛素样生长因子1及其受体表达情况比较。 结果:大鼠28只均进入结果分析。①神经行为功能测试结果:实验组大鼠缺血再灌注7,14d神经行为功能评分分别为(1.50±058),(1.50±0.78)分,低于再灌注6h[(3.00±0.00),P〈0.05]。②各组大鼠脑组织神经细胞形态观察结果:脑损伤区神经细胞周围出现明显的周隙,形态不规则、出现核固缩,细胞染色呈紫蓝色,核仁消失,并有许多散在的细胞碎片。③大鼠皮质区和纹状体区胰岛素样生长因子1及其受体表达情况比较:实验组大鼠缺血再灌注6h、12h、24h、3d、7d皮质区胰岛素样生长因子1阳性细胞数分别为(8.75±2.06),(11.13±1.14),(19.75±3.18),(17.38±3.11),(11.23±2.28)个,高于假手术组[(3.88±1.46),P〈0.05],纹状体区分别为(8.25±2.21),(11.34±2.21),(18.23±2.64),(18.56±2.34),(11.31±2.14)个,高于假手术组[(4.12±2.24)个,P〈0.05];实验组大鼠缺血再灌注6h、12h、24h、3d、7d皮质区胰岛素样生长因子-1受体阳性细胞数分别为(7.63±1.50),(10.50±2.34),(15.55±3.12),(15.37±3.01),(8.86±2.75)个,高于假手术组[(4.13±1.81),P〈0.05]。纹状体区分别为(8.33±2.31),(10.24±2.09),(14.72±2.17),(14.24±2.77),(8.38±2.05)个,高于假手术组[(3.76±2.35)个,P〈0.05]。 结论:脑缺血再灌注后神经功能明显受损,脑组织胰岛素样生长因子1受体及其受体主要在皮质和纹状体区表达,再灌注12h~7d持续高表达,1~3d达高峰,但在再灌注14d后表达明显减少,提示胰岛素样生长因子及其受体早期表达的神经功能恢复作用。
  • 基于分形理论的人体骨微观结构仿生设计 免费阅读 收费下载
  • 背景:设计人体骨微观结构需建立一种能有效地描述其中的孔结构和连接体的模型,由于这些孔具有不规则的边界,而这种不规则性很可能就与功能有着密切的关系。分形理论能否有效的找出这些不规则结构中蕴含的规则性? 目的:利用分形理论对人体骨微观结构进行了分形特性描述,根据分形维构造符合人体要求的微孔结构,利用快速成型制造技术,从仿生学的角度提出了一种新的人体骨微观结构三维建模设计方法。 设计:计算机辅助仿生设计。 单位:武汉理工大学生物中心。 材料:实验于2005-01/06在武汉理工大学生物中心完成,材料为1名健康中年男性人体髋关节骨灰度图原始图。 方法:对人体骨灰度图进行处理,提取其典型微孔结构的边缘轮廓,得到的人体骨边缘轮廓图。利用B样条作图原理将其矢量化。①利用分形理论,分析典型微孔结构的分形维数,结果用维数(D=2s,s为拟和直线的斜率)表示,找出微孔结构之间的内在联系。②在VC++下利用蒙特卡罗撒点法生成具有适当孔隙率的人体骨二维微观结构,利用快速成型分层制造技术生成三维结构模型。主要观察指标:①人体骨微观组织微孔结构的分形维数。②人体骨二维及三维模型建立结果。 结果:①对具有代表性的孔进行了分维计算,得出这些维数值介于1.14~1.28之间,这些微孔结构的分维值是非常接近的,证明了人体骨边界轮廓具有自相似性。②得到了人体骨微观结构的二维模型,得到二维模型之后,利用快速成型分层制造技术生成了三维结构模型,在保证二维模型较大孔隙率的情况下,三维模型的孔隙率以及连通性均能达到较高要求,通过计算,该模型的孔隙率达到40%以上,能够实现层与层之间的相互贯通,满足设计要求。 结论:从人体骨微观结构仿生型应该满足的基本要求入手,将分形理论应用于人体骨二维仿生模型建立。对人体骨灰度图及其典型微孔的边缘轮廓的分形特性进行了分析。利用VC++开发出适应组织工程的人体骨二维仿生微观结构的软件,同时将二维模型导入到三维软件中生成三维模型,最终生成符合人体骨功能的3维支架结构模型。
  • 动脉粥样硬化模型主动脉血管细胞黏附分子1mRNA表达量与益气活血法干预的量效关系 免费阅读 收费下载
  • 背景:祖国医学中,本虚标实、气虚血瘀为动脉粥样硬化辩证论治常见证型之一,益气活血剂重用益气药物,然而益气、活血药的最佳权重关系需进一步研究。 目的:观察益气活血法对动脉粥样硬化模型主动脉血管细胞黏附分子1mRNA表达量的影响,分析益气活血药黄芪、三七的交互作用和量效关系。 设计:随机对照动物实验。 单位:山西医科大学。 材料:实验于2005-04在山西医科大学完成。健康雄性Wistar大鼠60只。槲皮素(由陕西彗科植物有限公司提供,批号20041112);三七总皂甙(由昆明雅阁臣药业有限公司提供,批号20050118);川芎嗪(由预新国际龙源药业有限公司提供,批号20041204)。 方法:造模:Wistar大鼠饲喂动脉粥样硬化饲料(蛋黄粉10%、猪油5%、胆盐0.5%、基础饲料85%),喂服3个月。分组及给药:60只雄性Wistar大鼠,适应性喂养3d后,随机抽取8只做为正常对照组,继续饲喂普通饲料,其余饲喂动脉粥样硬化饲料。3个月后随机抽取4只进行血脂测定及主动脉组织标本检测,验证造模成功,再将其余48只随机分为6组:①黄芪治疗组:造模成功后给予槲皮素0.1g/(kg·d)灌胃。②三七治疗组:造模成功后给予三七总皂甙0.1g/(kg·d)灌胃。③黄芪三七2∶1治疗组:造模成功后给予槲皮素0.1g/(kg·d),三七总皂甙0.05g/(kg·d)灌胃。④黄芪三七3∶1治疗组:造模成功后给予槲皮素0.15g/(kg·d),三七总皂甙0.05g/(kg·d)灌胃。⑤川芎嗪治疗组:造模成功后给予川芎嗪0.2g/(kg·d)灌胃。⑥正常对照组:饲喂普通饲料。⑦模型组:造模成功后改喂普通饲料。用药30d后采用RT-PCR法检测主动脉中血管细胞黏附分子1mRNA的相对表达水平。取尾静脉血2mL测血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平。 主要观察指标:①主动脉中血管细胞黏附分子1mRNA的相对表达水平。②血脂水平。 结果:60只雄性Wistar大鼠参加实验,51只雄性Wistar大鼠进入结果分析,其中治疗组大鼠因为灌胃不慎死亡3只,模型组大鼠意外死亡2只。①高脂饮食可诱导大鼠形成动脉粥样硬化模型,模型组的血脂水平明显高于正常组(P〈0.05),各干预组血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平低于模型组(P〈0.05)。②正常对照组无血管细胞黏附分子1mRNA表达。各干预组血管细胞黏附分子1mRNA表达量明显低于模型组。黄芪三七3∶1治疗组的血管细胞黏附分子1mRNA表达量水平最低(0.42±0.02),与其他干预组比较,差异有显著性意义(P〈0.05)。 结论:益气活血药黄芪、三七可以下调主动脉组织血管细胞黏附分子1mRNA的表达量,降低血脂,具有抗动脉粥样硬化作用,同时,联合应用比单独应用效果更好,并且在一定范围内,随着益气药物量的增加,抗动脉粥样硬化作用增强。
  • 胎儿皮肤神经肽P物质和肥大细胞与无瘢痕愈合的关系 免费阅读 收费下载
  • 目的:比较胎儿、正常成人皮肤及瘢痕中神经肽P物质(substance P,SP)阳性细胞的形态、分布和数量差异,探讨P物质表达和肥大细胞数量与无瘢痕愈合之间的关系。 方法:实验于2004-01/2005-01在重庆医科大学附属第一医院整形美容科和重庆医科大学病理教研室进行。收集胎龄为16~33周因车祸等原因引产的32例胎儿皮肤(家属知情同意)、26例整形手术中切除的正常成人皮肤以及18例不同时期的增生性瘢痕(患者均知情同意),用免疫组织化学的方法分别检测神经肽P物质的表达,P物质阳性细胞观察和计数采用分等级的方法。以细胞浆着色程度(浅、中、深)来判定。甲苯胺蓝染色的方法检测肥大细胞,在高倍镜下(×400倍)随机计数5个视野中阳性细胞数,取其平均值,为肥大细胞数。 结果:①苏木精-伊红染色结果:孕早期胎儿皮肤表皮由1~3层细胞组成,真皮层细胞数量较多,胶原成分少、排列整齐,随着胎龄的增加,表皮细胞层数逐渐增加,出现角质层,逐渐分化为典型的五层细胞。②胎儿皮肤P物质的表达:孕22周以前胎儿皮肤中无P物质的表达,孕22周以后可见表皮细胞的下3层表达较多、且染色强度基本一致,随着胎龄的增加,至孕33周后的胎儿皮肤,P物质表达部位和阳性强度无明显变化。在正常成人皮肤中P物质表达于除角质层外的表皮全层,正常成人皮肤中的P物质染色强于胎儿皮肤;在瘢痕中P物质大量表达于表皮层、真皮中成纤维细胞及小血管周围,染色强。28周孕前胎儿皮肤、28周孕后胎儿皮肤、正常成人皮肤P物质的表达明显少于瘢痕组织(P〈0.005)。③胎儿皮肤肥大细胞形态学观察结果:胎儿皮肤中未见典型的肥大细胞。正常皮肤肥大细胞计数少于瘢痕组织[(3.60±2.56),(8.41±4.06)个/视野,P〈0.01]。 结论:①胎儿发育早期(22周以前)皮肤中不表达P物质可能是早期胎儿皮肤无瘢痕愈合的原因之一。②瘢痕的形成同时与皮肤中的过多聚集并持续存在的肥大细胞和过多释放的P物质有关。
