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文献检索:
  • 特发性血小板减少性紫癜患者CD4^+CD25^+Treg细胞的表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:近年研究发现,CD4^+CD25^+Treg细胞不论数量缺失或功能紊乱均可导致免疫异常的发生,对调节性T细胞的深入认识,将会对免疫异常疾病如自身免疫性疾病、移植物抗宿主病、过敏性疾病等发病机制的揭示有着深远的意义。实验将进一步验证CD4^+CD25^+Treg细胞与特发性血小板减少性紫癜发病的关系及可能机制。 方法:实验于2007—06/09在中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所实验室完成。①实验材料:中国协和医科大学血液病医院住院的特发性血小板减少性紫癜患者27例治疗前后外周血,患者确诊符合血液病诊断及疗效标准。正常人外周血15份,实验均征得患者或家属知情同意。②实验方法:应用流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者、正常对照、以及治疗前后患者外周血中CD4^+CD25^+Treg细胞的比例。对其中治疗有效的23例患者,采用密度梯度离心法从治疗前后的外周血中提取单个核细胞,以RT—PCR方法检测其中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果:①特发性血小板减少性紫癜患者外周血中CD4^+CD25^+Treg细胞的比例以及CD4^+CD25^+Treg细胞在总CD4^+T细胞中所占比例明显均低于正常对照组(P〈0.05)。②有效治疗后的特发性血小板减少性紫癜患者CD4^+CD25^+Treg细胞的比例与治疗前相比无明显改变(P〉0.05),但Treg细胞中Foxp3mRNA的表达水平比治疗前明显增加(P〈0.05)。 结论:特发性血小板紫瘢患者体内存在CD4^+CD25^+Treg细胞的异常,数量的减少、Foxp3表达的降低所造成的CD4^+CD25^+Treg细胞免疫抑制功能受损可能是特发性血小板减少性紫瘢发病的一个重要因素。
  • 血管内皮生长因子对骨髓瘤骨髓基质细胞分泌白细胞介素6的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究表明骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞黏附后,可促进多种细胞因子如血管内皮生长因子、白细胞介素6的分泌,这些因子在促进肿瘤生长、浸润中起到关键作用。 目的:观察血管内皮生长因子对多发性骨髓瘤患者骨髓基质细胞分泌白细胞介素6的影响。 设计、时间及地点:对照观察,于2005—04/2007—04在大连医科大学附属二院血液实验室完成。对象:所有骨髓标本来源于大连医科大学附属二院血液科住院患者,多发性骨髓瘤患者18例,缺铁性贫血患者8例的骨髓为正常对照。血管内皮生长因子为R&D公司产品。 方法:上述对象每例抽取骨髓5mL,贴壁法分离培养骨髓基质细胞。当细胞贴满瓶壁后传代,取2~3代细胞进行实验。分别向骨髓瘤骨髓基质细胞、正常骨髓基质细胞的悬液中加入含10%胎牛血清的IMDM培养液,按1×10^0L^-1密度接种,48h后收集上清液待测。此外,分别以10,50,100μg/L血管内皮生长因子作用骨髓瘤骨髓基质细胞48h,另以100μg/L血管内皮生长因子分别作用骨髓瘤骨髓基质细胞24,48,72h,收集上清液待测。 主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞表型。ELISA法检测两种骨髓基质细胞培养上清液中的白细胞介素6浓度。ELISA法检测血管内皮生长因子作用于骨髓瘤骨髓基质细胞对分泌白细胞介素6的影响。 结果:26例骨髓标本均进入结果分析。①体外培养的骨髓基质细胞贴壁生长,平均4周融合为单层,传代后表现为成纤维细胞形态,其表型为CD54^+,CD33^-,CD31^-。②骨髓瘤骨髓基质细胞上清液中白细胞介素6的含量明显高于正常骨髓基质细胞(t=6.17,P〈0.05)。③分别以10,50,100μg/L血管内皮生长因子作用骨髓瘤骨髓基质细胞48h后,其上清液中白细胞介素6的含量逐渐升高,3种浓度间比较差异有显著性意义(F=218.19~1970.90,P〈0.05)。以100μg/L血管内皮生长因子分别作用骨髓瘤骨髓基质细胞24,48,72h后,其上清液白细胞介素6的含量逐渐升高,各时间点比较差异有显著性意义(F=92.86~1026.30,P〈0.05)。 结论:骨髓瘤骨髓基质细胞在生长形态上与正常骨髓基质细胞基本相似,但前者白细胞介素6的分泌却显著高于后者。血管内皮生长因子对骨髓瘤骨髓基质细胞的白细胞介素6分泌呈剂量、时间依赖性影响。
  • 白血病小鼠单倍型相合骨髓移植的归巢 免费阅读 下载全文
  • 背景:移植后造血干细胞的顺利归巢是单倍相合骨髓移植成功的关键。 目的:构建小鼠白血病模型,进行单倍型相合的骨髓移植,动态观察受体小鼠体内移植细胞归巢率及不同时间点的归巢规律。 设计、时间及地点:随机对照观察实验,于2005—11/2007—10在福建医科大学实验动物中心清洁级动物实验室进行。 材料:供鼠为清洁级近交系C57BL/6小鼠和C57BL,6小鼠与BALB/c小鼠杂交的雄性F1小鼠,受鼠为清洁级近交系雌性BALB/c小鼠,用于构建白血病小鼠模型。 方法:将48只造模小鼠随机分为2组,对照组供鼠为C57BL/6小鼠,实验组供鼠为F1小鼠。实验组进行主要组织相容性复合物单倍型相合的同种异基因骨髓移植,对照组进行主要组织相容性复合物完全不相合的骨髓移植。 主要观察指标:移植后1,2,3,4d动态观察小鼠外周血、骨髓和脾中有核细胞计数,以流式细胞仪检测可与FITC标记的抗鼠H-2K^b单抗结合的供鼠阳性细胞并计算骨髓和脾归巢率。 结果:对照组外周血中供鼠来源的细胞数持续下降,脾和骨髓的归巢率均为先升后降,提示供者来源的骨髓细胞在受鼠体内为先归巢再出巢;实验组外周血中供鼠来源的细胞数先下降,再持续上升,骨髓归巢率为下降后上升,脾归巢率为上升后下降,提示供鼠来源骨髓细胞在骨髓中表现为出巢后再归巢,脾中有延迟,与对照组比较,实验组第4天外周血中供鼠细胞数量及骨髓和脾归巢率均增高(尸〈0.05)。 结论:主要组织相容性复合物单倍体相合的骨髓移植的归巢规律是先出巢再归巢,归巢的细胞数量和归巢率高于主要组织相容性复合物完全不相合骨髓移植。
  • 自体骨髓间充质干细胞移植治疗免肾缺血再灌注损伤 免费阅读 下载全文
  • 目的:骨髓间充质干细胞可分化为肾小管上皮细胞,有效促进损伤肾脏功能的修复,但以往研究多以大鼠作为实验对象采用同种异体移植。实验采用自体骨髓间充质干细胞行兔左肾动脉灌注治疗,以观察移植细胞对缺血再灌注损伤后肾组织结构和功能修复的影响。 方法:实验于2006-03/12在解放军成都军区昆明总医院完成。①实验材料:健康2-3月龄日本大耳白兔24只,雌雄不限,体质量(2.6±0.7)kg,由解放军昆明总医院实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。将24只兔随机均分为移植组和对照组。②实验方法:以红细胞破碎法结合贴壁培养法分离培养兔骨髓间充质干细胞,免疫细胞化学染色鉴定细胞表面标记物CD34、CD105、CD106的表达。采用右肾切除联合左肾动脉缺血85min再灌注的方法,制备兔肾缺血再灌注损伤模型。造模后移植组经右股动脉插管行自体骨髓间充质干细胞左肾动脉灌注治疗,对照组注入等量生理盐水。③实验评估:分别在移植前及移植后3,7,14,21,28d行肾功检测和肾组织病理学观察。 结果:①刚接种的细胞主要为圆形,第7天左右细胞呈现克隆性生长,呈骨髓间充质干细胞特征性的旋涡状生长,细胞形态多呈梭形,传代细胞生长速度明显增快,细胞体积明显增大。P3代细胞CD34染色均呈阴性反应,而CD105、CD106染色阳性细胞在超过98%。②造模后第3天两组的血清肌酐、尿素氮均达最高水平,自第7天起移植组血清肌酐、尿素氮水平逐渐低于对照组,第21天两组间血清肌酐和尿素氮差异显著(P〈0.05)。③缺血再灌注损伤后两组肾小管上皮细胞变性、坏死甚至脱落,随着时间延长,坏死肾小管逐渐修复,但移植组修复程度明显好于对照组。 结论:移植的自体骨髓间充质干细胞可在一定程度上加速缺血再灌注损伤后肾组织结构和功能的恢复。
  • 人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖影响的体外实验 免费阅读 下载全文
