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  • 胎盘免疫调节因子对细胞因子诱导的杀伤细胞超微结构及免疫表型的调节作用 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过电子显微镜、流式细胞仪观察经胎盘免疫调节因子处理的细胞因子诱导的杀伤细胞超微结构及免疫表型变化,了解胎盘免疫调节因子的免疫调节活性。方法:实验于2006-02/2007-01在广西医科大学医学科学实验中心重点实验室进行。实验材料:重组人干扰素γ和白细胞介素1α为Peprotech公司产品。重组人白细胞介素2和抗人CD3单克隆抗体为北京远策药业有限公司产品。实验方法:①胎盘免疫调节因子的制备:将新鲜经检人胎盘去筋膜,生理盐水冲净、剪碎匀浆,置-20℃48h后,反复冻融3次,用生理盐水透析,取透析外液,过虑除菌,分装,抽样做有关鉴定实验。②细胞因子诱导的杀伤细胞的制备:抽取健康自愿者静脉血20mL,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,加RPMI1640培养液调整细胞的密度至1×10^9L^-1,放于50mL培养瓶中培养。于当天加入1×10^6U/L干扰素γ,置于37℃、50mL/LCO2孵育箱中培养24h。次日将悬浮的细胞转移到6孔板培养中,分别加入终浓度为100mg/L的PHA、3×10^5U/L白细胞介素2、133μg/L抗CD3mAb及1×10^5U/L白细胞介素1α,每3d半量换液1次,同时补加白细胞介素2至3×10^5U/L。将培养14d细胞因子诱导的杀伤细胞以5×10^9L^-1接种于24孔板,实验组中加入一定剂量的胎盘免疫调节因子诱导,对照组加入等量生理盐水,继续培养72h。③实验评估:制备电镜标本,观察细胞超微结构。采用流式细胞术测定细胞因子诱导的杀伤细胞CD4^+、CD8^+、CD3+CD4^+、CD3^+CD8^+、CD25^+、HLA-DR、CD3^+CD56^+、CD80^+百分含量。结果:①细胞因子诱导的杀伤细胞表型分析:实验组CD4^+、CD8^+和CD3^+CD4^+明显低于对照组[实验组:(8.40±8.15)%,(33.10±4.61)%,(7.98±12.65%);对照组:(39.43±9.16)%,(58.90±11.35)%,(31.30±5.94)%,P〈0.05];实验组CD3^+CD8^+、CD25^+表达明显高于对照组[实验组:(30.50±2.56)%,(24.8±6.31)%;对照组:(15.90±7.35)%,(0.56±0.21)%,P〈0.05]。②透视电镜下观察细胞因子诱导的杀伤细胞超微结构特征:与对照组相比,实验组细胞因子诱导的杀伤细胞线粒体深染,溶酶体增加,异染色质比例增加,微绒毛肿胀及增长等。结论:胎盘免疫调节因子能促使细胞因子诱导的杀伤细胞超微结构及细胞表型发生明显变化:细胞因子诱导的杀伤细胞线粒体深染,溶酶体增加,异染色质比例增加,微绒毛肿胀增长,CD3^+CD8^+、CD25^+细胞百分比升高,CD4^+、CD8^+和CD3^+CD4^+细胞百分比降低。
  • 白细胞介素13刺激成纤维细胞胶原基因转录和胶原蛋白的合成 免费阅读 下载全文
  • 目的:以成纤维细胞株3T3为实验对象,观察白细胞介素13对成纤维细胞株3T3胶原合成作用,探讨白细胞介素13对纤维化形成的作用机制。方法:实验于2005-03/2006-10在江西医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室进行。实验材料:成纤维细胞株3T3细胞为江西省医学科学研究所江西省医学生物高技术重点实验室保存。白细胞介素13购自Peprotech公司。实验方法:①3T3细胞培养:3T3细胞常规培养在含体积分数为0.15胎牛血清、100U/mL青、链霉素的DMEM培养液中,置于37℃、含体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,并分为实验组和对照组,两组细胞均用无血清DMEM培养12~16h,实验组加入100μg/L白细胞介素13,作用24,48,72h后进行以下实验。②应用Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13作用下,3T3细胞体外合成胶原纤维情况。细胞培养上清液采用羟脯氨酸实验检测细胞分泌的总胶原蛋白含量。采用RT-PCR检测3T3细胞Ⅰ型胶原α1基因(COL1A1)mRNA的表达。采用Western blotting检测白细胞介素13作用后成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:①Van Gieson胶原纤维特殊染色观察白细胞介素13对成纤维细胞体外合成胶原纤维的影响:有胶原纤维地方被Van Gieson液染成红色,细胞核则为灰黑色。显微镜下可见成纤维细胞呈放射状、编织状或旋涡状排列,细胞体呈梭形或不规则三角形,胞质向外伸出大小不等的突起,核为椭圆形,位于胞浆的中央,在白细胞介素13孵育的3T3细胞中可观察到较多的胶原纤维。②羟脯氨酸实验检测白细胞介素13对成纤维细胞分泌总胶原含量影响:白细胞介素13刺激3T3细胞分泌的总胶原含量24h后即明显增高,持续至72h(t=6.751,P〈0.01),明显高于对照组(t=3.019,P〈0.05)。③RT-PCR检测白细胞介素13作用下3T3细胞Ⅰ型胶原α1mRNA水平:在511bp(β-actin)和378bp处(COL1A1)均可见一明显条带。④Western blotting检测白细胞介素13作用下Ⅰ型胶原蛋白表达情况:白细胞介素13作用3T3细胞0,24,48,72h后,Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐增强,与actin蛋白相比,差异显著(P〈0.05)。结论:白细胞介素13可促进3T3细胞胶原基因的转录和胶原蛋白的合成,可能在纤维化疾病发病机制中发挥重要作用。
  • 白细胞介素1β诱导肾小管上皮细胞的转分化 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察白细胞介素1β对肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞分泌功能的影响。方法:实验于2005-06/2006-01在泸州医学院附属医院传染免疫研究室完成。以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,给予白细胞介素1β(10μg/L)刺激,12,24,48,72h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测α-平滑肌肌动蛋白和E-钙粘连素的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白含量。结果:白细胞介素1β刺激48h后肾小管上皮细胞转变为明显类似成纤维细胞形态;刺激12h即可见α-平滑肌肌动蛋白的表达由64.80±2.19增加到83.23±2.71(P〈0.05),E-钙粘连素的表达由81.77±1.27减少到64.50±1.31(P〈0.05),随刺激时间延长上述变化越明显,72hα-平滑肌肌动蛋白表达增加到170.53±3.94;E-钙粘连素表达减少到26.20±2.32。细胞培养上清液中纤维连接蛋白含量随时间延长增加(P〈0.05),白细胞介素1β刺激72h时纤维连接蛋白增加1倍。结论:白细胞介素1β可诱导肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,增加纤维连接蛋白的分泌。
  • 大鼠主动脉内膜损伤后新生内膜各种生长因子表达与表没食子儿茶素没食子酸酯的干预 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3 gallate,EGCG)对大鼠主动脉内膜损伤后再狭窄的影响,探讨其对新生内膜各种生长因子表达的干预效应。方法:实验于2006-03/10在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。实验分组:选用清洁级雄性健康SD大鼠72只,体质量(300±35)g,随机数字表法分为对照组、模型组、EGCG低剂量组和EGCG高剂量组,每组18只。实验方法:以球囊损伤方法建立大鼠主动脉内膜损伤模型。①对照组:结扎左颈总动脉,不插入球囊导管,不给药。②模型组:结扎左颈总动脉并球囊拉伤主动脉内膜,不给药。③EGCG低剂量组:拉伤主动脉内膜,给予20mg/(kg.d)EGCG灌胃。④EGCG高剂量组:拉伤主动脉内膜,给予50mg/(kg.d)EGCG灌胃,药物组术前3d给药。对照组及模型组予生理盐水灌胃,直至实验结束。实验评估:每组于术后14,28d分别随机选取9只大鼠,取其主动脉进行苏木精-伊红染色并作血管形态学检测;同时进行免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子BB、碱性成纤维细胞生长因子、生长转化因子β1的表达水平。结果:纳入大鼠72只,其中模型组28d时1只鼠死于腹主动脉血栓;14d时1只鼠右后肢出现血栓性跛行;EGCG低剂量组14d时1只死于手术急性呼吸窘迫综合征,1只死于术后21d胸水形成,无血栓形成现象;EGCG高剂量组14,28d各有1只分别因感染、误灌入气管死亡,无血栓形成现象;对照组动物生长状况良好;最后67只大鼠进入结果分析。①模型组新生内膜显著增厚,新生内膜平均厚度、面积自胸主动脉到腹主动脉上段及下段逐渐增加、狭窄逐渐明显。②EGCG低剂量组新生内膜平均厚度及面积于术后14d下降,与模型组比较,无显著差异[(45.89±9.54),(60.75±17.70)μm;(1.10±0.29),(1.55±0.61)mm^2;P〉0.05],但两者于术后28d则显著降低(P〈0.05);EGCG高剂量组术后14,28d的新生内膜平均厚度、面积均显著下降[14d:(20.21±5.55),(60.75±17.70)μm;(0.48±0.22),(1.55±0.61)mm^2;28d:(35.08±12.39),(80.75±22.27)μm;(0.82±0.50),(2.35±1.03)mm^2;P〈0.01]。③模型组动脉增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子BB、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1表达显著增加;低剂量EGCG对内膜损伤后增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达无明显抑制作用;而高剂量在术后14,28d均显著抑制增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达。EGCG对转化生长因子β1表达无影响。结论:EGCG剂量依赖性地抑制动脉内膜损伤后再狭窄,其作用与抑制血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达有关。
  • 犬内皮与平滑肌细胞的短期静态联合培养 免费阅读 下载全文
  • 目的:为获得组织工程化自体血管,观察体外静态培养条件下犬内皮细胞与平滑肌细胞联合培养组织学及形态学的特征。方法:实验于2004-07/2005-06在首都医科大学宣武医院外科院级实验室完成。①实验材料:雄性杂种犬,3个月龄,体质量8~12kg。②实验方法:贴块法及酶解法对犬内皮细胞及平滑肌细胞进行原代分离培养及扩增,将第Ⅱ代平滑肌细胞以1×10^9L^-1的密度种植于胶原膜上培养13d,再将第Ⅱ代内皮细胞接种于生长平滑肌细胞的胶原膜上2d。③实验评估:行苏木精-伊红染色同时扫描电镜和透射电镜观察平滑肌细胞和内皮细胞在胶原载体上联合培养后的形态。结果:苏木精-伊红染色见平滑肌细胞较均匀的分布于支架材料表面及内部;扫描电镜下,平滑肌细胞可以在胶原载体材料上生长,增殖明显并在短期内形成多层细胞。内皮细胞与平滑肌细胞联合培养2d就可在平滑肌细胞层表面获得连续的单层内皮细胞层。结论:在短期静态培养条件下犬的血管平滑肌细胞和内皮细胞可以在胶原载体材料上形成具有两层细胞结构的组织工程化动脉血管组织片。
  • 恒磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察不同磁感应强度恒磁场对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2活性的影响,以探讨磁场是否能用于经皮冠状动脉支架介入治疗术后再狭窄的防治。方法:实验于2005-12/2006-08在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成。取纯种雄性SD大鼠,体质量200~250g,用含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验随机分为对照组,1Gs恒磁场组、5Gs恒磁场组、10Gs恒磁场组、50Gs恒磁场组,其中对照组不予磁场干预,其他各组分别给予磁场干预继续培养48h。运用基质金属蛋白酶2活性酶图分析法结合吸光度扫描分析,观察恒磁场对血管平滑肌细胞的基质金属蛋白酶2表达的影响。结果:与对照组相比,各组基质金属蛋白酶2的活性均明显被抑制,差异有显著性意义[(831.25±2.38)×10^2,(690.57±2.57)×10^2,(574.35±1.98)×10^2,(401.05±1.96)×10^2,(316.23±3.24)×10^2,P〈0.05],不同磁场强度组组间分析显示具有剂量依赖性,随磁场强度加大,抑制作用也增强。结论:适当强度的恒磁场抑制血管平滑肌细胞的基质金属蛋白酶2活性的表达,磁场对经皮冠状动脉支架介入治疗术后的再狭窄可能具有防治作用。