  • 外源性一氧化氮对创伤愈合过程中一氧化氮合酶表达及瘢痕形成的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:应用组织化学、免疫组织化学及计算机辅助图像分析方法,观察外源性一氧化氮在创伤愈合过程不同时间,对一氧化氮合酶表达和胶原形成的影响,探讨其在促进创伤愈合和抑制病理性瘢痕形成中的机制。 方法:实验于2004-09/2006-03在河北省人民医院整形烧伤外科及河北省人民医院临床医学研究中心完成。以硝普钠为一氧化氮供体,将60只大鼠随机分为对照组及硝普钠0.5,1,2,4mmol/L组,每组12只,通过建立大鼠创伤模型,并分别在创面局部应用50g/L葡萄糖溶液、0.5,1,2,4mmol/L硝普钠,观察及测量创伤后3,7,10,14d的肉芽组织生长情况、一氧化氮合酶的表达情况和肉芽组织中羟脯氨酸含量。 结果:60只大鼠全部进入结果分析。①形态学观察:对照组于创伤后14d可完全愈合;硝普钠0.5mmoL/L组及1mmoL/L组肉芽组织生长良好,且愈合时间较对照组提前三四天;硝普钠2mmoL/L组及4mmoL/L组愈合情况不良,完全愈合时间延迟,皮肤张力较低,炎症反应明显。②一氧化氮合酶蛋白表达:大鼠皮肤创伤后角质形成细胞、汗腺、毛囊和骨骼肌细胞以及创伤后肉芽组织的炎症细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞均不同程度的表达一氧化氮合酶蛋白。对照组在第3天和第14天分别呈现一氧化氮合酶阳性颗粒表达高峰,而硝普钠各组仅在第7~10天出现表达一氧化氮合酶阳性高峰,呈先增加后减少的趋势。③羟脯氨酸含量:对照组从创伤后第3,7,10,14天羟脯氨酸含量进行性增加[依次为(1.637±0.127),(2.250±0.169),(2.420±0.201),(2.908±0.241)mg/g];硝普钠0.5mmol/L组在创伤后第3,7天羟脯氨酸含量低于对照组[(1.435±0.147),(1.766±0.211)mg/g,P〈0.05或P〈0.01],而在第10天和第14天羟脯氨酸含量均高于对照组[(3.128±0.240),(3.437±0.239)mg/g,P〈0.01];硝普钠1mmol/L组和2mmol/L组在第10天和第14天的羟脯氨酸含量明显高于对照组[(1mmol/L组:(3.244±0.245)(3.582±0.282)mg/g,P〈0.01;硝普钠2mmol/L组:(3.666±0.263),(4.301±0.268)mg/g,P〈0.01);硝普钠4mmol/L组仅在创伤后第3天表现比对照组多[(1.912±0.139)mg/g,P〈0.01),其余均与对照组水平相近。 结论:局部应用外源性一氧化氮具有显著的促修复作用,主要体现在伤后第7~10天,小剂量的一氧化氮促进创面愈合的作用远远大于大剂量一氧化氮。
  • 猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质的联合培养 免费阅读 收费下载
  • 目的:将猪小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞的复合培养,证实小肠黏膜下基质是否可以成为组织工程化血管的良好载体材料。 方法:实验于2005-09/2006-01在同济大学生命科学与技术学院生物医学工程研究所完成了猪小肠黏膜下基质的制备与处理,在复旦大学医学院附属中山医院肿瘤中心完成了猪小肠黏膜下基质的射线照射及消毒,在同济大学生命科学与技术学院实验室完成了猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质的复合培养。实验材料:猪小肠黏膜下基质取自屠宰场获取的新鲜家猪空肠,猪髋动脉内皮细胞(PIEC,中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库)。实验分组:分为猪髋动脉内皮细胞单独培养组与猪小肠黏膜下基质-猪髋动脉内皮细胞复合培养组。实验方法:①小肠黏膜下基质采用物理和化学方法处理。②猪髋动脉内皮细胞单独培养。③猪小肠黏膜下基质-猪髋动脉内皮细胞复合培养。实验评估:采用倒置相差显微镜观察细胞的黏附和生长,猪小肠黏膜下基质的组织结构;测定单纯培养猪髋动脉内皮细胞和猪小肠黏膜下基质-猪髋动脉内皮细胞复合培养细胞的生长曲线,每日取3孔培养细胞经消化后细胞计数,取其均值,总共8日;以评价猪小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞的细胞相容性。 结果:①小肠黏膜下层表面形态:猪小肠黏膜下基质为浅白色薄膜状,厚度约80μm,光镜下可见处理后膜的上下两侧结构不同,一面较粗糙,孔径较大,用于细胞种植,另一面较平坦。单经物理方法处理后的猪小肠黏膜下基质表面有大量残留的细胞碎屑,再行化学处理后基质表面无细胞碎屑残留,胶原纤维未受损。②单独培养与复合培养的猪髋动脉内皮细胞形态对比:倒置显微镜观察,猪小肠黏膜下基质与猪髋动脉内皮细胞复合培养接种细胞24h贴壁,第1~4天时细胞增殖不明显,第5天有较多细胞直接贴附于材料边缘,随时间延长,猪髋动脉内皮细胞在猪小肠黏膜下基质表面黏附生长良好,细胞均匀分布于基质,细胞形态多为梭形及多角形。与猪髋动脉内皮细胞单独培养细胞相比,伪足不明显,细胞形态也相对规则。③细胞生长曲线:复合培养组的细胞计数前4d较单纯培养组少,第5天后时细胞计数高于单纯培养组,复合培养组在接种的后1d数量最少,两组细胞计数均在最后1d达到最大值。 结论:猪髋动脉内皮细胞可在猪小肠黏膜下基质上黏附生长,猪小肠黏膜下基质可促进猪髋动脉内皮细胞的增殖,猪小肠黏膜下基质有良好的细胞相容性,其孔径、结构有助于猪髋动脉内皮细胞的黏附和生长,是良好的组织工程生物衍生材料。
  • 应用表皮干细胞构建组织工程皮肤及移植实验 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨应用人表皮干细胞和猪脱细胞真皮构建组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的可行性。 方法:实验于2004-06/2005-12在南昌大学医学院烧伤研究所完成。①取环状切除后幼儿包皮(家属知情同意)用中性蛋白酶与胰蛋白酶混合消化液消化,收集细胞,接种在已包被Ⅳ型胶原的培养皿中,快速黏附,保留快速黏附细胞继续培养,培养体系为低钙高糖DMEM培养基,待融和状态时,再次消化,离心收集细胞,再次经过Ⅳ型胶原快速黏附,保留黏附细胞,培养20d左右,用作构建表皮干细胞并进行细胞鉴定。②将第2代细胞接种于铺好Ⅳ型胶原的猪无细胞真皮上,每3天换液。10d后将其转移至不锈钢网架上,行气液界面培养5d左右,构建复合皮。③取SD大鼠20只,随机分2组。于动物背部尾侧正中作2.5cm×2.5cm的全层皮肤至肌筋膜的切除。实验组10只创面覆盖表皮干细胞构建的复合皮移植物,对照组10只覆盖无细胞真皮移植物。④移植后7,10,14,21和35d,两组动物均活检取材,进行创面大体观察、组织学观察及免疫组织化学、免疫荧光鉴定等。 结果:①表皮干细胞的分离、扩增及鉴定:在扩增的细胞拟接种于无细胞真皮前,进行角蛋白19免疫组织化学鉴定、以流式细胞术进行α6、CD71鉴定。经胶原Ⅳ黏附的细胞培养后形成较大集落,拟接种的种子细胞中α6briCD71dim细胞占总细胞的(39±7)%;鼠抗人角蛋白19阳性细胞率为(53±6)%。②组织工程皮肤的建立结果:表皮干细胞种植于无细胞真皮上1d后,细胞便贴壁并开始生长增殖,8d左右透过间隙见无细胞真皮上表皮干细胞渐增殖融合成片;2周时无细胞真皮表面可见菲薄皮片状生长的细胞膜片物。复合皮组织学检查可见无细胞真皮表面覆盖多层融合的表皮层细胞,无细胞真皮内细胞成分去除完全。③创面愈合情况:术后2周,实验组移植物成活,创面上已上皮化,移植物柔软,而对照组无细胞真皮表面未上皮化,较干燥,色暗、触之较硬,两组创面均未见明显收缩。4周,实验组创面愈合,未见明显排斥反应。对照组无细胞真皮干燥脱落而创面暴露,创面收缩明显,创面边缘因自体表皮细胞爬行而缩小创面。④组织学检查及免疫组织化学染色结果:实验组2周时创面已全部上皮化,但细胞分层少;3,4周表皮层分化良好,多层结构,真皮纤维内见成纤维细胞长入,见少许炎症细胞,大鼠自体正常皮肤见毛囊及毛发结构。对照组2周创面尚未上皮化,无细胞真皮干燥变性,3,4周后创面仍未愈合,可见大量炎症细胞。实验组愈合创面抗人人类白细胞抗原-Ⅰ型抗原直接免疫荧光染色呈阳性,证明新生表皮由移植的人表皮细胞形成。而对照组阴性。实验组愈合创面广谱角蛋白免疫组织化学染色见整个表皮层细胞胞浆染呈棕黄,为阳性反应。 结论:利用体外纯化扩增的表皮干细胞及制备的猪脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤,该组织工程皮肤可用于修复动物全层皮肤缺损。
  • 兔骨髓间充质干细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性 免费阅读 收费下载
  • 目的:探索以骨髓间充质干细胞为种子细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性。 方法:实验于2004-11/2006-03在中山大学第二附属医院医学科研中心完成。①参照张金明等报道的方法,制备脱细胞尿道海绵体-尿道基质,并行组织学检查观察脱细胞效果。②分离兔骨髓间充质干细胞,鉴定其表型,体外培养增殖后种植于兔脱细胞尿道海绵体-尿道基质上。③48只兔随机均分为实验组、对照组,每组24只。实验组用种植有干细胞的脱细胞基质即组织工程尿道修复部分切除的兔海绵体尿道,对照组组仅用脱细胞基质修复。④术后观察动物排尿情况,并于术后1,2,4,8,12,24周切取标本,看有无狭窄及腔面一般性状并行组织学检查,比较两者差异。 结果:两组共48只兔全部进入结果分析。①自行制备的组织工程支架和种子细胞鉴定结果:所制备脱细胞基质质地柔软,镜下未见细胞成份;分离培养的细胞表型为CD45阴性,CD166,CD29,CD105阳性,符合骨髓间充质干细胞特征。②术后动物及标本一般观察:实验组术后2周时发现1例尿瘘;对照组2周时发现1例尿瘘,8,12,24周时分别发现各1例尿道狭窄。其余实验动物在拔除导尿管后排尿通畅。③两组兔再造尿道组织学检查结果:实验组自术后2周开始,组织学检查见血管和平滑肌逐渐增多;24周时,尿道腔面光滑,可见和正常尿道海绵体类似的组织结构。对照组自2周起可见血管,4周起可见平滑肌再生,24周时血管和平滑肌形成仍较少,较多纤维瘢痕,且无窦样组织形成,再造尿道腔面不如实验组光滑。 结论:以骨髓间充质干细胞为种子细胞,脱细胞尿道海绵体为基质,构建组织工程化尿道海绵体,移植修复兔海绵体尿道缺损,可形成类似于正常尿道海绵体的组织结构。