  • 背景:许多报道指出骨髓间充质干细胞具有免疫调节作用,可治疗自身免疫性疾病。 目的:体外观察人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖的影响。 设计、时间及地点:对照观察性实验,于2007—01/10在安徽医科大学第一附属医院中心实验室完成。 材料:来源于29例重型及慢性再生障碍性贫血患者的外周血。 方法:取再生障碍性贫血患者骨髓血及外周血,采用Percoll上密度梯度离心分离骨髓间充质干细胞,用淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞,用含体积分数为0.20胎牛血清的RPM11640培养基悬浮,将细胞悬液加入尼龙棉柱内,平置于37℃温箱中孵育1h,用预温至37℃的上述培养液冲洗出非黏附细胞即为T淋巴细胞,洗涤后重悬于培养基中备用。将骨髓间充质干细胞以1×10^3/孔,1×10^4/孔加入到植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞增殖体系中,以单独培养的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞为对照。 主要观察指标:MTT还原法测定再生障碍性贫血患者T淋巴细胞的增殖。 结果:与对照组比较,当骨髓间充质干细胞为1×10^4/孔时,对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞增殖表达的抑制率为(42.1±11.2)%,差异有显著性意义(P〈0.01),当骨髓间充质干细胞为1×10^3/孔时,抑制率为(9.2±3.5)%,差异无显著性意义。 结论:自体骨髓间充质干细胞可抑制再生障碍性贫血患者T细胞的增殖,且这种抑制作用具有数量依赖性。
  • 以SEAM预处理方案行自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤 免费阅读 下载全文
  • 背景:造血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤前,预处理方案对移植效果至关重要。目前经典BEAM方案中的药物卡莫司汀在国内不易购得,且该方案毒副作用较大,复发率较高。 目的:以司莫司汀取代卡莫司汀组成SEAM预处理方案,观察自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤的效果。 设计、时间及地点:病例分析,于2003—06/2006-02在解放军成都军区昆明总医院血液科进行。 对象:选取同期收治的15例Ⅲ~Ⅳ期非何杰金淋巴瘤患者,男13例,女2例,平均年龄43.8岁,均经过2-8个疗程的化疗,CR14例,CR21例,部分缓解10例;病理证实T细胞淋巴瘤3例,弥漫大B细胞淋巴瘤12例;移植前复查肝肾功能及肺功能均正常。组成SEAM预处理方案的4种药物:司莫司汀(Semustine)为浙江瑞新公司产品,批号20071125;足叶乙甙(Etopside)为江苏恒瑞公司产品,批号07101231;阿糖胞苷(Ara—C)为浙江海正公司产品,批号080103A;马法兰(Mephalan)为葛兰素史克产品,批号7001。 方法:皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子动员后12d采集患者外周血干细胞,与羟乙基淀粉、人血白蛋白及二甲基亚砜配成冻存液移植备用。动员后1个月行自体外周血干细胞移植,移植前患者行SEAM预处理方案:移植前8d口服司莫司汀320mg/m^2。移植前7d~移植前4d,静滴足叶乙甙200mg/m^2,1次/d;静滴阿糖胞苷200mg/m^2,1次/12h。移植前3d~移植前2d,静滴马法兰70mg/m^2,1次/d。移植当天将预先冻存的自体外周血干细胞水浴解冻,经锁骨下静脉插管快速回输给患者,一般输注细胞量为(3.0~5.0)×10^8/kg。 主要观察指标:①预处理的毒副作用。②移植后造血功能恢复。③疾病转归。 结果:SEAM预处理过程中15例患者均出现不同程度消化道反应,1例出现心动过速,3例出现肝功能损害。所有患者在自体外周血干细胞移植后造血功能均快速重建,中性粒细胞计数≥0.5×10^9L^-1的中位时间为11d,血小板计数≥20×10^9L^-1的中位时间为13d。中位随访时间39个月,13例患者无病存活,2例分别于移植后4,13个月死于疾病复发。 结论:非何杰金淋巴瘤患者对SEAM预处理方案耐受性好,该方案毒副作用轻微,造血重建恢复较快,目前随访治疗效果较好。
  • 内皮祖细胞移植对大鼠心肌梗死后缺血心肌血管再生及心功能的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:内皮祖细胞是一类能直接分化为血管内皮的前体细胞,不仅参与胚胎期血管发育,也在成体血管新生中起重要作用。 目的:观察内皮祖细胞移植对心肌梗死大鼠心肌血管再生及心功能的影响。 设计、时间及地点:随机对照,在体组织病理学观察,于200607/200707在华中科技大学同济医学院附属协和医院心研所完成。 材料:清洁级Wistar雄性大鼠80只,65只大鼠建立心肌梗死模型,剩余15只作为假手术组,不结扎冠状动脉。细胞标记BrdU及其抗体为Sigma公司产品,EBM-2细胞培养液基质为Gibico公司产品。 方法:抽取大鼠外周血,通过密度梯度离心获得单个核细胞,贴壁法分离培养内皮祖细胞,加入BrdU至终浓度为100mg/L予以标记,继续培养7d移植备用。造模成功大鼠随机分为2组:内皮祖细胞移植组30只,将BrdU标记的内皮祖细胞悬液100μL分5点注射到左室前壁梗死灶边缘;培养基对照组30只,以同样方式注射等量的EBM-2细胞培养液基质。 主要观察指标:移植后4周对梗死区心肌组织进行病理学及免疫组化检测,测定新生毛细血管密度。心脏超声检查心功能变化。 结果:造模过程5只大鼠死亡。内皮祖细胞移植组在心肌瘢痕区边缘发现植入的内皮祖细胞、新生毛细血管和少许淋巴细胞,且存在棕褐色的BrdU阳性细胞;培养基对照组在移植区仅见少许淋巴细胞,无内皮祖细胞成分及BrdU阳性细胞。内皮祖细胞移植组梗死心肌瘢痕边缘毛细血管密度明显高于培养基对照组(P〈0.01)。与假手术组比较,内皮祖细胞移植组和培养基对照组的各项心功能指标均出现明显变化,差异有显著性意义(P〈0.05)。内皮祖细胞移植组的左室射血分数、缩短率均较培养基对照组明显提高(P〈0.01)。 结论:同种异体内皮祖细胞移植到心肌梗死大鼠缺血心肌后能分化为毛细血管内皮细胞,促进梗死后心肌血管新生,改善心功能。
  • 经冠状动脉内注射体外培养骨髓间充质干细胞的安全性 免费阅读 下载全文
  • 目的:经冠状动脉内移植可以使移植细胞均匀的分布在移植血管相关心肌组织内,同时避免了心肌内注射引起的心肌损伤,是目前很多临床试验采用的移植途径。然而部分学者指出冠状动脉内注射移植可能会导致心肌梗死等并发症。观察经介入途径将骨髓间充质干细胞注射到心肌梗死猪冠状动脉内的可行性及安全性。 方法:实验于2005-06/2006-03在中国协和医科大学阜外心血管病医院、卫生部心血管病再生医学重点实验室完成。①实验材料:中华小型猪由中国农业大学实验动物基地提供,雌性,6个月龄。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用密度梯度离心法分离猪骨髓单个核细胞获取骨髓间充质干细胞,并采用超顺磁性氧化铁颗粒和荧光细胞膜标记物CM—DiI进行双重标记。阻断冠状动脉前降支中下1/3处90min后开放制作猪心肌梗死模型。通过导管将骨髓间充质干细胞注射到心肌梗死模型动物的冠状动脉内,观察心电图及肌钙蛋白I在细胞移植后不同时期的变化,应用心脏磁共振在体示踪移植细胞在心脏内的分布,评价心脏形态和功能在细胞移植前后的变化,病理检查分析移植细胞在心肌组织内的分布以及体内非靶器官的再分布情况及组织形态改变。 结果:①冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞当时及24h后,心电图未见ST-T明显改变,肌钙蛋白未见明显升高。细胞移植后当时及24h后左室舒张末期容积、左室收缩末期容积未见明显增大,左心室射血分数未见降低。移植后2周心脏功能明显改善,左心室容积明显缩小,左心室射血分数明显升高。②细胞移植前、移植后24h、移植后2d,反映心肌损伤的肌钙蛋白I均未出现明显升高,细胞移植过程中心电图未出现明显的变化。⑤病理检查发现移植细胞在心肌组织内均匀分布,2周后可见移植细胞在梗死区域存活,移植细胞存在向肺、肝、肾等非靶器官的再分布,移植细胞对非靶器官的组织形态无明显影响。 结论:实验证明经冠状动脉内移植的骨髓间充质干细胞能够均匀的分布到相关心肌组织内,不会造成梗死心肌组织的功能损伤,并可以明显改善梗死心肌功能,对非靶器官组织形态无明显影响,经冠状动脉内移植骨髓间充质干细胞治疗猪急性心肌梗死是安全可行的。
  • 骨髓间充质干细胞成肌诱导后移植对延缓失神经肌肉萎缩的作用 免费阅读 下载全文
  • 目的:实验将化学和应力协同诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞移植到失神经骨骼肌内,观察体内的成肌效应,以达到延缓失神经骨骼肌萎缩的目的。 方法:实验于2007—04/10在上海交通大学医学院附属新华医院动物实验中心和中心实验室完成。①实验材料:SD大鼠由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用密度梯度离心法分离培养雄性SD大鼠股骨、胫骨中骨髓间充质干细胞。取第3代细胞进行化学诱导后,再进行应力诱导,于移植前1d以DAPI标记。取8周龄SD大鼠36只,随机分为对照组与实验组,18只/组。两组均切断大鼠左侧后肢坐骨神经,并造成1cm神经缺损,形成失神经支配腓肠肌动物模型。实验组大鼠腓肠肌的内、外侧头经皮注入骨髓间充质干细胞,对照组大鼠以同样方法注入无细胞、不含胎牛血清低糖DMEM培养液。③实验评估:术后第4,S,12周检测大鼠双侧腓肠肌运动单位电位及纤颤电位,取双侧腓肠肌测定肌湿重,然后行苏木精-伊红染色,并作图象分析,测定肌纤维横截面积,采用BCA法测双侧腓肠肌蛋白总量。 结果:①切断坐骨神经后2周大鼠腓肠肌均发生不同程度的萎缩。左侧腓肠肌运动单位电位波形逐渐变单一,时限逐渐延长,电压逐渐变小,纤颤电位的正向波逐渐增多。4、8周时实验组与对照组有差异,12周时两组无差异。②实验组骨髓间充质干细胞移植处可观察到带荧光的细胞核及肌纤维,对照组未见此现象。实验组第4,8周失神经支配腓肠肌湿重残存率、腓肠肌纤维横截面积残存率、蛋白总量残存率均明显低于对照组(P〈0.01),12周时两组差异无统计学意义。结论:骨髓间充质干细胞移植到失神经骨骼肌内可明显延缓失神经支配骨骼肌的萎缩,并且这一作用只在细胞移植8周以内比较明显。
