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  • 银杏内酯和神经生长因子影响原代人胚肝细胞的增殖及分泌 免费阅读 收费下载
  • 目的:如何培养足够的肝细胞以及应用一些物质、因子从而使其增加分裂、减少凋亡?观察银杏内酯和神经生长因子对体外原代培养的人胚肝细胞增殖、凋亡及相关分泌功能的影响具有临床实用性意义。方法:实验于2005-07/2006-10在南通大学神经生物学研究所完成。①细胞来源:孕14-16周流产胎儿,由南通市妇幼保健院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准。银杏内酯由中国药科大学提供,神经生长因子为Roche公司产品。②实验方法:用非灌流法从人胚肝中分离肝细胞,以DMEM作为培养基,接种于4块24孔培养板中,每两块培养板各接种36孔,12孔,组,细胞3x105/孔。银杏内酯组各孔加入含37.5g/L银杏内酯和体积分数为O.1小牛血清的DMEM培养液2mL,神经生长因子组各孔加入含100mg/L神经生长因子和体积分数为O.1小牛血清的DMEM培养液2mL,空白对照组各孔加入仅含体积分数为O.1小牛血清的DMEM培养液2mL。③实验评估:人胚肝细胞原代培养至9d,倒置显微镜下计数每视野的肝细胞数,同时行MTT试验,并用流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况。分别于培养3,6,9d时收集肝细胞培养液进行白蛋白含量检测。结果:①原代肝细胞生长情况及肝细胞计数:接种12h后各组肝细胞均已贴壁,3d后可见由3-5个细胞组成的细胞集落,至9d时银杏内酯组和神经生长因子组肝细胞已基本铺满孔底,且呈立体生长倾向,空白对照组肝细胞较少,胞间有空隙存在。至培养9d,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组每视野内肝细胞计数差异有显著性意义(F:12.97,P:O.00)。②MTT试验结果:原代肝细胞培养至9d时,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组吸光度值差异有显著性意义(F=71.90,P:0.00)。③肝细胞培养液白蛋白含量:培养3d时各组细胞培养液的白蛋白含量方差分析无明显差异(F=O.23,P=O.79)。培养6,9d同一时间点组间比较差异有显著性意义(F=11.69,P=O.00;F=9.35,P=O.00)。(9细胞凋亡情况:银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组凋亡肝细胞百分率分别为11.53%,9.29%,15.27%。结论:银杏内酯和神经生长因子对原代人胚肝细胞的增殖和分泌白蛋白功能均具有促进作用,并抑制细胞凋亡。
  • 骨髓间充质干细胞向神经细胞转化过程中神经生长因子及受体的表达 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞过程中神经生长因子及其受体的表达变化情况,以探索骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的机制。方法:实验于2005-10/2006-08在华北煤炭医学院中心实验室和形态实验室完成。实验方法:①骨髓间充质干细胞的分离和培养:分离纯化健康成年SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养。(④骨髓间充质干细胞的诱导分化:取第5代细胞,加入含L-DMEM、1mmol/Lβ-巯基乙醇、20%FBS预诱导液进行预诱导,24h后去除预诱导液,加入含L-DMEM、5mmol/L β-巯基乙醇诱导液诱导培养5h,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,采用免疫细胞化学方法鉴定神经细胞。(9尼氏小体染色:应用甲苯胺蓝对尼氏小体染色,光镜下观察并照相。④实验评估:对诱导前后细胞进行免疫组织化学检测,并提取诱导前后细胞的mRNA,通过RT-PCR法检测神经生长因子、神经生长因子受体TrkAmRNA表达变化。结果:①骨髓间充质干细胞的培养:骨髓间充质干细胞贴壁生长情况良好,大部分细胞贴壁呈长梭形。传代后细胞形态和原代细胞相似,生长加快。②骨髓间充质干细胞的诱导分化:加入预诱导液后,细胞体积缩小,立体感增强,细胞边缘变得不规整,部分细胞有细的指状突起,其中约2%的细胞胞体已变成近似球形,具有短的突起,形状类似神经元。5h后细胞转化达到峰值,形态不再发生明显改变,具有典型神经细胞样形态,免疫细胞化学检测显示,神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白表达均呈阳性。⑧尼氏小体染色:未诱导骨髓间充质干细胞胞浆内无尼氏小体,诱导5h后大部分细胞染色阳性,胞质中存在着深蓝色颗粒状尼氏小体。(9RT-PCR反应检测神经生长因子和TrkAmRNA:神经生长因子mRNA表达在诱导前后没有变化,Trl(AmRNA在诱导后的表达减少(P〈0.05)。结论:①骨髓间充质干细胞成功诱导分化为神经细胞,其在诱导分化为神经细胞前后表达神经生长因子及其受体TM。②神经生长因子在诱导分化前后稳定表达,神经生长因子受体TrkA在诱导分化后表达减少,神经生长因子/TrkA信号途径可能在骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的过程中起作用。
  • 碱性成纤维细胞生长因子对体外培养大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用 免费阅读 收费下载
  • 目的:适当的碱性成纤维细胞生长因子剂量能促进脂质过氧化活性,发挥保护脊髓神经细胞的功能。设立不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子,比较其对大鼠胚胎脊髓神经细胞生长发育和脂质过氧化的影响,筛选出保护脊髓损伤的机会窗口。方法:实验于2006-08/1O在江苏大学医学技术学院细胞培养室完成。①实验方法:健康成年妊娠16d的wistar孕鼠1只,取出胚胎脱颈椎法处死,分离脊髓组织胰蛋白酶消化,制备细胞悬液,将脊髓神经细胞密度调整至4×10^5L^-1。碱性成纤维细胞生长因子组分别向细胞悬液中加入1,10,50,100,200斗g/L碱性成纤维细胞生长因子20μL,设立正常对照组。②实验评估:倒置相差显微镜下观察胚胎脊髓神经细胞形态,计数集落数,确定细胞分化的结果。检测超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量及相对蛋白质含量。结果:①胚胎脊髓神经细胞的形态:刚接种的脊髓神经细胞为圆形,随着培养的时间延长胞体逐渐增大,伸出突起的脊髓神经细胞逐渐增多、突起伸长。培养5~8d的脊髓神经细胞胞体最丰满,周围晕光明显,随后大量脊髓神经细胞增殖形成细胞岛。②鼠胚胎脊髓神经细胞的生长分化:与正常对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子10,50,100μg/L组细胞集落数明显增加(P〈O.05);至200μg/L时细胞集落数减少(P〈O.01),细胞存活率明显下降,甚至出现细胞死亡现象。③鼠胚胎脊髓神经细胞相对蛋白质含量:与正常对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子10,50,100μg/L组可明显提高鼠胚胎脊髓神经细胞相对蛋白质含量(P〈O.05);至200μg/L时则产生抑制作用(P〈O.01)。④鼠胚胎脊髓神经细胞抗氧化指标检测:与正常对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子10,50,100μg/L组超氧化物歧化酶活性升高,丙二醛含量降低(P〈O、05);至200μg,L时丙二醛含量明显升高(P〈O.01)。结论:10~100μg/L的碱性成纤维细胞生长因子能促进鼠胚胎脊髓神经细胞的生长发育,增加细胞突起长度,调节脂质过氧化水平,维持细胞内的自由基动态平衡。
  • 碱性成纤维细胞生长因子基因转染对鼠眼外肌成肌细胞生物学行为的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:实验证明外源性的碱性成纤维细胞生长因子可以增强骨骼肌成肌细胞的生长及成活,内源性碱性成纤维细胞生长因子对肌肉修复也有明显作用。但如将其基因转染到眼外肌中也有相同的效果吗?目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子基因转染对鼠眼外肌成肌细胞生物学行为的影响。设计:单一样本观察。单位:青岛大学医学院附属医院眼科。材料:原代大鼠眼外肌成肌细胞为前期培养得到,纯度大于90%,并成功构建人PEGFP-N3-bFGF真核表达载体(另文发表)。方法:实验于2005-09/2006-12在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①实验干预及分组:实验分为试验组:用重组PEGFP-N3-bFGF转染的细胞;对照组1:空载PEGFP-N3转染的细胞;对照组2:培养皿中只加入F-10培养基(体积分数为0.1的胎牛血清)培养的细胞。采用脂质体转染技术.将重组PEGFP-N3-bFGF质粒转染体外培养的大鼠眼外肌成肌细胞中。③实验评估:用免疫组织化学法观察碱性成纤维细胞生长因子表达;用荧光显微镜检测转染效率;在培养的第1,3,5,7,9,11,13,15,21,28天采用ABC-ELISA法检测各组成肌细胞碱性成纤维细胞生长因子蛋白的分泌;采用四甲基偶氮唑盐法检测各组眼外肌成肌细胞增殖情况;根据已知一定浓度标准品的A值计算各组细胞肌酸激酶活性。主要观察指标:①观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染体外培养的大鼠眼外肌成肌细胞的效率;转染后的表达情况。②转染后碱性成纤维细胞生长因子蛋白的分泌情况;对大鼠眼外肌肌原细胞生长和分化的影响。结果:④碱性成纤维细胞生长因子基因转染体外培养的大鼠眼外肌成肌细胞的转染率达(42.8±1.2)%。②免疫组织化学检测试验组呈现阳性反应。③转染细胞能够分泌碱性成纤维细胞生长因子蛋白,第5天最高达662.935ng/L。④转染细胞增殖活性明显提高,其A值均比同一时相点的对照组明显增高(P〈0.05)。⑤转染后细胞从第5天始至终,肌酸激酶值高于对照组(P〈0.01)。结论:碱性成纤维细胞生长因子基因转入大鼠眼外肌的成肌细胞中,能够使大鼠眼外肌的成肌细胞分泌碱性成纤维细胞生长因子,具有促进细胞增殖,提高其成活率,促进其分化能力。
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  • NRR设有基础研究、临床研究、研究快报、病例报告、技术报告、综述、学术探讨等栏目。
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  • 本刊为从事临床康复领域生物材料、干细胞、组织构建、器官移植、人工器官、康复工程、医学假体、医用植入体、康复器械研究的在校博士、硕士研究生设立2007年度奖学金奖励12名奖金2万元 免费阅读 免费下载
  • 为进一步推进中国组织工程研究中生物材料、干细胞、组织构建、器官移植、人工器官、康复工程、医学假体、医用植入物与介入物、康复器械研究的深入发展.鼓励广大青年学者勤奋学习,提高素质,鼓励本学科优秀青年人才的脱颖而出,
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  • 《中国组织工程研究与临床康复》杂志是一本传播组织工程领域一流学术研究成果的专业期刊,由卫生部主管,中国康复医学会与《中国组织工程研究与临床康复》杂志社主办.1997年创刊.全球范围内公开发行,200页/期.出版时效为周刊。
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  • 受强力霉素调控的永生化骨骺干细胞株的建立 免费阅读 收费下载
  • 目的:建立受强力霉素调控高表达外源基因的真核表达体系一永生化骨骺干细胞株,为调控甲状旁腺相关肽的不同片断在骨骺干细胞中的表达打下基础。方法:实验于2006-0912007-03在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料:SD大鼠的乳鼠由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供,雄鼠4只,雌鼠6只。②实验方法:取SD大鼠的乳鼠10只,显微镜下选取LaCroix环处的软骨及软骨前体细胞(骨骺干细胞),采用磁性细胞分选的方法,分离出原代骨骺干细胞,并用PCMVSV40质粒将其永生化。用脂质体介导法将pTet-on质粒转染已永生化的骨骺干细胞,通过G418筛选并经有限稀释法进行单克隆化,得到稳定转染的抗性克隆并将其分别扩增培养。将pTRE2hyg-luc质粒瞬时转染扩增后的单克隆细胞,加入终浓度为1mg/L的强力霉素诱导剂培养,48h后逐一检测每个细胞株的荧光素酶表达活性,逐一筛选强力霉素调控高表达外源基因的永生化骨骺干细胞株。③实验评估:将挑选出的第23号克隆扩增培养,加入O.01,O.1,O.5,1,5mg/L强力霉素进行诱导培养,并设置3组对照,一组为空白对照(蒸馏水),一组为未转染Tet-on系统的骨骺干细胞(均加入1mg/LO.1mg/强力霉素诱导),另一组为转染后的骨骺干细胞不加入强力霉素诱导。观察强力霉素对骨骺干细胞的最优诱导质量浓度。结果:第23号克隆的细胞经诱导后荧光素酶的表达活性为85790,而非诱导状态下该细胞株的活性为437,诱导后的活性增加196.3倍。强力霉素质量浓度梯度实验提示,强力霉素的最优诱导质量浓度是1mg/L左右,质量浓度过高可导致细胞死亡,过低时诱导效率降低。结论:永生化骨骺干细胞株可用于真核调控高表达,为研究甲状旁腺相关肽的不同功能片断与骨骺干细胞的分化机制的关系打下了基础。