  • 国家自然科学基金2007年面上项目关于生物医学工程学学科领域课题申请初审结果选介 免费阅读 下载全文
  • 2007年度国家自然科学基金委员会在集中受理期间共接收申请项目70372项。按照《国家自然科学基金项目管理规定(试行)》及相关项目管理办法、2007年度项目指南和申请通告的要求对申请项目进行了初审。
  • 血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2在血管瘤不同生长过程中的表达特征 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2在血管瘤不同分期中的表达。方法:取自承德医学院附属医院1998-01/2005-12期间血管瘤手术切除的标本共60例及正常带血管皮肤手术切除标本10例,患者家属知情同意。①实验分组:根据Mulliken标准进行病理诊断并分类,所有标本共分4组。增生组22例;退化组20例;退化完成组18例。另取10例正常带血管皮肤组织作为对照组。②采用免疫组织化学S-P法对各组标本的血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶2进行染色。③实验评估:以正常血管上皮细胞或肿瘤细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性,检测各组血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2的表达。结果:①随着血管瘤病理时期的变化,血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2出现明显不同的表达。②增生组血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2的阳性表达率明显高于其他各组,且随着血管瘤的退化,两者的阳性表达率逐渐下降,至退化完成期时与对照组几乎无差别。③血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2的表达呈正相关。结论:血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2在血管瘤的不同分期中起重要作用,其表达水平与血管瘤的病理分期有密切关系。
  • 应用纳米晶胶原基骨体外构建组织工程骨 免费阅读 下载全文
  • 目的:应用组织工程技术,建立体外诱导人骨髓间充质干细胞,与纳米晶羟基磷灰石/胶原骨共培养的人工骨模型,探求细胞与纳米晶胶原基骨结合的最佳模式。方法:实验于2005-09/2006-09在江苏大学医学技术学院中心实验室完成。①实验材料:纳米晶胶原基骨材料由清华大学材料系崔福斋等人研制。骨髓取自骨科取髂骨患者(男性,30岁,患者知情同意)。②实验干预:全骨髓法体外培养骨髓间充质干细胞并扩增,应用成骨诱导剂诱导向成骨细胞表型转化。取纳米晶胶原基骨材料经60Co照射灭菌,无水乙醇疏水化,三蒸水洗去乙醇等处理制备支架材料。细胞与支架材料复合培养。③实验分组:骨髓间充质干细胞培养至第3代后分为两组:复合材料后加成骨诱导剂组:骨髓间充质干细胞先与纳米晶胶原基骨复合培养3d后再加入成骨诱导剂;成骨细胞复合材料组:骨髓间充质干细胞在诱导成骨细胞后与纳米晶胶原基骨复合培养。④实验评估:记录第3代骨髓间充质干细胞生长曲线。将诱导后细胞分别进行碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色。扫描电镜比较两组复合物经体外孵育2周后,细胞在其中生长情况。结果:①细胞生长情况:倒置显微镜下观察原代培养的骨髓细胞增殖迅速,基本都呈形态均一成纤维样细胞,10~12d左右即可长满,并可稳定传代,传代细胞7~9d即可传代。诱导培养后的细胞呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征。构建出骨髓间充质干细胞与骨组织共培养的模型。②体外复合后细胞生长及基质分泌情况:细胞可在纳米晶胶原基骨内表面良好贴壁,复合材料后加成骨诱导剂组,细胞贴附,但成骨细胞少见;成骨细胞复合材料组,细胞数量明显较前者多。复合培养8d,分布于支架材料上的细胞大量增殖、分泌细胞外基质。第14天,大量细胞在材料表面和孔隙中生长。细胞之间广泛存在突起连接,局部有胶原分泌,且可见成骨细胞形成。结论:证实纳米晶胶原基骨适合种子细胞的贴附、生长和增殖,经成骨诱导后的细胞较骨髓间充质干细胞更易与材料贴附、增殖。
  • 增强型绿色荧光蛋白标记技术示踪组织工程化骨形成 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法:实验于2005-07/2006-11在南昌大学第二附属医院分子医学实验室完成。选取12个月龄中国青山羊2只作为骨髓基质干细胞供体。另取BACB/un裸鼠9只作为骨髓基质干细胞-珊瑚复合物受体。①将已转化pEGFP-N2大肠杆菌109菌种,进行质粒提取并经AvaⅡ酶切鉴定。②脂质体lipofectamine2000介导转染羊骨髓基质干细胞。分别于转染24h、6个月后计算荧光的转染效率。标记与未标记细胞经成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶活性和四环素钙结节染色,以未标记的同期细胞作对照。③将标记细胞接种于珊瑚支架,形成骨髓基质干细胞-珊瑚复合物,分别于体外培养4,7,14d后进行电镜扫描观察。④将体外培养7d的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,荧光显微镜下进行示踪观察,苏木精-伊红染色观察组织结构。以未标记的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照。结果:共纳入中国青山羊2只,BACB/un裸鼠9只,作为受体的9只裸鼠进入结果分析。①质粒经酶切后电泳,可见3条带,分别为445bp,1938bp,2354bp,确定所提质粒为pEGFP-N2。②转染24h后绿色荧光表达率35%;经G418筛选,转染6个月后绿色荧光表达率75%;与对照组相比,标记细胞碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P〉0.05),均具有钙结节形成能力。③标记细胞与材料贴附生长良好,并分泌胶原纤维及钙盐结晶样基质。④组织学示新生骨样组织围绕材料孔隙生成;新生组织细胞内有绿色荧光表达,同时对照组未观察到绿色荧光。结论:脂质体介导法转染的pEGFP-N2标记骨髓基质干细胞,可用于裸鼠体内示踪,是一种理想的组织工程化骨组织的示踪方法。
  • 组织工程骨修复兔股骨髁骨缺损成骨效应的核素骨显像定量评价 免费阅读 下载全文
  • 目的:应用放射性核素技术评价组织工程骨修复兔股骨髁骨缺损的效果。方法:实验于2006-06/2007-01在解放军济南军区总医院动物实验中心完成。①实验分组:取健康清洁级新西兰大白兔30只,每只兔子的左侧股骨髁为实验组,右侧为对照组,30侧/组。②实验方法:取大白兔1只抽取骨髓约5mL行细胞培养,传至第4代时将基础培养液更换为诱导液进行成骨诱导。将细胞密度调整为109L-1滴加于羟基磷灰石颗粒表面,在基础培养液内培养24h后更换诱导液培养1周。双侧股骨髁制作0.5cm×1.0cm的骨缺损,将诱导成骨后的细胞复合珊瑚羟基磷灰石植入左侧,右侧单纯植入羟基磷灰石。③实验评估:术后4,8,12周分别行放射性核素骨显像监测两组人工骨对骨缺损的修复能力。以双侧股骨髁骨缺损处1cm×2cm大小的矩形为兴趣区,用兴趣区计算不同时间点的兴趣区平均计数。结果:纳入30只大白兔均进入结果分析。①术后4周对照组和实验组兴趣区差异无显著性意义[(16.70±1.37),(18.46±1.47)像素,P〉0.05],术后8,12周对照组和实验组兴趣区比较差异有显著性意义[8周:(21.31±2.02),(33.98±2.96)像素;12周:(37.48±2.05),(53.48±2.15)像素,P〈0.01]。实验组与对照组组间不同时间点兴趣区平均值差异有显著性意义。②通过兴趣区方法定量对比实验组和对照组放射性浓集比值,组织工程骨组作用优于羟基磷灰石人工骨组,骨缺损修复能力优于后者,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:骨髓间充质干细胞诱导后复合珊瑚羟基磷灰石可有效修复兔股骨髁松质骨缺损。放射性核素骨显像在骨修复过程中具有良好的监测作用。
  • 携带LacZ的腺病毒载体在牵引骨痂局部转染成纤维细胞和成骨细胞的表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:利用小鼠胫骨牵引成骨动物模型,在牵引成骨过程中局部给予携带了LacZ的腺病毒载体后观察其表达情况,以探讨基因治疗促进骨折愈合的可行性。方法:实验于2004-10/2006-01在中南大学湘雅三医院完成。①实验分组:取雄性8周龄CD-1小鼠20只,随机数字表法分为实验组和对照组,每组各10只。②实验方法:所有小鼠接受左胫骨中上段骨干横行截骨安置特制延长外固定架,胫骨牵引过程包括5d静止期,10d牵引期,牵引速率为0.1mm/次,2次/d,共0.2mm/d。牵引期第7天实验组牵引骨痂局部注射5μL携带了LacZ的腺病毒载体,对照组局部注入等量未含LacZ腺病毒液。③实验评估:注射后第3天麻醉后杀取动物,采集左胫骨标本,分别作组织学检查和组织化学分析。结果:纳入小鼠20只,均进入结果分析。在牵引第10天,牵引骨痂中纤维间区形成,两端的新生骨由骨折两端中心生长延伸。骨髓腔内外可见大量新生骨形成。X-Gal底物染色显示,在实验组新生骨组织内可见大量细胞呈阳性染色;而对照组未发现阳性染色细胞。结论:在牵引成骨过程中,骨痂局部注射携带LacZ的腺病毒,能成功转染局部的成纤维细胞及成骨细胞,并表达LacZ基因,为临床应用基因治疗促进骨牵引延长或骨折愈合提供可行性。
  • 2007年国家自然科学基金委生命科学部部分学科重点项目资助计划及立项领域介绍 免费阅读 下载全文
  • 1生物医学工程学学科立项领域名称:“组织工程材料与再生环境”(申请代码.C010515),拟资助1~2项;自由申请重点项目:拟资助1~2项。
  • 成纤维细胞生长因子Ⅱ型受体功能获得型点突变影响小鼠颅底软骨发育 免费阅读 下载全文
  • 目的:对比野生型小鼠和成纤维细胞生长因子Ⅱ型受体(fibroblast growth factor receptor2,fgfr2)基因S252W突变型小鼠颅底软骨的生长发育情况,探讨fgfr2功能持续增强对小鼠颅底软骨发育的影响。方法:实验于2004-03/2005-04在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心实验室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。①fgfr2+小鼠和C57BL/6J小鼠交配后取F1代,利用聚合酶链反应方法进行fgfr2突变型小鼠基因型的鉴定,得到野生型和fgfr2受体功能获得型点突变型两组小鼠。②标本取材及处理:分别在两组实验动物中,取胚胎期16d(E16)、胚胎期17d(E17)、新生2d(P2)、新生8d(P8)的小鼠的颅底作为标本。一部分体积分数为0.75的乙醇溶液固定。另一部分标本行40g/L多聚甲醛固定,150g/L乙二胺四乙酸溶液脱钙,常规石蜡包埋、切片。③阿尔辛-茜素红骨架染色显示颅底整体骨骼的发育情况。软骨组织染为蓝色,骨组织染为红色。④脱钙骨切片后进行苏木精-伊红染色。未脱钙骨切片后进行Calcein染色,荧光显微镜下观察钙化组织的情况。⑤使用地高辛RNA标记试剂盒按照产品说明制备Col 10(Collagen 10)地高辛标记的互补RNA探针,对颅底软骨联结进行检测软骨分化标志基因表达情况的原位杂交。⑥组织切片染色结果使用SPOT Advanced软件进行数码拍摄。结果:①实验小鼠颅底发育的大体情况:fgfr2受体功能获得型点突变小鼠从胚胎后期开始就表现出短颅现象。②阿尔辛蓝-茜素红骨架染色、Calcein染色和苏木精-伊红染色显示,fgfr2受体功能获得型点突变小鼠出生后颅底软骨联结没有出现提前融合的现象,但是颅底软骨生长发育差,软骨细胞增生区、肥大区缩短。突变小鼠的颅底软骨发育障碍导致颅底骨组织的生长发育也出现障碍。③原位杂交:Col10在野生型和突变型小鼠颅底软骨的表达部位未见明显差异,但是这个软骨细胞分化标志基因的表达强度降低。结论:fgfr2 S252W点突变能够引起小鼠颅底软骨联结处的软骨细胞发育异常,导致颅底骨骼发育畸形。fgfr2可能具有调控软骨细胞系发育的功能,从而可能在骨骼发育、骨折修复等方面发挥重要作用。
  • 三种不同培养条件下兔关节软骨细胞增殖速率的差别 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察兔关节软骨细胞在3种不同培养条件下增殖速率的差别。方法:实验于2004-10/2006-10在上海长海医院血管外科实验室完成。取4周龄新西兰雄性兔6只,利用机械与酶消化的方法获得均一性兔关节软骨细胞,在单层培养条件下增殖至第2代;将第2代细胞在高密度条件下转入藻酸盐凝胶24孔培养介质,进行三维培养。根据实验目的,将24孔培养板分为单层培养对照组,三维培养组(培养液不含胰岛素样生长因子Ⅰ),含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组(培养液含50μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ),每日在倒置相差显微镜下观察软骨细胞的生长状态,进行细胞计数1周,绘制细胞生长曲线,比较3种不同培养条件下兔关节软骨细胞的增殖速率。结果:①单层培养细胞24h后开始贴壁生长,细胞形态呈多角形、星形、圆形,72h后,倒置显微镜下观察细胞增殖数目明显增多,细胞增殖呈片状;三维培养条件下的软骨细胞,刚接种至藻酸钠凝胶时,细胞形态为圆形;三维培养(含胰岛素样生长因子Ⅰ)体系中的软骨细胞从转入三维培养的第3天起,发现细胞出现分裂增殖,局部有细胞团族形成,第7天,凝胶中开始有大量的细胞团族形成。在培养过程中,三维培养软骨细胞形态始终保持圆形。②1周内,单层培养条件下的软骨细胞增殖速率要明显高于三维培养组;含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组的软骨细胞增殖速率明显高于不含胰岛素样生长因子Ⅰ三维培养组。结论:单层培养方法短期内(1周)对软骨细胞的增殖作用要优于三维培养方法;胰岛素样生长因子Ⅰ对三维培养条件下关节软骨细胞具有促进增殖的作用。