  • 转化生长因子β2诱导鼠脂肪间充质干细胞向软骨细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞成骨和成软骨的促分化作用已破广泛证实。 目的:假设转化生长因子β2可在体外诱导鼠脂肪间充质干细胞向成软骨细胞分化,实验拟验证其可行性。 设计、时间及地点:体外细胞学实验,于2007—03/11在北京大学第三医院中心实验室完成。 材料:清洁级3周龄雄性Lewis大鼠24只。用于分离培养脂肪间充质干细胞。 方法:取第2代脂肪间充质干细胞,通过10μg/L外源性转化生长因子β2以离心管内微团培养、单层培养两种方式向软骨细胞进行诱导分化.培养3周对照组单纯加入基础培养液。 主要观察指标:两种诱导方式下细胞(团)形态结构的变化、Ⅱ型胶原免疫组织化学检测结果、软骨细胞特异性基因Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达, 结果:微团培养诱导的脂肪间充质干细胞组织块经苏木精-伊红染色显示在组织内部形成类似软骨陷窝样结构,阿尔新蓝染色呈强阳性,Ⅱ型胶原免疫组化结果显示有棕褐色强阳性颗粒,RT-PCR检测到Ⅱ型胶原和Aggrecan mRNA的表达。单层培养诱导的脂肪间充质干细胞无细胞外软骨基质分泌,未发现Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan mRNA的表达。 结论:在离心管内微团培养方式下,转化生长因子β2可以启动或促进脂肪间充质干细胞的软骨分化,且分泌软骨细胞特异性基质。简单的单层培养方式诱导失败。
  • 胰岛干细胞转分化胰岛样细胞与天然胰岛功能的比较 免费阅读 下载全文
  • 目的:目前在胰腺干细胞体外转分化为胰岛样细胞的转化效率,转分化胰岛样细胞的成熟度,能否代替天然胰岛的功能等问题上存在争议。实验将分离纯化、扩增的大鼠胰腺导管上皮细胞,并诱导分化为胰岛样细胞团,与天然胰岛功能进行比较。方法:实验于200407/2005-04在暨南大学第二临床医学院暨深圳市人民医院临床医学研究中心实验室完成。实验选用SD大鼠10只.采用差异性贴壁、低血清培养等方法纯化大鼠胰腺导管上皮细胞,以免疫组织化学方法鉴定后,在含exendin-4、角质细胞生长因子、尼克酰胺等细胞因子和葡萄糖的培养基中,将其转分化为胰岛样细胞团,以DTZ染色和胰岛素免疫荧光染色鉴定。分离纯化SD大鼠天然胰岛,对胰岛样细胞团与天然胰岛进行葡萄糖刺激试验,检测培养液上清液中胰岛素和C肽的水平。 结果:①免疫组织化学染色显示从大鼠胰腺导管上皮细胞分离纯化的细胞呈CK-19染色阳性,PDX-1染包阴性,表明为胰腺干细胞。诱导4周后,细胞逐渐汇聚成胰岛样细胞团.免疫荧光染色为阳性,证明有胰岛素分泌。②葡萄糖刺激实验显示,在低糖和高糖刺激下,胰岛样细胞团胰岛素的分泌量约为天然胰岛的1/30和1/35,C肽分泌量为天然胰岛的1/32和1/26. 结论:目前胰腺干细胞体外转分化为胰岛样细胞的成熟度与天然胰岛仍然存在较大差别,其在功能仅为天然胰岛的1/30—1/35。
  • 穴位移植同种异体骨髓间充质干细胞对梗死区心肌再生的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:在“实验家兔经穴标”准通过国家认证的基础上,许多现代研究表明穴位注射疗法具有药效与穴效整合、药效强、药效长的优点。 目的:将中医传统医学穴位注射与现代医学干细胞治疗相结合,观察骨髓间充质干细胞穴位移植对家兔急性心肌梗死模型缺血心肌细胞的修复重建能力。 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007—06/08在辽宁中医药大学针灸系电生理实验室完成。 材料:选用健康日本大耳白兔,用于制备急性心肌梗死模型。 方法:将造模成功的30只心肌梗死家兔按随机数字表法分为3组(n=10),模型对照组不做其他处置;穴位注射干细胞组于造模1周后经穴位注射已经分离、培养、扩增、标记的家兔骨髓间充质干细胞悬液;穴位注射生理盐水组经穴位注射等量的生理盐水。 主要观察指标:对各组家兔心肌梗死区进行Brdu免疫组织化学染色以观察穴位移植骨髓间充质干细胞是否迁移至梗死区;对Brdu染色阳性的细胞复染心肌特异性肌钙蛋白I以观察迁移的细胞是否分化及分化的性质。 结果:穴位注射干细胞组梗死区心肌组织免疫组织化学Brdu染色阳性,心肌特异性肌钙蛋白I染色阳性;模型对照组及穴位注射生理盐水组梗死区心肌组织未见Brdu标记阳性细胞。结论:家兔急性心肌梗死模型经穴位移植的骨髓间充质干细胞,可迁移至心肌梗死区,并可以在梗死区分化为心肌细胞。
  • 在人子宫内膜饲养层上生长的人原始生殖细胞生物学特性 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前在胚胎多潜能干细胞建系和培养过程中,存在着建系率低、具有正常核型的干细胞系比率低等问题。 目的:观察接种于人子宫内膜成纤维细胞饲养层上原代培养的人原始生殖细胞在体内外的生物学特性。 设计、时间及地点:细胞观察,于2004—01/2005—04在沈阳市妇婴医院和中国医科大学完成。 材料:人胚胎来源于流产孕妇,用于分离培养原始生殖细胞。人子宫内膜来源于因子宫肌瘤行子宫切除术的患者,用于制备成纤维细胞饲养层。清洁级10周龄雄性裸鼠2只,用于体内分化实验。 方法:从人胚胎生殖嵴、肠系膜中消化分离的原始生殖细胞,将其接种在人子宫内膜成纤维细胞饲养层上传代培养。体内实验取连续传5代的2个细胞株,分别制备浓度为1×10^9L^-1的细胞悬液,于每只小鼠两侧腹股沟处皮下各接种0.5mL,培养8周。体外分化采用无黏附特性的培养瓶和除去白血病抑制因子的原始生殖细胞培养液,以脱饲养层法悬浮培养扩增的细胞,直到拟胚体形成及贴壁分化。 主要观察指标:通过免疫荧光检测胚胎干细胞特异性表面标志物的表达、碱性磷酸酶染色及染色体核型分析,对所培养细胞进行鉴定。检测裸鼠体内畸胎瘤的形成及组织分化。免疫组化染色观察体外肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白的表达。 结果:①传至第2、7代的人胚胎原始生殖细胞SSEA-4,SSEA-3,TRA-1—60,TRA-1—81等表面标志物均呈阳性表达,碱性磷酸酶染色呈阳性,染色体分析为正常二倍体核型46XX。②接种8周末,2只小鼠均形成皮下畸胎瘤,其内存在囊括3个胚层的组织结构,包括皮脂腺、脂肪、腺体及腺上皮、鳞状上皮等。③培养第4天形成拟胚体,肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白均呈阳性表达。 结论:人子宫内膜成纤维细胞可以作为人原始生殖细胞的饲养层细胞,传代后的原始生殖细胞仍保持胚胎干细胞的未分化状态和发育全能性。
  • 重组腺病毒介导的肝细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞源性脂肪细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:肝细胞生长因子可促进血管内皮细胞增生及新生血管形成,已广泛应用于病理性瘢痕、心肌缺血等的实验性治疗。 目的:鉴于重组腺病毒的宿主范围广,探讨重组腺病毒介导的人肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞源性脂肪细胞转染效率、目的蛋白表达及细胞活性的影响。 设计、时间及地点;2006—08/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院完成的细胞对比实验。 材料:清洁级2月龄Wistar大鼠25只用于制备骨髓间充质干细胞。携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒毒株、重组腺病毒介导的人肝细胞生长因子由解放军兰州军区兰州总医院博士后科研工作站哈小琴博士惠赠。 方法:向体外培养至第3代的骨髓间充质干细胞中加入含地塞米松、IBMX、牛胰岛素、吲哚美辛、胎牛血清的L-DMEM进行成脂诱导。以不同感染强度的携带绿色荧光蛋白基因重组腺病毒转染诱导后的脂肪细胞。重组腺病毒介导人肝细胞生长因子以最佳感染强度转染诱导后的脂肪细胞。 主要观察指标:油红。染色检测成脂情况。流式细胞仪计数绿色荧光蛋白阳性表达,计算转染效率。ELISA法检测转染上清中肝细胞生长因子的表达,MTT法检测转染脂肪细胞的活性。 结果:①骨髓间充质干细胞成脂诱导后胞质内富含橙红色的脂滴,成脂率(97-31±0.46)%。②以100pfu/cell携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒转染脂肪细胞72h后,绿色荧光蛋白表达量达高峰,此时转染效率为65.39%。③以100pfu/cell作为最佳感染强度转染脂肪细胞72h后,肝细胞生长因子的表达量为峰值。与未转染空白对照比较,转染后24,48,72,96,168h脂肪细胞活性均无明显变化(t=-0.024~0.092,P〉0.05)。 结论:重组腺病毒可介导肝细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞,有效表达目的蛋白,且转染该基因对脂肪细胞的活性无影响。