  • 三七总皂甙对大鼠体内肝卵圆细胞增殖的调控及机制 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏缝隙连接蛋白32、43表达、缝隙连接细胞间通讯功能和肝卵圆细胞增殖的影响,探讨三七总皂甙调节肝卵圆细胞增殖的可能机制。方法:实验于2004-07/2006-02在江西省分子医学重点实验室完成。①实验材料:健康雄性清洁级Wistar大鼠,体质量150g左右,随机分成对照组(n=6)、模型组(n=38)、三七总皂甙组(n=37)。三七总皂甙注射剂(昆明制药集团股份有限公司惠赠)。(萤实验方法:模型组大鼠按20mg/(kg·d)剂量灌喂2-乙酰氨基芴,连续4d,第5天不灌喂,行2/3肝切除,术后次日按20mg,(kg·d)剂量继续灌喂5d;三七总皂甙组大鼠按模型组建模时,即第1次2-乙酰氨基芴灌胃前1h予以三七总皂甙25mg/(kg·d)腹腔内注射,并持续实验结束。模型组、三七总皂甙组在术后4h,4d,8d,12d,16d随机取6只大鼠检测。对照组大鼠未作特殊处理,作正常对照。③实验评估:采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化;免疫组织化学和细胞形态学方法计数肝卵圆细胞;切开标记,染料示踪技术确定缝隙连接细胞间通讯;免疫组织化学及RT-PCR技术检测缝隙连接蛋白32蛋白及mRNA表达;免疫组织化学、Westemblot及RT中CR技术分析CX43蛋白及mRNA水平。结果:肝功能衰竭导致模型组大鼠死亡8只,三七总皂甙组死亡7只,共66只进入结果分析。①大鼠肝卵圆细胞的活化、增殖情况:对照组,模型组和三七总皂甙组4h未见肝卵圆细胞增殖。模型组4d汇管区有肝卵圆细胞增殖反应,8d肝卵圊细胞增殖达峰值,12d肝卵圆细胞从汇管区向肝实质内浸润,16d肝卵圆细胞增殖较12d减少。与模型组比较,三七总皂甙组4,8,16d减少(P〈0.05),12d增殖肝卵圆细胞增多(P〈0.05)。②大鼠肝脏缝隙连接细胞问通讯的变化:各时点模型组、三七总皂甙组大鼠肝脏缝隙连接细胞间通讯均低于对照组(P〈0.01),与模型组比较,三七总皂甙组各时点缝隙连接细胞间通讯升高(P〈0.01)。(④大鼠肝脏CX32、CX43蛋白及CX32、CX43mRNA表达:模型组、三七总皂甙组各时点CX32蛋白表达低于对照组(P〈0.05),与模型组比较,三七总皂甙组4d表达上调(P〉0.05),余时点均明显升高(P〈0.05)。模型组CX32mRNA水平4h~16d各时点均低于对照组,与模型组比较,三七总皂甙组4h上调(P〉0.05),4-16d明显升高(P〈0.05);模型组、三七总皂甙组CX43蛋白表达上调,模型组4h~16d各时点CX43蛋白均高于对照组。与模型组比较,三七总皂甙组在4h下调(P〉0.05),4d、8d时点表达下降(P〈0.01),12,16d时点升高(P〈0.05,P〈0.01)。模型组CX43mRNA4h~16d各时点均高于对照组。与模型组比较,三七总皂甙组CX43mRNA水平与蛋白趋势一致,呈现表达峰值低、持续时间长的特点。结论:三七总皂甙可使大鼠2-乙酰氨基芴喂食+肝切除术模型肝脏的肝卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,其机制与调节大鼠2-乙酰氨基芴喂食+肝切除术模型肝脏的缝隙连接蛋白时空表达模式改变肝脏缝隙连接细胞间通讯功能相关。
  • 建立永生化骨髓间充质干细胞株 免费阅读 收费下载
  • 目的:将外源性人端粒酶反转录酶基因转入人骨髓间充质干细胞,以建立永生化细胞株。方法:实验于2006-01/2007-01在石河子大学新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室完成。①实验材料:骨髓标本采自因意外事故引产死亡的8个月正常胎儿,家属均签署知情同意书。大肠杆菌DH5α分子克隆的受体菌由本室保存。质粒pBabepuro-hTERT由美国Weinberg博士惠赠。PA317细胞和Hela细胞由郭志儒博士惠赠。NIH3T3细胞由黄瑾博士惠赠。②实验方法:无菌条件下将骨块置于d-MEM培养液中,分离及扩增培养人骨髓间充质干细胞。提取并纯化质粒pBabepuro-hTERT,转染包装骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选后获得抗性克隆,选取病毒滴度最高的细胞克隆感染生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞。⑧实验评估:采用端粒酶重复序列扩增法一酶链免疫吸附法检测人骨髓间充质干细胞转染前后端粒酶活性的变化,样本的△A值高于0.2视为端粒酶阳性。结果:①骨髓间充质干细胞的形态观察:第3代人骨髓间充质干细胞形态不规则,体积较大的细胞逐渐死亡,以梭形为主。②基因转染包装细胞和克隆筛选结果:嘌呤霉素筛选7d后,转染的细胞出现抗性克隆。待细胞克隆长至肉眼可见时将细胞克隆消化后扩增培养,挑选出4个抗性克隆,分别命名为克隆1,2,3,4。③病毒滴度的测定:1~4号细胞克隆的病毒滴度分别为3×10^67x10^5,4x10^5,9x10^6cfu/L。④端粒酶活性变化的检测:未转染的第3代骨髓间充质干细胞AA值为0.121±0、043,端粒酶活性为阴性。第3代人端粒酶反转录酶一骨髓间充质干细胞的△A值为1.741±0.103,端粒酶活性为阳性。结论:导入外源性人端粒酶反转录酶基因后可激活骨髓间充质干细胞的端粒酶活性。
  • 腺病毒重组绿色荧光蛋白转染脂肪组织来源干细胞的特点 免费阅读 收费下载
  • 目的:体外基因转染成人脂肪组织来源的干细胞后,观察腺病毒载体能否有效地转染及对细胞的影响。实验应用腺病毒增强型绿色荧光蛋白进行体外基因转染以验证基因修饰效果。方法:实验于2006-10/2007-02在南方医科大学生物技术工程研究所实验室完成。实验对象:脂肪组织取自南方医科大学附属医院整形科手术室5例成年女性腹部吸脂术患者,排除了冠心病、高血压及糖尿病等。手术前均与患者本人谈话并征得其同意,获取脂肪组织进行实验,并经医院伦理委员会批准。实验方法:分离人脂肪组织,进行原代和传代培养。取第4代脂肪组织来源干细胞进行流式细胞术表型鉴定,并将0,10,20,30,50,100感染复数值的腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白,通过活力和增殖实验进行体外转染,观察其对脂肪组织来源干细胞的影响。结果:5份标本均成功培养出脂肪组织来源干细胞,生长良好,均成功进行了腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白基因转染。①原代细胞培养48h后可见细胞贴壁,13d后可见细胞铺满瓶底80%细胞绝大多数呈梭形。1:2传代后细胞增殖速度明显加快,3d后细胞即已长满培养瓶底,即可传代。第4代的脂肪组织来源干细胞表型,呈CD29^+,CD34^-,CD44^+,CDl06^-,CDl33^-和HLA-DR^-②腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白转染24h可见绿色荧光,5d荧光表达强度最强,脂肪组织来源干细胞细胞传代培养后仍有强荧光表达。⑨转染组和未转染组细胞培养1,3,5,7,9,11d时细胞活力、增殖分化均无统计学差异。结论:腺病毒重组增强型绿色荧光蛋白可成功进入脂肪组织来源干细胞,感染复数值为50时较为理想。
  • 双重消减纯化体外培养许旺细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:许旺细胞培养技术和纯化方法虽不断改良。得到的培养物纯度仍然有限,双重消减法是否可以培养高纯度许旺细胞。目的:采用双重消减法对许旺细胞进行培养,观察其生长情况并测定培养纯度。设计:对照动物实验。单位:首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科,北京市耳鼻咽喉科研究所。材料:实验于2006-03/07在北京市耳鼻咽喉科研究所免疫室和病理室完成。选用20只3天龄Wislar大鼠,雌雄不限,由中国医学科学院实验动物中心提供。方法:分离大鼠坐骨神经,以0.2%胶原酶消化后培养。①分组干预:细胞分为实验组及对照1,2,3组,每组5只。实验组应用双30rain差速贴壁法和Ara-C纯化,对照组1,2分别用双30rain差速贴壁法和Ara-c纯化处理,对照组3不进行纯化。②实验评估:倒置显微镜下观察许旺细胞生长情况;采用MTT法测量实验组和对照组3生长曲线,观察细胞增殖能力;采用免疫细胞化学染色对许旺细胞进行鉴定;计算许旺细胞培养纯度(每个视野S100阳性细胞占所有细胞的比例)。主要观察指标:①各组许旺细胞生长情况。②免疫细胞化学染色结果。③细胞生长曲线。④许旺细胞培养纯度。结果:①许旺细胞生长情况:培养5d时实验组许旺细胞形态及增殖能力良好,偶见成纤维细胞。对照组1、2在培养第5天时可见较多成纤维细胞,许旺细胞形态好。但较少呈漩涡状排列的生长区域。对照组3从培养第2天开始成纤维细胞迅速增殖,所占比例逐渐增大,许旺细胞生长受到影响,突起较短,少见漩涡状生长区域。②许旺细胞生长曲线:实验组许旺细胞于第3天进入对数增殖期。至第6天达平台期。对照组3较实验组提前1d进入对数增殖期。③免疫细胞化学鉴定结果:实验组经抗S100抗体染色。阳性的许旺细胞胞体及突起呈棕褐色,梭形或三角形,双极突起。漩涡状排列。成纤维细胞形态不规则,胞浆宽大,着蓝色。④许旺细胞计数:实验组$100阳性细胞所占比例高于对照组3(P〈0.01)。结论:利用双重消减法得到较高纯度的许旺细胞培养物。
  • 大鼠皮下脂肪分离间充质干细胞的体外培养及鉴定 免费阅读 收费下载
  • 背景:脂肪间充质干细胞具有多向分化能力,并且相对更加容易获得,因此作为一种新的细胞工程的种子细胞日渐受到重视。目的:观察从大鼠皮下分离脂肪间充质干细胞的体外培养情况,并对其进行免疫细胞化学染色等鉴定。设计:动物实验。单位:解放军总医院心内科。材料:选用1只健康雄性Wistar大鼠,清洁级,鼠龄4个月,体质量200g;I型胶原酶、DMEM培养基、特级胎牛血清(GIBCO公司);免抗大鼠CDl3、CD34、CD44、105、Ⅷ因子、HUODR、VWF、Myosin等多克隆抗体及SABC试剂盒(武汉博士德公司);绿色荧光蛋白一重组腺病毒包装载体为北京本元正阳基因技术有限公司产品。方法:实验于2006-10在解放军总医院心内科完成。①细胞分离和培养:全麻下取Wistar大鼠腹股沟脂肪垫O.3g,剪碎,消化后培养,镜下观察有大量梭形贴壁细胞后二三天换DMEM培养液,观察细胞生长情况。调整细胞浓度为2x10^7L^-1,接种于96孔细胞培养板,每孔100μL。从第2天起每日随机取3孔,胰蛋白酶消化细胞,分别用血球计数板在倒置显微镜下计数。②细胞存活率的计算:收集第3至第8代细胞。加入预配好的DMSO冻存液,2~4周后复苏,台盼蓝染色检测细胞存活率。③免疫细胞化学染色及鉴定:以2×10^7L^-1的细胞数接种多孔培养板,24h后行CDl3、CD34、C1244、CD45、CDl05、Ⅷ、HLA_DR、VWF因子等细胞表面抗体的免疫细胞化学(SABC法)鉴定及油红染色。④多细胞系定向诱导分化及鉴定:用多孔板接种后加含特定诱导因子的培养基进行多系定向诱导分化,并进行油红O脂肪颗粒染色,对成骨诱导组进行碱性磷酸酶组化染色,对成心肌诱导组进行肌浆球蛋白免疫组化染色。⑤转染腺病毒携带的绿色荧光蛋白基:用96孔板接种第4代ADMSC,同时加入I型腺病毒为载体的绿色荧光蛋白,以不同MOI值1:50、1:100、1:150、1:200转染,观察转染情况。主要观察指标:①细胞分离和培养观察结果。(9冻存与复苏后细胞存活率。③免疫细胞化学染色及鉴定结果。(9多细胞系定向诱导分化及鉴定结果。⑤转染腺病毒携带的绿色荧光蛋白结果。结果:①从O.3g皮下脂肪分离出约3.6x10。贴壁细胞,并可在体外多代传代培养扩增。②细胞冻存2-4周后复苏用台盼蓝染色示存活率在90%以上。⑧各代CDl3、C1244、CDl05等免疫细胞化学染色均阳性,CD45、Ⅷ因子、HLA.DR、VWF等免疫细胞化学染色均阴性。(少从第2代开始,各代均可见少量细胞油红O染色阳性,而且在延长培养基的换液时间后。油红O染色阳性细胞明显增多。体外多系定向诱导分化后油红O染色、碱性磷酸酶染色、肌浆球蛋白免疫组化检测分别阳性。⑤转染72h后荧光显微下观察,在MOI值1:200见绝大多数细胞发出绿色荧光,转染成功,粗测转染率在90%以上。结论:可以从大鼠皮下脂肪成功分离出大量具有成脂、成骨、成肌等多向分化潜能的间充质干细胞,该细胞可以在体外培养进行多代传代及大量扩增、长期冷冻保存,并且成功转染了I型腺病毒为载体的绿色荧光蛋白基因。
  • ^60Coy射线局部辐射后小鼠非辐射区域骨髓巨核细胞的变化 免费阅读 收费下载