  • 应用骨量及骨强度变化评估壁虎提取物改善骨质疏松大鼠的生物效应 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过观察骨量及生物力学指标,探讨中药壁虎提取物对影响骨组织构建正常结构骨质疏松的效应。方法:实验于2005-08/2006-07在解放军第四军医大学放射医学教研室完成。实验材料:健康8周龄雌性SD大鼠24只,体质量(220±15)g。壁虎提取物由解放军第四军医大学制备。实验分组:大鼠按体质量大小随机分为4组,即假手术组、模型组、预防组和治疗组,每组6只。实验干预:假手术组大鼠仅游离卵巢后关腹,其余各组大鼠均切除双侧卵巢。预防组大鼠术后6d开始灌胃用药,治疗组大鼠术后3个月开始灌胃用药,两组均按每日0.2g/kg体质量给予壁虎提取物1mL;假手术组和模型组大鼠术后6d给予等量注射用水灌胃。实验评估:术后6个月取各组大鼠骨组织,进行骨组织骨密度值、骨钙含量、最大应力、最大应变、弹性模量、骨皮质厚度等指标检测。结果:24只大鼠均进入结果分析。①骨密度和骨钙含量变化:假手术组与模型组相比各指标均有明显差异,表明骨质疏松动物模型制备是成功的。预防组和治疗组的全身骨密度值、腰椎骨密度值和骨钙含量均高于模型组大鼠(P〈0.01)。②生物力学变化:预防组和治疗组的骨组织最大应力、最大应变及弹性模量高于模型组(P〈0.01),但未能恢复到假手术组水平。③几何结构参数:预防组和治疗组的骨皮质厚度均较模型组增厚[(0.784±0.081),(0.686±0.077),(0.506±0.091)mm,P〈0.01],两组的骨髓腔直径均较模型组降低[(1.993±0.149),(1.975±0.087),(2.120±0.098)mm,P〈0.01和P〈0.05]。结论:壁虎提取物可改善实验动物骨皮质厚度和髓腔径,增加骨量和骨强度,对骨组织构建影响因素骨质疏松有一定的防治作用。
  • 《中国神经再生研究(英文版)》杂志组稿重点及投稿作者免费赠送杂志 免费阅读 下载全文
  • 去势大鼠腰椎骨密度及血清生化指标改变及运动训练的干预 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过观察切除卵巢骨质疏松模型大鼠骨组织形态、血清生化指标以及骨密度的表达情况,了解运动训练对预防绝经后骨质疏松的生物学作用。方法:实验于2005-01/2006-01在解放军第四军医大学动物中心实验室完成。①实验对象:雌性SD大鼠45只,随机分为正常对照组、单纯去势组以及运动训练组,每组15只。②实验方法:单纯去势组、运动训练组分离出双侧卵巢并结扎,摘除,分层缝合切口。正常对照组大鼠仅行手术进入腹腔,切除少量脂肪组织后关闭腹腔。运动训练组术后2周开始进行跑步训练,跑道速度为15m/min。每日上下午各训练1h。各组动物于术后第12周麻醉下处死采血,收集骨骼标本。③实验评估:苏木精-伊红染色观察第3腰椎骨组织形态;DPX-IQ7040双能X线骨密度仪测定第4腰椎骨密度;甲基百里香酚蓝法测定血清钙水平;硫酸亚铁法测定血清磷水平;磷酸苯二钠法测定血清碱性磷酸酶水平;放免法测定骨钙素水平。结果:单纯去势组和运动训练组各有1只动物死亡。其余动物均进入结果分析。①腰椎骨密度:运动训练组明显高于单纯去势组[(0.2443±0.0202),(0.2004±0.0408)g/cm^2,P〈0.01]。②血清中生化指标检测结果:运动训练组钙离子、碱性磷酸酶、骨钙素水平明显低于单纯去势组[(2.440±0.232),(3.053±0.172)mmol/L;(1.962±0.173),(2.350±0.195)μkat/L;(23.43±3.78),(27.86±4.43)μg/L,P〈0.01]。③骨组织形态:运动训练组骨小梁数目增加,小梁的厚度增加,视野下穿孔的数量少于单纯去势组。结论:经过适量运动训练,大鼠去卵巢后体内骨改建的高转换状态可以得到缓解。
  • 广东东莞地区中老年非暴力性骨折107例及无骨折求诊者392例超声骨密度测定 免费阅读 下载全文
  • 目的:应用超声骨密度/骨质量测量仪对东莞地区中老年非暴力性骨折患者进行检测,探讨各参数的变化规律及临床意义,并确立骨折的骨密度阈值。方法:①实验对象:选择2003-09/2006-08在东莞石龙人民医院进行超声骨密度测定的非暴力性骨折东莞地区中老年患者107例,男30例,女77例;同期同龄进行超声骨密度测定的无骨折求诊者392例,作为对照组,男83例,女309例。②实验分组:根据年龄分为3个时期:46~60岁为老年前期、61~75岁为老年期、76岁以上为高龄期,以及相应男女组及骨折与非骨折组。③实验方法:采用法国DMS公司UBIS5000型超声骨密度/骨质量测量仪对中老年非暴力性骨折者、无骨折就诊者进行超声骨密度测量。④实验评估:比较两组男女及不同年龄段超声振幅衰减平均值、超声传播速度、骨硬度指数、T值(代表患者测量值如超声振幅衰减平均值和20岁正常人的测量值之间的差异)、Z值(代表患者测量值如超声振幅衰减平均值和同龄正常人的测量值之间的差异)。结果:两组499例患者全部进入结果分析。①总体比较:男、女性骨折组与非骨折组比较,除超声传播速度差别无统计学意义外(P〉0.05),其余指标(超声振幅衰减、骨硬度指数、T值、Z值)非骨折组高于骨折组(P〈0.01)。②分年龄组比较:老年前期组与总体一致,老年组、高龄组主要指标无统计学意义。应用方差分析对女性骨折组各年龄组之间进行比较,除骨硬度指数外(P〈0.05),其余指标差异无显著性;男性骨折组各年龄组之间比较得出与女性一样结果。③男性与女性骨折组比较:除T值男性组高于女性组外(P〈0.01),其余指标(超声振幅衰减、超声传播速度、骨硬度指数、Z值)差异均无统计学意义。结论:①中老年人群骨质下降至一定程度(相应测量参数为骨折阈值)时容易发生脆性骨折。②致脆性骨折的骨质量条件与性别、年龄因素无明显相关性。③东莞地区步入老年期后不论男女骨质疏松现象相当普遍,是否会出现骨折关键在于有否外力作用,对其预防性诊断很有价值。
  • 缺氧条件下维生素E对视网膜色素上皮细胞生长的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:自行设计细胞模型并观察缺氧条件下维生素E对培养视网膜色素上皮细胞生长的影响。方法:实验于2006-10/2007-03在南京医科大学生理实验室完成。①实验操作:取对数生长期的细胞,以正常条件为对照(常规培养和体积分数为0.95的空气,体积分数为0.05的CO2),建立人视网膜色素上皮细胞的缺氧模型(缺氧培养,体积分数为0.95的N2和体积分数为0.05的CO2混合气体,测氧仪测氧浓度〈1%,24h),作用于细胞的维生素E浓度分别为0.1,0.2,0.3mol/L。②实验评估:四甲基偶氮唑盐法检测24h细胞活力(以吸光度A值表示);激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧水平;黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶活性。结果:①四甲基偶氮唑盐检测细胞生长活力:缺氧组细胞活力低于对照组(P〈0.01),缺氧+维生素E组细胞活力有所提高,与缺氧组相比,差异显著(P〈0.05)。随着维生素E浓度的提高,活力逐渐升高。②细胞内活性氧水平:与对照组比较,缺氧组细胞内活性氧的产生明显增多;与缺氧组比较,缺氧+维生素E组抑制视网膜色素上皮细胞内活性氧的产生。③超氧化物歧化酶活力检测:与对照组比较,缺氧组超氧化物歧化酶的活力降低;与缺氧组比较,缺氧+维生素E组超氧化物歧化酶活力升高,差异均具有显著性意义(P〈0.05)。结论:缺氧引起视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤,维生素E抑制了缺氧情况下视网膜色素上皮细胞的损伤作用,维生素E主要通过提高超氧化物歧化酶活性来发挥抗氧化损伤作用,其抗氧化损伤作用有剂量依赖性。
  • 马钱子药膏改善颈椎病患者周围神经压迫症状:随机对照306例效果观察 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察马钱子药膏改善颈椎病患者周围神经压迫症状的临床效果,并与扶他林软膏进行对照。方法:将2002-06/2005-11到深圳市中医院门诊就诊的360例颈型、神经根型颈椎病患者随机分为治疗组185例和对照组175例,治疗组采用马钱子药膏,对照组采用扶他林软膏,均外用于颈项部,每天外搽3次,每次五六分钟,7d为1个疗程,持续治疗4周,每周观察记录1次。将颈项部疼痛、上肢放射痛、上肢麻木症状按轻重不同分别计为0,1,2,3分。同时参照2002年卫生部颁发的《中药新药临床研究指导原则》中关于颈椎病的诊断疗效标准判定疗效。结果:360例患者均进入结果分析。①治疗组治疗1,2,3,4周颈项痛、放射痛评分低于对照组(P〈0.05或0.01)。治疗组治疗2,3,4周上肢麻木症状低于对照组(P〈0.05或0.01)。对各症状的缓解主要体现在治疗的第1,2周,治疗第3,4周时效果趋于稳定,与治疗2周后的差异不明显。②治愈率和总有效率:治疗组高于对照组(41.6%,33.1%;92.4%,85.8%,P〈0.05)。③治疗组有14例患者出现皮肤瘙痒症状,9例患者出现敷药部位的皮肤潮红,其中严重的有2例患者出现皮肤小水疱,对照组10例患者出现皮肤瘙痒症状,6例患者出现敷药部位的皮肤潮红,但经过正确的局部处理措施后,症状缓解。结论:马钱子药膏对颈项痛、上肢放射痛、上肢麻木等症状具有可靠的治疗效果,该药对上述症状的改善要优于扶他林软膏。
  • 22 题名 三维CT评估发育性髋关节脱位的骨性形态学特征 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过使用CT三维测量髋臼发育情况及髋臼对股骨头覆盖率对比性观察,整体反映髋臼发育情况。方法:①观察对象:选择2003-06/2005-04对41例发育性髋关节脱位患者55个髋关节。其中男12例,女29例;年龄18个月~6岁。患髋右侧23例,左侧32例,其中双侧12例。健康侧27髋。患儿家属均知情同意。②实验方法:所有患儿使用PQ6000型多层螺旋CT扫描,扫描数据进行骨组织三维重建。将测量数据制成图表,显示三维的髋臼发育情况,并量化表示髋臼的缺损情况。③实验评估:计算不同截面正常侧髋臼指数、中心边缘角(假设符合正态分布)的均数、标准差、分布范围及95%可信区间。观察发育性髋关节脱位术前术后骨骼形态学变化。分别在术前、术后测量患者患侧髋臼指数、中心边缘角和前倾角,测量值均分别与正常值进行对比。结果:患侧55个髋,健康侧27髋,均进入结果分析。①发育性髋关节脱位术前术后骨骼形态学变化:术前55侧发育性髋关节脱位髋关节脱位程度为,参照Toennis分类方法,Ⅰ度5髋(9.1%),Ⅱ度11髋(20%),Ⅲ度32髋(58.2%),Ⅳ度7髋(12.7%)。术后患者均表现髋臼α角均〉90°,头臼呈同心圆对位,Shenton线连续,股骨头较术前明显发育,原先未出现头骺的患者,出现头骺,但较正常仍偏小;髋臼口呈类圆形,髋臼边缘欠光滑,髋臼整体呈一定程度前倾。②术前术后髋臼指数、中心边缘角和前倾角变化对比:术后患者的髋臼指数和前倾角与正常对照组之间差异无显著性(P〉0.05),术后患者的中心边缘角大于正常对照组[(33.4±2.6)°(29.1±2.0)°,P〈0.01],术后患者的髋臼指数和前倾角测量值均小于术前(P〈0.01)。结论:介绍了一种对髋臼形态测量的新方法,它能够全面反映髋臼的发育情况,不但增加了对中心边缘髋臼病理改变的认识程度,还为手术提供了精确的可信度较高的矫形设计方案。
  • 数字减影血管造影评价股骨头坏死模型 免费阅读 下载全文
  • 目的:用数字减影血管造影评价骨膜剥离加髓腔破坏法建立股骨头坏死动物模型的效果。方法:实验于2005-07/2006-01在武汉协和医院中心试验室完成。随机选用成年杂种狗12只,采用骨膜剥离加髓腔破坏法破坏实验动物左侧股骨头的血供,制造股骨头坏死模型,对侧为正常对照。分别于术后1,4,8,16周获取股骨头标本(每个时间点3只动物),制备病理切片进行苏木精-伊红染色观察组织学情况。实验第4周及第16周麻醉后MRI扫描观察股骨头坏死情况。实验动物术前及处死前麻醉后股动脉数字减影血管造影技术检测,比较手术前后股骨头局部的血液循环变化。结果:12只杂种狗均进入结果分析。①病理切片证实全部实验侧标本均出现不同程度股骨头坏死表现,且第16周股骨头标本呈轻度塌陷外观。②狗正常股骨头T1,T2像表现为中低信号影;实验第4周时,造模侧股骨头内表现出散在高信号;第16周时,这些高信号影进一步加大,头下区小片中低信号区。③数字减影血管造影图像显示手术后16周手术区局部出现多量新生血管从股骨颈、髓内等处再生长入有坏死的股骨头内的征象。结论:骨膜剥离加髓腔破坏法能成功建立股骨头坏死模型,且在该模型中存在坏死和重建并存的现象,符合股骨头坏死的病理变化,是一种比较理想的造模方式。