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  • 钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发育中的表达 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发育中表达规律及定位,探讨钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发育中的作用。 方法:实验于2006-03/09在辽宁医学院组织胚胎学实验室完成。选取25~30g健康成年昆明小白鼠,采用检查阴道栓脱落的方法确定其受孕后,选取胚龄10,12,14,16,18d的胎鼠和生后日龄1,3,7,14,21,40d的仔鼠,每组取8只鼠。将各胚(日)龄小鼠剖腹取出肾脏,应用免疫荧光技术对各组小鼠肾脏钙结合蛋白D28k表达进行定性观察;应用蛋白印迹技术(Western blotting)对不同发育阶段的小鼠远端肾单位钙结合蛋白D28k的表达进行定量的测定。 结果:①免疫荧光结果:钙结合蛋白D28k在胚龄10d胎鼠肾脏未见表达,胚龄12d在输尿管芽微量表达,胚龄14d在输尿管芽Y型分支表达,表达量增加,胚龄16d在输尿管芽壶腹表达强烈,且在肾单位与输尿管芽壶腹连接部有少量表达。胚龄18d到生后7d,钙结合蛋白D28k表达量逐渐增加,并定位于远曲小管、连接小管、皮质集合管。生后7d到生后40d,钙结合蛋白D28k在远曲小管、连接小管、皮质集合管表达丰富,在髓质集合管表达下降。钙结合蛋白D28k表达部位在输尿管芽或远曲小管、连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内。②Western blotting检测结果:胚龄12d钙结合蛋白D28k表达量极低,无法检测。胚龄14d到胚龄16d,钙结合蛋白D28k表达量增加[(12.0994±0.6911),(13.2383±0.1729),P〈0.01]。胚龄16d与胚龄18d钙结合蛋白D28k表达量无显著性差异。胚龄18d到生后7d钙结合蛋白D28k表达量明显增加[(13.8447±0.2385),(15.2718±0.2019),(16.3208±0.2839),(19.3383±0.4044),P〈0.01]。生后7d到生后14d,钙结合蛋白D28k表达量减弱,差异有显著性意义[(19.3383±0.4044),(15.8915±1.0185),P〈0.01]。生后14d到生后40d钙结合蛋白D28k表达量差异无显著性。 结论:在小鼠肾脏发育中,钙结合蛋白D28k在胚龄12d胎鼠肾脏输尿管芽微弱表达,随胚(日)龄增加其表达逐渐增加,生后7d达最大水平,并定位于远曲小管、连接小管和皮质集合管。此后表达减弱并趋于平稳。钙结合蛋白D28k表达部位在输尿管芽或远曲小管、连接小管、皮质集合管上皮细胞胞浆内。
  • 《第三军医大学学报》(半月刊)征订启事 免费阅读 免费下载
  • 原代培养海马神经元周期素依赖性蛋白激酶5及其活性在低氧环境中的变化 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察低氧对原代培养海马神经元存活力、周期素依赖性蛋白激酶5蛋白表达及其活性变化的影响。 方法:实验于2005-01/12在解放军第二军医大学实验动物中心完成。取孕14~18dSD胎鼠的海马细胞进行原代培养,培养8~10d的细胞用于实验。取培养稳定阶段已分化成熟的大鼠海马神经元至低氧环境,继续培养12,24,36h,微孔酶标仪590nm处暗室内测定神经元存活力,免疫印迹测定周期素依赖性蛋白激酶5蛋白表达及其活性改变,每个时间点重复3次。 结果:与常氧组比较,低氧组从继续培养12h起神经元存活力明显下降[(1.01±0.14),(0.77±0.15);(0.98±0.12),(0.68±0.11);(0.95±0.11),(0.61±0.08);P〈0.01],周期素依赖性蛋白激酶5蛋白表达水平下降[(1.67±0.19),(0.82±0.08);(1.54±0.13),(0.75±0.06);(1.49±0.13),(0.70±0.11);P〈0.01],活性明显增加[(1.76,3.56);(1.84,4.29);(1.95,6.04);P〈0.01]。 结论:低氧环境可导致神经元损伤,与周期素依赖性蛋白激酶5过度激活有关。
  • 原代培养鼠胚脊髓运动神经元活力状态与肌萎灵注射液的干预作用 免费阅读 收费下载
  • 目的:从细胞水平,观察扶元起萎,养荣生肌的中药制剂肌萎灵注射液对原代培养鼠胚脊髓运动神经元的保护作用。 方法:实验于2004-03/2005-03在解放军第三军医大学完成。实验分组:清洁级SD雌性孕鼠,孕期10~14d。应用密度梯度离心法分离鼠胚脊髓运动神经元进行原代培养,运动神经元培养72h后,按培养板及孔分为4.5μg/L肌萎灵组(肌萎灵注射液,含生药0.9g/mL)、9μg/L肌萎灵组、45μg/L肌萎灵组、力如太组(力如太R利鲁唑片,应用时经0.9%NaCl-0.01NHCl溶解)和对照组。实验处理:各组分别加入用新鲜培养基稀释为0.5%(终浓度4.5μg/L)、1%(终浓度9μg/L)、5%(终浓度45μg/L)的肌萎灵注射液,力如太组加入利鲁唑(终浓度10μmo/L),对照组加入等量新鲜培养基。实验评估:①共同培养3d用四甲基偶氮唑盐法观察其对细胞活力的影响,以吸光度表示。②采用NF-200免疫组织化学染色并进行图像分析,测定神经突起主干长度。 结果:①培养的运动神经元活力状态比较:4.5,9,45μg/L肌萎灵组培养运动神经元活力显著增强,与对照组相比,差异有显著性意义(0.317±0.054,0.396±0.087,0.329±0.097,0.230±0.130,P〈0.05)。力如太组细胞生长与对照组相比无显著差异(0.266±0.141,0.230±0.130,P〉0.05)。②脊髓运动神经元突起生长情况结果:4.5μg/L肌萎灵组和9μg/L肌萎灵组可促进其生长,与对照组相比,差异有显著性意义[(315.96±32.32),(373.46±80.24),(159.71±48.95)μm,P〈0.05]。 结论:肌萎灵注射液可增强运动神经元活力,促进脊髓运动神经元突起的生长。
  • 家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路的研究 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路与皮肤末梢感受器通路的关系,为中医皮部经络学说提供形态学依据。 方法:实验于2005-10/11在连云港市第一人民医院肿瘤生物实验室进行。①选取雄性家兔4只,随机数字表法分为神经逆行追踪18~24h组、神经逆行追踪30~36h组,每组2只。②两组兔以乌拉坦1.5g/kg麻醉后,经双侧“风门”穴皮内注射荧光素核黄(Sigma,批号74681-68-8)1g/L(含核黄500μL)逆行神经追踪,神经逆行追踪18~24h组和神经逆行追踪30~36h组兔分别成活18~24h,30~36h后处死。③分别取C2~L5脊神经节、颈、胸交感神经节、肠系膜下神经节、大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓、胃、小肠、心肌、肺、肾、骶脊肌、背阔肌、膈肌、肠系膜下动脉、牵涉区部位的皮、骶部、“足三里”穴部的皮及耳,冰冻连续切片,分别做成两套,一套蒸馏水贴片,直接在Olympus ZX-004荧光显微镜下寻找各组织荧光标记的神经细胞、荧光标记密集的神经末梢部位;另一套行苏木精-伊红染色后再置于荧光显微镜下,观察有无新的发现。 结果:4只兔均进入结果分析。①神经逆行追踪18~24h组:在C3~L3脊神经节发现标记细胞,以T3~12标记细胞较多;在颈、胸交感神经节及肠系膜下神经节发现标记细胞;在小肠黏膜及黏膜下标记到大量的节细胞;在脊髓后角、下丘脑的橄榄核、骶脊肌、背阔肌、膈肌的肌膜、心肌的内、外膜,胃、膀胱壁、肺支气管壁、肝管壁、胆囊壁的外膜和黏膜、肩关节滑膜、腹主动脉、肠系膜动脉壁的内、外膜、肾小管以及胃牵涉区、足三里穴的皮和骶部及耳的皮内毛细血管袢发现有荧光密集区。②神经逆行追踪30~36h组:C3~T2脊神经节核黄标记细胞大部分消失,T3~10仍较多,在颈、胸交感神经节、肠系膜下神经节及小肠节细胞的标记细胞与神经逆行追踪18~24h组相似,荧光密集区的部位同神经逆行追踪18~24h组,但更密集。 结论:家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路网络由脊神经节、交感神经节及节后神经元和小肠节细胞等神经网络组成,与皮肤末梢感受器通路网络基本相同。
  • 正常和链脲佐菌素诱导糖尿病模型大鼠体外破骨细胞样细胞的培养方法 免费阅读 收费下载
  • 目的:建立成年正常大鼠和链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠骨髓体外破骨细胞样细胞培养的方法。 方法:实验于2003-05/2004-03在河北医科大学第三医院中心实验室完成。①雌性Wistar大鼠,2.5~3.0个月龄,用链脲佐菌素溶液,按60mg/kg单剂量进行腹腔注射,注射48h后检测血糖,血糖≥16.7mmol/L视为诱导糖尿病模型成功。随机选择链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠及成年正常大鼠各1只,麻醉下处死,无菌条件下取股骨,收集骨髓。②用α-MEM冲洗骨髓细胞,并稀释骨髓细胞至1.5×109L-1的浓度,将细胞悬液置于24孔培养板内,培养液为无酚红α-MEM,其中含体积分数为0.1的胎牛血清、30μg/L细胞核因子κB受体活化因子配基、10μg/L巨噬细胞集落刺激因子。培养板置于体积分数为0.05的CO2和37℃培养箱内培养,用倒置相差显微镜观察破骨细胞样细胞形态变化。③细胞培养7d后,进行细胞固定和抗酒石酸酸性磷酸酶染色,抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性且细胞核≥3个的细胞认定为破骨细胞样细胞。④在倒置显微镜下,计数破骨细胞样细胞数。 结果:①倒置显微镜下动态观察细胞,发现细胞的形态逐渐由圆形变为椭圆形、长梭形和不规则形状。在培养的第3天始,单核细胞融合为多核细胞,破骨细胞样细胞形成。在第5,6天破骨细胞样细胞形成明显增多。②破骨细胞样细胞酶学检查,可见有大量多核且抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的细胞。③破骨细胞样细胞计数:实验获得的破骨细胞样细胞的数量能够满足细胞计数的需要,与成年正常大鼠相比,链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠破骨细胞样细胞数量增加(92.50±10.87,107.00±13.72个/孔)。 结论:正常成年大鼠和链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠骨髓体外破骨细胞样细胞的培养方法建立,分离培养的破骨细胞样细胞有多核、抗酒石酸酸性磷酸酶阳性的特性。