  • 鼠表皮干细胞的稳定分选方法及其体外培养体系建立 免费阅读 下载全文
  • 背景:采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤,存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新,但在体外普通培养条件下易发生终末分化。 目的:为获得稳定生长的鼠表皮干细胞,拟建立或完善能够调控其增殖分化的体外培养体系。 设计、时间及地点:细胞观察,于2007—05/11在广州市创伤外科研究所完成。 材料:清洁级1~3d龄Wistar大鼠20只用于制备表皮干细胞。 方法:采用两步酶消化法获得单个表皮细胞悬液,Ⅳ型胶原快速贴壁法分选贴壁细胞,加入含胎牛血清、0.05mmol/LCaCl2及表皮细胞生长因子、腺苷、胰岛素、氢化可的松、霍乱毒素等复合的DMEM培养基进行培养,原代分离细胞时胎牛血清体积分数为0.2以维持细胞活性,第2次换液时改为0.1。 主要观察指标:光镜下观察细胞生长情况,免疫组化法检测目的细胞角蛋白19和P63整合素的表达,流式细胞仪检测01整合素和CD71的表达,通过细胞周期及生长曲线观察其增殖能力。 结果:①Ⅳ型胶原筛选的细胞在复合DMEM培养基中生长良好,细胞活性〉98%,培养6d后形成含100~200个细胞的大克隆,呈鹅卵石样铺满瓶底。②角蛋白19和P63均呈阳性表达,β1整合素表达率为98.57%,CD71表达率为9.05%。③94.99%细胞处于GdG,期,细胞呈指数增长。 结论:两步酶消化+Ⅳ型胶原快速黏附法可成功分选稳定生长的鼠表皮干细胞。含霍乱毒素、腺苷、胰岛素等因子的复合DMEM培养基可维持表皮干细胞的增殖能力,其中合适的血清浓度及Ca^2+浓度至关重要。
  • 细胞因子在体外诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化过程中的作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓基质细胞持续稳定地向软骨细胞转化一过程中,物理、化学和生物等诸多因素均发挥着作用,某些因素的共同作用会更有利于细胞的转化,而转化生长因子β1和胰岛素样生长因子等均可诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化。 目的:拟验证转化生长因子β1与胰岛素样生长因子在体外联合诱导犬骨髓基质细胞向软骨细胞分化的效果。 设计、时间及地点:细胞观察,于2006—05/10在中山大学附属第三医院中心实验室完成。 材料:清洁级12月龄雄性成年杂种犬1只,用于分离培养骨髓基质细胞。转化生长因子β1、胰岛素样生长因子I由美国Sigma公司生产。 方法:白犬髂后嵴处抽取骨髓10mL,密度梯度法分离培养骨髓基质细胞,传至第3代,调整细胞密度为2×10^9L^-1。诱导组向细胞内加入含10μg/L转化生长因子β1、50μg/L胰岛素样生长因子I、50mg/L维生素C、10^-7mol/L地塞米松、1%ITS—A、100U/mL青霉素、100mg/L链霉素、10%胎牛血清的高糖DMEM培养基。对照组仅加入含10%胎牛血清的高糖DMEM进行常规培养。主要观察指标:诱导后细胞形态学变化。诱导后组织化学及免疫组化检测结果。 结果:与对照组比较,第3代骨髓基质细胞成软骨诱导48h后能明显促进细胞集落生长,细胞增殖加快,但细胞形态无变化,仍为长梭形:诱导14d后大部分细胞呈多角形或圆形,折光性增强。诱导后番红O染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性表达。 结论:转化生长因子β1与胰岛素样生长因子I体外联合诱导可获得骨髓基质细胞源性软骨细胞。
  • AdCMV-BMP-7促进兔骨髓基质细胞的成骨分化 免费阅读 下载全文
  • 目的:研究表明骨形态发生蛋白7可促进软骨的再生和重建。实验拟证实人骨形态发生蛋白7可促进兔骨髓基质细胞分化为成骨细胞。 方法:实验于2005—10/2006—03在解放军第二军医大学长征医院完成。①实验材料:pAdTrack—CMV,pAdEasy-1及pGEM—T—BMP-7质粒均由许国华博士惠赠;大肠杆菌TG1、DH5a、BJ5183及包装细胞株293为本实验室保存;成年雄性新西兰大白兔2只购于解放军第二军医大学动物中心。②实验过程及评估:构建重组腺病毒表达载体AdCMV—BMP-7:首先将骨形态发生蛋白7序列插入到穿梭载体pAdTrack中,得到重组腺病毒pAdCMV—BMP-7;传代培养至第3代兔骨髓基质细胞,加入不同滴度值的AdCMV—BMP-7培养7d,以感染腺病毒空载体和未感染AdCMV—BMP-7的兔骨髓基质细胞作为阴性对照,观察碱性磷酸酶含量与时间及剂量的关系。 结果:①重组AdCMV—BMP-7的构建:采用的AdEasyTM-1载体系统含有报告基因绿色荧光蛋白,筛选时间大为缩短,得到大约34kb大小的AdCMV—BMP-7。②AdCMV—BMP-7促进兔骨髓基质细胞分化结果:感染AdCMV—BMP-7后的骨髓基质细胞合成碱性磷酸酶明显增加且呈时间及剂量依赖性,而骨髓基质细胞感染腺病毒空载体对碱性磷酸酶合成无影响,提示骨髓基质细胞在单一的骨形态发生蛋白7作用下即可分化为成骨细胞。 结论:实验结果提示重组腺病毒表达载体AdCMV—BMP-7能够促进骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化,且成时间依赖性及剂量依赖性。
  • 骨髓间充质干细胞对缺氧微环境的耐受性 免费阅读 下载全文
  • 背景:在需要进行干细胞治疗的缺血性心脏病移植的微环境中,长期存在着缺血缺氧环境,骨髓间充质于细胞移植到心肌后能否适应? 目的:观察骨髓间充质干细胞对缺氧的耐受性。 设计、时间及地点:对比观察实验,2005—03/2006—03在北京大学医学部心血管研究所完成。 材料:成年雄性SD大鼠10只,体质量150g左右,SPF级。 方法:采用密度梯度法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,在3种氧浓度中进行培养。体积分数为0.95的N2+体积分数为0.05的CO2为无氧组,体积分数为0.0O的O2+体积分数为0.94的N2+体积分数为0.05的CO2为低氧组,体积分数为0.05的CO2+空气为正常氧浓度组。测定MTT值绘制生长曲线、用锥虫蓝和Hoechst33258染色计数细胞死亡和凋亡的数量。 主要观察指标:细胞在不同氧浓度及不同培养时间点的死亡和凋亡百分数,以及细胞数目增长情况。 结果:①生长曲线显示骨髓间充质干细胞在1%低氧浓度和无氧条件下的增殖能力较正常氧浓度条件下显著降低(P〈0.05)。②在不同氧浓度条件下,连续培养5d内,各时间点骨髓间充质干细胞死亡百分率3组间差异无显著性。③通过检测细胞核碎裂发现缺氧未显著增加骨髓间充质干细胞凋亡.在不同氧浓度条件下,连续培养5d内,细胞凋亡率均低于8%(P〉0.05)。 结论:骨髓间充质干细胞在体外培养时对缺氧耐受性较好。
  • 大鼠气管干细胞增殖分化过程中Wnt/β-Catenin信号分子的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景;干细胞和细胞外基质的互相作用需要Wnt信号途径的参与。在气管损伤后的修复过程中,不同的分子信号级联控制干细胞的迁移、增生与分化,Wnt信号途径是否参与其中?目的:检测并验证Wntβ-Catenin信号途径在气管干细胞增殖分化中的作用。 设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2004—05/2006—07在沈阳医学院完成。 材料:2周龄Wistar大鼠,雌雄不拘,作为离体气管来源。 方法:实验组以含氟尿嘧啶的Hams F12培养液作用离体大鼠气管,作用12h后换成单纯Hams F12液,对照组只用Hams F12液培养。 主要观察指标:去除氟尿嘧啶后于0,6,12,24,48h采用免疫组织化学SP染色及蛋白印迹法检测气管上皮中Wnt—1和β-Catenin的表达。 结果:氟尿嘧啶作用12h后,大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,暴露出基底膜,仅剩余少数较分散的间隔分布的近于裸核的细胞,呈钉状位于基底膜上。氟尿嘧啶去除6h后,气管基底膜上可见少量扁平样细胞。24h后基底膜上细胞数目增加,并逐渐分化呈立方状,连接成片。48h后气管上皮中出现假复层柱状上皮,并可见纤毛细胞。免疫组织化学及蛋白定量结果显示:正常及损伤后0h气管上皮极少量表达Wnt-1及β-Catenin,损伤后6hWnt-1及β-Catenin表达最强,其后随时间延长,表达逐渐减少。 结论:Wnt-1时间依赖性表达与气管上皮损伤修复进程相吻合,胞浆中游离状态的β-Catenin表达可能产生了促进气管干细胞的增殖并抑制其分化的作用。
  • 中药祛脂素对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞脂肪分化的干预 免费阅读 下载全文