  • 骨性关节炎软骨组织内蛋白多糖和软骨细胞凋亡数量变化与早期药物干预的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察早期应用硫酸氨基葡萄糖与COX-2抑制剂联合干预对骨性关节炎软骨组织内蛋白多糖含量、软骨细胞凋亡数量的影响。方法:实验于2005-09/2006-10在解放军总医院动物实验室完成。实验分组:新西兰兔30只按随机数字表法分为空白对照组、模型组和治疗组,每组10只。实验干预:模型组选用右后肢石膏过屈位固定的方法造模,治疗组在造模的同时给予硫酸氨基葡萄糖与COX-2抑制剂治疗,空白对照组不予任何处理。所有动物造模后3个月处死取患肢股骨髁,制作组织切片。实验评估:①苏木精-伊红染色方法观察软骨组织的病理变化。②Massion染色法评估软骨组织内蛋白多糖含量(用平均吸光度表示)。③TUNEL标记软骨凋亡细胞数量。结果:30只兔全部进入结果分析。①治疗组关节软骨表面不平整,软骨细胞出现排列紊乱,层次不清,细胞核缩小甚至消失,软骨细胞数特别是同源细胞族细胞数较空白对照组减少。模型组软骨细胞排列更加紊乱、稀疏。软骨囊周围基质着色变浅,可见软骨表面碎裂、脱落。②软骨组织内蛋白多糖平均吸光值:模型组低于空白对照组(70.03±3.19,122.55±3.45,P〈0.01);治疗组高于模型组(85.18±4.87,122.55±3.45,P〈0.05)。③软骨细胞凋亡数量:模型组高于空白对照组(27.34±1.32,1.00±0.13,P〈0.01);治疗组低于模型组(14.34±1.69,27.34±1.32,P〈0.05)结论:硫酸氨基葡萄糖与COX-2抑制剂联合应用能够增加软骨组织内蛋白多糖的含量,减少软骨细胞凋亡的发生,具有保护关节软骨,预防与延缓骨性关节炎发生的作用。
  • 中药制剂承载丸对甲基强的松龙预处理的成骨细胞L型钙通道电流的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察承载丸含药血清对甲基强的松龙预处理的MC3T3-E1成骨细胞L-钙通道电流的影响。方法:实验于2006-04/06在中国中医科学院望京医院药理实验室及吉林大学基础医学院生理教研室完成。①实验材料:MC3T3-E1(购于北京协和细胞中心);8个月龄SD大鼠10只,雌雄各半;中药制剂承载丸(由鹿角霜、肉苁蓉、续断、黄芪、当归、炙水蛭、杜仲、蛋衣、皂角刺、香附、乌药等21味中药组成);甲基强的松龙(批号H20040338,Pharmacia NV/SA生产)。②实验干预:成骨细胞(MC3T3-E1)传代培养。承载丸药粉60g,加水至200mL搅匀,取大鼠6只(雌雄各半),每只灌服2.5mL/d,灌服4d后动脉取血,制备含药血清。另取大鼠4只,同法灌服生理盐水,制成不含药血清。甲基强的松龙的浓度为1×10-5mol/L。③实验分组:将培养后的成骨细胞株分为4组:正常组(加入正常大鼠不含药血清)、模型组(加入正常大鼠不含药血清及甲基强的松龙)、承载丸低剂量组(加入甲基强的松龙及0.5mL承载丸含药血清)和承载丸高剂量组(加入甲基强的松龙及0.1mL承载丸含药血清)。④实验评估:24h后,用全细胞膜片钳技术记录每组10个细胞的L-钙通道电流,并测定其峰值电流。结果:①各组电流峰值测定结果:模型组峰值电流比正常组下降19.5%[(0.1839±0.0179),(0.2284±0.0209)nA,P〈0.01];承载丸低剂量组和高剂量组比模型组分别升高37.4%和45.2%[(0.2526±0.0093),(0.2671±0.0120),(0.1839±0.0179)nA,P〈0.01];承载丸高低剂量组相比差异有显著性意义(P〈0.05)。②MG3T3E1细胞钙电流的特性分析:正常组,钙通道大约在-20mV时开放,最大峰值电流在+20~+30mV,反转电位在+60~+70mV。当在浴液中加入Co2+,可阻断此电流的大部分电流成份,其峰值电流为(0.1050±0.0097)nA,而钙离子激活剂Bayk8644增加了此电流(0.3335±0.0323)nA。结论:①甲基强的松龙抑制成骨细胞L-钙通道电流。②承载丸含药血清可升高甲基强的松龙预处理的成骨细胞L-钙通道电流。
  • 人T-bet基因的体外扩增及克隆和鉴定 免费阅读 下载全文
  • 目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成。①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计合成一对附加BglⅡ和SalⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物。②分离人外周血单个核细胞,提取RNA,用反转录-聚合酶链反应方法将T-bet的编码序列cDNA扩增,装入pMD18-T载体并送去测序。③BglⅡ+SalⅠ双酶切质粒pMD18-T-bet,经琼脂糖电泳切胶回收T-bet片段,将T-bet插入载体pEGFP-C1构建成重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。④用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证。结果:①反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为1608bp的特异性扩增带。②测序结果证实,T-bet的编码序列和Genbank中T-bet mRNA序列相同。③双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确。结论:实验成功扩增出人T-bet基因,构建了基因重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet,为探索T-bet基因对免疫细胞的调节作用和肿瘤基因治疗奠定了基础。
  • 携带脑源性神经营养因子基因腺病毒载体转染在体大鼠损伤坐骨神经基因表达的检测 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察携带小鼠脑源性神经营养因子cDNA表达片段的重组腺病毒载体AxCA-BDNF,转染大鼠坐骨神经后基因表达的情况。方法:实验于2000-03/2002-04在第三军医大学大坪医院野战外科研究所、北京军区总医院神经外科实验室完成。实验材料:体质量200g左右的Wistar大鼠90只,雌雄不限。实验方法:①制备坐骨神经损伤模型:用1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。在大鼠右侧股后部作纵行切口,无菌条件下显露坐骨神经,自股中部切除10mm坐骨神经,然后随机分为3组,每组30只,按不同方式处理:A组:坐骨神经缺损+硅胶管+AxCA-BDNF原液8μL;B组:坐骨神经缺损+硅胶管+脑源性神经营养因子溶液8μL;C组:坐骨神经缺损+硅胶管+空白病毒稀释液8μL。②灌注固定和组织切片制备:分别于术后3d、7d、14d、1个月、2个月、4个月共6个时相点,每组各取5只大鼠进行灌注。另外取5只正常Wistar大鼠作为正常对照。应用原位杂交和免疫组化等手段从脑源性神经营养因子mRNA和蛋白水平,定性和半定量分析测定坐骨神经损伤后脑源性神经营养因子基因表达。结果:90只大鼠均进入结果分析。A组3d、7d、14d、1个月时近、远端神经干和脊髓(L3~6)中脑源性神经营养因子mRNA水平均远远高于B、C组(近端神经干:A组:90.70±3.32,108.32±3.95,110.51±2.13,60.39±3.24;B组:15.46±1.89,20.50±2.31,94.37±2.45,48.32±2.37;C组:14.49±2.03,22.42±2.24,95.28±3.66,46.47±2.11;远端神经干:A组:96.24±4.58,113.10±5.83,116.28±5.22,66.91±3.87;B组:21.37±3.39,28.56±2.67,105.62±4.31,52.54±4.15;C组:20.75±3.56,27.33±2.52,104.45±4.98,53.40±3.76;脊髓:A组:100.43±4.17,109.69±6.06,103.47±5.47,60.84±4.84;B组:50.51±4.32,37.36±3.15,35.05±3.82,35.82±3.35;C组:51.03±3.91,38.98±3.75,39.36±3.34,34.64±2.84,P〈0.05,P〈0.01),脑源性神经营养因子水平也高于C组。结论:通过腺病毒介导转染的脑源性神经营养因子基因在大鼠坐骨神经内得到了有效表达,并通过轴突逆行转运到了相应的脊髓神经元。
  • 鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P〉0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。
  • 雌性小鼠生殖器官衰老与玉米幼芽提取物的干预效应 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察玉米幼芽提取物对雌性衰老小鼠卵巢和子宫抗氧化损伤方面的作用。方法:实验于2006-04/06在西北农林科技大学生理实验室完成。实验分组:选取健康雌性昆明小鼠28只,随机分为4组,每组7只,分别为正常组,衰老组,玉米幼芽提取物30mg/kg组和60mg/kg组。实验干预:正常组每天注射生理盐水,其余3组每天注射D-半乳糖(200mg/kg),连续45d。注射的第11天开始正常组,衰老组每天灌服蒸馏水,玉米幼芽提取物30mg/kg组和60mg/kg组加服30mg/kg和60mg/kg玉米幼芽提取物。末次灌胃禁食,确定间情期后处死,迅速解剖取出卵巢和子宫,低温下匀浆组织。实验评估:考马斯亮蓝法测定总蛋白含量,羟氨法测定超氧化物歧化酶活性、TAB法测定谷胱甘肽过氧化物酶活性,比色法测定丙二醛含量。结果:28只小鼠均进入结果分析。①总蛋白含量:衰老组显著低于正常组[卵巢(24.27±3.40),(50.84±3.65)mg/L,(P〈0.01);子宫(38.49±1.71),(47.47±3.43)mg/L,(P〈0.01)],玉米幼芽提取物30mg/kg组和60mg/kg组显著高于衰老组[卵巢(38.68±4.51),(38.37±0.55),(24.27±3.40)mg/L,(P〈0.01);子宫(41.98±0.92),(42.96±0.84),(38.49±1.71)mg/L,(P〈0.01)]。②超氧化物歧化酶活性:衰老组显著低于正常组[卵巢(20.10±3.98),(23.27±1.88)mkat/g,(P〈0.05);子宫(85.00±9.70),(113.21±14.34)mkat/g,(P〈0.05)],玉米幼芽提取物30mg/kg组和60mg/kg组显著高于衰老组[卵巢(27.52±2.55),(24.17±1.63),(20.10±3.98)mkat/g,(P〈0.01,P〈0.05);子宫(105.85±7.20),(113.06±5.10),(85.00±9.70)mkat/g,(P〈0.05)]。③谷胱甘肽过氧化物酶活性:衰老组显著低于正常组[卵巢(0.0900±0.0050),(0.1050±0.0067)mkat/g,(P〈0.01);子宫(0.0300±0.0800),(0.0633±0.1584)mkat/g,(P〈0.01)],玉米幼芽提取物30mg/kg组和60mg/kg组显著高于衰老组[卵巢(0.1217±0.0083),(0.1134±0.0067),(0.0900±0.0050)mkat/g,(P〈0.01);子宫(0.0817±0.0200),(0.0683±0.0750),(0.0300±0.0800)mkat/g,(P〈0.01)]。④丙二醛含量:衰老组显著高于正常组[卵巢(0.894±0.052),(0.183±0.017)mmol/g,(P〈0.01);子宫(0.357±0.048),(0.113±0.014)mmol/g,(P〈0.01)],玉米幼芽提取物30mg/kg组和60mg/kg组显著低于衰老组[卵巢(0.211±0.046),(0.322±0.077),(0.894±0.052)mmol/g,(P〈0.01);子宫(0.103±0.022),(0.134±0.035),(0.357±0.048)mmol/g,(P〈0.01)]。结论:玉米幼芽提取物能改善D-半乳糖引起的卵巢和子宫氧化应激,具有良好的抗衰老作用。
  • 成人成骨细胞骨髓培养法与组织块培养法的对比 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察成人成骨细胞在两种不同培养方法下的增殖、分化、成骨能力以及细胞形态学方面的差异,探讨成人成骨细胞培养的更为便捷有效的方法。方法:实验于2006-03/10在南京大学附属鼓楼医院科研部完成。①实验分组:分为两组。一组取前后交叉韧带断裂患者关节镜下重建术修整髌韧带时残留的松质骨块;另一组抽取同一患者骨髓进行成骨细胞原代培养,患者均知情同意。②实验方法:在相同的培养条件下,对松质骨块及骨髓分别用组织植块培养及骨髓培养法进行成骨细胞原代培养。③实验评估:倒置相差显微镜观察记录原代成骨细胞的形态学变化,改良钙钴法染色计算两组碱性磷酸酶染色阳性细胞数及其百分比;分别在第2,3,4,5,6天以四甲基偶氮唑盐比色法绘制细胞增殖曲线,磷酸对硝基苯酯二钠盐法测定碱性磷酸酶含量并检测成骨细胞的增殖、分化活性;以VonKossa染色比较成骨细胞成骨能力。结果:①细胞形态学观察结果:倒置相差显微镜观察证实成骨细胞组织块培养法与骨髓培养法培养出的成骨细胞在形态上无明显差异。②碱性磷酸酶染色后阳性细胞的表达:组织块培养法成骨细胞纯度为(90±6)%,高于骨髓培养法(68±10)%。③成骨细胞增殖、分化活性的测定:四甲基偶氮唑盐比色法培养第3天后可见细胞增殖趋势发生明显变化,组织块法的增殖优于骨髓培养法;碱性磷酸酶检测表明在细胞分化方面,骨髓培养法优于组织块培养法。④成骨细胞的成骨能力:VonKossa钙结节染色证实骨髓培养法与组织块培养法形成的钙结节数量分别为(8±6)个/视野及(12±3)个/视野,无显著差异。结论:骨髓培养法与组织块培养法各有优点与不足,需根据具体实验要求确定相应的培养方法。