  • 全层软骨缺损合并深部“微骨折”兔软骨修复情况 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察在全层软骨缺损深部制造“微骨折”对兔软骨修复的影响。 方法:实验于2003-04/10在同济医学院矫形外科实验室完成。实验用自制“微骨折”骨刀由管形不锈钢制作而成,分微骨刀内芯和外置套筒两部分。微骨刀近端配有可拆卸的螺帽,其远端为4枚锋利的钢钉,孔距为4mm,其连线呈正方形,孔隙深4mm,可深达松质骨内。取20只大白兔随机分2组,每组10只。用尖刀片在兔股骨内髁处切除6mm×6mm软骨组织造成全层关节软骨缺损,建立实验动物模型。实验组在缺损局部应用特制骨刀造成“微骨折”,对照组缺损局部不予特殊处理。分别在4周和8周每组各处死5只实验兔,作大体观察以及组织病理学检查。 结果:①两组兔缺损修复处大体观察:在缺损处对照组只有肉芽组织和瘢痕组织生长,仅边缘有少量软骨组织生长,实验组在4周时大部分为软骨组织生长,而8周已全部被软骨组织修复。②组织病理学观察:实验组在4周时修复组织以纤维软骨为主,还有大量幼稚的透明软细胞,排列较紊乱,内混有一些纤维组织,与正常的关节软骨组织有一定的差异。而对照组修复组织均为红染的肉芽组织和纤维瘢痕组织,8周时,仅为瘢痕组织。③关节活动度的变化:术后各组动物关节活动度良好。 结论:采用特制骨刀在全层软骨缺损的情况下合并“微骨折”,能使全层缺损的软骨组织得以修复。
  • 补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad2的表达 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad2的基因表达,从基因水平研究中医归经理论,为靶向给药提供依据。 方法:实验于2004-06/2006-11在河北医科大学中西医结合基础实验室完成。实验分组:选择3个月龄健康雌性SD大鼠(未曾交配)90只,体质量(300±20)g。常规喂养1周后,随机数字表法分成7组:正常对照组、骨质疏松模型组、补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组、非经非穴位外贴组,其中正常对照组和骨质疏松模型组每组20只,其余每组各10只。实验处理:除正常对照组喂正常饲料,自由饮水外,其余各组均喂食低钙饲料,饮用蒸馏水,每周2次在大鼠大腿内侧肌肉注射地塞米松1mg/kg体质量,5周后建立骨质疏松模型。实验评估:造模后,用抗骨松穴位贴剂分别外贴肾经和膀胱经穴位、非经非穴位、并与口服补肾方药比较治疗骨质疏松,以双能X线骨密度仪检测连续给药16周后大鼠离体股骨骨密度,采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白免疫印迹杂交方法分别检测Smad2的mRNA、蛋白表达,观察其治疗效果。 结果:纳入90只大鼠,在实验第5周时,正常对照组、骨质疏松模型组分别取10只,用于验证造模成功,70只进入结果分析。①给药16周后,与骨质疏松模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组的股骨骨密度明显增加[(0.161±0.016),(0.206±0.028),(0.196±0.023),(0.202±0.015),(0.205±0.023)g/cm2,P均〈0.01]。②应用补肾中药防治16周后,与骨质疏松模型组比较,补肾方药口服组、肾经外贴组、膀胱经外贴组、依普拉封口服组Smad2mRNA的表达明显上调(0.517±0.031,0.524±0.033,0.596±0.033,0.592±0.021,0.583±0.032,P〈0.01);Smad2蛋白表达亦明显增强,差异显著(50.901±2.205,71.802±2.100,72.352±2.306,74.012±2.145,73.802±2.203,P〈0.01)。 结论:①补肾方药通过口服和外贴穴位两种不同途径均发挥“归经”作用,引起靶器官骨组织上调Smad2的表达而有效改善骨密度。②Smad2mRNA表达及蛋白水平的下调可能是原发性骨质疏松症发生的重要机制之一。
  • 牛骨形态发生蛋白对骨质疏松性椎体骨折愈合过程中局部血管内皮生长因子表达的作用 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察骨质疏松性椎体骨折愈合过程中,局部血管内皮生长因子动态表达,探讨牛骨形态发生蛋白促进SD大鼠骨质疏松性椎体骨折愈合的作用机制。 方法:实验于2005-07/2006-07在解放军兰州军区总医院骨研所完成。①牛骨形态发生蛋白的制备:青海小牦牛大腿骨,-4℃条件下,粉碎,按Urist改良方法提取。②选择雌性SPF级8个月龄SD大鼠96只,去除双侧卵巢建立骨质疏松模型。随机分为2组:实验组和对照组,每组48只。③术后3个月行L5椎体开窗建立人工骨折模型,实验组置牛骨形态发生蛋白10mg+纤维蛋白复合体;对照组注入等量无血清培养液。④于手术后3,7,10,14,21,28,56,84d每组麻醉状态处死6只,用苏木精-伊红染色、免疫组织化学及定量聚合酶链反应检测骨折愈合不同时间的标本血管内皮生长因子及血管内皮生长因子mRNA的动态表达,阳性信号为胞浆内棕色颗粒。 结果:96只SD大鼠全部进入结果分析。①骨折愈合不同时间组织学观察:实验组术后7d纤维骨痂形成,21d新生骨组织与旧骨组织出现融合,56~84d软骨性骨痂已逐渐被骨性骨痂取代,骨折部位髓腔再通,出现成熟板层骨,骨折基本愈合。对照组术后7d未见典型纤维性骨痂;21d新生骨组织大都游离与孤立存在,术后28d骨小梁仅有少部分连结成网状,56~84d部分骨缺损存在,不见成熟板层骨,大部分髓腔不通,骨折愈合延迟。②骨折不同时间血管内皮生长因子免疫组织化学结果:实验组血管内皮生长因子在7d左右可见有阳性表达的细胞,14d有分泌高峰,对应循环数(CT值)最小,两组比值最大。而对照组未见明显分泌高峰。③实时荧光定量聚合酶链反应检测结果:对照组在造模后1,2,4,6,8周时,椎体内的血管内皮生长因子mRNA的表达量明显低于实验组(P〈0.01)。 结论:牛骨形态发生蛋白可促进大鼠骨质疏松性椎体骨折部位血管内皮生长因子的动态表达,可在受体骨折部位局部促进骨折生长。
  • 小剂量乙醇长期摄入对生长期小鼠松质骨代谢的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察小剂量乙醇摄入对生长期小鼠松质骨代谢的影响。 方法:实验于2004-10/2005-03在本校动物中心完成。取清洁级6周龄昆明种小鼠30只,体质量25~30g,随机数字表法分成①基础对照组:实验开始时麻醉动物后处死取材。②正常对照组:给予蒸馏水10mL/(kg·d)灌胃。③乙醇组:给予体积分数为0.5的乙醇(根据预实验结果选用),按4g/(kg·d)剂量灌胃,换算成60kg体质量成人相当于摄入乙醇约30g/d,连续灌胃60d。实验结束麻醉后处死全部小鼠,取胫骨上段进行不脱钙骨制片,经计算机自动图像分析系统对骨代谢相关指标进行骨组织形态计量学分析。 结果:纳入小鼠30只,均进入结果分析。①乙醇对小鼠胫骨上段静态参数及动态参数的影响:与正常对照组比较,乙醇组小鼠的骨小梁面积百分率明显降低[(9.77±3.30)%,(3.31±0.94)%,P〈0.05];骨形成率降低[(27.46±4.55)%,(17.97±6.91)%,P〈0.05];骨小梁分离度增加[(430.20±177.91),(1115.37±320.45)μm,P〈0.05];单位骨小梁周长破骨细胞数有增加趋势。②乙醇对小鼠骨生物力学参数的影响:乙醇组的最大抵抗应力及股骨颈结构强度值均显著低于正常对照组[最大抵抗应力:(46.93±11.70),(128.93±10.48)MPa;股骨颈结构强度:(20.80±2.42),(29.48±2.52)N;P〈0.01]。 结论:小剂量乙醇摄入可造成生长期小鼠骨形成的降低,骨量的丢失。
  • 巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建 免费阅读 收费下载
  • 目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。 方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1188bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统。 结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1188bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符。将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统。 结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础。
  • 可注射性材料藻酸钠体外培养幼猪关节软骨细胞及形成组织工程化软骨的能力 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察以藻酸钠为载体体外培养幼猪关节软骨细胞的增殖及形成工程化软骨的能力;评价藻酸钠凝胶作为培养软骨细胞载体的可行性。 方法:实验于2003-10/2004-03在中山大学附属第二医院实验中心完成。取3个月龄小型猪膝关节软骨,酶消化法得到高纯度软骨细胞,体外培养3代后与藻酸钠混合,调节软骨细胞密度为5×10^9L^-1,接种于96孔培养板中,每孔接种50μL,25g/L氯化钙溶液凝胶化10min后,DMEM培养基加体积分数为0.1的胎牛血清于96孔培养板中培养。4周后取材观察,行苏木精-伊红染色、Masson染色及免疫组织化学分析,观察软骨细胞形态,Ⅱ型胶原表达及成软骨能力。 结果:①单层培养的软骨细胞呈多角形,细胞浆内表达Ⅱ型胶原;藻酸钠与软骨细胞复合后,藻酸钠凝胶材料与透明软骨细胞之间嵌合好。②苏木精-伊红染色见幼猪软骨细胞在海藻酸钠中增殖成株状或岛状;Masson染色见类似软骨陷窝之间胶原被染成绿色,可见细胞周围胶原分泌;免疫组织化学染色见细胞岛及其周围基质呈橘红色,细胞分泌Ⅱ型胶原较多。 结论:幼猪软骨细胞在藻酸钠中可良好生长增殖,幼猪软骨细胞和藻酸钠复合可在体外成功构建组织工程化软骨。