  • 背景:祛脂素为复方中药制剂,其化学成分包含维生素A、胡萝卜素、芸香甙及槐甙A、B、C和生物碱等,可抑制脂肪细胞分化成熟。骨髓间充质干细胞可定向分化为脂肪细胞,因此可将其作为阻止骨髓脂肪化、成为治疗再生障碍性贫血的一个可能靶点。 目的:观察复方中药祛脂素对再生障碍性贫血骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化的干预效果。设计、时间及地点;细胞观察,于2006—06/2007—03在大连医科大学附属二院血液风湿科实验室完成。 材料:骨髓间充质干细胞来自12例再生障碍性贫血患者。祛脂素为本科室辅助治疗再生障碍性贫血的科内中药验方,主要含五灵脂、槐花米和山楂,每毫升相当于原中药材1g的糊状药液。 方法:抽取患者骨髓液,Ficoll+贴壁法分离培养骨髓单个核细胞,达70%~80%融合后扩增传代。取传至第3代的骨髓间充质干细胞,分为2组:脂肪细胞诱导组向含有10%FBS的DMEM培养体系中加入终浓度为0.5μmol/L氢化可的松、1μmol/L地塞米松、10mg/L牛胰岛素;祛脂素组在其基础上加入终浓度为1g/L的祛脂素,培养14d。 主要观察指标:计算脂肪细胞阳性率。采用RT-PCR及Western blowing法测定细胞内PPARγmRNA、蛋白水平的表达。结果:与脂肪细胞诱导组比较,祛脂素组脂肪细胞阳性率、细胞内PPARγmRNA水平、PPARγ蛋白水平均明显下降(t=18.6,P〈0.01:t=189.64,P〈0.01;t=15.93,P〈0.01)。 结论:祛脂素对再生障碍性贫血的骨髓间充质干细胞脂肪分化具有抑制作用,通过减少脂肪细胞形成、降低脂肪细胞特异性标志PPARγ的转录及蛋白表达,帮助恢复骨髓造血功能。
  • 不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较 免费阅读 下载全文
  • 背景:以往利用羊膜提取间充质干细胞的研究多将注意力放在新鲜的羊膜标本上,由于地域和时间的限制,对羊膜进行保存是必须面对的实际问题。 目的:实验拟比较从不同保存时间人羊膜标本中分离培养的羊膜间充质干细胞的增殖能力。 设计、时间及地点:体外进行的细胞对照观察,于2007—01/200802在郑州大学医学院和生物工程系完成。 材料:正常剖宫产的健康产妇志愿捐献的羊膜12份,孕38周,检测乙肝5项、HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性。 方法;无菌条件下将每份新鲜完整的羊膜平均分成3组,即新鲜1h组、4℃放置24~36h组、4℃放置48~60h组。将3组标本剪碎,胰蛋白酶-胶原酶联合消化,过滤后收集单细胞悬液,以2×10^8L^-1密度接种,加入含胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁法纯化扩增细胞。 主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线。取第3代细胞进行免疫组织化学检测和流式细胞仪鉴定。 结果:①3组标本消化后都含有多种单个细胞成分,呈圆形、菱形、短梭形、多角形,细胞折光性良好,此外还有多个上皮细胞聚集所成的细胞团。接种后1-3d各组细胞均为潜伏期:4~7d新鲜1h组与4℃放置24~36h组进入对数生长期,细胞增殖活跃,细胞数目呈指数级递增,4℃放置48~60h组仍处于潜伏期;7d后前两组细胞已铺满瓶底,4℃放置48~60h组刚开始指数级递增。②各组细胞神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、巢蛋白均呈阳性表达,胶质纤维酸性蛋白呈阴性。各组细胞CD29,CD44均呈阳性表达。 结论:保存时间在60h内的人羊膜都可以分离出具有增殖能力的间充质干细胞,但36h内的羊膜标本所分离的间充质干细胞具有较快的增殖能力。
  • 成人脂肪间充质干细胞冻存前后的生物学特性 免费阅读 下载全文
  • 目的:目前关于脂肪间充质干细胞冻存和复苏的条件,以及冻存复苏过程对其基本生物学特性以及诱导分化能力影响的研究较少。实验拟观察冻存前后脂肪间充质干细胞的一般生物学特性以及向心肌细胞方向诱导分化的潜能。 方法:实验于2006-12/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院医学实验中心,解放军兰州军区重点实验室完成。①实验材料:成人腹部大网膜脂肪组织由解放军兰州军区兰州总医院普通外科提供。实验经患者知情同意,并经医院伦理委员会批准。②实验方法:自成人脂肪组织分离培养脂肪间充质干细胞。取对数生长期的第3代细胞,液氮中经短期3个月及较长期20个月冻存.复苏后台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面分子。取生长状态良好的脂肪间充质干细胞,以5-氨杂胞苷进行体外诱导,诱导后第28天采用免疫荧光技术检测心肌特异性肌钙蛋白-I.计算心肌样细胞转化率。 结果:①短期冻存组与较长期冻存组的细胞存活率无差异。②短期冻存组、较长期冻存组。冻存前后脂肪间充质干细胞的生长曲线无明显差别,呈“S”形;接种后第1、2天为潜伏期,第3天进入对数生长期,第7天达顶点,第8天略育减少。③短期冻存组细胞呈CD29阳性、HLA-DR阴性:较氏期冻存组细胞呈CD44阳性、CD34阴性,两组冻存前后脂肪间充质干细胞的表面分子表达无差异(P〉0.05)。④冻存前后脂肪间充质干细胞经5壕i杂胞廿诱导后第28天时心肌特异性肌钙蛋白-I均呈阳性表达。短期及较长期冻存组冻存前后诱导转化率无差别,两组间也无差别。 结论:脂肪间充质干细胞可经受短期及较长期冻存.复苏后细胞的存活率较高,基本生物学特性及诱导分化潜能无明显变化。
  • 小鼠子宫蜕膜基质细胞的分离培养 免费阅读 下载全文
  • 目的:蜕膜组织的细胞成分相当复杂,其中蜕膜基质细胞约占全部蜕膜细胞数的75%,其能分泌多种细胞因子,既参与蜕膜营养供应作用又能调节蜕膜局部的免疫微环境。实验拟建立良好的小鼠子宫蜕膜基质细胞培养方法,为进一步建立蜕膜细胞共培养系统将为研究病理性妊娠打下良好的基础。 方法:实验于2006—09/2008-01在泰山医学院实验动物中心,SPF级实验室完成。①实验材料:8~10周龄C57BL/6雌性小鼠,由北京维通力化实验动物技术有限公司提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:选用孕龄6~8d的C57BL/6小鼠蜕膜组织进行体外培养,采用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶混合消化,进行全组分蜕膜细胞培养,采用原代细胞过夜换液方法清除红细胞、淋巴细胞和不贴壁的细胞成分,利用传3代方法对蜕膜基质细胞进行分离提纯。纯化后,观察蜕膜基质细胞的生长变化规律,制作细胞爬片,用催乳素免疫组织化学试剂盒检测培养细胞的成分。 结果:①小鼠蜕膜基质细胞在接种24h后大部分已贴壁,贴壁生长的细胞成纤维母细胞状,一般培养5~7d后细胞融合成单层。原代培养的蜕膜基质细胞在含10%胎牛血清的培养液中可增生数周,四五天传代1次,传代后的细胞形态无明显变化,而传代培养极性渐不明显。②免疫组织化学显示,体外培养传代后95%阳性细胞为蜕膜基质细胞,细胞大小形状基本均一,染色特点为胞质内可见细小的棕色颗粒,且越近胞核染色越深。结论:采用复合酶消化,换液传代方法提纯蜕膜组织,方法简单、经济实用,并可获得较高纯度的蜕膜基质细胞。
  • bmi-1原癌基因在不同来源CD34^+细胞的表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:Bmi-1是一种属于PcG家族的原癌基因,它直接参与细胞生长、增殖的调节,是成体干细胞和白血病干细胞自我更新所必需的。检测原痛基因bmi-1在不同来源CD34^+细胞中的表达,探讨其与细胞增殖的关系。 方法:实验于200703/11在广州医学院生化教研室完成。①实验材料:白血病细胞株SHI-1由苏州大学附属第一医院、江苏省血液病研究所薛永权教授惠赠;脐血由广州医学院附属广州市第一人民医院妇产科提供。实验经产妇知情同意,并经医院伦理委员会批准:外周血采自健康成年自愿捐献者。②实验方法:以CD34免疫磁珠标记急性单核细胞白血病细胞株SHI-1,上柱分选CD3矿细胞,脐血单个核细胞以同样的方法标记CD34免疫磁珠标记和分选CD34^+细胞,应用流式细胞仪分析分选后CD34^+的寓集度:将分选前后的CD34^+、CD34^SHI—1细胞以相同的密度接种于24孔板,分不同的时间点计数细胞,并绘制生长曲线。选用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞。以正常脐带血和外周单个核细胞为对照,采用半定最RT—PCR法检测bmi—1基因在不同来源CD34^+细胞中的表达。 结果:①SHI—1细胞分选前后标记CD34^+PE、CD38^+FITC流式分析显示,分选后CD34^+细胞的富集度为99%以上。②SHI-1-CD34^+细胞旱缓慢生长趋势,不同于分选前细胞的指数生长状态。③RT-PCR检测显示,bmi-1 mRNA在SHI—1—CD34^+细胞中的表达高于其在脐肌-CD34^+与外周血单个核细胞中的表达(P〈0.05)。bmi-1 mRNA在SHI—1、SHI—1—CD34^+、SHI-1-CD34^+细胞中表达差异不显著,在脐血L—CD34^-细胞中弱表达或不表达。 结论:bmi-1基因在SHI细胞株CD34^+与CD34^-细胞中均高表达,说明其与血液细胞的高增殖能力密切相关。