  • 巴戟天多糖及其水提取物对体外培养成骨细胞活性的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:体外培养成骨细胞,观察巴戟天多糖和巴戟天水提物对成骨细胞活性的影响。方法:实验于2004-09/2005-08在福建省骨伤研究所骨伤分子生物学实验室完成。①提取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,分别用50,100,200g/L巴戟天多糖及50,100,200g/L巴戟天水提物药物血清进行体外培养。对照组用含50,100,200g/L无药血清的DMEM培养液培养。培养72h后进行相关指标检测。②通过MTT方法检测巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞增殖的影响。③检测碱性磷酸酶、细胞内骨钙素、转化生长因子β1基因表达等指标,观察巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞活性的影响。结果:①药物血清对成骨细胞增殖的影响:100g/L巴戟天水提物组和100g/L巴戟天多糖组吸光度大于对照组,差异有非常显著性(P〈0.01),且100g/L巴戟天多糖组吸光度高于100g/L巴戟天水提物组(0.4302±0.0193,0.3829±0.0228,P〈0.01)。②药物血清对成骨细胞活性的影响:巴戟天水提物组与巴戟天多糖组碱性磷酸酶比活性、细胞内骨钙素含量、转化生长因子β1mRNA相对表达量均高于对照组[碱性磷酸酶比活性:(16.89±2.09),(20.68±2.44),(11.23±2.40)μkat/g;骨钙素含量:(3.74±0.82),(3.97±0.69),(2.63±0.34)ng/106;转化生长因子β1 mRNA相对表达量:2.97±0.37,4.23±0.30,0.07±0.27,P均〈0.01]。巴戟天多糖碱性磷酸酶比活性、转化生长因子β1 mRNA相对表达量高于巴戟天多糖组(P〈0.01)。结论:巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著促进体外培养成骨细胞增殖、促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶与骨钙素、促进成骨细胞转化生长因子β1 mRNA的表达,并且巴戟天多糖优于巴戟天水提物。
  • 自体骨负载软骨细胞修复兔关节骨软骨缺损 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察原代单层培养的自体软骨细胞包埋于骨与骨膜之间修复关节骨软骨缺损的可行性,探索一种关节内骨软骨缺损或单纯软骨缺损的修复方法。方法:实验于2003-05/2006-10在安徽医科大学完成。实验分组:取4周龄健康新西兰大白兔27只,体质量460~520g,随机摸球法分为自体骨+软骨细胞+骨膜移植组、自体骨+骨膜移植组、骨膜移植组,每组9只。实验方法:取自体骨+软骨细胞+骨膜移植组兔子膝关节的软骨消化成软骨细胞并在体外原代单层培养近2周;每只兔子的双侧膝关节股骨滑车部造成3mm×4mm×4mm的骨软骨缺损,在自体骨+软骨细胞+骨膜移植组各取两块3mm×4mm的髂骨洗去血细胞,充填软骨下骨缺损,松质面向关节腔,骨膜覆盖,软骨细胞与纤维蛋白凝胶混合物注入腔隙内;自体骨+骨膜移植组不注射软骨细胞;骨膜移植组用骨膜修复。实验评估:分别在4,8,12周进行大体和苏木精-伊红染色、蕃红花”O“染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学进行形态学以及透射电镜超微结构观察软骨的生长情况,并按照O’Driscoll,Keeley and Salter评分标准,对各组进行半定量评分,组间比较采用q检验。结果:纳入新西兰大白兔27只,均进入结果分析。①3组软骨的生长情况:自体骨+软骨细胞+骨膜移植组软骨缺损被修复,外观与周围正常软骨没有明显区别,组织学检测为透明软骨或类透明软骨,软骨下骨修复完善;自体骨+骨膜移植组缺损表面被纤维软骨修复,12周出现明显退变;骨膜移植组缺损被纤维组织及骨样组织修复,对应的髌骨软骨出现磨损的创痕。②3组不同时间点组织学评分:自体骨+软骨细胞+骨膜移植组、自体骨+骨膜移植组、骨膜移植组4周分别是(10.83±4.40),(9.33±3.93),(5.83±1.94)分;8周:(15.17±4.71),(10.83±3.06),(6.67±1.51)分;12周:(15.83±4.58),(8.17±2.79),(3.83±0.75)分。在第8,12周,3组之间差异有显著性意义(P〈0.01)。结论:自体骨复合纤维蛋白凝胶负载软骨细胞修复关节骨软骨缺损,可在重建软骨下骨的同时形成透明或类透明软骨表面。
  • 彩色超声评估强直性脊柱炎患者附着端血流和声像的特征:病例-对照 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过观察强直性脊柱炎患者和健康人的附着端血流的彩色超声声像图,探讨彩色超声在强直性脊柱炎诊断中的价值。方法:选取2005-09/2006-08在上海交通大学附属第六人民医院肾脏风湿科住院的强直性脊柱炎患者30例为强直性脊柱炎组,健康职工和大学生30例作为对照组。①检测方法:用美国GE公司Logiq-700彩色超声诊断仪测定每个被测对象12个附着端的血流情况和声像图。②评估标准:声像图见附着端回声增高或毛糙或彩色血流增多为外周附着端阳性,骶髂关节血流增多,频谱为低阻血流为骶髂关节阳性。结果:除强直性脊柱炎组1例无骶髂关节数据外,60例全部进入结果分析。强直性脊柱炎组中骶髂关节异常血流增多23例(77%),跟腱附着端阳性数13例(43%),髌韧带附着端阳性数10例(33%),股直肌肌腱附着端阳性数3例(10%),腓侧副韧带阳性率和胫侧副韧带阳性数各3例(10%),骶髂+外周阳性率90%,外周附着端阳性率53%。对照组除骶髂+外周阳性率3%以外,其余均为阴性。两组骶髂关节、跟腱附着端、髌韧带附着端、股直肌肌腱附着端超声检查阳性率比较差异有显著性意义(P〈0.05),腓侧、胫侧副韧带附着端阳性率比较差异无显著性意义(P〉0.05)。结论:彩色超声可以检测强直性脊柱炎患者附着端血流的异常,可作为诊断强直性脊柱炎的有效辅助方法。
  • 去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化 免费阅读 下载全文
  • 目的:初步构建受体内皮细胞化的组织工程同种心脏瓣膜,减轻移植后免疫排斥反应,并探讨内皮细胞适宜的种植方法,增强内皮细胞与细胞外基质的黏附性。方法:实验于2004-06在阜外医院心血管外科先心病研究室完成。①实验材料:取冠状动脉搭桥患者术中剩余的大隐静脉(该材料是术中多余弃掉部分,患者知情同意),研究方案获伦理委员会批准。②实验方法:采用低渗液-去污剂(10g/L去氧胆酸)-核酸酶法去除同种心脏瓣膜组织中的全部细胞成分,构建去细胞的同种心脏瓣膜;取培养3~4代的成人大隐静脉内皮细胞,依照内皮细胞密度分为生理密度种植组:以1.5×10^8L^-1密度种植;超生理密度种植组:以(4~5)×10^8L^-1密度种植;生理密度反复种植组:以1.5×10^8L^-1密度,反复种植3d。③实验评估:种植于脱去全部细胞的同种心脏瓣膜上,静态培养5d,扫描电镜观察内皮细胞的覆盖情况。结果:去细胞同种心脏瓣膜的细胞外基质有着良好的细胞黏附性;3种不同的内皮细胞种植密度,其中以内皮细胞超密度(4~5)×108L-1种植,静态培养5d,同种组织瓣膜表面基本覆盖单层内皮细胞,细胞间相互延伸汇合,形态结构良好。以生理密度种植内皮细胞覆盖率较低,细胞大多孤立存在,细胞间较少相互延伸汇合。生理密度反复种植3d,内皮细胞覆盖率低于超生理密度种植组,细胞间可见相互延伸汇合,细胞形态结构良好。结论:去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化保留了同种心脏瓣膜的正常结构、功能及良好的组织相容性,有望延长瓣膜的使用寿命,取得更好的临床疗效。
  • 内源性神经营养因子及其受体对针刺的反应 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察针刺治疗周围神经损伤过程中内源性神经营养因子及其受体的变化。方法:实验于2001-09/2002-07在黑龙江中医药大学针灸生理实验室完成。实验分组:选择雄性6个月龄Wistar大鼠150只,体质量(280±20)g,随机分为电针组、手针组、对照组,每组50只。实验方法:实验采用分批造模,分别于第1次造模术后7,14,21,25d继续造模,于最后一批造模并针刺治疗3d后将全部大鼠麻醉后统一处死取材。实验评估:即在术后及针刺治疗3,7,14,21,28d观察各组神经生长因子、神经生长因子受体、碱性成纤维细胞生长因子的免疫组织化学结果并进行横向纵向比较,同时采用半定量的统计方法,每只大鼠取3张相同部位切片(坐骨神经远端),随机取10个视野,求其细胞阳性数的算术平均值。根据阳性细胞数目及染色的深浅,将阳性结果分为4级并依次打分:±(x〈5,1分),+(x=5~10,2分),++(x=10~20,3分),+++(x〉20,4分),套用Ridit公式进行统计。结果:纳入大鼠150只,均进入结果分析。损伤坐骨神经段的神经营养因子表达在3d时开始增多,至第14天时,含量及浓度均达到高峰期,但该阶段各组间差异无显著性意义;14d以后,内源性神经营养因子的表达开始下降,电针组与手针组下降较慢,而对照组下降较快。进行Ridit检验后发现,第21天时,电针组与对照组比较有显著性差异;第28天时,电针组、手针组与对照组比较均有显著性差异,电针组优于手针组,但无统计学意义。结论:针刺疗法治疗周围神经损伤的过程与内源性神经营养因子的变化有明确的相关性,针刺疗法可以延长神经营养因子及其受体的分泌时间及含量,且电针组优于手针组。
  • 《中国组织工程研究与临床康复》杂志介绍 免费阅读 下载全文
  • 人视网膜色素上皮细胞增殖与川芎嗪的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响,以及川芎嗪对AGEs诱导的人视网膜色素上皮细胞增殖的拮抗作用。方法:实验于2003-09/2004-07在中南大学湘雅二医院中心实验室完成。①实验分组:原代培养人视网膜色素上皮细胞,第3 ̄8代用于实验,设空白对照组,DMEM培养基中不加入任何药物;AGEs对照物组,培养液中含100mg/L的AGEs对照物;AGEs组,培养液中含10,50,100,200,400mg/L的AGEs,分别干预视网膜色素上皮细胞24h及48h。②实验操作:川芎嗪干预实验:也设空白对照组;AGEs对照物组;AGEs组,培养液中含100mg/L的AGEs;AGEs+川芎嗪组,培养液中加入10,20,40,80,160,320,640mg/L川芎嗪30min后加入100mg/L的AGEs,分别干预视网膜色素上皮细胞24h。③实验评估:MTT微量酶比色法检测视网膜色素上皮细胞增殖情况。结果:①视网膜色素上皮细胞增殖情况:不同浓度AGEs组细胞增殖率均高于对照物组(P〈0.01),100mg/LAGEs组增殖率(24,48h分别为39.45%,31.97%)高于其他组(P〈0.01),48h与24h结果一致。②川芎嗪的抑制效应:与AGEs组比较,10,20,40,80,160mg/L川芎嗪对AGEs诱导的视网膜色素上皮细胞增殖无抑制作用(P〉0.05),320及640mg/L川芎嗪有抑制作用,其抑制率为8.96%,15.08%(P〈0.01)。结论:①AGEs可诱导人视网膜色素上皮细胞增殖。②低浓度川芎嗪对AGEs诱导的人视网膜色素上皮细胞增殖无抑制作用,高浓度川芎嗪具有抑制作用。
  • 坐骨神经慢性挤压伤模型大鼠行为学及形态学变化 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察大鼠坐骨神经慢性挤压伤模型所引起的行为学及病理形态学变化。方法:实验于2006-02/05在解放军军事医学科学院生物工程研究所完成。①SD大鼠24只,随机分为3组,坐骨神经结扎组12只制备右侧坐骨神经慢性挤压伤模型,正常对照组6只不干预,假手术组6只手术但不结扎,观察处理后42d内自发痛、触诱发痛、热刺激及冷刺激痛觉过敏等行为学变化。②SD大鼠54只,随机分为正常对照组、假手术组及坐骨神经结扎后3,7,14,21,28,35,42d组9组,处理同前,相应时间点处死大鼠观察坐骨神经和脊髓组织大体形态、苏木精-伊红染色和轴突髓鞘染色观察脊髓组织病理变化,电镜观察超微结构变化。结果:78只大鼠进入结果分析。①行为学变化:坐骨神经结扎组大鼠术后3d即出现明显的自发性疼痛,机械刺激痛阈值从术前的(17.33±5.42)g降至(3.28±1.37)g;热刺激爪退缩阈值从(12.13±2.37)s缩短至(10.43±1.65)s;冷刺激抬足次数从(3.50±1.09)次增加至(14.75±2.34)次。术后7 ̄14d这些阈值的变化逐渐达高峰,并持续至观察期结束(42d)。②坐骨神经结扎大鼠坐骨神经结扎部位及其远端轴突水肿,部分脱髓鞘。结论:大鼠坐骨神经慢性挤压伤模型可以产生明显的、稳定的自发性疼痛和诱发性疼痛等类似临床神经痛的症状和体征;其局部病理变化与症状相符。
  • 股骨颈骨折内固定器置入的生物力学特征及其应用特点 免费阅读 下载全文