  • 正常动脉和动脉粥样硬化动脉内膜上血管细胞黏附因子1的表达和分布 免费阅读 收费下载
  • 目的:比较正常动脉及糖尿病和非糖尿病患者动脉粥样硬化动脉内膜血管细胞黏附因子1的表达和分布,分析血管细胞黏附因子1在糖尿病动脉粥样硬化进展中的作用。 方法:实验于2005-01/2006-05在沈阳医学院及沈洲医院完成。标本分别来源于外伤、肿瘤手术及截肢术者的腹主动脉、股动脉及肾动脉。健康人14例,年龄(36±16)岁,非糖尿病伴动脉粥样硬化患者16例,年龄(63±3)岁,作为非糖尿病组;糖尿病伴动脉粥样硬化患者12例,年龄(64±7)岁,作为糖尿病组。应用免疫组织化学方法检测各组动脉内膜血管细胞黏附因子1的表达和分布,利用计算机图像分析仪对免疫组织化学染色切片进行灰度扫描作相对定量分析。 结果:①血管细胞黏附因子1沉积物在正常动脉内膜表达阴性或极少,动脉内膜平均灰度值为132.094±5.180。②在非糖尿病伴动脉硬化患者动脉内膜表达阳性,且散在分布在泡沫细胞、平滑肌细胞周围,动脉内膜平均灰度值为117.561±8.054。③在糖尿病伴动脉硬化患者的动脉内膜表达明显增多,主要分布在内皮和平滑肌细胞周围,中层也可见到血管细胞黏附因子1免疫沉积物表达,内膜增生明显,动脉内膜平均灰度值为84.881±6.119。利用计算机图像分析仪进行灰度扫描,灰度值越小,染色程度越高,即血管细胞黏附因子1的免疫沉积越多。 结论:血管细胞黏附因子1在糖尿病患者动脉中表达增加可以部分解释糖尿病患者易于发生动脉粥样硬化。
  • 心肌间质转化生长因子β1在心肌梗死大鼠缬沙坦干预过程中的表达特点 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察大鼠心肌梗死后心肌间质转化生长因子β1蛋白及mRNA的表达及缬沙坦对其的影响。 方法:实验于2004-12/2005-06在华中科技大学协和医院心血管研究所实验室进行。①在110只SD雄性大鼠中随机取10只为假手术组(只行开胸手术不结扎冠状动脉),剩余100只结扎冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型,将造模成功的50只大鼠随机分成模型组和缬沙坦组,缬沙坦组灌胃给予缬沙坦40mg/(kg·d),模型组给予等量生理盐水。②模型组和缬沙坦组分别于给药后7,14,28d取8或9只,应用超声心动图评价大鼠心功能变化和心室重塑的过程,然后处死取心脏,用RT-PCR及免疫组化方法检测转化生长因子β1 mRNA和蛋白表达情况。假手术组于术后28d处死,检测项目同上。 结果:58只大鼠进入结果分析。①转化生长因子β1 mRNA表达:模型组7,14,28d时高于假手术组(P〈0.05);缬沙坦组7,14,28d时低于模型组(P〈0.05)。②转化生长因子β1蛋白表达:模型组7,14,28d时高于假手术组(P〈0.05);缬沙坦组7,14d时低于模型组(P〈0.05)。③超声心动图显示模型组大鼠在术后7,14,28d时心功能明显低于假手术组(P〈0.05),缬沙坦组14,28d时心功能指标均较模型组明显改善(P〈0.05)。 结论:心肌间质转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达在心肌梗死后均增高,缬沙坦抑制其增高,并改善心室重塑,提示缬沙坦影响转化生长因子β1的表达可能是改善心肌梗死后心室重塑的机制之一。
  • 周围神经再生与神经生长因子给药途径的关系 免费阅读 收费下载
  • 目的:应用周围神经损伤模型,局部和全身给予神经生长因子,观察对周围神经再生的影响。 方法:实验于2001-06/2003-05在大连医科大学神经解剖研究室完成。选用体质量180~200gSD大鼠36只,随机分为3组,即全身用药组、全身对照组和局部用药组。其中局部用药组,右侧后肢为实验组,左侧后肢为对照组。切除大鼠5mm长的坐骨神经,两断端用硅胶管桥接形成再生室。局部用药组向右侧再生室内注入0.5mL神经生长因子;向左侧再生室内注入等量生理盐水为对照。全身用药组按5mL/kg腹腔内给药。对照组腹腔内注入等量盐水。术后9周对各组动物进行电镜观察及轴突计算机图像分析,采用辣根过氧化物法逆行追踪观察脊髓前角运动神经元的标记情况。 结果:36只大鼠全部进入结果分析。①再生坐骨神经电镜观察结果:局部用药组及全身用药组的结果基本一致,有髓神经纤维髓鞘较厚、轴突直径较粗,髓鞘厚呈板层样排列,神经再生活跃。而对照组中有髓神经纤维髓鞘较薄、直径细小。②轴突计算机图像分析:用药组轴突数目优于对照组[局部:(2781±170),(1758±103)个/μm2;全身:(2840±127),(1786±112)个/μm2,P均〈0.01];用药组轴突直径亦优于对照组[局部:(1.11±0.18),(0.64±0.17)μm,全身:(1.16±0.15),(0.87±0.17)μm,P均〈0.01]。③辣根过氧化物酶标记结果:实验组脊髓腰段横切片中,可见较多标记的前角运动神经元,而对照组中则少见。全身用药组与局部用药组结果相似。 结论:全身和局部应用神经生长因子对周围神经再生有明显的促进作用。神经生长因子也支持运动神经元存活。
  • 骨髓单个核细胞复合异种骨修复坏死股骨头 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察骨髓单个核细胞复合异种骨对坏死股骨头的修复效果。 方法:实验于2006-04/10在辽宁医学院附属第一医院骨科实验室完成。15只新西兰白兔采用杨述华等液氮冷冻法的改进方法建立双侧股骨头坏死模型,即术中只切开关节囊,不切断股骨头圆韧带,股骨头不脱位行液氮冷冻。手术后行自体对照,一侧髋关节为实验组,另一侧为对照组。实验组为髓芯减压后植入复合骨髓单个核细胞的异种骨,对照组髓芯减压后植入异种骨。术后2,4,8周两组分别行X射线检查、Masson染色检查及计算机图像分析。观察坏死股骨头修复情况。 结果:纳入新西兰白兔15只,均进入结果分析。X射线及Masson染色检查示实验组股骨头坏死修复效果优于对照组。术后2,4,8周实验组新生骨小梁体积比分别高于对照组,差异有显著性意义[分别为(25.49±0.60)%,(24.44±0.76)%;(32.45±0.37)%,(31.08±0.38)%;(37.93±0.40)%,(36.30±0.74)%,t=2.901,4.936,6.627,P〈0.05]。 结论:骨髓单个核细胞复合异种骨对坏死股骨头有良好的修复效果。
  • 多种反映心血管病的相关因子与急性冠状动脉综合征患者颈动脉斑块负荷 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨急性冠状动脉综合征患者心血管病因子之间的相关性。 方法:选择2004-08/2006-12青岛大学附属青岛市立医院的急性冠状动脉综合征患者76例,男44例,女32例,年龄(60±11)岁,纳入标准:必须至少具备下列3条标准中的2条:①缺血性胸痛的临床病史。②心电图的动态演变。③心脏血清学标志物肌钙蛋白阳性,其中不稳定性心绞痛46例、心肌梗死30例,患者知情同意。入院后经2周内行择期冠脉造影检查。术前行颈动脉超声检查,分为颈动脉斑块阳性组(n=28)和颈动脉斑块阴性组(n=48)。发病时取血,应用液相蛋白芯片结合流式细胞分析方法测定血清白细胞介素6、白细胞介素8、可溶性CD40配体、单核细胞趋化蛋白1、可溶性P-选择素、组织型纤溶酶原激活剂、可溶性血管细胞粘附分子1;常规冠状动脉造影,颈动脉超声检查。 结果:纳入急性冠状动脉综合征患者76例,均进入结果分析。组织型纤溶酶原激活剂与其余的炎症因子之间未见显著相关性;而这些炎症因子之间大部分存在相关性。颈动脉斑块阳性组血清组织型纤溶酶原激活剂水平明显低于颈动脉斑块阴性组[(1359.2±714.6),(2052.8±1700.4)ng/L,P〈0.05],其他因子浓度结果比较,差异无显著性意义。不稳定心绞痛组组织型纤溶酶原激活剂水平为(3722.2±647.9)ng/L,急性心肌梗死组组织型纤溶酶原激活剂水平为(2712.9±622.4)ng/L,两组比较无显著差异(P〉0.05)。 结论:组织型纤溶酶原激活剂是独立于急性冠状动脉综合征炎症反应以外,而反映斑块负荷的标志,急性冠状动脉综合征患者颈动脉斑块阳性结果可能提示纤溶系统受损较重。
  • 成纤维细胞生长因子对兔纤维环细胞转化生长因子β2的调节 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察成纤维细胞生长因子对培养兔纤维环细胞转化生长因子β2表达的调节作用。 方法:实验于2005-03/2006-04在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。培养4月龄雌性日本大白兔的纤维环细胞,在每次换液时加入成纤维细胞生长因子100μg/L,铺满后收集细胞,作纤维环细胞转化生长因子β2常规免疫组织化学研究,细胞呈棕黄色染色为阳性表达信号,同时为进一步明确纤维环细胞转化生长因子β2的定位进行免疫胶体金标记电镜观察。 结果:光镜下细胞明显呈棕色,电镜下细胞膜表面有明显的胶金颗粒粘附。 结论:成纤维细胞生长因子能促进纤维环细胞转化生长因子β2的表达。
  • 原位再生是心肌再生研究的重要方向 免费阅读 免费下载
  • 应用原位再生方法进行心肌再生研究正在被更多的研究者尝试,心脏原位再生被认为是今后的一个研究热点。现在有越来越多的证据表明:心脏具有自我再生的能力。在这种方法中,研究人员将支架植入到受损的心肌上,当支架被血管化后,就为植入的心肌细胞创建了一个舒适的环境和空间。为加速植入支架的血管生成和嫁接,可通过向其注入生物活性分子来提高它的发育和生存能力,
  • 高血压血管重构及高血压状态下的颈动脉血管重构 免费阅读 收费下载