  • 目的:临床局部辐射条件下会造成非辐射区域组织及细胞功能损害,最为突出的是对造血功能的影响。实验建立^60COy射线左半身辐射动物模型,观察局部电离辐射对其非辐射区域骨髓巨核细胞的影响。方法:实验于2003-10/2005-03在解放军第三军医大学辐照中心和全军复合伤研究所完成。①实验动物:6~8周龄SPF级雄性昆明小鼠180只,随机数字表法分为正常对照组、全身辐射组、左半身辐射组、全身屏蔽辐射组,45只/组。②实验方法:全身辐射组小鼠固定于辐射架内;左半身辐射组小鼠麻醉后固定体位,用铅砖屏蔽右半身;全身屏蔽辐射组小鼠麻醉固定体位,用铅砖屏蔽全身。以^60COy射线一次性辐射,剂量率68.46cGy/min。正常对照组不作任何干预。⑧实验评估:辐射后不同时相检测小鼠血清丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性变化,计数外周血血小板,检测骨髓巨核祖细胞集落形成单位,观察骨髓组织病理改变及CD41a、CD61的表达。结果:全身辐射组第8天死亡2只,第9天死亡4只,其余各组无脱失。①外周血血小板计数:辐射后第2,7天,左半身辐射组外周血血小板数量显著低于正常对照组(P〈0.01),但高于全身辐射组(P〈0.01)。②血清丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性变化:辐射后第2,9天,左半身辐射组血清丙二醛含量显著高于正常对照组(P〈0.01),低于全身辐射组(P〈0.01);血清超氧化物歧化酶活性显著低于正常对照组(P〈0.01),高于全身辐射组(P〈0.01)。③骨髓巨核祖细胞集落形成单位的变化:与正常对照组比较,辐射后6h左半身辐射组非辐射侧的巨核祖细胞集落形成单位显著降低(P〈0.01),高于全身辐射组及左半身辐射组(P〈0.01)。④骨髓组织病理改变:正常对照组有核细胞比例较高,分布均匀,并见多量散在分布的细胞龛;辐射2d后,左半身辐射组非辐射侧骨髓有核细胞较正常对照组减少,但好于全身辐射组、左半身辐射组。⑤骨髓CD41a及CD61表达的变化:辐射后2d与正常对照组比较,左半身辐射组非辐射侧骨髓CD41a及CD61阳性细胞数和相对荧光强度均显著降低(P〈0.01),但高于全身辐射组、左半身辐射组(P〈0.01)。结论:局部电离辐射作用后,可导致小鼠非辐射区域骨髓巨核细胞增殖能力降低,血小板减少,产生功能障碍。氧自由基激活可能参与了该损伤过程。
  • 三种阳离子脂质体介导血管内皮细胞基因转染效率的比较 免费阅读 收费下载
  • 目的:评价不同阳离子脂质体介导基因转染血管内皮细胞的转染效率。方法:实验于2006-12,2007-02在中山大学生化实验室及广州市创伤外科研究所完成。采用增强型绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectin、Lipofectamine、Dosper3种不同的阳离子脂质体为载体,转染人脐静脉血管内皮细胞。在24孔板中,每孔加入人脐静脉血管内皮细胞悬液(1×10^6个细胞),各孔分别加入3种不同阳离子脂质体增强型绿色荧光蛋白质粒复合物,分别于培养24,48h后用荧光显微镜及流式细胞仪测定增强型绿色荧光蛋白在细胞内的表达及转染效率。结果:3种不同阳离子介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染的人脐静脉血管内皮细胞内均有绿色荧光蛋白表达,24h后明显。48h后达高峰。Dosper介导组绿色荧光细胞百分比明显高于Lipofectin介导组及Lipofectamine介导组,差异有非常显著意义(P〈0.01)。结论:Dosper介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,较适合作为血管内皮细胞的基因转染载体。
  • 构建双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的实验 免费阅读 收费下载
  • 目的:前期实验已成功构建无突变及564位是单突变腺病毒载体。在此基础上构建人双突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体,为进一步研究低氧诱导因子1α基因及其突变体的临床应用奠定基础。方法:实验于2005-12/2006-12在南方医院心内科重点实验室完成。①实验材料:限制性内切酶Pacl(NEB),PI-Scel、I-Ceul(Clontech);IPTG、X-G;ai(Takara),转染试剂Lipofectamine2000(invitrogen),凝胶回收试剂盒(Omega);DMEM(Ofmega),小牛血清(PAA);北京天为时代公司病毒基因组提取试剂盒;HIF-1d单克隆抗体(Chemicon Intemational公司);羊抗鼠辣根过氧化物酶标记二抗(北京鼎国生物公司)。质粒、菌珠、细胞系等:Adeno-XTM-AdenoviralExpressionSystems(BD.CLONTECH):包括有pShutUe2、pShutUe2-lacZ、Adeno-XTMViralDNA等;重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1d-Ala564-Ala803及pShuttle2-IacZ(本室已构建成功);大肠杆菌DH5a(本室保存);HEK2193A细胞(中科院上海细胞所)。(2)实验方法:采用分子克隆技术,以PI-Scel和I-Ceul双酶切重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-Iα-Ala564-Ala803,然后切下含有低氧诱导因子1acDNA表达的盒片段,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-XViralDNA连接,重组成pAdeno-HIF-1d腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在HEK2193A细胞中包装成为重组腺病毒Adeno-HIF-1a-Ala564-AlaS03。⑧实验评估:进行PCR鉴定及滴度测定。用重组腺病毒转染293A,采用Westemblot鉴定低氧诱导因子1α蛋白表达。结果:提取重组腺病毒质粒pAdeno-HIF-1a-Ala564-Ala803以引物A、B和引物1、2、3、4进行PCR鉴定,分别扩增出287,460,214bp的3种引物片段,与预期一致,经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功。pAdeno-4acZ转染293A细胞后X-GaI原位染色,显示约有近20%左右细胞染成蓝色,病毒滴度为6.8x10^7pfu/mL。Adeno-HIF-1a-Ala564-Ala803转染293A后稳定表达低氧诱导因子1α蛋白。结论:成功构建了重组腺病毒突变型的Adeno-HIF-1d-Ala564-Ala803。
  • 高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨用高强度聚焦超声辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞的可行性,为高强度聚焦超声开辟新的应用领域。方法:实验于2004-0112005-04在泰安市中心医院中心实验室完成。①实验材料:BALB/C清洁级小鼠20只。CT-26肿瘤细胞为BALB/C小鼠来源的结肠癌细胞,由解放军第二军医大学免疫学研究所惠赠。②实验方法:应用白细胞介素4+粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞。设立4组:高强度聚焦超声辐照组将CT-26细胞置于含10%小牛血清的RPMll640培养液中,进入对数生长期后调整细胞浓度为5x100L^-1,采用1000W/cm^2×30S剂量辐照CT-26细胞,离心,取上清过滤除菌。冻融组将CT-26细胞调整浓度至5×10^9L^-1,-80℃冷冻,35℃水浴复温,循环4次。裂解离心,取上清过滤除菌。单纯Cr-26细胞组将CT-26细胞调整浓度至5x10^9L^-1。细胞不经其他任何处理。空白对照组将树突状细胞与抗原按1:10接种,培养4~6h。从小鼠脾脏制备脾细胞,分离纯化T细胞,调整浓度至2x10^9L^-1,T细胞与上述4组负载的树突状细胞按20:1接种,培养基中加入白细胞介素2,共孵育48h。③实验评估:对扩增培养的树突状细胞首先进行形态学观察,再采用流式细胞仪分析细胞表型。锥虫蓝染色观察高强度聚焦超声辐照后CT-26细胞拒染率和形态学变化。ELISA法检测各组致敏树突状细胞诱导T细胞分泌白细胞介素12及干扰素-y的含量。结果:①骨髓源性树突状细胞形态及细胞表面表型分析:体外培养小鼠骨髓细胞6~8d。细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的树突状细胞特征。流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD80、CD86、H-2Kd及I-A^d呈高表达。②高强度聚焦超声辐照后细胞拒染率和形态学的变化:超声辐照剂量为1000W/cm^2×30S时,无细胞存活,完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片。③致敏树突状细胞诱导T细胞分泌细胞因子情况:与空白对照组比较,高强度聚焦超声辐照组、冻融组、单纯CT-26细胞组分泌的白细胞介素12及干扰素叫含量均明显升高(P均〈0.05);且高强度聚焦超声辐照组、冻融组升高幅度大于单纯CT-26细胞组,但此两组比较差异无显著性意义(P〉0.05)。结论:高强度聚焦超声能使肿瘤细胞灭活、破碎,其制备的肿瘤抗原可体外致敏树突状细胞,并使树突状细胞分泌白细胞介素12,诱导T细胞分泌干扰素-y。
  • 大鼠红细胞流变性变化及抗运动疲劳效应与补服肉碱和糖的作用 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察单独和配合补充肉碱和糖对大鼠红细胞流变性及抗运动疲劳能力的影响。方法:实验于2005-09/11于河北师范大学体育学院运动生理学实验室完成。①选用SD雄性大鼠72只,按随机数字表法分为4组:安静组(n=6)、安静补服组(n=18)、安慰运动组(n=12)和补服运动组(n=36)。安静补服组和补服运动组均给予3种药物形式:左旋肉碱(由沈阳东宇精细化工有限公司生产)、葡萄糖(济南利民制药有限公司生产)、肉碱和葡萄糖。安静补服组和补服运动组每天上午8:30给予自来水溶解的肉碱和,或糖补剂,安静组和安慰运动组给予相同量的自来水。连续补充7d,补服量:肉碱组、葡萄糖组、肉碱+葡萄糖组分别为650mg/(kg·d),7g/(kg·d),325mg/(kg·d)+3.5g,(kg·d)。②在实验第8天,将安静组取血4mL。安慰运动组和补服运动组进行无负重游泳至力竭,然后取血。采用北京泰诺德新技术研究所生产的Bv.100型无摩擦式血液流变仪测全血高切黏度(180SI^-1)、全血高切还原黏度(180S^-1)、全血低切黏度(3S^-1)、全血低切还原黏度(3S^-1)、刚性指数及聚集指数。③计量资料进行正态分布、方差齐性检验后,再进行方差分析。结果:大鼠72只均进入结果分析。①红细胞流变性指标变化:安静补服组各组虽大部分红细胞流变性指标有改善,但与安静组相比,差异无显著性意义(P〉0.05)。安慰运动组运动后5min全血高切黏度和全血高切还原黏度明显高于安静组(P〈0.01),运动24h后全血高、低切黏度和红细胞聚集指数明显高于安静组(P〈0.01)。一次力竭运动后5min各补服运动组全血低切黏度明显低于安慰运动组(P〈0.01)。各组间红细胞刚性指数和红细胞聚集指数差异不明显(P〉0.05)。各补服运动组间相比,补服肉碱组的全血低切还原黏度最高(P〈0.01)。各补服运动组运动后24h全血低切还原黏度和红细胞聚集指数明显低于安慰运动组(P〈0.05-0.01),补服肉碱和肉碱+葡萄糖运动组全血低切还原黏度和全血低切黏度、红细胞聚集指数明显高于补服葡萄糖运动组(P〈0.05-4).01)。(爹抗疲劳作用:补服肉碱、葡萄糖、肉碱+葡萄糖运动组大鼠游泳时间分别为(334.5±27.81),(321.0±51.83),(326.5±39.9)min,均长于安慰运动组[(252.5±42.69)min,P〈0.01];各补服运动组间差异不明显(P〉0.05)。 结论:单独补充或合用肉碱和糖均有利于力竭运动后大鼠红细胞流变性指标的改善 导致其运动能力的提高。
  • 自身免疫性肝炎大鼠模型外周血淋巴细胞亚群变化与褪黑素的影响 免费阅读 收费下载
  • 观察褪黑素对自身免疫性肝炎大鼠模型外周血淋巴细胞亚群的影响方法:实验于2004-10/2006-10在解放军第一二三医院南京军区肝病中心实验室完成。①实验材料:Wistar大鼠,雄性,3月龄,体质量(230±20)g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。褪黑素:美国Sigma公司产品,临用前以无水乙醇溶解,再加生理盐水配制,使乙醇浓度为0.1%,置4℃冰箱保存备用。②实验方法:采用弗氏完全佐剂加肝细胞特异性脂蛋白法制作大鼠自身免疫性肝炎模型。将建模成功大鼠随机分为模型对照组、褪黑素注射组及猪促肝细胞生长素注射组,每组20只。褪黑素注射组褪黑素2mg/kg腹腔注射,1次,d,猪促肝细胞生长素注射组2mg/kg猪促肝细胞生长素腹腔注射,1次,d,模型对照组与正常对照组均用含0.01%乙醇的生理盐水腹腔注射。③实验评估:60d后检测各组大鼠外周血淋巴细胞亚群浓度。结果:①CD4^+细胞≤39.5%18只,均为褪黑素注射组动物,肝炎组织活动性指数≤8分。22只CD4’细胞〉39.5%动物中,4只肝炎组织活动性指数≤8分,其中2只为褪黑素注射组动物,2只为模型对照组动物。18只肝炎组织活动性指数〉8分,均为模型对照组动物。(多18只CD4^+细胞≤39.5%褪黑素注射组动物中,17只肝纤维化指数≤4分,1只肝纤维化指数4分;22只动物CD4^+细胞〉39.5%,2只肝纤维化指数≤4分,为模型对照组动物,20只肝纤维化指数〉4分,褪黑素注射组2只,模型对照组18只。@)cD4^+细胞≤39.5%,肝组织血管病变均为1级,〉39.5%时,2级以上血管病变为90.9%。18只CD4^+细胞≤39.5%褪黑素注射动物血管病变为1级。22只CD4^+细胞百分比〉39.5%,2只血管病变为1级,为模型对照动物,17只血管病变为2级,褪黑素注射组2只,模型对照组15只。3只血管病变为3级,为模型对照动物。④CD4^+细胞≤39.5%时,83.3%血管内皮细胞生长因子表达呈弱阳性,CD4^+细胞〉39.5%时,81.8%血管内皮细胞生长因子表达呈强阳性,提示CD4^+细胞与血管内皮细胞生长因子表达有关。⑤模型对照组外周血CD4^+细胞数和CD4qCD8^+比值均明显高于其他组(P〈0.05),CD8^+细胞与其他组无明显差异(P〉0.05)。褪黑素注射动物与猪促肝细胞生长素注射动物相比,无明显差异(P〉0.05)。结论:褪黑素对自身免疫性肝炎模型大鼠外周血CD4^+细胞有较强的抑制作用。