  • 目的:总结和分析内固定器械在股骨颈骨折治疗中的应用的特点。资料来源:应用计算机检索OVID数据库1996-01/2006-12关于股骨颈骨折的内固定器械方面的文章,检索词“femoral neck fracture,vitodynamics,internal fixation,instrument”并限定文章的语言种类为“English”;利用计算机检索中国期刊全文数据库1996-01/2006-12与股骨颈骨折的内固定器械相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词为“股骨颈骨折,内固定器械”等。同时手工查阅相关的书籍。资料选择:共收集到相关文章150余篇,对资料进行初审,纳入标准:①内固定器械应用的特点。②回顾调查研究。③观察对象为股骨颈骨折患者。④无论有无对照组、是否随机均纳入。资料提炼:共收集符合上述要求的文章58篇,进一步查找全文,并阅读其引文,排除重复性研究,内容重复的,以近3年发表,且发表在较权威性杂志者优先,最后纳入26篇进行综述。26篇中8篇论述股骨颈骨折的发病及治疗特点,16篇介绍股骨颈骨折内固定器械的置入特点。资料综合:①股骨颈特殊的解剖关系和血供系统使骨折部位常承受较大的剪应力,从而影响骨折复位和复位内固定后的稳定性。加之骨折时易使血供来源破坏,影响复位和内固定效果,并可能导致骨折不愈合和股骨头缺血性坏死。影响股骨颈骨折预后的医源性因素主要是复位和内固定质量。②用于股骨颈骨折的固定器械装置有多种,折尾钉、空心钉、三刃钉、滑钉或钉板、加压单钉和加压多钉较常用。早期解剖复位、骨折加压、坚强内固定来促进骨愈合。③绝大多数骨科工作者采用空心钉内固定的方法治疗股骨颈骨折。3枚空心加压螺钉固定是目前较为理想的内固定术式。结论:可采用早期解剖复位、骨折的加压、坚强的内固定来促进股骨颈骨折后的骨愈合;目前绝大多数学者采用空心钉内固定的方法治疗股骨颈骨折。
  • 欢迎访问《中国组织工程研究与临床康复》杂志网站www.zglckf.com 免费阅读 下载全文
  • 成纤维细胞生长因子2的分子结构和生物学效应 免费阅读 下载全文
  • 目的:成纤维细胞生长因子2是一种多功能、作用广泛的细胞因子。就成纤维细胞生长因子2分子结构和生物学效应以及与骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的相关研究进行综述。资料来源:应用计算机检索PubMed数据库1990-01/2006-10有关成纤维细胞生长因子2的文章,检索词“FGF-2,molecular structure,biological effect,myocardial infarction and rat and marrows tem cell”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1990-01/2006-10期间的相关文章,检索词“碱性成纤维细胞生长因子”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章找全文。纳入标准:①有关成纤维细胞生长因子2分子结构、生物学特性的研究。②有关骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的研究。资料提炼:共收集到34篇有关成纤维细胞生长因子2分子结构和生物学效应的文章,67篇有关骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的研究。选取其中31篇归纳总结。资料综合:①成纤维细胞生长因子2在人体内普遍存在,许多体外培养的细胞也自分泌成纤维细胞生长因子2。成纤维细胞生长因子2包括18000的低相对分子质量成纤维细胞生长因子2和高相对分子质量成纤维细胞生长因子2。成纤维细胞生长因子2翻译的起始密码子有两种:AUG和CUG。②成纤维细胞生长因子2有两种不同的受体,它们可与相应的受体结合发挥生物学功能。③在体外培养骨髓间充质干细胞的过程中,成纤维细胞生长因子2可促进其向心肌样细胞分化,在相对缺氧的环境下,提高心肌样细胞存活率。结论:成纤维细胞生长因子2作为一种多功能的细胞生长因子,在胚胎发育,创伤修复以及缺血、炎症、肿瘤等情况下,可作用于靶细胞上的特异性受体,发挥多种生理功能。它对新生血管形成过程中的毛细血管基底膜降解、内皮细胞迁移增殖、胶原合成及小血管腔形成等均有明显的促进作用。在相对缺氧的环境下,成纤维细胞生长因子2提高心肌样细胞存活率。
  • 血管内皮生长因子与运动的相关性 免费阅读 下载全文
  • 目的:血管内皮生长因子是一种广泛存在于机体组织的细胞因子,与运动密切相关,是近来运动人体科学界和运动医学界研究的焦点。对近来血管内皮生长因子与运动的相关研究进行综述,以能够找到提高训练质量乃至运动水平的方法。资料来源:应用计算机检索Medscape.net1996-01/2006-12的相关文章,并根据相关的参考文献检索了部分文章,检索词“vascular endothelial growth factor,exercise”,限定语言种类为English;同时计算机检索中国知识资源总库1996-01/2006-12的相关文献,限定语言种类为中文,检索词“血管内皮生长因子,运动”。资料选择:纳入条件:①随机对照试验研究。②试验包括对照组和干预组。同时排除综述和重复的研究。资料提炼:共找到相关研究47篇,排除17篇,30篇符合标准。通过30个实验对运动中血管内皮生长因子在机体中的表达、作用及含量和动态变化进行了相关的分析和研究。资料综合:①血管内皮生长因子与运动的关系密切相关,现在仍然是运动医学界的研究焦点之一,研究的方向为运动对机体血管内皮生长因子的影响,目的是发现运动对机体的影响。②不同的运动方式对机体的血管内皮生长因子的表达不同,目前采用的训练方式多为极限运动或运动与其他因素相结合,如低压强+运动。③观察部位多集中在大脑、肌肉、心血管、血液等,不同部位的表达不同。④运动对血管内皮生长因子表达有动态变化的规律。结论:血管内皮生长因子与运动的关系密切相关,不同的运动方式会造成血管内皮生长因子在机体不同部位不同表达。运动对血管内皮生长因子表达的影响呈现出规律性。
  • CRTER近期组稿重点 免费阅读 下载全文
  • 结缔组织生长因子与病理性瘢痕 免费阅读 下载全文
  • 目的:结缔组织生长因子主要由间质组织产生,对人体不同组织和细胞发挥着不同的调控功能,参与创伤愈合,与病理性瘢痕的形成有着密切的关系。文章对结缔组织生长因子与病理性瘢痕研究进展作一综述。资料来源:应用计算机检索Medline1991-09/2006-05期间的相关文章,检索词为“connective tissue growth factor”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1994-01/2006-05期间的相关文章,检索词为“结缔组织生长因子”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:①结缔组织生长因子及其受体。②影响结缔组织生长因子的因素及信号转导。③结缔组织生长因子与病理性瘢痕及治疗。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到1253篇相关文献,47篇文献符合纳入标准,排除的1206篇文献为内容陈旧或重复。资料综合:生理状态下,结缔组织生长因子与胚胎的发育、间质组织的生长等有着非常重要的作用。病理情况下,它与多种组织器官的纤维化,肿瘤的生长与凋亡等有着密切的联系。结论:结缔组织生长因子在不同状况下发挥不同的作用,既可以促进创伤的愈合,过多分泌则又促进病理性瘢痕的产生。抗结缔组织生长因子中和抗体与结缔组织生长因子反义寡核苷酸可抑制其促病理性瘢痕作用。
  • 结缔组织生长因子与器官纤维化 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过综述结缔组织生长因子的研究现状,探讨结缔组织生长因子与器官纤维化的关系。资料来源:应用计算机检索美国NCBI PubMed数据库1988-01/2006-12相关结缔组织生长因子与器官纤维化方面的文献,检索词“connective tissue growth factor,fibrosis”,限定文献语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,选取包括结缔组织生长因子与器官纤维化的文献,开始查找全文。纳入标准:具有原创性,论点论据可靠的实验文章。观点明确,分析全面的综述文章。文献主体内容与本课题联系紧密的文章。排除标准:具有明显实验设计和结果错误的文章及观点模糊的综述。质量评价主要考察资料的真实性、实施过程是否严密。资料提炼:共检索到336篇关于结缔组织生长因子与器官纤维化的文献,最终纳入32篇符合标准的文献。资料综合:结缔组织生长因子基因是即刻早期基因家族成员,可刺激细胞增殖、分化和凋亡、促进细胞外基质沉积、介导细胞粘附、刺激细胞迁移、促进胚胎发育、损伤修复及新血管的生成。在病理状态下,结缔组织生长因子作为转化生长因子β的下游因子在多种纤维化疾病的发生和发展中起重要作用。文章分别阐明了结缔组织生长因子及其超家族成员、结缔组织生长因子基因和蛋白质结构、受体、功能和生物学作用、致纤维化作用和与其相关的防纤维化策略。结论:通过抑制结缔组织生长因子的表达有望阻断和逆转纤维化进程。
  • 下背痛的评价及其患者生活质量的评价 免费阅读 下载全文
  • 目的:总结分析近10年国内外下背痛患者生活质量的研究状况,以期提高医疗过程中的注意力。资料来源:应用计算机检索Medline1997-01/2006-06与下背痛患者生活质量研究相关的文献,检索词“low back pain,quality of life”,限定文献语言种类为English。同时计算机检索清华全文数据库1998-01/2006-06相关下背痛患者生活质量研究的文献,检索词“下背痛,生活质量”,限定文献语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取包括下背痛患者生活质量研究的文献,开始查找全文。纳入标准:包含下背痛的诊断、评定、治疗以及下背痛的健康教育和社会支持等多方面文献,绝大多数文献都与生活质量研究有关。排除标准:重复研究,Meta分析,没有对照组的文献。资料提炼:共检索到52篇关于下背痛患者生活质量研究的文献,最终纳入30篇符合标准的文献。资料综合:生活质量涉及到生理、心理、社会、文化、经济以及精神等不同层面,是指个体在其所在文化、风俗习惯的背景下,由他生活的标准、理想追求的目标所决定的对他目前社会地位、生活状态的认识和满意程度。提高下背痛患者的生活质量,关系到患者的治疗效果。下背痛患者普遍存在躯体症状和抑郁的心理反应,两方面的表现都可能使患者的生活质量受到影响。在对下背痛患者的治疗中,不仅只关注躯体功能和疾病本身,同时还应注重心理功能和社会职能。结论:随着对下背痛的病因、预防、治疗及康复研究的进一步深入,下背痛困扰人类的现象在不久必将得到很大改善。
  • 蛋白质组学及其相关技术在运动人体科学中的应用 免费阅读 下载全文
  • 目的:对蛋白组学及蛋白芯片技术发展现状进行综述,为该技术在运动医学中的应用提供参考资料。资料来源:应用计算机检索PubMed2003-01/2006-12期间相关蛋白组学及蛋白芯片技术方面的文章,检索词“exercise AND protein chip,protein microarray”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库2003-01/2006-12期间相关蛋白组学及蛋白芯片技术方面的文章,检索词“蛋白质,运动锻炼,运动医学”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与蛋白质组学及蛋白质芯片技术的研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到312篇相关文献,32篇文献符合纳入标准,排除的280篇文献为内容陈旧或重复。资料综合:蛋白组学研究已成为基因组学研究后生命科学发展的大方向之一。它研究的主要内容包括:蛋白质分离与鉴定、蛋白质功能的确定、蛋白质翻译后修饰及相互作用、各种疾病或疲劳标志物的筛选与疾病诊断、生物信息学及药物开发等方面。文章在对蛋白质组学的发展及其相关技术在运动人体科学中的应用现状进行综述的基础上,对运动人体科学未来的发展方向进行了展望。由于蛋白质组学的建立以及蛋白质芯片技术的逐步完善,对运动人体科学的研究及其发展将起到很好的促进作用。结论:未来将从分子水平上阐明运动与人体适应的分子生物学机制,研究热点将集中于从运动营养蛋白质组学、反兴奋剂的蛋白质芯片技术、运动员机能评定的蛋白质芯片研究等方面。
  • 缩血管活性因子内皮素在缺血性心脏病中的作用及中医药干预效应 免费阅读 下载全文
  • 目的:总结内皮素在缺血性心脏病中的病理生理意义。方法:应用计算机检索维普、万方和中文生物医学期刊(光盘)数据库2000-01/2006-12相关缺血性心脏病及内皮素方面的文献,检索词“缺血性心脏病,内皮素”,限定文献语言种类为中文。同时计算机检索Medline数据库2000-01/2006-12相关缺血性心脏病及内皮素方面的文献,检索词“ischemic heart disease,endothelin”,限定文献语言种类为English。对资料进行初审,选取包括缺血性心脏病及内皮素方面的文献,开始查找全文。纳入标准:内皮素在缺血性心脏病中的作用及中医药的干预效应。排除标准:内皮素在其他疾病中的作用。结果:共检索到200余篇关于缺血性心脏病及内皮素方面的文献,最终纳入29篇符合标准的文献。内皮素是极强的缩血管活性因子,在缺血性心脏病中具有重要的病理生理意义,中医药从缺血性心脏病的发病机制及病理环节着手,进行干预,大量研究资料表明,中医药在保护内皮细胞功能、治疗缺血性心脏病方面疗效肯定,在目前寻找和研究新型有效的内皮素受体拮抗剂具有广阔的发展前景。结论:内皮素在心血管疾病中具有重要意义,但其治疗缺血性心脏病保护内皮功能的具体机制还有待进一步探讨。
  • 改良人体标本保存液配方的效果 免费阅读 下载全文
  • 在组织工程实验研究中,普遍存在着对生物体保存的问题。如何寻找一种对人体危害小、保存效果好的标本保存液为实用性课题,2003-11/2005-04在赣南医学院基础医学院解剖教研室完成本实验。根据本地区气候、环境特点,对现有标本保存液进行了改良和改进,设计了一组新的防腐保存液配方。对比观察传统保存液与改良保存液长期浸泡的标本、对兔眼刺激及甲醛的挥发程度,发现两种保存液保存的标本无明显差异;改良液保存的标本挥发的气体对兔眼无明显刺激,其甲醛的挥发程度也比传统保存液要低。说明改良保存液有明显优势,是一种较理想的标本保存液。