  • 目的:研究高血压颈动脉重构特点、机制,为临床控制高血压并逆转颈动脉重构提供新靶点。 资料来源:应用计算机检索维普全文电子期刊数据库所有相关高血压动脉重构及颈动脉重构方面的文献,检索词“动脉重构,颈动脉重构,高血压”,限定文献语言种类为中文。同时计算机检索Entrez PubMed所有相关高血压动脉重构及颈动脉重构方面的文献,检索词“artery remodeling,carotid artery remodeling,hypertention”,限定文献语言种类为English。 资料选择:对资料进行初审,选取包括高血压大动脉重构机制及颈动脉重构方面的文献,开始查找全文。纳入标准:有关高血压颈动脉形态学、平滑肌细胞及细胞外基质重构及其机制的文献。排除标准:与高血压颈动脉重构无关的文献。 资料提炼:共检索到168篇关于高血压动脉重构及颈动脉重构的文献,最终纳入39篇符合标准的文献。 资料综合:颈动脉血管重构导致高血压的发展和并发症的出现。高血压颈动脉的重构形态学上以壁厚/腔径比值增高、顺应性下降为特点。血管中层平滑肌细胞总体积增加及动脉壁细胞外基质组成成分的变化是高血压颈动脉重构的重要内容。高血压颈动脉重构的机制与细胞增殖、凋亡及血管炎症、纤维化有关。 结论:高血压的治疗必须重视血管的保护及血管重构的逆转。通过药物干预及基因治疗,逆转血管重构,将成为多种心血管疾病治疗的重要措施。
  • 血管黏附分子中选择素结构、功能及其表达的特点 免费阅读 收费下载
  • 目的:归纳总结选择素的组成、分布、结构、表达及其选择素与配体相互作用的主要功能。 资料来源:应用计算机检索Medline数据库1990-01/2007-01有关选择素功能的相关文章,检索词“Selectin,function”,限定文章语言种类为英文。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1994-01/2007-01期间的选择素的相关文章,检索词“选择素、功能”,限定文章语言种类为中文。 资料选择:对资料进行初审,选取与选择素研究进展相关文献,然后筛除明显无关文献或相关性不强的文献,对剩余文献开始查找全文,进一步明确其相关性。纳入标准:随机对照研究;实验或临床研究包含平行对照组。排除标准:重复或类似的同一研究、综述文献(或个案报道等)。 资料提炼:共收集到79篇有关选择素研究方面的文章,33个实验或临床研究符合纳入标准。排除的46篇文献中,32篇为未随机研究或重复性研究,14篇为综述类文章。 资料综合:33个实验包括403例患者和342只实验动物,分别阐述了以下3点:①选择素家族的组成、分布:目前发现的选择素家族包括3个成员:L-选择素、P-选择素、E-选择素,P-选择素和E-选择素表达于内皮细胞,L-选择素只表达于白细胞。②选择素的结构及其表达:选择素分子是一类Ⅰ型跨膜糖蛋白,它分为胞外区、跨膜区和胞内区,3种选择素的胞外区的不同部位在同一物种或不同物种间有一定的同源性。而跨膜区和胞内区则没有同源性,胞内区是细胞内部分。③选择素的配体:选择素执行其功能离不开和其配体的相互作用,配体包括糖类配体和蛋白类配体两部分。糖类配体主要是一些寡糖基团。蛋白类配体多是一些分子量在数万到数十万单位的蛋白分子。④选择素的主要功能为:介导炎症过程中白细胞的起始黏附,参与肿瘤转移过程,参与缺血-再灌注损伤,参与血栓形成及促进创伤的修复和愈合,参与细胞内外的信号传递,参与器官移植免疫排斥反应等。 结论:①目前发现的选择素家族的3个成员,P-选择素和E-选择素表达于内皮细胞,L-选择素只表达于白细胞。②选择素的主要作用是在炎症发生时介导白细胞与血管内皮细胞的起始黏附,以及介导白细胞之间、白细胞与血小板之间的黏附。此外,在淋巴细胞归巢、炎症反应、血栓形成、自身免疫性疾病及肿瘤转移等过程中,选择素还发挥着重要作用。
  • 成纤维细胞的成骨能力 免费阅读 收费下载
  • 目的:成纤维细胞参与任何创伤的愈合。但在骨折愈合的过程中,成纤维细胞却能最终发展为骨组织。归纳总结成纤维细胞的生物学特性、成骨能力及其影响因素。 资料来源:应用计算机检索Pubmed,Ovid数据库1990-01/2006-12有关成纤维细胞生物学特性及其成骨能力的文章,检索词“fibroblasts,osteogenesis”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1994-01/2006-12期间的相关文章,检索词“成纤维细胞、成骨”,限定文章语言种类为中文。 资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章找全文。纳入标准:①有关成纤维细胞生物学特性的研究。②有关成纤维细胞与成骨的基础与临床研究。排除标准:重复或类似的同一研究、Meta分析、综述文献。 资料提炼:共收集到151篇有关成纤维细胞及成骨能力的文章,排除重复或类似的同一研究,40篇符合研究要求。 资料综合:①通过对成纤维细胞在骨折时电镜下超微结构分时段的观察,发现成纤维细胞具备成骨的条件,如提供钙化时所需的Ca^2+、分泌胶原纤维和基质小泡;并能最终转化为骨组织。②通过体外培养成纤维细胞,在诱导因素作用下可形成钙化结节。③通过对其诱导因素研究发现,成纤维细胞必须在诱导因素作用下才能成骨。其影响因素为局部骨组织、应力、生长因子、上皮细胞、病理环境等。 结论:从本身的生物学特性研究来说,成纤维细胞具备有成骨的条件。同时研究发现成纤维细胞表现为成骨是在特殊环境下,有诱导因素的作用下的结果。
  • 不同年龄段人体骨密度变化与运动的干预 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨运动对不同年龄段人体骨密度的影响。 方法:应用计算机检索中国期刊全文数据库1990-01/2006-08相关运动与骨密度的文献,检索词“运动,骨密度”,限定文献语言种类为中文。同时计算机检索highwire press1990-01/2006-08相关运动与骨密度的文献,检索词“exercise,bone density”,限定文献语言种类为English。对资料进行初审,选取包括骨密度与运动和年龄相关的文献,开始查找全文。纳入标准:运动对各年龄段骨密度影响的文章。排除标准:研究对象为健康人群不包括由于其他疾病引发的骨质疏松的文章和重复研究。共检索到532篇关于运动与骨密度的文献,最终纳入27篇符合标准的文献。 结果:本文运用文献资料法,综述不同年龄段人体骨密度变化与运动的干预,探讨运动对不同年龄段骨密度的影响。结果提示,目前关于运动对骨量增长期及衰老下降期的研究较多,结果基本一致,但对于骨量缓慢增长期的研究较少且结果不一致。 结论:运动对骨密度的影响是肯定的,但相关的研究大部分是对绝经后女性和老年人以及儿童青春期的研究,而对于在人体骨量缓慢增长期的研究很少,且结论不一致。
  • 血管内皮生长因子在口腔颌面骨组织工程中的应用 免费阅读 收费下载
  • 目的:了解血管内皮生长因子促进骨再生和修复作用的机制及应用方式,探讨其在口腔颌面骨组织工程中的应用前景。 资料来源:应用计算机检索PubMed数据库1994-01/2006-02有关血管内皮生长因子促进成骨的文章,检索词“Vascular endothelial growth factor,Bone formation,Maxillofacial bone,Bone defect”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1994-01/2006-02期间的相关文章,检索词“血管内皮生长因子、成骨、颌骨”,限定文章语言种类为中文。 资料选择:对资料进行初审,选取符合要求的有关文章找全文。纳入标准:①血管内皮生长因子及其受体分子结构方面的文章。②血管内皮生长因子促进成骨作用的基础研究和临床研究。③血管内皮生长因子在颌骨组织工程中应用的基础研究和临床研究。排除标准:重复或类似的同一研究、Meta分析、个案报道。 资料提炼:共收集到186篇有关血管内皮生长因子促进成骨作用的文章,排除重复或类似的同一研究,30篇符合要求(其中2篇为血管内皮生长因子及其受体分子结构方面的文献,18篇为血管内皮生长因子促进成骨作用的基础研究和临床研究方面的文献,10篇涉及血管内皮生长因子在颌骨组织工程中应用的研究)。 资料综合:①国内外有关血管内皮生长因子促进成骨作用的机制为:通过促进内皮细胞增殖、血管生成,调节骨组织血供并参与骨的发育形成;作为旁分泌因子参与骨形成代谢;通过调节成骨细胞和破骨细胞的活性促进骨组织的再生、修复和重建。②血管内皮生长因子在骨组织工程中的应用方式主要有外源性应用和内源性应用,外源性应用就是将外源性血管内皮细胞生长因子加入到支架和细胞的复合体中,使它通过促进血管化、调节参与成骨的多种因子及成骨细胞和破骨细胞的活性,提高成骨效能。内源性应用就是利用基因技术,将人血管内皮细胞生长因子基因转入种子细胞,使种子细胞持续的产生血管内皮细胞生长因子,为骨形成提供足够的血管化和调节骨细胞的活性。③动物实验已证实血管内皮生长因子对颌骨牵张成骨和颌骨缺损修复起着促进作用。 结论:应用外源性和内源性血管内皮生长因子构建的组织工程骨可促进骨形成和骨缺损修复,用它来加快颌面骨组织工程的骨形成和缩短疗程在理论上是可行的。
  • 工程化心肌组织构建研究仍有难点 免费阅读 免费下载
  • 由于心肌不像心脏瓣膜或血管,没有可用来替换的组织或生物材料,因此,心血管再生医学与组织工程领域中面临的最大挑战就是如何再造组织工程化心肌组织。近年来,随着组织工程技术、干细胞技术和生物材料等的快速发展,使得在体内外制造工程化心肌组织成为可能。
  • 颈椎椎后肌肉组织Ca^(2+)-ATP酶与颈椎病及颈部软组织病理变化的相关性 免费阅读 收费下载