  • 人CD4和IHLA-DR0401表达载体转化扩增及其在L929细胞中的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:转基因小鼠的开发已成为类风湿关节炎动物模型的必然趋势,HLA—DR是通过何种分子机制导致类风湿关节炎的发病是目前研究热点。 目的:拟对含有人CD4基因质粒pcDNA3-CD4和含HLA—DR0401基因质粒pLNCX2-DR*0401进行体外转化扩增,并观察其在小鼠成纤维细胞内的表达。 设计、时间及地点:开放性实验,于200706/2008-01在南方医科大学中医药学院实验中心、南方医科大学动物实验中心分步完成。 材料:含人CD4基因载体pcDNA3-CD4和含HLA-DR0401基因载体pLNCX2-DR*0401分别由美国宾西法尼亚大学微生物学系和马里兰巴尔的摩县大学生物化学系惠赠。大肠杆菌DH5α为北京天根生化科技有限公司产品。小鼠成纤维细胞(L929)细胞株为南京凯基生物科技发展有限公司产品。 方法:取pcDNA3-CD4和pLNCX2-DR*0401质粒转化DH5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选培养,挑取阳性克隆菌落进行培养后抽提质粒,并取样进行限制性内切酶鉴定和测序。采用脂质体转染L929细胞,通过流式细胞仪和直接免疫荧光法对人CD4和HLA—DR0401的表达进行检测。 主要观察指标:①质粒扩增情况。②质粒酶切及测序鉴定。③质粒转染L929细胞后的表达。 结果:经转化扩增后,pcDNA3,CD4、pLNCX2-DR*0401质粒的纯度及浓度均较高。人CD4表达载体经酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且与GenBank一致,HLA—DR0401表达载体酶切鉴定正确,测序鉴定HLA—DRα基因正确。流式细胞仪检测转pcDNA3-CD4载体的细胞约61%呈阳性,直接免疫荧光结果显示人CD4在转基因细胞中得到表达,分布于胞膜及胞质内。流式细胞术检测仅有1%的转pLNCX2-DR*0401载体的细胞呈阳性,直接免疫荧光无特异性荧光检出。结论:成功转化并扩增了人CD4和HLA,DR0401表达载体,并转染小鼠成纤维细胞系L929,为下一步转基因鼠模型的构建奠定了实验基础。
  • 骨髓间充质干细胞移植修复大鼠坐骨神经挤压伤 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓间充质干细胞体外分离培养方便,细胞免疫原性低,更适合于细胞移植,已有证实其在神经缺损修复方面具有较大的应用潜力。 目的:明确体外培养的骨髓间充质干细胞体内移植后,促进大鼠周围神经损伤修复的可行性,并初步探讨其可能的作用机制。 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/2007-03在吉林大学公共卫生学院毒理教研室完成。 材料:选取健康雌性Wistar大鼠50只,鼠龄2个月;另选取出生1周的雌性Wistar大鼠6只用于制备骨髓间充质干细胞;实验用兔抗NGF单克隆抗体为Santa Cruz公司产品。 方法:①采用贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,传至第3代,于移植前48h加入BrdU进行标记。②取50只健康Wistar大鼠,利用钳夹法建立坐骨神经挤压伤模型后随机分为细胞移植组和对照组,每组25只,移植组将BrdU标记的骨髓间充质干细胞移植到神经损伤处,而对照组注入等量的DMEM。 主要观察指标:①术后1,2,4,6周取移植组损伤段神经进行抗BrdU染色。②术后1,2,4,6周对两组损伤远端神经进行神经生长因子免疫组化染色,图像分析软件分析阳性表达的积分吸光度。③术后每周进行步态分析测量坐骨神经功能指数,术后6周测量再生神经传导速度、坚牢蓝染色后计数有髓神经纤维数目和内径、测量大鼠实验侧腓肠肌湿重和肌纤维横截面积。 结果:全部50只实验大鼠均进入结果分析。①术后1,2,4周在细胞移植组神经损伤处可以检测到BrdU阳性细胞。②术后1和2周细胞移植组神经生长因子蛋白表达积分吸光度值均高于对照组,差异有显著性意义(P〈0.01);而术后4,6周差异则无显著性意义(P〉0.05)。③术后3-6周细胞移植组坐各神经功能指数的恢复要优于对照组;术后6周细胞移植组大鼠的神经传导速度、有髓神经纤维计数和直径、腓肠肌湿重和横截面积均高于/大于对照组,差异有显著性意义(P〈0.05~0.01)。 结论:体外培养的骨髓间充质干细胞可进行体内移植,移植后能在局部损伤微环境中发挥作用,促进周围神经损伤修复,提高早期神经生长因子表达是其机制之一。
  • 胎儿肠壁结缔组织诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:间充质干细胞具有多向分化能力,在体外能诱导分化为上皮细胞,而胚胎原始消化管上皮的分化受肠壁间充质的诱导。肠壁结缔组织能否诱导骨髓间充质干细胞分化形成上皮细胞,尚不明确。目的:观察胎儿肠壁结缔组织能否诱导骨髓间充质干细胞分化形成上皮细胞。 设计:体外培养,对比观察。 单位:实验于200407/200607在重庆医科大学组织胚胎学教研室完成。材料:表皮生长因子为Sigma公司产品;CK,CK20为中山生物有限公司产品。收集四五个月流产胎儿标本6例的四肢骨髓,Ficoll离心,分离、培养、扩增获取骨髓间充质干细胞。取胎儿十二指肠乳头以下肠段,剥去肌层和外膜。酶消化去除上皮。剪成约15mm×5mm的组织块。胎儿标本由临床学院妇产科提供,产妇同意提供胎儿用于实验,实验经医院伦理委员会批准。 方法:实验分4组进行:干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组分别将DAPI标记的第3代骨髓间充质干细胞(3×10^4)个移植于肠壁结缔组织块的黏膜下层表面:干细胞组和干细胞+表皮生长因子组为骨髓间充质干细胞爬片;其中干细胞移植+表皮生长因子组和干细胞+表皮生长因子组加入终浓度为10μg/L表皮生长因子;4组均体外培养12d。 主要观察指标:①用荧光显微镜观察DAPI标记的骨髓间充质干细胞的形态及分布。②干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组组织块培养12d后,采用苏木精.伊红染色观察与荧光显微镜观察同一肠壁结缔组织表面细胞形态。⑧免疫组化染色检测标记细胞CK及CK20的表达,以及肠壁结缔组织是否表达表皮生长因子。④高碘酸.希夫反应(PAS反应)检测DAPI标记细胞与结缔组织间有无基膜样物质产生。 结果:①荧光显微镜下干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组的组织块表面均有DAPI标记的荧光阳性细胞,苏木精一伊红染色显示该部位细胞呈上皮样形态,而且在培养时经多次换液未被洗去为长在结缔组织表面的细胞。②免疫组织化学染色显示两组组织块表面的细胞均可表达CK及CK20。③免疫荧光染色显示组织块表面的细胞同时有标记细胞核的DAPI蓝色荧光与标记CK的红色荧光,表明DAPI标记的骨髓间充质干细胞已经分化为上皮细胞。④干细胞组细胞CK及CK20阴性,而干细胞+表皮生长因子组则为阳性,提示表皮生长因子有诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的作用。⑤PAS反应显示在标记细胞与结缔组织之间有基膜样结构糖蛋白出现。未经培养的结缔组织组织块内有表皮生长因子表达。 结论:表皮生长因子和胎儿肠壁结缔组织在体外均能诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞:肠壁结缔组织中的表皮生长因子可能是结缔组织诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的因素之一。
  • 大鼠肝卵圆细胞体外分离培养和向肝细胞的诱导分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:肝卵圆细胞具有强大的自我更新复制及在一定的条件下克隆增殖并分化为成熟肝细胞的能力,既可在体外用于构建生物人工肝的生物材料部分,也可以进行体内移植,还可为组织工程提供种子细胞,在治疗肝病方面具有广阔的前景。 目的:建立成年wistar大鼠肝卵圆细胞增殖模型,行体外分离和培养肝卵圆细胞,探索体外诱导其分化为肝细胞的可行性。 设计:观察性实验。 单位:南方医科大学南方医院消化病研究所。 材料:实验于2003-12/2006-02在南方医院消化病研究所实验室完成。36只三四个月龄,体质量约150~200g的健康雄性Wist“大鼠,南方医科大学实验动物中心提供。 方法:将雄性Wistar大鼠行乙硫氩酸灌喂和2/3肝切除。采用两步法灌注和Percoll密度梯度离心法分离纯化肝卵圆细胞,行体外培养并添加肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M和成纤维细胞生长因子4诱导其分化。 主要观察指标:肝卵圆细胞和诱导分化细胞的鉴定。 结果:①体外分离每只模型大鼠肝脏中可获得约1.34×10^8L^-1肝卵圆细胞,细胞为圆形、椭圆形或多角形,约为正常肝细胞1,6~1/3,核质比例大,2周后可呈克隆样增殖生长。②激光扫描共聚焦显微镜显示,肝卵圆细胞胞浆和胞膜表达干细胞标志11hy.1及c-kit。③免疫细胞化学检测其原始细胞标志甲胎蛋白呈阳性表达。肝卵圆细胞能稳定传代,肝卵圆细胞在肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M和成纤维细胞生长因子4刺激下细胞形态逐渐发生改变,细胞伸展且体积渐增大,贴壁能力减弱,诱导14d后分化细胞A1b明显阳性表达,且随着诱导时间的延长,其阳性率逐渐升高。④细胞化学方法显示诱导分化细胞胞浆G-6-P染色呈棕黑色沉淀,PAs染色呈红色颗粒。 结论:乙硫氨酸灌喂联合2,3肝切除可复制成年Wistar大鼠的肝卵圆细胞增殖模型。胶原酶灌注结合PeTcoll密度梯度离心分离纯化可获得满意的肝卵圆细胞。大鼠肝卵圆细胞能在体外传代培养,在一定条件刺激下可诱导分化为肝细胞。