  • 大鼠皮肤麦克尔细胞切片制作方法 免费阅读 下载全文
  • 实验于2006-04在广东医学院组织学与胚胎学教研室完成。以大鼠皮肤为材料,定位于触盘,经取材、固定、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片及染色等过程制作皮肤麦克尔细胞的切片。结果观察到触盘切面明显高出周围皮肤表面,触盘表皮的基底层细胞间可见3~5个麦克尔细胞,触盘真皮有丰富的血管及有髓神经纤维。组织取材一定要在镜下找到触盘做好标记,取材速度要快,最好用固定液灌注后取材。
  • 成纤维细胞生长因子受体3在牙源性肿瘤中的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:成纤维细胞生长因子受体3与恶性肿瘤的关系已被证实,但是否在具有特殊生物学特性的牙源性肿瘤中扮演角色国内外文献报道较少。目的:观察成纤维细胞生长因子受体3在牙源性肿瘤中的表达。设计:随机对照观察。单位:湖州师范学院医学院口腔医学系,浙江大学医学院附属口腔医院。材料:实验于2003-01/2004-12在浙江大学口腔医学院完成。所有标本均来自浙江大学医学院附属口腔医院病理科1999~2003期间牙源性肿瘤病例,包括造釉细胞瘤29例,角化囊肿20例,始基囊肿36例,以5例正常牙囊或残余牙板上皮作为对照。所有标本均经石蜡包埋,切成3~5μm厚的切片,置于涂有多聚赖氨酸的载玻片上,烘干备用。方法:采用免疫组织化学方法,检测成纤维细胞生长因子受体3在正常牙囊或残余牙板上皮和牙源性造釉细胞瘤、角化囊肿及始基囊肿中的表达。主要观察指标:成纤维细胞生长因子受体3在造釉细胞瘤、角化囊肿、始基囊肿中的表达。结果:成纤维细胞生长因子受体3在造釉细胞瘤、角化囊肿及始基囊肿中呈阳性表达,表达率分别为59%、45%、8%,三者表达差异有显著性意义;在正常牙囊或残余牙板上皮中呈阴性表达。成纤维细胞生长因子受体3阳性细胞集中在肿瘤的细胞成熟区。结论:成纤维细胞生长因子受体3可能与造釉细胞瘤、角化囊肿的发病机制及终末分化机制有关。
  • 重组人粒细胞集落刺激因子修复大鼠动脉损伤 免费阅读 下载全文
  • 背景:有研究显示大鼠皮下注射粒细胞集落刺激因子后,外周血CD34+细胞明显增高。并发现运用粒细胞集落刺激因子不仅动员了骨髓干细胞,而且加速损伤血管段的再内皮化,抑制了新生内膜增生。目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠损伤动脉的再内皮化及抑制新生内膜增生作用。设计:随机对照动物实验。单位:南京医科大学附属南京第一医院。材料:实验于2005-12/2006-04于南京市第一医院完成。选用40只雄性SD大鼠,8~12周龄SPF级,体质量200~250g,购于国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心。重组人粒细胞集落刺激因子购于山东齐鲁制药有限公司,2F动脉取栓导管购于Edwards Lifesciences公司,CD34单克隆抗体、CD45单克隆抗体购于联科生物有限公司。方法:用Excel软件随机将大鼠分成治疗组及对照组,每组20只。治疗组给予皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(100μg/kg),1次/d,共8d。对照组皮下注射等量生理盐水,1次/d,共8d。治疗5d后,腹腔注射麻醉大鼠,颈外动脉做一切口,将2F动脉取栓导管插入至左颈总动脉分叉处,注入200μL空气使球囊扩张,然后回拉球囊至肩胛舌骨肌处,回抽空气后重新送回导管,反复3次后拔出导管,结扎颈外动脉。①治疗前和治疗5d后,所有大鼠均取1mL静脉血进行白细胞和CD34+细胞计数。②球囊损伤后14和28d,每组分别麻醉后处死大鼠10只,取左颈总动脉。每组各5只用于暴露动脉内膜腔,应用图形分析软件计算再内皮化面积,再内皮化面积=未被伊文氏蓝着色区域/损伤总面积;每组另有5只,取左颈总动脉,取血管横切面,经HE染色后用图像分析软件计算新生内膜与中膜比(I/M),评估新生内膜增生程度。③采用免疫组化方法检测血管内膜CD31+与vWF+(Ⅷ因子)细胞,推测损伤后内皮修复程度。主要观察指标:①大鼠外周血白细胞及CD34+细胞表达。②球囊损伤后血管再内皮化程度。③新生内膜增生程度(新生内膜与中膜比)。④血管内膜CD31+与vWF+(Ⅷ因子)细胞检测结果。结果:纳入SD大鼠40只均进入结果分析。①外周血白细胞及CD34+细胞表达:治疗5d后,治疗组大鼠白细胞总数高于对照组[(27.60±2.45)×10^9L^-1,(10.11±1.81)×10^9L^-1,P〈0.01],CD34+细胞数量高于对照组(38.31×10^7L^-1,3.14×10^7L^-1,P〈0.01)。②血管再内皮化程度:球囊损伤后14和28d,治疗组再内皮化面积分别为(68.3±8.3)%,(97.6±4.1)%,高于对照组[(33.8±6.3)%,(76.1±5.2)%,P〈0.01]。③新生内膜增生程度:球囊损伤后14,28d,治疗组新生内膜与中膜比分别为0.39±0.11,0.45±0.09,均低于对照组(0.87±0.15,1.26±0.16,P〈0.01),治疗组血管新生内膜增生程度被显著抑制。④血管内膜CD31+与vWF+(Ⅷ因子)细胞检测:球囊损伤后28d,治疗组血管内膜被接近于连续完整的CD31+与vWF+细胞覆盖,对照组血管内膜仅见零星、分散的CD31+与vWF+细胞。结论:重组人粒细胞集落刺激因子可促进大鼠血管损伤后外周血中CD34+细胞表达及血管内膜再内皮化,抑制新生内膜增生。
  • 骨折愈合过程中生长因子表达与中药阿胶复方的干预效应 免费阅读 下载全文
  • 背景:阿胶强骨口服液可有效治疗骨折,但其具体的药理学机制仍有待研究。在骨折愈合中,血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2是促进血管内生以及骨的合成代谢的重要耦联因子。目的:观察阿胶强骨口服液对SD大鼠胫骨骨折愈合过程中骨痂中血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨折的疗效机制。设计:完全随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨伤科研究室。材料:选用90只雌性3月龄SD大鼠,体质量(368±40)g,阿胶强骨口服液(主要成分为阿胶,新疆华世丹药业股份有限公司生产);阳性对照药接骨七厘片(主要成分为当归、乳香、没药、大黄、血竭、骨碎补、自然铜,珠海金沙(湖南)制药有限公司生产)。方法:实验于2005-07/12在华中科技大学同济医学院中西结合骨代谢实验室(省级实验室)完成,采用三点弯曲方法造成大鼠右胫骨中段闭合性骨折后,采用完全随机法分为3组:阿胶强骨口服液组(n=30):按人鼠表面积比率换算等效计量法计算后,每只每次给予阿胶强骨口服液2mL灌胃给药,2次/d;接骨七厘片组(n=30):用蒸馏水配制成225g/L灌胃,2次/d;生理盐水组(n=30):给予同等容量,同等频率的生理盐水灌胃。分别在实验第4,7,14,21,28天采用免疫组织化学方法检测大鼠右胫骨骨痂区血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2表达的变化,计算平均吸光度值及阳性细胞数(5个视野细胞)。主要观察指标:各组大鼠右胫骨骨痂区血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2表达(平均吸光度值及阳性细胞数)。结果:纳入大鼠90只均进入结果分析。①血管内皮生长因子表达检测结果:实验开始后4,7,14d,阿胶强骨口服液组大鼠及接骨七厘片组平均吸光度值均高于生理盐水组(P〈0.05~0.01),阳性细胞数变化幅度与平均吸光度值一致。②成纤维细胞生长因子2表达检测结果:实验开始后4,7d,阿胶强骨口服液组及骨七厘片组成纤维细胞生长因子2平均吸光度值,均高于生理盐水组(P〈0.05~0.01),阳性细胞数变化幅度与平均吸光度值一致。结论:阿胶强骨口服液在骨愈合早中期可通过调节血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2的表达,促进前成骨细胞和成软骨细胞的有丝分裂、血管内生以及骨的合成代谢达到促骨折愈合的作用。
  • 血管内皮生长因子受体在大鼠脊髓组织中的表达与分布 免费阅读 下载全文
  • 背景:血管内皮生长因子具有特异性促内皮细胞分裂原的作用,可促进新生血管生长,其受体在大鼠脊髓组织中的表达与分布有待观察。目的:观察血管内皮生长因子受体1与血管内皮生长因子受体2在大鼠脊髓组织的表达与分布。设计:随机对照观察。单位:大连医科大学附属第一医院骨外科;华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科。材料:选用10只清洁级成年雄性Wistar大鼠,体质量180~200g,由华中科技大学同济医学院动物试验中心提供。免疫组化一抗购于SantaCruz公司,二抗三抗均购于北京中山公司。逆转录-聚合酶链式反应试剂盒为Promega产品,Trizol试剂购于Invitrogen公司,血管内皮生长因子受体1和血管内皮生长因子受体2抗体(1∶400,Santa Cruz Biotechnology),血管内皮生长因子受体1及血管内皮生长因子受体-2引物由北京奥克公司设计。方法:实验于2004-03/06在武汉协和医院手外科实验室完成。①脊髓前角血管内皮生长因子受体表达的检测:100g/L水合氯醛腹腔麻醉大鼠,取腰4~6段脊髓入固定液中4℃固定过夜,常规脱水,透明,石蜡包埋,连续切片约5μm厚,进行免疫组织化学染色观察血管内皮生长因子受体表达分布。②脊髓血管内皮生长因子受体mRNA的表达检测:取5只大鼠,各取腰4~6段脊髓组织50mg,离心,紫外分光光度计检测总RNA含量,对合成得到的cDNA进行PCR扩增,取10μLPCR产物在20g/L琼脂糖凝胶上电泳,0.1mg/L溴乙锭染色,紫外灯下观察记录结果并照相。凝胶成像分析系统上扫描定量,读取各条带的灰度值,以β-actin条带的灰度值为1,其它目的片段灰度值与其相比较,记录灰度比,分析目的片段的表达水平。主要观察指标:①大鼠脊髓前角血管内皮生长因子受体1及血管内皮生长因子受体2蛋白的表达分布。②脊髓血管内皮生长因子受体mRNA的表达检测结果。结果:①血管内皮生长因子的两种受体蛋白在大鼠正常脊髓组织的微血管均有表达,并且血管内皮生长因子受体2更主要的表达于脊髓运动神经元、胶质细胞及周边白质中的神经纤维。②凝胶成像分析系统扫描结果示正常脊髓组织中血管内皮生长因子受体-2的含量明显高于血管内皮生长因子受体1的含量(0.874±0.222,0.486±0.181,P〈0.05)。结论:血管内皮生长因子通过血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2两种受体共同作用促进脊髓微血管的形成,维持神经内环境的稳定;通过血管内皮生长因子受体2发挥神经营养和神经保护作用。
  • 猪主动脉内皮细胞在血管紧张素作用下血管活性物质变化及丹参酮ⅡA的保护效应 免费阅读 下载全文
  • 背景:导致血管内皮细胞损伤的因素中,肾素-血管紧张素系统、尤其是局部肾素-血管紧张素系统所产生的血管紧张素Ⅱ起着重要的病理生理作用。目的:观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ作用下的血管内皮细胞分泌一氧化氮及其内皮型一氧化氮合酶基因表达的影响和细胞内游离钙离子浓度水平的改变,探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞的保护作用。设计:观察对比实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊内科。材料:实验于2006-03/10在华中科技大学同济医学院基础医学实验中心完成。实验用猪主动脉由同济医学院病理生理教研室提供。方法:采用硝酸还原法、逆转录聚合酶链反应,分别检测不同浓度(10-8~10-6mol/L)作用不同时间(1,6,24h)的血管紧张素Ⅱ对培养的猪主动脉内皮细胞产生一氧化氮及其内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响;然后比较在10-6mol/L的血管紧张素Ⅱ作用的不同点(0,6h)加入50mg/L浓度的丹参酮ⅡA,分别检测作用1,6,24h后内皮细胞的一氧化氮生成和内皮型一氧化氮合酶的基因表达变化。用激光共聚焦扫描显像系统检测内皮细胞内游离钙离子浓度水平的变化。主要观察指标:①一氧化氮含量。②内皮型一氧化氮合酶mRNA表达。③游离钙离子浓度。结果:①随着血管紧张素Ⅱ浓度的增加、作用时间的延长,内皮细胞一氧化氮的产生及内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达呈顺序下降(P〈0.01)。②丹参酮ⅡA各组一氧化氮的产生及内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达明显高于血管紧张素Ⅱ组,在丹参酮ⅡA作用1,6h,血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组一氧化氮的产生及内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达明显高于血管紧张素Ⅱ6h+丹参酮ⅡA组(P〈0.05);随着作用时间延长至24h,两组间差异无显著性(P〉0.05)。③主动脉内皮细胞游离钙离子浓度:血管紧张素Ⅱ组显著高于空白对照组(P〈0.01),丹参酮+血管紧张素Ⅱ组显著低于血管紧张素Ⅱ组(P〈0.05)。结论:丹参酮ⅡA可抑制血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞分泌一氧化氮以及细胞内皮型一氧化氮合酶基因表达的负性作用,可能通过多种途径对血管内皮细胞及其功能起到保护作用。