  • 目的:通过分析Ca^2+与骨骼肌的关系,进一步阐述颈椎椎后肌肉组织内Ca^2+-ATP酶与颈椎病的关系,及颈部软组织的病理变化。 方法:应用计算机检索PubMed 1985-01/2006-12相关骨骼肌损伤与肌组织Ca^2+-ATP酶关系方面的文献,检索词“Ca^2+pump,Ca^2+-ATPase,skeletal muscle”。限定文献语言种类为English。同时计算机检索CNKI与万方数据库1990-01/2006-12相关钙ATP酶与骨骼肌损伤的关系,及颈椎病发病病因的文献。检索词“钙ATP酶(Ca^2+-ATP酶),骨骼肌,颈椎病病因”,限定文献语言种类为中文。对资料进行初审,选取包括Ca^2+-ATP酶与肌组织损伤相关的文献,开始查找全文。纳入标准:Ca^2+-ATP酶活性变化与骨骼肌损伤密切相关的文献研究。排除标准:重复研究,Meta分析类文章。共检索到4050篇关于Ca^2+-ATP酶活性变化,骨骼肌损伤及颈椎病发病原因等方面的文献,最终纳入24篇符合标准的文献。 结果:目前对酶活性变化与骨骼肌损伤的关系研究已较为广泛。而骨骼肌损伤作为颈椎病发病的一个因素,以酶活性变化作为指标来观察颈椎病发病时颈部软组织病理变化情况,及治疗后软组织病理变化情况的研究则较为少见。众多研究表明Ca2+是参与骨骼肌收缩的重要离子之一,与骨骼肌的生理病理有密切关系,而肌细胞内质网膜上的Ca^2+-ATP酶是调节细胞内Ca^2+浓度的重要蛋白质之一。骨骼肌慢性劳损易导致ATP酶活性下降,而酶活性的下降加重骨骼肌损伤,而引发系列疾病。强迫屈颈体位作为颈椎病发病的危险因素之一,可使颈椎椎后肌肉Ca^2+-ATP酶活性降低,酶活性降低致使肌细胞损伤,并最终导致骨骼肌损伤而发病。 结论:Ca^2+-ATP酶活性变化是颈部软组织病理变化的一个重要指标之一。同时,该酶的活性变化也与颈椎病发病有着密切的关系。
  • 骨形态发生蛋白载体的研究与应用 免费阅读 收费下载
  • 目的:介绍近几年来骨形态发生蛋白载体的研究及应用进展。 资料来源:应用计算机检索PubMed 1965-01/2006-07相关骨形态发生蛋白的文章,检索词“Bone Morphogenetic Protein,BMP and carriers”,限定文章语言种类为English。 资料选择:对资料进行初审,选取包括骨形态发生蛋白的文献,然后删除明显与载体无关的研究,对剩余文献查找全文。纳入标准:与骨形态发生蛋白载体研究应用相关的动物实验。排除标准:重复研究、Meta分析类文章。 资料提炼:共检索到1000篇关于骨形态发生蛋白的文献,最终纳入37篇符合标准的文献,分别介绍了骨形态发生蛋白成员载体的研究、临床应用及动物实验。 资料综合:骨形态发生蛋白具有诱导骨形成活性特点,是目前的研究热点。骨形态发生蛋白应用于修复骨缺损需复合适宜的载体,目前已有多种材料用于其载体,有植入性和注射性载体两类,包括生物陶瓷、骨水泥、高分子多聚体、胶原、纤维蛋白凝块等。这些材料理化性质和生物学性质各不相同,因此与骨形态发生蛋白复合后的载体也各具特色。本文介绍了不同载体与骨形态发生蛋白复合体的各自特点,并回顾了各种载体材料的研究和应用现状。 结论:骨形态发生蛋白属于超级转化因子β家族,可诱导骨形成,复合各种载体可应用于骨缺损的修复。
  • 细胞因子中白细胞介素受体的平衡 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨白细胞介素受体的结构、信号转导及临床意义。 资料来源:应用计算机检索Medline 1994-01/2006-01关于白细胞介素及其受体的文章,检索词为“Interleukin recepertor”并限定语言为英文,同时计算机检索万方数据库2004-04/2006-04关于白细胞介素受体的文章,限定语种为中文,检索词为“白细胞介素受体”。 资料选择:对资料进行初审,选取与白细胞介素受体有关的文章,删除明显无关文献或相关性不强的文献,对剩余文献查找全文,进一步明确其相关性。纳入标准:随机对照研究;实验或临床研究包含平行对照组。排除标准:重复性研究和综述类文章。 资料提炼:共收集到74篇有关白细胞介素及其受体的文章,31个实验或临床研究纳入标准。排除重复性研究及综述类文章。 资料综合:31个研究包括1600例患者和432只动物,分别阐述了白细胞介素受体的结构,信号转导及作用机制,白细胞介素受体与临床疾病如变态反应性、自身免疫性、肿瘤、炎症等的关系。①白细胞介素受体的结构:白细胞介素受体均为跨膜糖蛋白结构,其N端位于细胞外,C端进入胞内,跨膜区为数目不等的氨基酸组成的肽链。②白细胞介素受体的信号转导:包括JAK-STAT途径、Ras-MAPK级联反应途径和p13k途径。③白细胞介素受体与疾病:白细胞介素受体与炎症、自身免疫性疾病、肿瘤、器官移植、骨质疏松及某些心肌病变的发生、发展有密切关系。 结论:白细胞介素作为一种重要的细胞因子,其作用的发挥主要是通过其受体完成,白细胞介素受体与疾病的发生、发展有密切关系。对白细胞介素受体的信号转导及作用机制的研究,有助于阐明多种疾病的发病机制,尤其对临床疾病的诊断、治疗、预后判断等方面有重要的意义。
  • 以色列科学家造出带有血管的三维组织切片修复受损心脏 免费阅读 免费下载
  • 以色列科研人员目前已在实验室中成功创造出世界第一颗搏动的“微型心脏”,有望用于修复心脏组织。这是科学家首次成功创造出包含所有关键细胞的心脏组织。重要的是他们发现了一种让构成心脏的不同类型细胞共同成长并发挥作用的方法。
  • 微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化及蛋白激酶C活性的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:转录因子NF-E2相关因子2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,有实验表明转录因子NF-E2相关因子2能被蛋白激酶C家族中的众多成员磷酸化,为进一步研究微波辐射造成氧化应激损伤的产生机制,是否可以从转录因子NF-E2相关因子2途径观察微波辐照对抗氧化调控系统的影响? 目的:分析微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2的磷酸化及蛋白激酶C活性的影响。 设计:观察对比实验。 单位:解放军第三军医大学劳动卫生学教研室。 材料:血管内皮细胞株,H332PO4,Protein-A Sepharose(Sigma公司),转录因子NF-E2相关因子2单抗(H-300,Santa Cruz),蛋白激酶Cα单抗(Santa Cruz),玻纤滤膜(Whatman公司)凝胶扫描系统(Gel Doc 2000,Bio-Rad),液闪测定仪(LKB-117瑞典)。 方法:实验于2003-03/07在解放军第三军医大学劳动卫生学教研室电磁辐射生物效应研究室完成。①转录因子NF-E2相关因子2磷酸化分析:血管内皮细胞以DMEM培养液培养至细胞生长至旺盛期,加入32Pi孵育标记2h,将细胞培养瓶置于37℃水浴盒中,在反射系数近似零的微波暗室接受微波辐照,为辐照组,辐照平均功率密度为30mW/cm2,辐照时间30min;以未接受辐照的细胞为对照组。采用免疫共沉淀-放射自显影法测定转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平,用凝胶扫描系统对细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平进行半定量分析,对照组细胞直接进行分析。②蛋白激酶C蛋白激酶活性分析及表达量测定:辐照组及对照组细胞培养方法、条件,辐照方式、剂量、条件同前。于辐照后2,4,8,24h裂解细胞,提取胞浆和胞膜蛋白,采用r-32P-ATP标记液闪法进行蛋白激酶C活性测定;采用凝胶扫描系统对蛋白条带灰度进行半定量分析;对细胞进行蛋白激酶C免疫细胞化学染色后于光镜下观察细胞胞浆的着色程度,对照组均直接给予测定和观察。 主要观察指标:①辐照组及对照组转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平检测结果。②细胞蛋白激酶活性分析及表达量测定结果。 结果:①辐照组及对照组转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平测定结果:辐照组辐照后2,4,8h,转录因子NF-E2相关因子2条带灰度强于对照组细胞,辐照4h,转录因子NF-E2相关因子2磷酸化达到峰值水平,条带灰度扫描半定量分析显示辐照2,4,8h辐照组细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平较对照组分别增加33%,261%,141%(t=2.974,4.209,4.047,P〈0.05),24h恢复正常。②辐照组及对照组细胞蛋白激酶C表达量及活性检测结果:微波辐照2,4,8h,辐照组细胞蛋白激酶C表达量高于对照组,以4h最明显,辐照后24h恢复正常;免疫细胞化学染色显示辐照组细胞辐照4h胞浆着色强度强于对照组;r-32P-ATP标记液闪法显示辐照2,4,8h,辐照组细胞蛋白激酶C活性较对照组分别增加了36%,93%,47%(t=2.801,3.654,3.035,P〈0.05),24h有回落。蛋白激酶C激活的峰值发生在照射后4h。 结论:微波辐照可引起血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平在一定时段内增强,同时可引起细胞蛋白激酶C表达增加,其活性变化时间效应与转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平有一致性。
  • 脊髓损伤后神经营养因子及干细胞治疗对轴突再生的影响:国外基础和临床研究新进展 免费阅读 收费下载
  • 背景:近几年国外学者在脊髓损伤的病理机制、损伤后神经元的保护、少突胶质细胞的再生及神经干细胞的移植治疗等研究方面取得了实质性地进展。介绍国外近10年来对脊髓损伤的新认识,最新研究成果及未来的科研和治疗方向。 资料来源:应6用计算机检索Medline数据库1987-01/2006-10脊髓损伤的相关文章,限定文章语言种类为English,检索词为“脊髓损伤;神经干细胞;轴突;神经营养因子;动物模型”,进行不同组合,选出相关文章。 资料选择:对资料进行初审,选择脊髓研究中的与神经干细胞及神经营养因子有关的研究文献查找全文。纳入标准:①脊髓损伤中以探讨其机制及新治疗方法的文章。②探讨脊髓损伤后轴突再生,生长锥作用,引导再生方向的靶点,突触再形成及功能重建的文章。③神经营养因子和内源性神经干细胞治疗的文章。排除标准:①未被SCI收录的文章,相类似的研究。②无英文摘要的文章。 资料提炼:共收集到相关文献1166篇,按上述标准纳入101篇,实际采用61篇,脊髓损伤机制相关文献12篇,轴突再生相关文献14篇,增长锥作用相关文献8篇,少突胶质细胞相关文献8篇,神经干细胞相关文献7篇,神经生长因子相关文献12篇。其余文献均被排除。 资料综合:①脊髓损伤功能恢复的基础:损伤的轴突再生及增长;轴突穿透损伤瘢痕区的能力;轴突朝着正确的靶区方向再生;轴突增长到一定程度后停止,终端形成突触,与神经元相接;神经传递功能重建及运动功能重新恢复。②脊髓损伤的神经病理分析:脊髓损伤后的原发性损害、继发性损害。③脊髓损伤的分子生物学机制包括3个方面:对于成年人中枢神经系统损伤后的神经元的发展、再生,神经元通路的建立起着重要的作用轴突增长锥;对轴突的再生起到抑制作用中枢神经系统髓鞘蛋白;细胞膜和细胞内信号传递。④脊髓损伤中起重要作用的细胞和因子:少突胶质细胞,白血病抑制因子和Minocycline,内源性神经干细胞。⑤脊髓损伤动物模型:最常使用的模型是全部离断、部分离断模型和挫伤模型。⑥脊髓损伤研究的前景:已经开始把动物实验中神经营养因子和神经干细胞治疗发现用于临床,如白血病抑制因子在国外已经开始临床Ⅳ期实验,对内源性神经干细胞的诱导调控增殖研究也已经越来越受到重视。 结论:神经营养因子干预治疗及神经干细胞治疗使脊髓损伤后的功能恢复成为可能。进一步探讨神经营养因子引起轴突再生的机制,将是脊髓损伤研究领域的未来方向,了解引导调控神经干细胞的增殖和分化方向,将在修复脊髓损伤方面发挥巨大的作用。