  • 应用超声技术评价骨髓间充质干细胞移植后兔缺血心肌的变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:近年的研究发现,骨髓间充质干细胞有修复损伤心肌,改善整体心脏功能的作用,但目前尚无有效的无创方法定量检测骨髓间充质干细胞移植后室壁运动、移植细胞的存活性和微循环改善情况。 目的:借助超声背向散射技术及组织多普勒成像技术观察骨髓间充质干细胞移植对缺血心肌心功能的影响及组织声学特性的改变。设计、时间及地点:完全随机分组设计,随机对照试验,于2004-12/2005-06在211国家重点试验室武汉大学人民医院心内科完成。 材料:选用成年日本大耳白兔48只,雌雄不拘,由湖北省实验动物中心提供。实验遵从美国国家卫生研究院关于实验动物使用和照顾指南(美国国家卫生研究院出版,版号:85-23,1996年修订)。实验用抗TnT抗体为美国Maxim公司产品,抗BrdU抗体为美国Sigma公司产品;所用仪器为美国HP公司Sonos5500型超声诊断仪。 方法:将48只兔随机分为2组:模型组和移植组,均采用开胸结扎左冠状动脉前降支法建立心肌梗死模型。移植组于造模后第3天取自体骨髓间充质干细胞,将诱导分化后的骨髓间充质干细胞分5点注射入梗死与非梗死区交界处心肌。 主要观察指标:分别在心肌梗死前1d、心肌梗死后2周、移植后4周行常规超声心动图检查,获取各室腔大小、室壁厚度、射血分数,并应用背向散射及组织多普勒成像技术获取左室前壁背向散射积分参数和室壁运动参数,分析后可以得到平均背向散射积分值和背向散射积分周期变化值。再调出TDI图像,测量左室前壁中段和基底段收缩期峰值速度、舒张早期峰值速度、舒张晚期峰值速度。最后处死动物,行心肌梗死区5.溴脱氧尿核苷的免疫组化染色、抗心肌特异肌钙蛋白T染色。 结果:有12只实验兔于心梗或移植后死亡,不计入统计。①超声检查结果:余实验兔在心肌梗死前1d、梗死后2周、移植后4周均获得良好图像。梗死前超声检查36只兔左室形态和收缩功能正常,结扎左冠状动脉前降支2周后,两组实验兔左心室腔均扩大,左室前壁变薄,收缩活动减弱至消失,射血分数降低、背向散射积分周期变化值、收缩期峰值速度、舒张早期峰值速度显著降低(P〈0.05)、平均背向散射积分值升高(P〈0.05),为成功的心肌梗死模型;移植后4周,与模型组和移植组移植前比较,移植组左室前壁收缩幅度增大,左室舒张期内径缩小、射血分数升高,平均背向散射积分值降低、背向散射积分周期变化值、收缩期峰值速度、舒张早期峰值速度显著提高(P〈0.05)。②心肌标本免疫组化检查结果:移植组梗死区内可见大量5-溴脱氧尿核苷标记阳性细胞散在分布,其抗心肌特异肌钙蛋白T染色阳性,显示清晰的心肌横纹,而正常心肌阴性。 结论:①骨髓间充质干细胞移植后能在缺血心肌内存活并改善缺血心脏心脏功能。②超声及其背向散射及组织多普勒成像技术能够实时、准确地检测出兔梗死心肌骨髓间充质干细胞移植后的功能变化。
  • Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:胚胎干细胞是体内各种成熟细胞的“种子”细胞,是神经移植和发育基因功能研究的有利工具。Notchl信号是多种神经细胞有序分化的关键性调控通路,目前对其在胚胎干细胞诱导分化过程中的动态表达尚无报道。 目的:探讨胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化过程中,跨膜信号分子Notch1蛋白的表达。 设计、时间及地点:细胞观察,于2003—1-2004—10在中山大学中山眼科中心完成。 材料:中山大学实验动物中心自建BALB/C小鼠胚胎干细胞Ⅵ株,具备XY染色体,正常核型比例80%以上,由中山大学中山眼科中心黄冰教授惠赠。 方法:胚胎干细胞复苏后,加入含20%胎牛血清、10^6IU/L小鼠白血病抑制因子的高糖DMEM细胞培养基,置于37℃、5%CO2培养箱中,两三天常规消化传代。向传至11代的胚胎干细胞中加入含20%胎牛血清、5×10^-7mol/L维甲酸的高糖DMEM诱导分化培养基,设立诱导1,5,9d3个观察时间点。 主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态变化。免疫荧光化学检测成熟神经元标志性抗原MAP-2的表达。免疫细胞化学、Western Blot法及流式细胞术检测Notch1蛋白的表达。 结果:胚胎干细胞呈克隆样生长,至诱导第9天大部分克隆周围为单一密集的神经网络。随着诱导时间延长,胚胎干细胞分化出的MAP-2阳性神经细胞数逐渐增多。胚胎干细胞克隆内的细胞几乎均呈Noahl强阳性或阳性表达,诱导分化后Notch1蛋白的表达随时间延长而逐渐降低(P〈0.01)。 结论:在胚胎干细胞向神经细胞的诱导分化过程中,Notch1信号逐渐关闭,提示Notch1可能对胚胎干细胞向神经细胞的特异性分化起重要作用。
  • 改良体外培养方法及诱导剂配比条件下骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓间充质干细胞取材方便,易于体外扩增,其体外培养方法及诱导分化仍需要改良。 目的:对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养方法及诱导剂配比进行改良,观察骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的潜能。 设计:观察实验。 单位:解放军广州军区广州总医院医学实验科。 材料:实验于2004-07/2006-06在解放军广州军区总医院医学实验科干细胞组织工程实验室完成,选用20只成年SD大鼠,清洁级,雌雄不拘,体质量140-180g,由解放军广州军区广州总医院动物实验中心提供。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。β-甘油磷酸纳,地塞米松,维生素C均为美国Sigma公司产品,羊抗大鼠骨钙素抗体购自美国DSL公司,S—P免疫组化试剂盒为福建迈新生物技术开发有限公司产品。 方法:采用改良法进行细胞的培养及诱导细胞成骨。①骨髓间充质干细胞分离及培养:大鼠麻醉后处死分离双侧股骨、胫骨骨髓制备单细胞悬液接种于培养瓶中,培养后48及96h半量更换培养液,以去除未贴壁的造血细胞,以后每3d换液1次,进一步去除未贴壁的细胞,待细胞汇合约80%时,用0.25%胰蛋白酶消化,按1:2传代培养。将第2代骨髓间充质干细胞接种于6孔培养板和玻璃平皿中,48h后吸去基础培养液。②骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化:应用含终浓度分别为10mmol/L、10^-7mol/L、50mg/L的地塞米松、β-甘油磷酸纳和维生素C的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化。 主要观察指标:①应用改良的培养方法及自行配比的培养液诱导分化后10d采用钙钻法测定碱性磷酸酶活性。②培养后12d采用免疫组织化学法检测骨钙素分泌情况。③诱导培养后2周采用Vonkossa染色检测细胞矿化作用。 结果:①碱性磷酸酶活性:经诱导后细胞碱性磷酸酶染色明显,胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀,碱性磷酸酶活性部位呈棕黑色。②骨钙素分泌情况:细胞经诱导后骨钙素阳性较明显,胞核呈蓝色,胞浆呈棕色。③细胞矿化作用:细胞经诱导培养后呈复层生长,并出现不透明结节,Von kossa染色可见黑色的矿化结节颗粒,颗粒大小不均一,提示有矿化基质沉积。 结论:改良法可成功培养及诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨。
  • 脐血间充质干细胞静脉移植治疗缺氧缺血性脑损伤的时效性 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究证实,使用间充质干细胞移植治疗成年动物缺氧缺血性脑损伤已取得了一定的疗效,但新生动物模型较少见。治疗所使用的间充质干细胞基本上都来源于骨髓,使用脐血间充质干细胞的研究报道较少。 目的:将脐血间充质干细胞从尾静脉注入新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型,探讨脐血间充质干细胞移植治疗的可行性及时效性。 设计、时间和地点:完全随机对照的动物实验,于2004—10/2005—07在南昌大学第一附属医院神经内科实验室完成。 材料:选用健康新生7d龄SD大鼠38只制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,死亡3只。 方法:采集23~35岁健康孕妇足月顺产儿的脐带血体外培养脐血间充质干细胞。移植前应用4’,6二脒基-2-苯吲哚盐酸体外标记间充质干细胞。造模成功的35只大鼠随机分为3组:早期移植组12只造模后第2天经鼠尾静脉注入脐血间充质干细胞;晚期移植组12只造模后1周进行移植;对照组11只注射等量的生理盐水。早期移植组和晚期移植组于移植后第2天以及造模后2周分别随机取6只大鼠,对照组于造模后2d,1和2周分别取3,4,4只大鼠麻醉后处死。取脑和海马回区的缺血脑组织制作冰冻切片。 主要观察指标:苏木精-伊红染色观察脑组织病理形态学改变。荧光显微镜观察脑组织4’,6二脒基-2-苯吲哚盐酸阳性细胞。 结果:对照组缺血区脑水肿,神经细胞肿胀,细胞数减少;早期移植组于移植后病灶侧脑内很少见到4’,6二脒基-2-苯吲哚盐酸阳性脐血间充质干细胞分布,其脑组织水肿程度及细胞外间隙的改善和细胞数目的增加也不明显;晚期移植组,造模后1周缺血脑组织细胞外间隙缩小,细胞数明显增加,脑组织水肿已明显减轻,在大鼠病灶侧脑内,可见大量的4’,6二脒基-2-苯吲哚盐酸阳性细胞向病灶区及周围迁移和扩散,没有明显的界限。 结论:脐血间充质干细胞能有效透过血脑屏障,在病灶脑组织周围迁移、扩散、整合;选择缺氧缺血性脑损伤后1周时进行移植效果较好。