  • 低剂量碳离子全身辐射对小鼠淋巴细胞增殖及血清干扰素的影响 免费阅读 收费下载
  • 观察小于0.1 Gy剂量碳离子全身辐射引起的小鼠脾淋巴细胞增殖及血清干扰素的变化。方法:实验于2006-11在中国科学院近代物理研究所医学物理实验室进行。①实验过程:取昆明系小鼠30只,采用完全随机设计方法分为5组,每组6只,采用离子束进行全身照射。^12℃^6+离子照射在兰州重离子研究装置(HIRFL)辐照终端进行,照射剂量为0,0.01,0.03,0.05,0.10Gy。麻醉照射后24h,小鼠摘眼球取血。②实验评估:采用ELISA法测定血清y-干扰素含量,操作严格按试剂盒说明进行。将眼球取血后的小鼠脱颈处死,无菌条件下取出脾脏,常规制备单细胞悬液,采用MTT法检测刀豆蛋白A和脂多糖对脾淋巴细胞的增殖作用。结果:30只小鼠均进入结果分析。①辐射对小鼠血清干扰素的影响:与未照射正常小鼠比较,0.01Gy和0.03Gy碳离子束照射后,小鼠血清中y-干扰素含量明显增高(P〈0.05)。照射剂量继续增大至0.05Gy和0.10Gy时,清y-干扰素含量下降。②辐射对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响:与未照射组比较,0.01Gy碳离子束照射可明显促进刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞增殖(P〈0.001,P〈0.001),其促进作用与0.03Gy组比较,差异有显著性意义(P〈0.01)。0.05Gy照射开始抑制脾淋巴细胞增殖指数,当照射剂量增大为0.10Gy时显示出明显的抑制作用。结论:0.01Gy和0.03Gy碳离子束照射能刺激淋巴细胞增殖,并能诱导y-干扰素活性以增强机体免疫力。
  • 红细胞指数及流变性在女子短跑运动员与普通女大学生递增负荷运动前后的变化 免费阅读 收费下载
  • 目的:检测分析递增负荷运动前后红细胞指数及流变性情况,观察红细胞的适应性变化,并以女子短跑运动员与普通女大学生作对照。方法:实验于2006-10/12在西安体育学院实验中心完成。①实验对象:实验组为陕西省体工队9名优秀女子短跑运动员,对照组为西安医学院15名普通女子大学生,两组平均年龄、身高、体质量等基线资料比较差异无显著性意义(P〉0.05)。②实验方法:两组受试者休息10min,然后在功率自行车上完成递增负荷运动,运动负荷从60W开始,转速为60r/min,每级负荷持续3min;之后,每增加30W为下一级负荷,直至力竭。③实验评估:分别于递增负荷运动前后采集指尖血和肘静脉血作为血样,测试红细胞指数、红细胞流变性及血乳酸浓度。结果:两组受试者均进入结果分析。①递增负荷运动前后红细胞指数的变化:运动前,实验组红细胞平均血红蛋白浓度和红细胞平均血红蛋白含量均显著高于对照组(P〈0.05),两组红细胞数、血红蛋白、红细胞平均容积和红细胞压积基本相似。运动后即刻与对照组比较,实验组血红蛋白、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞平均血红蛋白含量均显著降低(P〈0.01),红细胞平均容积显著升高(P〈0.01)。②递增负荷运动前后红细胞流变性的变化:与运动前比较,运动后即刻实验组红细胞变形性、红细胞聚集指数、血沉、血沉方程K值、红细胞电泳时间分别增加10%,3.9%,2.6%,19.3%,26.2%,升高幅度明显小于对照组(P〈0.05,0.01)。③递增负荷运动前后血乳酸浓度的变化:运动前安静状态下两组血乳酸浓度基本相似(P〉0.05)。运动后即刻和运动后3min,实验组血乳酸浓度显著大于对照组(P〈0.05,0.01);运动后8min两组血乳酸浓度差异无显著性意义(P〉0.05)。结论:①安静状态时,运动员红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞平均血红蛋白含量是维持其较高血红蛋白浓度的重要因素。②运动员红细胞具有耐酸性及变形性相对较强的特点。
  • 人类O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶蛋白的亚细胞荧光定位 免费阅读 收费下载
  • 机体对烷化剂诱导基因突变的修复能力取决于细胞内O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶的含量及合成速度。构建人类O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合表达的载体.根据荧光分布确定其亚细胞定位。方法:实验于2006-12/2007-06在南阳医学高等专科学校生理学实验研究中心完成。参考人类06-甲基鸟嘌呤-DNA广-甲基转移酶的基因序列和p-EGFP-N1载体的多克隆位点设计PCR扩增引物。从Hela细胞中提取总RNA,反转录合成O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶的cDNA,进而合成双链DNA。扩增后的DNA目的片段与p-EGFP-N1载体均行Nhel和BamHI双酶切,回收,定量后用T4连接酶连接,产物转化大肠杆菌感受态细胞TOPlO,挑选阳性克隆并提取质粒测序,构建成功的质粒绿色荧光蛋白位于O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶蛋白的C末端。将pEGFP-N1-MGMT载体分别转染HEK293和Hela细胞,荧光显微镜下与转染空载体pEGFP-N1的细胞进行对比观察,荧光信号表达最高点时进行固定并对细胞核进行复染,观察亚细胞定位情况,同时免疫印迹分析蛋白的表达。结果:①RT-PCR检测:扩增的OL甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因cDNA片段约为650bp,与预期相符。②克隆及序列鉴定:扩增的DNA片段与载体pEGFP-N1经过Nhel和BamHI双酶切后,可连接得到重组的表达载体.命名为pEGFP-N1-MGMT。重组质粒的酶切产物有650bp,4700bp两条带,克隆结果正确。该质粒经测序确认正确。③免疫印迹分析:转染pEGFP-N1质粒的细胞表达增强型绿色荧光蛋白,相对分子质量约为27000;转染pEGFP-N1-MGMT融合蛋白质粒的细胞相对分子质量约为49000,证明目的蛋白在转染细胞内表达成融合蛋白。④亚细胞定位:转染pEGFP-N1质粒的细胞绿色荧光信号均匀分布于整个细胞。转染pEGFP-N1-MGMT质粒的细胞绿色荧光主要集中在胞质,特别在一定条件下核周围有颗粒样聚集。结论:①实验成功构建pEGFP-N1-MGMT融合蛋白质粒。②人类O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因定位在胞浆,且在一定条件下可以在核周聚集。
  • 基因芯片检测灵芝提取物对白细胞中免疫相关基因表达的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:灵芝对于免疫系统的调节还缺乏严格的临床证据,其关键是缺乏客观、系统评价灵芝对免疫系统调节效果的手段。基于此,采用基因芯片分析检测了灵芝对免疫相关基因表达水平的影响,从而揭示与灵芝功能密切相关的基因和途径。方法:实验于2002-12/2003-05在首都医科大学宣武医院神经分子生物实验室完成。①实验干预:血液材料来源于身体健康的宣武医院医护人员和学生12人,均对检测项目知情同意。平均年龄(31±4)岁,男女各6人。将其分为年龄、性别大致匹配的2组:安慰剂组和灵芝组,每组6人。灵芝组和安慰剂组对象分别服用灵芝胶囊和淀粉胶囊安慰剂,每人每天服用2次,每次2粒(相当于药用灵芝400mg),连续30d。灵芝胶囊主要成分为软壁灵芝孢子粉、灵芝提取物。②实验评估:服药前1天和服药30d后采用自动分析仪计算全血不同种类白细胞计数和不同种类白细胞所占比例。分离白细胞抽提总RNA,利用博星公司的cDNA芯片BiosTar-H-IC-1检测了服用灵芝胶囊后白细胞中441个免疫相关基因的表达变化。结果:①所检测的441个免疫相关基因中,共有11个基因存在着差异表达。其中10个基因表达水平升高,1个基因表达水平降低。发生差异表达的11个基因中有2个参与信号转导过程,包括STAT4和LYN。服用灵芝胶囊后两个基因的表达量都显著增加。在发生差异表达的11个基因中有7个基因属于淋巴细胞表面抗原。②服用灵芝胶囊和安慰剂后白细胞总数和不同种类白细胞的百分比均未发生明显变化(P〉0.05)。结论:①灵芝对免疫系统的调节功能主要通过调节淋巴细胞的活性而实现,而不是通过改变白细胞数量和分类计数。②STAT4和LYN参与的信号转导途径很有可能是灵芝胶囊作用的主要靶点。
  • 原发性血小板减少性紫癜模型小鼠血浆内皮素水平与加味小柴胡颗粒及其组方的干预 免费阅读 收费下载
  • 目的:建立原发性血小板减少性紫癜动物模型,观察加味小柴胡颗粒及其组方对造模小鼠血浆内皮素含量的调节。方法:实验于2006-07/12在南京中医药大学第一临床医学院实验中心完成。①实验动物与药品:选取SPF级BALB/C小鼠54只,随机数字表法分为5组:正常组10只、模型组12只、加味小柴胡颗粒组11只、小柴胡颗粒组11只、丹参三七颗粒组10只。小柴胡颗粒主要成份为柴胡、黄芩、法半夏、党参、炙甘草、生姜、大枣,每克颗粒含生药5.45g;丹参三七颗粒每克含生药2g;加味小柴胡颗粒:在小柴胡颗粒主要成份上添加丹参、三七,每克颗粒含生药4.18g;均由天江制药厂提供。②实验方法:除正常组外,各组均建立原发性血小板减少性紫癜动物模型。造模后7d灌胃给药,加味小柴胡颗粒组给予加味小柴胡颗粒16.7g生药,kg体质量,小柴胡颗粒组给予小柴胡颗粒13.8g生药,kg体质量,丹参三七颗粒组给予丹参三七颗粒4.4g生药/kg体质量,正常组及模型组均给予等容积蒸馏水。每天给药1次,共给药14d。③实验评估:各组小鼠眼球取血,分离血浆,取上清液用放射免疫法测定血浆内皮素含量。结果.54只BALB/C小鼠均进入结果分析。与正常组比较,模型组血浆内皮素含量明显升高(P〈O.05)。与模型组比较,加味小柴胡颗粒组、丹参三七颗粒组明显下降(P〈0.05),而小柴胡颗粒组无明显变化(P〉0.05)。结论:原发性血小板减少性紫癜血管内皮功能异常,表现为血浆内皮素明显升高,加味小柴胡颗粒及丹参三七颗粒均对其有下调作用,而小柴胡颗粒无影响。
  • CD4^+T淋巴细胞在无症状人类免疫缺陷病毒感染者早期接受扶正排毒片治疗后的变化 免费阅读 收费下载
  • 背景:无症状人类免疫缺陷病毒(Human lmmunodeficiency Virus,HIV)感染者不适宜抗病毒治疗,中医药早期干预对无症状带毒期HIV感染者会产生一定的治疗意义。目的:观察扶正排毒片早期干预HIV感染者CD4^+T淋巴细胞水平及血浆病毒载体量变化。设计:观察对比试验。单位:河南中医学院艾滋病研究所。对象:于2005-11随机抽取HIV感染者较多的某乡69例有偿献血感染的无症状HIV感染者,男39例,女30例,年龄30~61岁,平均(43±8)岁,平均病程(13±3)年。纳入标准:①符合中华人民共和国国家艾滋病无症状HIV感染诊断标准(2005年修订版)。②年龄18~65岁。③200/mm。≤CD4^+T淋巴细胞计数〈600/mm^3。④未使用抗病毒药物及其它药物治疗者。(9签署知情同意书。排除标准:①严重肝肾功能不全,或合并心脑血管、肺和造血系统等严重原发性疾病,精神病患者。②原发性免疫缺陷患者,激素、化疗等引起的继发性免疫缺陷患者,血液病患者。③妊娠或哺乳期妇女。随机抽取的某个县的25例无症状HIV感染者为空白组,纳入标准、排除标准与治疗组相同。方法:治疗方案:治疗组感染者给予扶正排毒片(黄芪、生白术、防风、白花蛇舌草、甘草等11味,河南省中医研究院奥林特制药厂生产.产品批号:050601),每次5片,相当于生药6,6g,3次/d,温开水冲服。3个月为1疗程,共观察4个疗程。空白组不服药。主要观察指标:①检测治疗组感染者治疗前和每疗程结束后CD4^+、CD8^+及CD4^+,CD8^+值,空白组只检测6个月前后CD4^+T淋巴细胞计数。②采用RT-PCR检测方法进行治疗组患者病毒载量检测。结果:治疗组感染者69例及空白组感染者25例均进入结果分析。①空白组感染者6个月前后CD4^+较治疗前明显下降,差异有统计学意义(尸〈0.05)。②随机抽取23例治疗组感染者进行病毒载量检测,与疗前对比,疗后6个月有9例血浆病毒载量下降较多,疗后1年12例血浆病毒载量下降较多。疗前和疗后6个月及1年对比有效率均达91,30%。结论:扶正排毒片早期干预HIV感染者可提高其免疫功能,对部分病例具有降低病毒载量的作用。
  • 人Persephin基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达 免费阅读 收费下载