  • 骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异 免费阅读 收费下载
  • 背景:近年来,发现一些基因的单核苷酸多态性可能与骨关节炎的易感性有关,以往研究主要集中于骨关节炎与类风湿性关节炎滑膜细胞基因表达差异,滑膜成纤维细胞与其他组织成纤维细胞基因表达差异与骨关节炎的关系有待研究。 目的:观察骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。 设计:观察对比分析。 单位:深圳市人民医院。 材料:骨关节炎患者(均符合1995年美国风湿病学会的骨关节炎诊断标准)滑膜及正常志愿者皮肤由深圳市人民医院骨科提供,所有提供皮肤者均对实验项目知情同意。RPMI 1640培养基、胎牛血清、TRIZOL试剂(美国Invitrogen Life Technologies公司),pGEM-T质粒系统(美国Progema公司),Display PROFILE-BASIC及Display PROFILEProbe试剂盒(美国Qbiogen公司)。 方法:实验于2005-01/06在深圳市人民医院完成。选取骨关节炎患者滑膜,经原代培养获得滑膜成纤维细胞,采用正常志愿者原代培养皮肤成纤维细胞作为对照。采用限制性酶切片段差异展示技术分离骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异表达的基因,使用blast比对将所得序列与Genbank中所有序列进行比对分析。主要观察指标:关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。 结果:骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与正常志愿者皮肤成纤维细胞相比,超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因表达水平较高。 结论:超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因在骨关节炎滑膜成纤维细胞表达水平高于皮肤成纤维细胞中相应基因表达水平,表明这些基因在骨关节炎疾病的发生过程中可能起到一定作用。
  • 南方医科大学珠江医院血液科 免费阅读 免费下载
  • 研究方向: 1.肿瘤的免疫细胞治疗 在理论上:提出致癌因素在诱发体细胞癌变的同时损伤了患者的免疫功能,导致了免疫监视能力的低下,从另一个侧面认识肿瘤的发展和转移的机制。
  • 《中国神经再生研究(英文版)》一本令神经再生研究专业领域感兴趣的杂志 免费阅读 免费下载
  • [研究与报道]
    脱细胞基质骨与成骨细胞和血管内皮细胞的生物相容性
    FasL^+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植(王树军 张惠珍 王颖 金姝 丁永霞 葛瑜 沈天伟 葛海良)
    微重力三维动态诱导骨髓间充质干细胞复合可注射型支架材料Pluronic F-127修复关节软骨缺损(王会才 张震宇 辛伟光)
    急性心肌梗死大鼠梗死区血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1αmRNA表达及人参皂苷Rg1的干预效应(金岩 刘闺男)
    人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与白细胞介素1β的相关性
    家兔动脉成形术后血管内膜增殖与普伐他汀联合阿司匹林的干预效应
    透明质酸钠联合转化生长因子β1关节腔注射对兔膝骨关节软骨的保护效应(陈昌红 王宸 钱卫庆)
    人成纤维细胞生长因子7的基因克隆和蛋白鉴定(韩兵 陈伟 付小兵)
    髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠脑组织的表达特征
    碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脑血肿周围组织和海马bax及bcl-2基因表达的调节
    胶原诱导型关节炎模型大鼠血浆血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子α表达及反应停的干预效应(刘曦 邵福灵 刘爱京)
    肺纤维化模型大鼠肺组织中转化生长因子β1及转化生长因子β1mRNA的表达及黄芪莪术合剂的干预效应
    同种异体组织工程化软骨局部免疫豁免诱导的实验
    兔骨髓间充质干细胞及聚羟基乙酸支架材料构建人工软骨的可行性
    藏汉两族人群血管内皮功能的差异比较
    动脉内皮细胞黏附分子和核因子κB表达及银杏叶提取物的抑制作用
    脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达的关系
    胰岛素样生长因子及其受体对脑缺血再灌注后大鼠神经行为功能的影响(孙锋 丁晓洁 王超 郭云良)
    基于分形理论的人体骨微观结构仿生设计(毛娅 陈作炳)
    动脉粥样硬化模型主动脉血管细胞黏附分子1mRNA表达量与益气活血法干预的量效关系

    胎儿皮肤神经肽P物质和肥大细胞与无瘢痕愈合的关系(张恒术 任海涛)
    外源性一氧化氮对创伤愈合过程中一氧化氮合酶表达及瘢痕形成的影响(仇树林 张培培 李兵 韩胜 张芾男)
    猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质的联合培养(冷晔 高艳琴 丁祖泉)
    应用表皮干细胞构建组织工程皮肤及移植实验
    兔骨髓间充质干细胞构建组织工程化海绵体尿道的可行性(黄红军 张金明 储海函)
    更正
    钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发育中的表达
    《第三军医大学学报》(半月刊)征订启事
    原代培养海马神经元周期素依赖性蛋白激酶5及其活性在低氧环境中的变化
    原代培养鼠胚脊髓运动神经元活力状态与肌萎灵注射液的干预作用
    家兔“风门”穴皮内神经末梢感受器通路的研究
    正常和链脲佐菌素诱导糖尿病模型大鼠体外破骨细胞样细胞的培养方法
    全层软骨缺损合并深部“微骨折”兔软骨修复情况(张远金 柯雯昙)
    补肾方药归经与实验性骨质疏松靶器官信号转导分子Smad2的表达
    牛骨形态发生蛋白对骨质疏松性椎体骨折愈合过程中局部血管内皮生长因子表达的作用
    小剂量乙醇长期摄入对生长期小鼠松质骨代谢的影响(陈艳 吴铁 陈文双 凌娟)
    巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建
    可注射性材料藻酸钠体外培养幼猪关节软骨细胞及形成组织工程化软骨的能力
    正常动脉和动脉粥样硬化动脉内膜上血管细胞黏附因子1的表达和分布(隋璐 沈薇 苏禄辉)
    心肌间质转化生长因子β1在心肌梗死大鼠缬沙坦干预过程中的表达特点(陈昭喆 宋亚辉 谢秀乐 袁俊强 孙向东)
    周围神经再生与神经生长因子给药途径的关系
    骨髓单个核细胞复合异种骨修复坏死股骨头(卢伟 付松 张元和)
    多种反映心血管病的相关因子与急性冠状动脉综合征患者颈动脉斑块负荷(滕金龙 康维强 宋达琳 任国瑞 李梅)
    成纤维细胞生长因子对兔纤维环细胞转化生长因子β2的调节(柯新 叶树楠 熊晓芊 赵明)
    原位再生是心肌再生研究的重要方向
    高血压血管重构及高血压状态下的颈动脉血管重构
    血管黏附分子中选择素结构、功能及其表达的特点(才立云 赵宝春 耿旭)
    成纤维细胞的成骨能力
    不同年龄段人体骨密度变化与运动的干预
    血管内皮生长因子在口腔颌面骨组织工程中的应用
    工程化心肌组织构建研究仍有难点
    颈椎椎后肌肉组织Ca^(2+)-ATP酶与颈椎病及颈部软组织病理变化的相关性
    骨形态发生蛋白载体的研究与应用
    细胞因子中白细胞介素受体的平衡(付盈菊 赵宝春)
    以色列科学家造出带有血管的三维组织切片修复受损心脏
    微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化及蛋白激酶C活性的影响(钟敏 陈阳 张广斌 余争平)
    脊髓损伤后神经营养因子及干细胞治疗对轴突再生的影响:国外基础和临床研究新进展
    骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异
    南方医科大学珠江医院血液科
    《中国神经再生研究(英文版)》一本令神经再生研究专业领域感兴趣的杂志
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

    主管单位:中华人民共和国卫生部

    主办单位:中国康复医学会 《中国组织工程与临床康复》杂志社

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