  • 血管壁和血管内皮细胞超微结构在急性机械性脑血管痉挛早期的变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:某些颅脑手术中难免会对脑血管进行牵拉、夹闭等机械性刺激,导致急性机械性脑血管痉挛的发生,目前这种急性机械性脑血管痉挛的病理生理及病理预后尚不清楚。目的:观察猫大脑中动脉血管直径、脑血流量、血管壁和血管内皮细胞超微结构在机械性刺激痉挛后早期(2h)的变化。设计:开放性实验。单位:首都医科大学附属北京天坛医院神经内科和北京市神经外科研究所。材料:选用健康成年的杂种猫6只,雌雄不拘,体质量2.5~3.5kg,由中国医学科学实验动物研究所提供。Periflux5010型激光多普勒血流仪(瑞典Perimed公司)。方法:实验于2005-08/2006-03在北京市神经外科研究所完成。200g/L水合氯醛腹腔注射(2mL/kg)麻醉后,取俯卧位。正中切开头皮,于前囟后1.5cm,旁开1.5cm开方形骨窗,8×10mm,挑破硬脑膜,选择无血管或少血管的脑表面固定激光多普勒血流计的微细探头。再使动物侧卧位,利用手术显微镜,通过眶下入路,暴露右侧大脑中动脉。选择大脑中动脉跨越嗅束前部位,利用钝性器械重复刺激大脑中动脉,频率为100次/min,持续30min。分别于刺激前,刺激结束后0,0.5,1.0,1.5,2.0h测量刺激前后大脑中动脉直径的变化,监测皮层脑组织灌流指数的变化,观察刺激后2h大脑中动脉血管壁和内皮细胞超微结构的变化。主要观察指标:刺激前,刺激结束后0,0.5,1.0,1.5,2.0h大脑中动脉直径和皮层脑组织灌流指数的变化以及刺激2h后大脑中动脉血管壁和内皮细胞超微结构的变化。结果:纳入6只实验动物全部进入结果分析。①大脑中动脉直径的变化:刺激结束后0,0.5,1.0h大脑中动脉直径分别为(0.617±0.129),(0.723±0.082),(0.840±0.084)mm,与刺激前比较,明显变窄[(0.897±0.066)mm,t=4.74,4.017,1.299,P〈0.01]。②脑组织灌流指数的变化:刺激结束后0,0.5,1.0,1.5,2.0h灌流指数分别为67.8±18.5,82.5±17.5,89.8±24.0,94.0±22.2,98.5±21.0,明显低于刺激前(159.2±23.5,t=4.716~7.469,P〈0.01)。③大脑中动脉超微结构的变化:大脑中动脉经急性机械性刺激后早期(2h)内皮细胞染色质边集,凝聚成新月形小体,线粒体嵴模糊不清。结论:机械性刺激猫大脑中动脉可导致脑血管痉挛。刺激后早期(2h)即出现内皮细胞超微结构的变化,显示内皮细胞的凋亡现象。提示颅脑手术中对脑血管的机械性刺激应尽可能的轻微,尽量减少对脑血管的机械性刺激,避免急性脑血管痉挛的发生。
  • 《中国神经再生研究(英文版)》杂志介绍 免费阅读 下载全文
  • 肺成纤维细胞三维立体培养条件对肺纤维化组织重塑的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:组织细胞三维立体培养是肺纤维化破坏与组织收缩研究的理想模型,特别是在纤维化的进展过程中,几种细胞因子如肿瘤坏死因子、白细胞介素、前列腺素、胰岛素以及渗出的血浆成分可能在纤维化的损伤修复和组织重塑中起重要的作用。目的:观察三维立体培养条件下肺成纤维细胞在血清和血清蛋白、胰岛素和细胞因子前列腺素E2、转移生长因子β、肿瘤坏死因子α的细胞外胶原基质收缩和细胞凋亡,探讨肺纤维化过程中细胞因子、胰岛素、血清及血清蛋白对肺组织重塑和纤维化形成的影响。设计:随机对照实验。单位:解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科。材料:实验于2005-08/2006-01在解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科实验室完成。人胚肺成纤维细胞(AmericanTypeCultureCollection),DMEM培养液和胎牛血清(GIBCO),胰岛素、转移生长因子(R&D),前列腺素E2(Sigma),Ⅰ型胶原提取自大鼠尾部肌腱。方法:为观察初始浓度对成纤维细胞收缩力的影响及细胞数量对胶原收缩的影响,提取大鼠尾部的胶原,与双蒸水、4×DMEM及成纤维细胞混合成胶原含量为0.75-1.5g/L的立体组织胶原,细胞浓度为0.2×10^7-4×10^7L^-1,置入含体积分数0.05的CO2培养箱37℃培养。每天测定胶原的面积,最后计算终面积与初始面积的比值。将0.01%-0.5%血清、0.1%的血清白蛋白和0.1%球蛋白分别加入到培养液中,观察胶原的收缩。加入10mg/L转移生长因子、10mg/L白细胞介素1、1mmol/L胰岛素和0.1μmol/L前列腺素E2,观察细胞因子对成纤维细胞介导胶原收缩的影响,对胶原中DNA含量进行测定及细胞存活率检测。主要观察指标:不同细胞因子或血清成分对肺成纤维细胞介导胶原收缩的影响,胶原内成纤维细胞数量对胶原收缩的影响,以及不同浓度胶原对胶原收缩和对细胞增殖和凋亡的影响。结果:①胶原的收缩有细胞依赖性,细胞浓度越高则胶原收缩越强烈。②血清和白蛋白的加入引起了剧烈的胶原收缩。③转化生长因子和胰岛素增强胶原的收缩,前列腺素E和白细胞介素1抑制胶原的收缩。④胶原的初始浓度越低,胶原收缩的速度越快越强烈,胶原终面积就越小,其中的成纤维细胞凋亡就越多。结论:肺成纤维细胞介导的胶原收缩可被白细胞介素1和前列腺素E抑制,胰岛素和转化生长因子则促进了胶原收缩。血清及血清成分在受损肺组织的渗出可以导致肺组织胶原的稀释与强烈收缩,而导致成纤维细胞增殖的抑制和凋亡的增加,肺纤维化进一步发展,成为无细胞胶原成分。
  • 关节软骨组织工程修复中的种子细胞 免费阅读 下载全文
  • 目的:阐述关节软骨组织工程修复的种子细胞及其应用的研究现状,对其来源、体外扩增、以及基因修饰进行了探讨,并提出其进一步应用的前景。资料来源:检索PubMed1994-01/2006-04与关节软骨组织工程修复的种子细胞相关的文章,检索词为“cartilage,joint,tissue engineering,stem cell,cell culture,gene modification”,并限定语言种类为英语。其他文章经清华同方和维普数据库检索具体的杂志名称和文章题名收集。资料选择:对收集到的资料进行初筛,选择与关节软骨组织工程修复的种子细胞相关的文章,筛除明显不符合原文的文章,对剩余的文献手工检索查找全文。资料提炼:共收集相关文章89篇,纳入34篇,排除55篇。资料综合:用于构建人工软骨组织的细胞主要有自体或异体软骨细胞、骨膜和软骨膜细胞、间充质干细胞以及胚胎干细胞,其均可于体外经特定的培养体系进行有效的培养和扩增,在一定条件下还可以经不同的策略和方法进行基因修饰,从而修复关节软骨缺损。结论:种子细胞以其自身多方面的特点在组织工程技术修复关节软骨缺损中发挥重要作用。
  • 运动员腱止点末端病的研究进展 免费阅读 下载全文
  • 目的:就近年来有关腱止点末端病的研究报道,对腱止点末端病的研究现状进行阐述。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1990-01/2006-12期间的相关文章,检索词为“Enthesopathy”和“tendinopathy”,限定文章语言种类为英文。同时计算机检索万方数据资源系统与中国期刊全文数据库1994-01/2005-12期间的相关文章,检索词“腱止点,末端病,腱病”,限定文章语言种类为中文。资料选择:选取与腱止点末端病的基础和临床相关的文献,排除重复性实验研究。资料提炼:共收集到20篇关于细胞因子在肌腱损伤愈合方面的基础和临床相关实验文章,16篇实验文章纳入标准。排除的4篇实验均为重复的同一研究。资料综合:①腱止点末端结构主要由4部分组成,其结构特点比较复杂;主要功能是传导和缓冲应力。②腱止点末端病的病因、病理目前还不清楚;一般认为其病因主要是末端结构失代偿,病理主要是胶原和软骨的退行性变。③通过各种理疗手段,能够改善腱止点末端的临床症状;但不能从根本上消除病因。结论:目前对腱止点末端结构的研究比较透彻,对末端病的病因、病理及与细胞凋亡的关系还了解较少,同时对于末端病的治疗目前还缺少可靠的科学方法,因此有必要对目前的治疗方法进行严密设计,随机研究其效果,同时还应积极开展对其他治疗方法(基因疗法、细胞因子疗法)的探索和研究。
  • 胎盘免疫调节因子对细胞因子诱导的杀伤细胞超微结构及免疫表型的调节作用(张学荣 蒙怡 舒雨雁 韦敏 石庆秋 徐阳曦)
    白细胞介素13刺激成纤维细胞胶原基因转录和胶原蛋白的合成
    白细胞介素1β诱导肾小管上皮细胞的转分化
    大鼠主动脉内膜损伤后新生内膜各种生长因子表达与表没食子儿茶素没食子酸酯的干预
    犬内皮与平滑肌细胞的短期静态联合培养
    恒磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶的影响
    国家自然科学基金2007年面上项目关于生物医学工程学学科领域课题申请初审结果选介
    血管内皮生长因子与基质金属蛋白酶2在血管瘤不同生长过程中的表达特征
    应用纳米晶胶原基骨体外构建组织工程骨
    增强型绿色荧光蛋白标记技术示踪组织工程化骨形成(戴江华 胡琼华 戴闽 尹东 戴育成 张吉翔)
    组织工程骨修复兔股骨髁骨缺损成骨效应的核素骨显像定量评价(付志厚 王爱民)
    携带LacZ的腺病毒载体在牵引骨痂局部转染成纤维细胞和成骨细胞的表达(刘振东 徐诣 张朝跃 苗杰 钟杰林 刘清)
    2007年国家自然科学基金委生命科学部部分学科重点项目资助计划及立项领域介绍
    成纤维细胞生长因子Ⅱ型受体功能获得型点突变影响小鼠颅底软骨发育(尹良军 杜晓兰 刘志君 苏楠 张宜华 杨京 金瑷 赵玲 陈林)
    三种不同培养条件下兔关节软骨细胞增殖速率的差别
    应用骨量及骨强度变化评估壁虎提取物改善骨质疏松大鼠的生物效应
    《中国神经再生研究(英文版)》杂志组稿重点及投稿作者免费赠送杂志
    去势大鼠腰椎骨密度及血清生化指标改变及运动训练的干预
    广东东莞地区中老年非暴力性骨折107例及无骨折求诊者392例超声骨密度测定(谢文伟 姚汉刚 熊秉刚 谢雪霞 吴彩玉 廖德允)
    缺氧条件下维生素E对视网膜色素上皮细胞生长的影响(马健 袁志兰 帅捷 曹鎏 洪瑾)
    马钱子药膏改善颈椎病患者周围神经压迫症状:随机对照306例效果观察(李全 李福安 卢坚)
    22 题名 三维CT评估发育性髋关节脱位的骨性形态学特征
    数字减影血管造影评价股骨头坏死模型
    骨性关节炎软骨组织内蛋白多糖和软骨细胞凋亡数量变化与早期药物干预的影响
    中药制剂承载丸对甲基强的松龙预处理的成骨细胞L型钙通道电流的影响
    人T-bet基因的体外扩增及克隆和鉴定
    携带脑源性神经营养因子基因腺病毒载体转染在体大鼠损伤坐骨神经基因表达的检测
    鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响(刘亮明 罗杰 张吉翔 郭宏兴 邓欢 徐江晶 尹东 熊高飞)
    雌性小鼠生殖器官衰老与玉米幼芽提取物的干预效应(刘韵佳 欧阳五庆 马淑燕)
    成人成骨细胞骨髓培养法与组织块培养法的对比(朴成吉 蒋青 陈东阳 徐志宏)
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    去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化
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    《中国组织工程研究与临床康复》杂志介绍
    人视网膜色素上皮细胞增殖与川芎嗪的影响
    坐骨神经慢性挤压伤模型大鼠行为学及形态学变化
    股骨颈骨折内固定器置入的生物力学特征及其应用特点(郭志 窦智)
    欢迎访问《中国组织工程研究与临床康复》杂志网站www.zglckf.com
    成纤维细胞生长因子2的分子结构和生物学效应
    血管内皮生长因子与运动的相关性(葛运华)
    CRTER近期组稿重点
    结缔组织生长因子与病理性瘢痕(高云 杨松林)
    结缔组织生长因子与器官纤维化(余文林 曾东 苑凯华 李勤 程飚)
    下背痛的评价及其患者生活质量的评价(陈裔英 乔晋琳)
    蛋白质组学及其相关技术在运动人体科学中的应用
    缩血管活性因子内皮素在缺血性心脏病中的作用及中医药干预效应(司友琴 黄政德 谢雪姣 严文厂)
    改良人体标本保存液配方的效果(刘仰斌 盛瑶环 李启华 吕军华)
    大鼠皮肤麦克尔细胞切片制作方法(谢玲 张志平 崔红晶 林坚涛)
    成纤维细胞生长因子受体3在牙源性肿瘤中的表达
    重组人粒细胞集落刺激因子修复大鼠动脉损伤(吴俊 陈绍良 刘志忠 李小波 苏晓叶)
    骨折愈合过程中生长因子表达与中药阿胶复方的干预效应
    血管内皮生长因子受体在大鼠脊髓组织中的表达与分布
    猪主动脉内皮细胞在血管紧张素作用下血管活性物质变化及丹参酮ⅡA的保护效应(李永胜 王照华 梁黔生 郑智)
    血管壁和血管内皮细胞超微结构在急性机械性脑血管痉挛早期的变化
    《中国神经再生研究(英文版)》杂志介绍
    肺成纤维细胞三维立体培养条件对肺纤维化组织重塑的影响(朱运奎 肖永久 薛庆亮 王晓芹 李继东 汪莉 刘卫 牟玉兰)
    关节软骨组织工程修复中的种子细胞(王瑞 赵建宁 吴苏稼)
    运动员腱止点末端病的研究进展(张兴梅)
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