  • 目的:Persephin是近年来发现的对多巴胺神经元的发育与分化起调控作用重要基因,单纯神经干细胞系C17-2移植治疗帕金森病在体内分化为多巴胺能神经元比例不高。实验构建了人Persephin基因重组腺病毒载体,并观察其在C17-2神经干细胞的表达。方法:实验于2005-06/12在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成(广东省重点实验室)。①实验材料:流产胚胎由中山大学附属第二医院妇产科提供,产妇及其家属均签署知情同意书。病毒骨架质粒载体pAdEasy.1,穿梭载体PAdTrack.CMV(含绿色荧光蛋白基因)、大肠杆菌菌株BJ5183和DH融、人胚肾293细胞均为本室保存。C17.2神经干细胞由美国哈佛大学医学院Snyder教授惠赠。②实验方法:采用反转录聚合酶链式反应从人胚胎脑获得PersephincDNA。将重组质粒pAdTmck-CMV-Persephin与骨架质粒pAdEasy-l共转染大肠杆菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒AdCMVPersephin,转化体外培养的C17.2神经干细胞。③实验评估:用原位杂交、免疫组化,Westernb10l法检测Persephin在C17-2神经干细胞中的表达。结果:①人Persephin基因的克隆与测序分析:琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,其Persephin基因片段长约310bp,与预期分子量相符。Persephin基因被克隆于载体pMDl8-T,以Sail和XhoⅠ双酶切可回收长约310bp的克隆片段,测序结果证实所克隆的为人PersephincDNA。②大肠杆菌同源重组获得克隆化重组腺病毒基因组及鉴定:Persephin重组腺病毒质粒pAdTmck-CMV·Persephin用PacⅠ酶切可切出4.1kb的目标片断,PCR鉴定可从重组腺病毒质粒中可扩增出PersephincDNA片断(310bp)。病毒滴度在脂质体转染后为1.9x10^7pfu/L。用收集的上清4次重复感染293细胞扩增重组腺病毒后,病毒滴度经绿色荧光蛋白检测达3.0x10^11pfu/L。⑧Persephin基因在C17-2神经干细胞中的表达:免疫组化与原位杂交显示转染pAdPersephin的C17.2神经干细胞胞浆中有Persephin蛋白和mRNA表达。提取感染病毒的C17.2神经干细胞的总蛋白,经Westernblot检测可见一特异性蛋白条带存在。结论:采用RT-PCR法成功克隆人PersephincDNA并构建其腺病毒载体,获得了稳定表达Persephin的神经干细胞克隆,为进一步分析转基因神经千细胞治疗神经退行性疾病提供可行的操作方法。
  • 小鼠卵黄囊间充质干细胞培养及诱导成血管内皮细胞 免费阅读 收费下载
  • 目的:成体间充质干细胞发育分化接近终末状态后经过一段时间的体外培养,易衰老凋亡,而来自于早期胚胎的卵黄囊间充质干细胞具有更大的增殖潜能和可塑性。那么体外分离培养的小鼠卵黄囊间充质千细胞能否定向诱导分化为血管内皮细胞呢?方法:实验于2006-03/2007-01在首都医科大学组织学与胚胎学实验室完成。①实验方法:显微分离妊娠10d的ICR小鼠胚胎卵黄囊,经Ⅰ型胶原酶消化得到卵黄囊细胞,取贴壁细胞培养,于接近90%融合时按1:2进行传代。②实验评估:取生长状态良好的第1代细胞,透射电镜观察细胞器超微结构,流式细胞仪检测其表面标志的表达;以血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子进行体外诱导,观察诱导后细胞形态及超微结构变化,免疫荧光法鉴定诱导后内皮细胞标志物的表达。结果:①体外分离培养可获得小鼠卵黄囊间充质干细胞,大多数呈梭形。透射电镜下卵黄囊间充质干细胞表面有微绒毛,胞浆中细胞器丰富,核大,形态不规则。流式细胞仪检测第1代卵黄囊间充质干细胞CD44、CDl05均呈阳性,CD34亦有少量表达。②诱导后的细胞形态明显改变,透射电镜下可见内皮细胞特征性Weible-Palade小体,胞质中有大量吞饮小泡,同时内皮细胞标志物FLKl染色呈阳性。结论:体外可分离培养出小鼠卵黄囊间充质干细胞,并能够成功定向诱导分化为血管内皮细胞。
  • 骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的动态观察 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的可能性,并观察其动态变化。方法:实验于2005-09/2007-03在山东大学齐鲁医院完成。①标本来源:骨髓标本15例来自山东大学齐鲁医院成人骨髓检查结果正常者,均签署捐献同意书。②实验方法:无菌条件下取骨髓2.O-5.OmL,采用percoll分离液和贴壁法获得纯化的成人骨髓间充质干细胞。⑧实验评估:流式细胞仪行细胞表面抗原检测,在适当的条件下诱导其分化为成骨细胞和脂肪细胞。采用两步法向胰岛素分泌细胞诱导,观察其在碱性成纤维细胞生长因子、活化素A、胰岛素样生长因子、尼克酰胺等因子刺激下向胰岛素分泌细胞分化的动态变化。双硫踪染色鉴定胰岛样细胞团,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌胰岛素的情况,RT-PCR检测胰岛细胞特异基因的表达。结果:①骨髓间充质干细胞的生长特性及免疫表型:分离培养获得的贴壁细胞,呈形态均一的梭形,流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44表达阳性。②向成骨细胞和脂肪细胞的诱导分化:此类细胞经茜素红染色、油红0染色均呈阳性,可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。③向胰岛素分泌细胞的诱导分化:第1步诱导后出现细胞簇,双硫腙染色不着色,胰岛素分泌量少,仅检测到PDX-1基因的表达,证实其为胰岛前体细胞。第2步诱导后细胞簇数目逐渐上升,至诱导14d大部分细胞簇经双硫腙染色都呈红色。④诱导后培养上清中胰岛素含量:诱导第3,7,14,21天的胰岛素分泌量分别为(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L。⑤胰岛细胞特异基因的表达:诱导7d仅检测到PDX.1基因的表达,insulin1、insulin2和Glut2基因均不表达。诱导14,21d检测到insulin2、PDX-1基因表达,insulin1基因弱表达,Glut2基因不表达。结论:体外分离、纯化得到的骨髓间充质干细胞诱导7d可分化出胰岛前体细胞,不具功能性;诱导14d后可成功地分化出成熟的具有功能性的胰岛素分泌细胞。
  • 精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察小鼠精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征,为探讨精原干细胞的多向分化能力提供实验依据。方法:实验于2006-03/2007-01在泸州医学院医学分子生物学实验室完成。①实验材料:生后6~8d左右昆明系小白鼠.雌雄均可,由泸州医学院动物科提供。②实验方法:取7-10d小白鼠双侧股骨和胫骨,制备骨髓基质饲养层。取6~8d雄性小鼠,脱颈椎处死后,无菌取出睾丸,进行精原干细胞分离、培养与鉴定。取培养3d的精原干细胞,分为两组:对照组用基本培养液(IMDM+100U,mL青霉素+100U,mL链霉素+10%胎牛血清)培养,实验组用条件培养液培养(基本培养液中添加50mmol/Lp-甘油磷酸钠、10^-6 mol/L地塞米松、50mg/L维生素C、50nmol/L胰岛素、20nmol/L碱性成纤维细胞生长因子)培养。③实验评估:在倒置显微镜下观察细胞的形态学变化、紫外分光光度仪动态检测上清液中碱性磷酸酶活性变化、免疫荧光法检测细胞内I型胶原的表达。结果:(!)细胞形态学特征变化:实验组精原干细胞在成骨条件培养液中较对照组细胞贴壁生长快,条件培养3~6d后见细胞生长迅速,呈集落样增长,细胞立体感增强,但未见明显细胞间桥;诱导培养15d见细胞增殖达高峰,增殖细胞的胞质问桥仍不明显。②I型胶原免疫荧光检测结果:实验组细胞浆内出现绿色荧光,呈阳性反应,对照组细胞呈阴性反应。③培养上清液碱性磷酸酶活性变化:实验组与对照组培养上清液中的碱性磷酸酶活性开始很低,以后逐渐增强。实验组培养上清液的碱性磷酸酶活性每个时间段都明显高于对照组(P〈0.05)。结论:小鼠精原干细胞在成骨诱导培养条件下能快速增殖,增殖过程中表现出成骨细胞的某些生物学特征,这为进一步研究精原干细胞的多向分化潜能提供实验参考。
  • 人脂肪干细胞体外培养特性及成脂成软骨分化 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察人脂肪组织问充质干细胞体外分离培养及成脂、成软骨诱导分化的生物学性状,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:实验于2006-0812007-03在吉林大学中日联谊医院前列腺疾病防治研究中心完成主要工作。实验方法:①人脂肪组织来源于健康成年女性腹部吸脂术,酶消化法分离出脂肪间充质干细胞,接种于含体积分数为0.10胎牛血清的高糖DMEM培养基进行原代培养。②取第3代脂肪问充质干细胞,采用细胞计数法测定细胞生长曲线,流式细胞仪测定CDl3、CD34抗原的表达,免疫荧光法测定CD34抗原的表达。③取第3代脂肪问充质干细胞,用含体积分数为0.10胎牛血清、0.5mm0l/LIBMX、1μmol/L地塞米松、10 μmol/L胰岛素的成脂诱导培养基和含体积分数为0.01胎牛血清、10旧/L转化生长因子B1、50nmol/L抗坏血酸、6.25mg/L胰岛素的成软骨诱导培养基分别诱导分化。④每天用倒置显微镜观察细胞形态及增殖变化,油红“O”、AB-PSA染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成脂、成软骨分化情况。结果:①体外培养的脂肪问充质干细胞呈扁平的长梭形,细胞形态均一,传代稳定。问质细胞相关标志CDl3和干细胞相关标志CD34表达阳性。②定向诱导后表现出脂肪细胞和软骨细胞特性。经成脂诱导,细胞内出现空泡,油红“O”染色呈红色;经成软骨染色,AB-PSA染色呈紫红色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色胞浆呈棕黄色。结论:脂肪干细胞能向软骨细胞方向诱导分化,可作为软骨组织工程种子细胞。
  • 脊髓损伤后真皮多能干细胞移植时机的选择 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察脊髓损伤后不同时间移植真皮多能干细胞对大鼠运动功能修复的影响。方法:实验于2006-06/2007-03在第三军医大学生理学教研室完成。①实验材料:实验动物2-4月龄SPF级SD大鼠,体质量(210±40)g,雌雄不限,由第三军医大学实验动物中心提供。真皮多能干细胞为第三军医大学防原医学系从SD大鼠真皮中提取和分离。②实验方法:将42只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型。将动物随机分为对照组(n=6)、真皮多能干细胞移植组(n=36)。真皮多能干细胞移植组又分为6个时间点:损伤后1,4,7,10,14,21d移植组,每组6只。各移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞,而对照组于损伤后7d注射等量磷酸盐缓冲液。⑧实验评估:分别于移植后1d、1周、4周、8周、12周对各组大鼠进行动物行为学和脊髓诱发电位检测。结果:42只实验大鼠均进入结果分析,无脱落。①动物行为学评分:4周以后各组动物行为学评分比较差异有显著性意义(P〈O.05),移植组明显高于对照组(P〈0.05),各移植组间比较,以损伤后7,10d移植组动物行为学评分改善最显著。②各组大鼠脊髓诱发电位检查:体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期和波幅值于移植后8,12周后明显高于对照组(P〈0.05),各移植组间比较,以损伤后7,10d移植组体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期和波幅值改善最显著。结论:脊髓损伤后7~14d进行真皮多能干细胞移植可明显改善大鼠后肢的运动功能。
  • 绿色荧光蛋白转基因干细胞在癫痫大鼠脑内的存活及对脑电的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察神经干细胞和骨髓基质干细胞移植至癫痫大鼠海马后的存活、迁移与周围组织的整合、修复和对癫痫大鼠脑电的影响。方法:实验于2005-03/2006-02在昆明医学院神经科学研究所完成。①实验材料:6~8周龄绿色荧光蛋白转基因小鼠。雌雄不限,体质量40-60g,由新加坡国立大学提供。健康雄性SD大鼠88只,体质量(300±20)g,由昆明医学院动物科提供。将88只SD大鼠随机分为对照组(n=8)、癫痫未移植组(n=8)、生理盐水组(n=24)、神经干细胞移植组(n=24)、骨髓基质干细胞移植组(n=24)。②实验方法:剖取绿色荧光蛋白小鼠孕鼠脑,分离获得整个海马进行神经干细胞的分离,并采用免疫化学方法鉴定。取绿色荧光蛋白转基因小鼠股骨,进行骨髓基质干细胞的分离,并采用免疫组织化学方法鉴定。癫痫未移植组、生理盐水组、神经干细胞移植组、骨髓基质干细胞移植组大鼠注射300x10^5U/kg,浓度80万U/mL青霉素制作癫痫大鼠模型,连续注射7d,每次癫痫发作按Racine评分标准评分,对照组大鼠腹腔注射相同剂量的生理盐水作为对照。将分离、培养绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞和骨髓基质干细胞,移植至青霉素致癫痫大鼠的右侧海马内。③实验评估:移植后1,2,4周观察移植干细胞在大鼠脑内存活和迁移情况,并检测大鼠脑电改变。结果:88只大鼠全部进入结果分析,中途无脱落。①大鼠行为学改变:癫痫未移植组、生理盐水组、神经千细胞移植组、骨髓基质干细胞移植组大鼠均达到Racine分级Ⅳ~V级,癫痫模型制备成功。②各组大鼠的脑电改变:移植干细胞可减少癫痫大鼠脑电的痫性发放,降低癫痫波的波幅,具有明显的抗痫效应。③干细胞移植后在海马内的存活和迁移:移植神经干细胞可在青霉素致痫鼠脑内存活和迁移,但随时间的延长,存活细胞数目减少。结论:干细胞移植于青霉素诱发的癫痫大鼠脑内能够存活、迁移,能够改善癫痫鼠的脑电生理功能,提示干细胞移植可能成为一种有效的癫痫治疗手段。
  • 脐血有核细胞移植治疗脑卒中的动物实验 免费阅读 收费下载
  • 目的:脐血有核细胞中富含多系前体细胞,具备改善受损神经系统功能的潜能。为此建立阻塞性脑卒中动物模型,探讨脐血有核细胞移植对其治疗的可行性。方法:实验于2004-09/2005-05在深圳市宝安区人民医院动物实验室完成。①实验材料:脐带血取自足月新生儿,由深圳宝安血站研究室提供,产妇及其家属均签署知情同意书。SD清洁级成年大鼠80只,随机取20只作为正常对照组,另60只以电凝法建立阻塞性脑卒中模型。剔除运动功能障碍不典型鼠后,随机取5只作为模型观察,余鼠按1:1随机分为细胞移植组和模型对照组,当出现单只为尾数时,将其分配在细胞移植组。②实验方法:无菌抽取脐血20mL,加入乙二胺四乙酸抗凝,Ficoll法分离脐血有核细胞。造模后第10天。细胞移植组大鼠将头部固定,按前囟尾侧3.0mm,中线旁1.5mm,深度1.2mm注入10^11 L^-1脐血有核细胞悬液5μL,1μL/min。模型对照组注射等量无细胞脐血清,正常对照组不给予任何干预。⑨实验评估:造模后4周,5只模型观察大鼠制作脑切片,行苏木精-伊红染色镜检。各组分别于细胞移植前、细胞移植后2,6周进行横木行走实验和触觉刺激试验,检测其运动和触觉功能的恢复。处死各组大鼠制作病理切片,免疫荧光检测脐血有核细胞在脑内生存和分化情况。结果:正常对照组、细胞移植组、模型对照组各20只、24只、24只进入结果分析。①阻塞性脑卒中模型大鼠病理特征:造模大鼠出现行为障碍,缺血部位出现中风囊,病理切片可见缺血坏死区等阻塞性脑卒中所致脑组织病理损伤。②运动和触觉功能测试:细胞移植前,细胞移植组与模型对照组大鼠的横木行走能力、撕胶纸能力均基本相似(P=0.05),且明显低于正常对照组(P〈0.01)。移植后第2周,细胞移植组大鼠两项能力均明显强于模型对照组(P〈0.05).但仍低于正常对照组(P〈0.01)。移植后第6周,细胞移植组大鼠的横木行走能力明显改善,与正常对照组基本相似(P〉0.05);撕胶纸能力仍低于正常对照组(P〈0.01)。⑨阳性细胞免疫荧光检测:细胞移植组进针注射部位存在大量抗人RNP,CD45双阳性完整细胞,并向大脑中线、皮层梗死部位迁移。所植入的细胞约2.95%表达胶质纤维酸性蛋白.3。41%表达神经特异性烯醇化酶。结论:移植人脐血有核细胞能有效改善阻塞性脑卒中大鼠的运动和触觉功能缺陷。
  • 地塞米松对人胚神经干细胞移植治疗大鼠脑液压损伤的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:有较多的学者提出,中枢神经系统是一个部分免疫豁免区,仍然存在干细胞移植后的排异问题,为求证免疫排异的存在与否。实验拟探讨人胚神经干细胞移植治疗脑液压损伤大鼠的移植免疫及其对策。方法:实验于2003-01/2003-07在北京神经外科研究所神经干细胞室完成。①实验材料:人胚来源:12周龄死胎大脑,产妇及家属知情同意,来自北京天坛医院产科。SD雌性大鼠30只,体质量(290±10)g,购自中国医学科学院实验动物研究所。②实验方法:体外培养人胚神经干细胞,并用5-溴脱氧尿嘧啶(BndU)标记,液压冲击大鼠右侧大脑皮质运动感觉区制作脑损伤模型,将其分为实验组与对照组。实验组在移植人胚神经干细胞后使用地塞米松腹腔注射,对照组移植人胚神经干细胞后仅使用生理盐水腹腔注射。③实验评估:脑外伤后24h移植人胚神经干细胞,于人胚神经干细胞移植后1周脑组织切片免疫组织化学染色检测BrdU、巢蛋白、微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白蛋白表达。采用流式细胞仪计数分析检测大鼠脑组织CD4T细胞淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比。结果:两组移植后1周,均见BrdU阳性细胞从移植区域向周围扩散,切片巢蛋白、微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白均为阳性,且微管相关蛋白2阳性细胞较多;实验组侧脑室脉络丛和脑实质的微血管中只见有少量的BrdU阳性细胞,对照组脉络丛中见大量聚集的BrdU阳性细胞。两组CD4^+T淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比差异有显著意义(P〈0.05)。结论:异种神经干细胞移植治疗脑损伤可能存在免疫排斥反应,地塞米松对其存在抑制作用。
  • 静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠海马区脑组织形态及微管相关蛋A2表达的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:骨髓间充质干细胞移植进入脑组织后,能否影响脑组织的形态及微管相关蛋白2的表达从而改善痴呆状态下的认知功能?观察静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞后,血管性痴呆模型大鼠脑海马CAl区脑组织形态及微管相关蛋白2的变化。方法:实验于2004-08/2005-05在解放军第二军医大学完成。①实验动物:健康雄性SD大鼠60只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组、假手术组,20只,组。②实验方法:另取20只大鼠用于体外分离、培养扩增骨髓间充质干细胞,传至第2代时加入BrdU进行标记,制备单细胞悬液,调整细胞浓度为3x109L~。细胞移植组、模型对照组采用双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆动物模型,假手术组仅暴露双侧颈总动脉但不结扎。造模后4周,细胞移植组尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1mL,模型对照组注射等量磷酸盐缓冲液,假手术组不进行尾静脉注射。③实验评估:细胞移植后4周,苏木精一伊红染色检测各组大鼠脑海马CAl区脑组织形态变化,免疫荧光染色观察经BrdU标记的骨髓间充质干细胞示踪情况,免疫组织化学染色检测脑海马CAl区微管相关蛋白2的表达。结果:细胞移植组5只大鼠死亡,模型对照组3只大鼠死亡,假手术组均进入结果分析。①脑海马CAl区锥体细胞形态变化:细胞移植组和模型对照组CAl区锥体细胞较假手术组排列稀疏、紊乱,细胞肿胀、脱失,核固缩,但细胞移植组细胞排列较模型对照组规则,且细胞肿胀、脱失及核固缩较模型对照组减轻。②脑海马内骨髓间充质干细胞的示踪:细胞移植后4周,大鼠脑海马内可见被绿色荧光标记的骨髓间充质干细胞。③脑海马CAl区微管相关蛋白2的表达:与假手术组比较,细胞移植组及模型对照组脑海马CAl区锥体细胞层微管相关蛋白2阳性产物的吸光度值均明显降低(P〈0.05);细胞移植组明显高于模型对照组(P〈0.05)。结论:静脉注射骨髓间充质干细胞能够使血管性痴呆大鼠脑海马CAl区神经元损伤及脱失减轻,并使微管相关蛋白2表达增加。
  • 心肌梗死后不同时间移植骨髓间充质干细胞对心脏功能修复的作用 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察心肌梗死后不同时间点移植骨髓间充质干细胞对梗死心肌修复的影响,寻找细胞治疗的有效移植时间窗。方法:实验于2006-04110在郑州大学基础医学院完成。①实验动物:清洁级6周龄雄性SD大鼠81只,1只用于获取骨髓间充质干细胞,剩余80只随机数字表法分为细胞移植组、培养液对照组,再按心肌梗死后1d及1,2,3周进行移植的时间各分为4个亚组,10只/组。②实验方法:获取、培养大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代接近70%融合时,加入5-溴脱氧尿嘧啶体外标记,调整细胞密度为4x10^10 L^-1备用。两组大鼠均结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。细胞移植组各亚组按对应时间点在心肌梗死中央及四周移植骨髓间充质干细胞悬液50μL/点(2x10^6个),培养液对照组各亚组于相同部位移植L-DMEM培养液,50μL/点。③实验评估:移植前和移植3周后检测心功能;苏木精-伊红、免疫组织化学染色观察心肌梗死区组织及细胞变化。结果:共79只大鼠进入结果分析。①骨髓间充质干细胞的生长特点:刚分离的细胞为圆形。5d后有集落形成,细胞呈梭形、纺锤形或多角形,胞核较大。传代后细胞体积较原代细胞增大,生长速度加快。(爹心肌梗死后不同时间移植骨髓间充质干细胞的心功能比较:与移植前比较,移植3周后细胞移植组各亚组左室射血分数、短轴缩短率均有所改善(P〈0.05),以心肌梗死后2周细胞移植组最为明显(P〈0.01);培养液对照组各亚组左室射血分数、短轴缩短率均下降(P〈0.05)。③梗死心肌组织学观察:细胞移植组心肌梗死区及周边可见核蓝色深染的细胞,排列整齐,梗死区瘢痕化减轻。④骨髓间充质干细胞在心肌组织中的分化:细胞移植组梗死心肌内可见大量BrdU标记阳性的骨髓间充质干细胞,胞核呈棕黄色,对心肌特异性肌钙蛋白T呈阳性表达。结论:心肌梗死后早期移植骨髓间充质干细胞能够改善心功能,以2周内进行细胞移植的效果较佳。
  • 自体造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病后感染高危因素42例分析 免费阅读 收费下载
  • 目的:感染有可能是自身免疫性疾病患者造血干细胞移植过程中的主要并发症,选择此类患者42例分析其临床感染特点与高危因素。方法:①实验对象:选取1999-01/2006-06郑州市第三人民医院收治的接受自体造血干细胞移植的重症自身免疫性疾病患者42例,移植前平均病程3年。实验经医院医学伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。②实验方法:环磷酰胺150mg/kg+抗人胸腺球蛋白,抗人淋巴细胞球蛋白预处理30例,环磷酰胺200mg/kg+抗人胸腺球蛋白,抗人淋巴细胞球蛋白预处理12例;CD34^+细胞纯化移植17例,CD34^+细胞未纯化移植25例。移植过程中无菌层流室全环境保护,当患者体温〉38℃时立即采集血液标本,15mini次,连续3次。同时依据感染部位,采集相应的分泌物标本,鉴定菌种,并进行药敏试验。移植后1~3个月出现发热的患者,应用酶免疫染色技术与ELISA法检测巨细胞病毒。结果:①感染病例临床特征:42例患者共32例于移植后发生感染,其中9例发生两个部位感染,4例发生3个部位感染。感染部位主要分布在口腔、肛周、肺部等,以及原发感染灶不明确的菌血症。细菌、真菌感染多发生在移植后1个月内,巨细胞病毒检测阳性多发生在移植后1~2.5个月,巨细胞病毒感染所致间质性肺炎多发生在移植后1~6个月。②病原菌分布与耐药:自身免疫性疾病自体造血干细胞移植后,真菌感染占36%,革兰氏阴性杆菌占32%,革兰氏阳性球菌占4%。实验所检出革兰氏阴性杆菌耐药率高,其中铜绿假单胞菌除对亚胺培南、头孢他啶、阿米卡星敏感外,对其他药物均耐药;大肠埃希氏菌对喹诺酮类、第3代头孢菌素等多种药物耐药,仅对氨基糖苷类敏感。③移植相关因素与感染发生:接受自体造血干细胞移植的自身免疫性疾病患者,其病程≥3年、移植前环磷酰胺用量≥5g、预处理环磷酰胺强度200mg/kg及CD34^+细胞纯化的患者发生重度感染概率更高(X^2=4.783-8.776,P均〈0.05)。结论:④自身免疫性疾病患者自体造血干细胞移植后,感染病原体以革兰氏阴性杆菌、真菌、巨细胞病毒为主,感染部位主要分布在口腔、肛周、肺部,细菌耐药率高。②感染发生除与原发病有关外,患者病程、移植前环磷酰胺用量、预处理方案及移植方式为显著相关危险因素。
  • 新生兔破骨细胞的体外分离培养与功能鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:选择新生兔为实验对象,观察体外培养破骨细胞形态学和生物学特征。方法:实验于2007-03,06在辽宁医学院生理实验室完成。采用改良Chambem法机械分离兔四肢长骨获得新生兔(出生24h内)的破骨细胞,并应用倒置显微镜、光镜观察其形态学特征。结果:①倒置显微镜观察结果:培养1d后,细胞贴壁生长,数量增多,第3天后,可见多核巨细胞,呈油煎蛋、长条形,漏斗形等。②光镜观察结果:苏木精一伊红染色可见破骨细胞胞浆丰满,呈浅粉色,内含许多空泡结构,核3-20个不等,核呈浅蓝色,每个核含一两个核仁,有时周围伸出伪足样胞浆突起;Giemsa染色核集中于细胞中央或散在于细胞周边,呈花篮状,核浅粉色,胞浆着色较浅,其中可见数个大小不等未着色空泡;TRAP染色胞浆呈酒红色颗粒,核蓝色,核仁一两个;甲苯胺蓝染色可见骨吸收陷窝呈蓝紫色,圆形,椭圆形或不规则形,边界清晰,其边缘反光性强。结论:应用改良Chambem法可成功获得新生兔破骨细胞,且具有骨吸收功能。
  • 微球培养人脂肪间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化 免费阅读 收费下载
  • 目的:观察微球培养的人脂肪间充质干细胞在特定诱导条件下向软骨细胞的分化情况,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法:实验于2006-03/08在湘雅医院中心实验室完成。①实验材料:皮下脂肪组织来源于股骨颈骨折手术患者6例,对本实验均知情同意。②实验方法:取皮下脂肪,分离培养脂肪间充质干细胞,胰酶消化,取传至第6代的细胞,密度调整为1×10^10L^-1进行接种培养,细胞贴附后加入软骨细胞诱导剂(含10μg/L转化生长因子β1、37.5mg/L维生素c、6、25mg/L胰岛素、6、25mg/L转铁蛋白、10^-7mol/L地塞米松、1%新生牛血清的高糖DMEM),倒置显微镜下观察细胞团的变化。③实验评估:诱导14d后,将细胞吹散,细胞爬片,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原的表达,甲苯胺兰染色观察细胞内异染情况,RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖aggrecanmRNA的表达。结果:①脂肪间充质干细胞向软骨细胞诱导后的形态:诱导3d后,细胞团向内呈放射状聚集。②诱导后Ⅱ型胶原的表达及细胞内异染情况:诱导14d后,Ⅱ型胶原在胞浆、胞膜及细胞外基质中均有表达,呈棕黄色;甲苯胺兰染色显示胞浆内呈蓝色异染。③诱导前后Ⅱ型胶原蛋白和aggrecanmRNA的表达:诱导前脂肪间充质干细胞无Ⅱ型胶原蛋白和aggrecanmRNA表达,而诱导14d后二者均有较高表达。结论:在微球状态下可成功诱导脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化。
  • 干细胞在骨及软骨、肌腱和心脏组织构建中的应用 免费阅读 收费下载
  • 目的:综述干细胞在组织工程中的应用进展。资料来源:应用计算机检索美国NCBI、Pubmed数据库1991-01/2006-10关于干细胞及干细胞应用于组织工程方面文章,检索词“stemcell,tissueengineenng”,并限定文章语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:干细胞作为种子细胞在组织工程中的相关研究。排除标准:重复性研究和缺乏原刨性的研究。资料提炼:共收集到符合标准的文献62篇。资料综合:种子细胞在组织工程研究中占据重要位置。寻找容易获得、造成创伤少且可以提供多种细胞来源的种子细胞是组织工程研究的关键,间充质干细胞存在于骨髓、脂肪、肌肉、皮肤等组织,在不同的体外诱导条件下可以扩增、分化为各种细胞,并先后作为种子细胞应用于骨、软骨、肌腱、心脏组织工程。尽管目前对间充质干细胞的基础及临床应用研究取得了一定进展.但仍有很多基础问题仍有待于解决,虽然有多个细胞表面标记物用于鉴定问充质干细胞,但是这些标记物缺乏特异性。结论:具有多向潜能分化能力的干细胞为组织工程提供理想的种子细胞来源,寻找特定的标记物用于鉴定间充质干细胞以及调节分化的分子生物学机制是未来的研究方向。
  • 骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死的相关研究 免费阅读 收费下载
  • 学术背景:目前已有将骨髓间质干细胞用于脑梗死动物模型治疗的报道,国内外有关骨髓间质干细胞用于治疗脑梗死的研究也取得了一些进展,但是对于其作用机制还不清楚,国内外有关这方面的争论比较多。目的:就骨髓间质干细胞治疗脑梗死的研究进展及其治疗作用机制进行综述。检索策略:由第一、三作者应用计算机检索PUBMED 2000-07/2007-03期间与骨髓间充质干细胞和脑梗死有关的文章,检索词为“mesenchymal stem cells.cerebralischemia,stroke”并限定文章语言种类为“English”。同时计算机检索中国期刊全文数据库2002-01/2007-03相关的文章,检索词为“骨髓间质干细胞,移植,脑梗死”,并限定文章语言种类为中文。纳入标准:文章所述内容应与骨髓间质干细胞治疗脑梗死的应用研究及其治疗作用机制研究相关。排除标准:重复研究。文献评价:共收集到300篇相关文献,排除248篇内容陈旧或重复的文献,52篇符合纳入标准,有51篇检索到全文,选用其中的33篇作为本文参考文献:16篇涉及骨髓间质干细胞移植治疗脑梗死的相关研究;8篇神经干细胞移植后的示踪标记相关研究文章;5篇脑血管疾病干细胞移植治疗现状相关文章。资料综合:骨髓间质干细胞具有多向分化潜能,在特定条件下可分化为具有神经元形态并表达神经元标记物的细胞,在脑内可与损伤的细胞融合,能分泌营养因子或者刺激损伤部位产生内源性因子,促进损伤组织的修复并减少细胞凋亡,已成为细胞移植治疗各种疾病的理想种子细胞。结论:骨髓间质干细胞对脑梗死具有较好的治疗作用,主要通过其移植后能够分泌大量营养因子从而发挥其神经保护作用和营养支持作用。
  • 肿瘤干细胞的研究与进展 免费阅读 收费下载
  • 目的:作为“种子细胞”的肿瘤干细胞对研究肿瘤发生及其临床治疗具有重要意义。总结近年来肿瘤干细胞的研究进展.对肿瘤干细胞的概念、特性及应用进行综述。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1980-01/2006-12期间的相关文章,检索词为“cancer stem cells”,限定文章语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:肿瘤干细胞的研究进展及临床价值。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到106篇相关文献,30篇文献符合纳入标准,排除的76篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的30篇文献中,分别涉及肿瘤干细胞的定义及来源、研究进展、临床治疗价值等内容。资料综合:肿瘤干细胞具有分裂增殖、自我更新以及分化成其他细胞的能力,目前已证实其存在于白血病、乳腺癌、脑癌、前列腺肿瘤等肿瘤组织中。目前的抗肿瘤治疗方法主要针对的是大多数已经分化的肿瘤细胞,而不能影响到肿瘤干细胞,即治标不治本。肿瘤的复发、转移以及耐药等特征都很可能与肿瘤干细胞有关,因此肿瘤治疗的关键应是针对肿瘤干细胞进行灭杀,又要保护正常干细胞,但此两种细胞表型极为相似,故应找到更为特异的靶点。结论:肿瘤干细胞不仅已经从血液系统的恶性肿瘤中成功分离出来,在大量实体瘤中也证实了肿瘤干细胞的存在,其耐药机制之一是表达一种或多种药物运载蛋白,对于肿瘤的发生及治疗提供了更多的思路和方向。
  • 干细胞移植与肝硬化的治疗 免费阅读 收费下载
  • 学术背景:肝硬化晚期到肝功能衰竭时.通过移植具有分化增殖能力的干细胞.使其在体内分化成肝细胞.可以代偿部分肝功能。目的:介绍干细胞移植治疗肝硬化的研究现状及发展方向。检索策略:由第一作者应用计算机检索Medline数据库2000-01/2007-04相关文献,检索词为“stemcell,metabolicliverdisease,transplanted”,限定语言种类为“English”。纳入标准:与可移植干细胞的种类、干细胞向肝细胞分化的研究及骨髓干细胞在干细胞移植治疗肝硬化中的作用有关的文章。排除标准:较陈旧的文献和重复研究。文献评价:共收集到125篇相关文献,32篇文献符合标准,其中4篇介绍可应用干移植治疗肝硬化的干细胞种类,10篇关于干细胞向肝细胞分化的基础研究,12篇是研究骨髓干细胞在干细胞移植治疗肝硬化中的应用,另外6篇介绍干细胞移植治疗肝硬化的研究现状。资料综合:①应用干肝硬化的干细胞可分为肝源性肝干细胞和非肝源性肝干细胞。②体外诱导干细胞向肝细胞分化的研究多集中干骨髓干细胞和胚胎干细胞;干细胞在体内向肝细胞分化的研究也有成功报道。③大量研究显示骨髓干细胞具有持久生成肝细胞和胆管细胞的能力;具有构建肝组织结构的作用。结论:肝脏疾病在接受肝干细胞移植后.病肝细胞数量可以得到恢复.病肝组织结构可以得到修复.且可以自体采集.避免其他方式移植可能出现的排斥反应,但目前仍处于理论和实验研究阶段,没有广泛应用于临床。
  • 间质干细胞与免疫调节 免费阅读 收费下载
  • 目的:间质干细胞能够逃避免疫识别.抑制免疫反应特征。文章就近年来问质干细胞及其免疫调节作用进行综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1976-01/2006-01期间的相关文章,检索词为“mesenchymal stem cells,immunemodulation”,并限定文章语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与间质干细胞及其免疫调节作用相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到263篇相关文献68篇文献符合纳入标准.排除的195篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的68篇文献中,分别涉及间质干细胞的免疫原性、免疫抑制作用及机制、应用等内容。资料综合:间质干细胞广泛存在于各种组织中.本身具有免疫原性低的特点,可以逃避同种异基因免疫识别。间质干细胞在体外、体内均有明确的免疫抑制作用.与间质干细胞对树突状细胞、T细胞、自然杀伤细胞等的调控作用有关。间质干细胞尚可对转化生长因子、白细胞介素、基质细胞来源因子、NF-KB配体、前列腺素、吲哚胺2.3-二氧酶等可溶性因子产生影响。由于间质干细胞多方面的免疫调节活性,使其拥有良好的应用前景.目前已在移植物抗宿主病及自身免疫疾病的治疗中发挥了作用。结论:间质干细胞无论在体内或体外均对T细胞的活化有抑制作用,可调节在同种异体抗原的识别和清除过程中主要细胞群的免疫功能.包括抗原递呈细胞、T细胞和自然杀伤细胞,但其调节免疫抑制作用的分子机制尚未被完全阐明。
  • CD4^+CD25^+调节性T细胞与自身免疫病 免费阅读 收费下载
  • 目的:CD4^+D25^+调节性T细胞是一群具有免疫调节或免疫抑制功能的细胞。越来越多的实验证明,CD4^+CD25^+调节性T细胞在维持外周免疫耐受中起重要作用,这种T细胞的数量减少或功能缺失可导致自身免疫性疾病的发生。本文就CD4^+CD25^+调节性T细胞及其在自身免疫性疾病中作用的研究进展做一综述。资料来源:应用计算机检索CNKI、Medline、EMCC数据库和手工检索2006-2007年的相关文献。检索词为“CEH~CD25*T调节性细胞,自身免疫病,免疫耐受,CD4^+CD25^+regulatory T cell,Treg,autoimmunedisease,immune tolerance”。资料选择:检索范围包括临床研究(不限研究对象的年龄、性别、种族)和基础研究,不限体内和体外研究。资料提炼:共收集到相关文献675篇,选择其中33篇英文文献进行重点阅读和分析。资料综合:CD4^+CD25^+调节性T细胞具有免疫抑制功能,在机体的免疫调节中发挥重要作用。与其免疫调节功能相关的杀伤性T细胞淋巴细胞相关抗原4、CD45RO、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体、淋巴细胞的无能相关基因等细胞表面分子和白细胞介素2、白细胞介素10、白细胞介素4、转化生长因子13等细胞因子的研究不断深入。此外,CD4^+CD25^+调节性T细胞功能的发挥还与FOXP3的表达密切相关。CD4^+CD25^+调节性T细胞数量的减少、抑制功能的受损和(或)细胞表面分子表达的缺陷可能导致1型糖尿病、多发性硬化和炎症性肠病等多种自身免疫病的发生。结论:CD4^+CD25^+调节性T细胞主要通过细胞接触依赖机制和抑制性细胞因子依赖机制发挥免疫抑制效应。其数量的减少、功能的受损和(或)表面分子表达的缺陷与自身免疫病的发生发展密切相关。
  • 应用诱导缓解及干细胞疗法治疗急性早幼粒细胞白血病的治疗策略特点 免费阅读 收费下载
  • 目的:全反式维甲酸、砷剂(三氧化二砷、复方黄黛片)、化疗治疗的联合应用明显提高了急性早幼粒细胞白血病的完全缓解率,缓解后治疗则进一步提高了长期生存率,但治疗方案及治疗时间仍存在争议,本文对此进行综述。资料来源:应用计算机检索Medline和CNKI1992-01/2007-02期间的相关文献,检索词为“白血病、早幼粒细胞、急性、治疗、干细胞、移植,leukemia,promyelocytic,acute,therapy,stemcells,transplantation”。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:与急性早幼粒细胞治疗相关。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到361篇相关文献,41篇文献符合纳入标准,排除的320篇文献为内容陈旧或重复的文献。资料综合:临床分别采用全反式维甲酸、三氧化二砷、复方黄黛片或化疗治疗急性早幼粒细胞白血病,全反式维甲酸、三氧化二砷、复方黄黛片完全缓解率达60%~98%,联合化疗可提高具有高危因素患者的缓解率达90%。联合用药进行完全缓解后治疗可降低复发率,提高无病生存率,但治疗时间短者,其复发率较高,以采用长程治疗(时间大于6年)者5年无病生存率高达48%。而造血干细胞移植者5年无病生存率更可达100%。结论:全反式维甲酸或砷剂单独应用及其联合化疗治疗急性早幼粒细胞白血病均可获得较高的完全缓解率,全反式维甲酸或砷剂联合化疗和造血干细胞移植可进一步降低复发率,提高完全缓解率,以长程治疗和干细胞移植疗效较好。
  • 加速血管内皮修复功能的新型支架:内皮细胞或内皮先祖细胞种植支架与支架后再狭窄 免费阅读 收费下载
  • 目的:为降低经皮球囊冠脉成形术及支架置入后支架内再狭窄,除药物包被支架外,细胞种植支架也是近年来应用和研究的热点。本文就近年来国内外细胞种植支架与支架术后再狭窄相关的研究进行阐述。资料来源:应用计算机检索PUBMED数据库1990-01/2006-12期间与血管再内皮化预防支架术后再狭窄相关的文章,检索词为“endothelialcelI,seed.restenosis”,限定文章语言种类为English。同时检索CNKI数据库1990-01/2006-12相关文章,检索词为“内皮细胞,种植,支架,再狭窄”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初选,选择细胞种植促进血管再内皮化的相关文章,筛除无对照组的试验研究,对剩余文献查找全文。排除重复性研究。资料提炼:从收集到相关文章中,选择与本综述主题最为相关的31篇文章。资料综合:①支架内再狭窄是目前影响临床限制经皮冠状动脉介入治疗应用的关键问题所在。②血管内皮层的完整性与血管内膜的增生、术后再狭窄有着密切的关系,血管内皮对受损内膜的结构重塑起着重要的调节作用,促进内皮完整性恢复能抑制或减小内膜增生。因此,促进血管再内皮化成为目前研究的热点。⑧近年来促进损伤内皮修复的方法主要有两种,一是局部灌注药物或导入相关基因,以促进血管内皮细胞生长;二是直接接种血管内皮细胞,以达细胞种植的目的。④血管内皮细胞种植支架置入以达到局部“细胞接种”,从而在局部增殖,快速覆盖支架、修复损伤内膜的研究也是近年来的研究热点。随着内皮祖细胞的研究进展,内皮先祖细胞将成为一种有前途种植支架的细胞来源。结论:随着支架的生物工程化制作工艺的不断改善。内皮细胞或内皮先祖细胞种植支架作为一种具有加速内皮修复功能的新型支架.成为抗再狭窄的新策略之一。在冠心病的介入治疗中将占有重要地位。
  • 异基因造血干细胞移植后肾脏慢性移植物抗宿主病的特征 免费阅读 收费下载
  • 患者,女性,34岁,因“颜面部及双下肢浮肿半个月”于2005-02入中山大学附属第五医院,出现蛋白尿、镜下血尿。患者曾于2004-04因急性白血病行异基因外周血造血干细胞移植。对患者实施肾脏穿刺活检、病理分析及抗慢性移植物抗宿主病治疗。异基因造血干细胞移植后出现累及肾脏的慢性移植物抗宿主病罕见,而以小管间质性肾炎为病理特点的慢性移植物抗宿主病更为罕见,表现为肾小球系膜细胞无明显增殖,间质中中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞浸润。实验室检测抗核抗体(+),CD4减少,CD8升高,CD4,CD8下降。异基因造血干细胞移植后出现的肾脏病变为慢性移植物抗宿主病的一种少见表现。是一种自身免疫性反应,积极进行肾穿刺活检,明确病理类型非常必要。免疫抑制剂治疗有效。
  • 胚胎嗅鞘细胞再移植治疗晚期脊髓损伤1例 免费阅读 收费下载
  • 目的:对晚期脊髓损伤患者开展嗅鞘细胞再移植治疗,探讨其对神经功能的继续改善效果。方法:①患者男性,27岁,哈萨克斯坦籍,2001年9月20日遭霰弹枪击急诊手术后,双下肢不能运动及感觉消失,尿便失禁,右下肢阵发性钝痛。诊断为陈旧性完全性脊髓损伤(T12),美国脊髓损伤协会标准脊髓功能分级为A级。2002年9月30日第1次行脊髓胚胎嗅鞘细胞移植术,2007年2月5日行第2次脊髓胚胎嗅鞘细胞移植术。治疗方案患者知情同意。②取4个月流产胚胎(孕妇及其家属均知情同意)的嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后培养2周,细胞浓度约2x10^10L^-1。于患者相应脊髓损伤上端(平T11椎体)做1个锁孔,直径约3cm,在脊髓损伤部位与正常脊髓交界处沿中线于无血管区,分两点用4.5号细针共注入100μL(第1次手术)、50μL(第2次手术)嗅鞘细胞悬液,细胞数均为1x10。个。第2次移植术前进行供、受体细胞HLA配型,术后口服FK506胶囊2mg,2次/d,共42d。结果:(里)第1次术后3个月,排尿能控制6h,双足运动功能改善,性功能改善,阴茎勃起功能改善,疼痛减轻。②第2次术后10d,双下肢双足皮肤泌汗功能改善,右下肢疼痛减轻,腹部皮肤感觉稍有好转,针刺觉左侧由术前T10皮节消失好转至T10减退。较第2次移植前椎旁躯体感觉诱发电位有所改善,双侧椎旁电位从T10下降到T120结论:胚胎嗅鞘细胞二次移植能继续改善晚期脊髓损伤患者的神经功能。但移植的细胞数量、容积、注射点位置等需深入探讨。
  • 低体质量儿童外周血干细胞采集输血反应1例 免费阅读 免费下载
  • 目的:报告1例低体质量儿童行外周血干细胞采集过程中出现输血反应的情况。方法:患儿,女,6岁,体质量16kg,于2005-08/2005-09入院,诊断为神经母细胞瘤Ⅳ期。外周血干细胞采集预处理方案为环磷酰胺1g/dx2d、法玛新10mg/dx3d、长春新碱O.4mg/dx5d。采集前30min给予地塞米松2.5mg预防输血反应的发生。外周血干细胞采集应用CS-3000Plus血细胞分离机,调至儿童采集程序,配以小体积分离槽和小体积收集槽。机器正常初始化后,采用去白辐照悬浮红细胞100mL,将其用生理盐水1:1稀释至200mL,进行全血灌注冲盈管路。当返血管路返出全血、首次溢出结束后停机,将其与患儿管路相连接,开机时全血流速设定为15mUmin。结果:①第1次开机19min后,患儿从耳阔至面部出现潮红,随即出现红色皮疹、瘙痒、燥动不安,过5min后全身出现红疹,血压90/60mmHg,心率124次,min,立即停机用盐水维持通路,静脉给予地塞米松2mg,非那根25mg,10%葡萄糖酸钙10mL,临床观察10min后患儿安静入睡,血压90/70mmHg,心率120次/min,重新开机,设定全血流速为15mUmin,20min后提高全血流速至25mUmin,共循环5000mL,用时3小时26分。②次日,开机前30min给予地塞米松5mg,开机后10min患儿出现胸闷,全身无皮疹,心率90次/min,停机,盐水维持密切观察,10min后患儿无不适,心率100次.min,重新开机,共循环5000mL全血,用时3小时38分。结论:①低体质量儿童在外周血干细胞采集过程中出现输血反应后,经及时处理顺利完成采集,并获得了足够的外周血干细胞。②设定全血流速15mL/min是CS-3000 Plus血细胞分离机运转程序的最低限,输血速度较快,这可能是小儿发生输血过敏反应的一个因素。
  • 香港大学、香港中文大学、汕头大学医学院4位学者发现:人类情绪会影响干细胞功能 免费阅读 免费下载
  • “情绪低落会伤身”并非无稽之谈,实有科学根据。4位香港和内地学者研究干细胞首次发现人类情绪会影响干细胞功能,进而影响身体免疫功能,是世界上首个证实人类情绪与干细胞有密切关联的研究。参与这项研究的学者包括香港大学儿科系助理教授杨默、香港中文大学儿科系副教授李桂霞、汕头大学医学院刘元生教授及程元生医生。研究结果显示,影响人类情绪的血清素对于干细胞的生长和移植有密切关联。
  • [技术与方法]
    银杏内酯和神经生长因子影响原代人胚肝细胞的增殖及分泌
    骨髓间充质干细胞向神经细胞转化过程中神经生长因子及受体的表达(王相利 宓宝杰 王海立)
    碱性成纤维细胞生长因子对体外培养大鼠胚胎脊髓神经细胞的作用(成静 端礼荣 吴全义)
    碱性成纤维细胞生长因子基因转染对鼠眼外肌成肌细胞生物学行为的影响
    [信息导读]
    《中国组织工程研究与临床康复》杂志近期组稿重点
    《中国神经再生研究(英文版)》杂志栏目介绍
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    《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志近况
    书讯
    第三届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会会议通知
    第四届全国糖尿病足治疗新技术学习班通知
    2007年8-12月本刊重点征集血液科方面稿件
    本刊近期重点关注造血干细胞移植并发症内容的稿件
    《中国组织工程研究与临床康复》杂志栏目介绍
    本刊近期重点组织干细胞治疗自身免疫疾病的稿件
    [干细跑实验技术方法]
    受强力霉素调控的永生化骨骺干细胞株的建立(李明辉 郭风劲 张树威 宋登新 王江 易磊)
    三七总皂甙对大鼠体内肝卵圆细胞增殖的调控及机制
    建立永生化骨髓间充质干细胞株(徐燕 慕晓玲)
    腺病毒重组绿色荧光蛋白转染脂肪组织来源干细胞的特点(杨波 高建华 鲁峰 朱茗)
    双重消减纯化体外培养许旺细胞(史金凤 雷雳 夏寅)
    大鼠皮下脂肪分离间充质干细胞的体外培养及鉴定(秦宇红 陈光辉 边素艳 张琰琴 李天德)
    [干细胞临床应用相关实验]
    ^60Coy射线局部辐射后小鼠非辐射区域骨髓巨核细胞的变化
    三种阳离子脂质体介导血管内皮细胞基因转染效率的比较
    构建双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的实验(胡英芳 王月刚 谢宜军 赖文岩 赖艳娴 吴平生)
    高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞
    大鼠红细胞流变性变化及抗运动疲劳效应与补服肉碱和糖的作用
    自身免疫性肝炎大鼠模型外周血淋巴细胞亚群变化与褪黑素的影响(丁体龙 马勇 于莉 夏志学)
    低剂量碳离子全身辐射对小鼠淋巴细胞增殖及血清干扰素的影响
    红细胞指数及流变性在女子短跑运动员与普通女大学生递增负荷运动前后的变化(高新友)
    人类O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶蛋白的亚细胞荧光定位(赵淑兰)
    基因芯片检测灵芝提取物对白细胞中免疫相关基因表达的影响(丁晖 蔡彦宁 温玫 陈彪)
    原发性血小板减少性紫癜模型小鼠血浆内皮素水平与加味小柴胡颗粒及其组方的干预
    CD4^+T淋巴细胞在无症状人类免疫缺陷病毒感染者早期接受扶正排毒片治疗后的变化(彭勃 刘学伟 郭会军)
    [研究与报告]
    人Persephin基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达(肖颂华 沈庆煜 黄仕雄 刘军 邢诒刚 陶恩祥 彭英)
    小鼠卵黄囊间充质干细胞培养及诱导成血管内皮细胞(韩小强 瓦龙美)
    骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的动态观察
    精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征
    人脂肪干细胞体外培养特性及成脂成软骨分化(郭宝锋 尹维田 刘浩宇 魏壮)
    [干细跑移植]
    脊髓损伤后真皮多能干细胞移植时机的选择
    绿色荧光蛋白转基因干细胞在癫痫大鼠脑内的存活及对脑电的影响
    脐血有核细胞移植治疗脑卒中的动物实验
    地塞米松对人胚神经干细胞移植治疗大鼠脑液压损伤的影响
    静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠海马区脑组织形态及微管相关蛋A2表达的影响
    心肌梗死后不同时间移植骨髓间充质干细胞对心脏功能修复的作用(贾敏 卢沛琦 杨继要 王永奎 韩雪飞)
    [研究快报]
    自体造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病后感染高危因素42例分析(董秀娟 陈蕾 马红霞 赵晓武 马冬燕 周凯)
    新生兔破骨细胞的体外分离培养与功能鉴定(任媛媛 张健)
    微球培养人脂肪间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化(周全 邓展生 朱勇 郭晓柠 叶川 李宝军 张胜利)
    [综述与专论]
    干细胞在骨及软骨、肌腱和心脏组织构建中的应用(王先成)
    骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死的相关研究(闻霞 孙锋 王金春)
    肿瘤干细胞的研究与进展(任道凌 臧健 易成)
    干细胞移植与肝硬化的治疗(姜玉奇)
    间质干细胞与免疫调节(陈楠楠)
    CD4^+CD25^+调节性T细胞与自身免疫病(孟荔 欧阳建)
    应用诱导缓解及干细胞疗法治疗急性早幼粒细胞白血病的治疗策略特点
    加速血管内皮修复功能的新型支架:内皮细胞或内皮先祖细胞种植支架与支架后再狭窄(王光富)
    [经验交流]
    异基因造血干细胞移植后肾脏慢性移植物抗宿主病的特征(侯丽君 徐景勃 何志国 曾林涓 朱旬 胡晓萍 钟淑萍 许娜 贾韬)
    [个案报告]
    胚胎嗅鞘细胞再移植治疗晚期脊髓损伤1例
    低体质量儿童外周血干细胞采集输血反应1例
    [图文新闻]
    香港大学、香港中文大学、汕头大学医学院4位学者发现:人类情绪会影响干细胞功能
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

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