  • 转染血管内皮细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死区血管新生的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓间充质干细胞作为基因载体,有利于外源基因保持良好的遗传稳定性,如能将血管内皮细胞生长因子基因转入间充质干细胞内移植到心肌梗死区,可望获得基因和细胞治疗相互协同促进的作用。 目的:观察转染血管内皮细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌梗死区血管新生及血管内皮细胞生长因子基因的体内表达。 设计、时间及地点:实验于2004/2007年在湖南省儿童医院儿科研究所,中南大学湘雅二医院中心实验室完成的随机对照实验。 材料:实验动物为雄性清洁级Wistar近交系大鼠。以冠脉结扎法制备大鼠心肌梗死模型。 方法:以密度梯度离心与贴壁培养法获得大鼠骨髓间充质干细胞。当间充质干细胞生长汇合率为80%~90%时以脂转法转染pcDNA3A-hVEGF165质粒。心肌梗死模型大鼠随机分4组进行干预:联合组于心肌梗死区移植转染血管内皮细胞生长因子基因的间充质干细胞,细胞组移植间充质干细胞、基因组注射脂质体一pcDNA31—VEGF165DNA复合物,对照组注射等容积培养液。 主要观察指标:移植4周后,各组大鼠心肌梗死区毛细血管密度,血管内皮细胞生长因子基因表达。 结果:大鼠心肌梗死区毛细血管密度以联合组和基因组最高,高于细胞组(P=0.001,0.029),细胞组高于对照组(P=0.028)。RT-PCR显示血管内皮细胞生长因子基因体内的表达从高到低依次为联合组、基因组、细胞组和对照组。结论:①作为血管内皮细胞生长因子基因的载体,骨髓间充质干细胞有利于其的稳定表达。②转染血管内皮细胞生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植有利于大鼠心肌梗死区的血管新生,其疗效优于单独应用基因或细胞治疗。
  • 不同胎龄大鼠神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化的比较 免费阅读 下载全文
  • 背景:胚胎来源干细胞的分化潜能不仅受到诱导条件影响,也受来源胚胎胚龄的影响。 目的:实验拟观察不同胎龄大鼠中脑神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化能力。 设计:随机对照观察。 单位:中山大学附属第一医院神经外科。 材料:实验于2007—03/2007—09在中山大学附属第一医院实验室完成。成年孕SD大鼠30只,体质量350~400g,由中山大学动物实验中心提供。许可证号码为SCXK(粤)2007—0034。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。DMEM/F12无血清培养液、B27添加剂、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、体积分数为0.1的胎牛血清为英国Gibco公司产品;白细胞介素1α,白细胞介素11、胶质细胞源性神经营养因子购自美国R&D公司;白血病抑制因子购自英国PEPROTECH公司;酪氨酸羟化酶抗体购自美国Santa Cruz公司;巢蛋白抗体、微管相关蛋白2抗体及胶质纤维酸性蛋白抗体为美国CHEMICON公司产品。 方法:①分别于大鼠孕10,12,14,16,18天摸球法随机选取6只,麻醉后处死孕鼠,无菌条件下剖腹取胚胎,分离中脑腹侧脑组织进行神经干细胞培养。在含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中分别培养不同胎龄大鼠脑神经干细胞,经传代扩增后,在含白细胞介素1α、白细胞介素11、白血病抑制因子、胶质细胞源性神经营养因子的诱导分化液中向多巴胺能神经元分化。②诱导分化6d后观察分化细胞生长情况并进行免疫细胞化学鉴定;酪氨酸羟化酶染色标记后通过流式细胞仪检测分化的多巴胺能神经元比率。 主要观察指标:①不同胎龄大鼠神经干细胞诱导分化后生长情况及免疫细胞化学鉴定结果。②神经干细胞诱导分化后酪氨酸羟化酶染色阳性细胞的比率。 结果:①孕10,12,14,16,18d胚胎大鼠中脑神经干细胞球在诱导分化液中贴壁生长,球内细胞从球体中央逐渐向外呈放射状生长,分化6天的细胞多数有1~2个长突起或有多个短突起。神经球经巢蛋白免疫细胞化学染色,大部分细胞胞浆染色呈阳性。②孕10,12,14,16,18d胚胎大鼠中脑神经干细胞在诱导分化液中培养6d后,流式细胞仪检测其诱导分化成酪氨酸羟化酶阳性细胞的比率分别为(10.3±2.5)%,(21.6±3.4)%.(16.7±2.8)%,(14.2±3.2)%,(8.9±1.8)%,各组间比较差异均有显著性意义(P〈0.05),其中孕12d大鼠中脑神经干细胞诱导分化成多巴胺能神经元比例最高。 结论:不同胎龄大鼠中脑的神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化的能力不同,以孕12d诱导分化成多巴胺能神经元比例最高。
  • 黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:体外培养扩增的骨髓间充质干细胞可诱导分化为神经细胞,但是有些诱导剂有一定的毒性,不能应用于人体内。 目的:以黄芪为诱导剂,诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞。 设计、时间及地点:随机对照实验,于200201/2005—01在大理学院基础医学院的云南省重点实验室和四川大学基础医学院与法医学院的干细胞研究中心完成。 材料:6周龄健康SD大鼠,体质量120~130g。 方法:以密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞,并传代扩增。采含体积分数为0.125的黄芪无血清L—DMEM培养液诱导分化为神经样细胞,观察细胞形态变化,以免疫组织化学染色方法检测分化细胞中巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达。 主要观察指标:①诱导分化细胞的免疫组织化学鉴定。②RT—PCR方法半定量分析相关基因Ngn-1和Wnt-1基因在诱导过程中的表达。结果:经传代后,骨髓间充质干细胞呈纤维细胞样,有较强的增殖能力。经黄芪诱导后,细胞形态发生改变,巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白均阳性。Ngn-1和Wnt-1基因在黄芪诱导骨髓间充质干细胞过程中表达量升高。 结论:骨髓间充质干细胞在黄芪诱导下可向神经样细胞分化。Ngn-1和Wnt-1基因在其分化过程中起正调控作用。
  • 2008年向CRTER投稿登陆作者稿件远程处理平台 免费阅读 下载全文
  • CRTER2008年综述类稿件体例(4.0-6.0版/篇) 免费阅读 下载全文
  • NRR近期组稿重点内容 免费阅读 下载全文
  • NRR已出版的文章被SCI引文库、CA、EM数据库收录情况 免费阅读 下载全文
  • NRR杂志2006年出版稿件的基本参数及被SCI引文库、CA、EM数据库收录情况 免费阅读 下载全文
  • CRTER发表文章被SCI引文库、CA、EM数据库收录的最新数据 免费阅读 下载全文
  • CRTER为国际投稿作者服务 免费阅读 下载全文
  • 骨髓间充质干细胞体外诱导分化及在细胞工程和基因工程中的应用 免费阅读 下载全文
  • 学术背景:骨髓间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,其体外诱导分化的不同组织对于骨及软骨组织工程、心血管疾病、神经系统疾病、免疫系统疾病等的治疗具有广阔的应用前景。 目的:总结骨髓间充质干细胞体外诱导分化的研究进展。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1998-01/2008—01期间的相关文献,检索词为“Mesenchymal stem cell,differtation,neuron,osteoblast,Chondrocyte,adipocyte,sarcoblast,endotheliocyte,Tissue repair,gene therapy”并限定文苹语言种类为English。同时检索万方数据库2002-01/2008-01期间的相关文献,检索词为“骨髓间充质干细胞,诱导分化,神经细胞,基因治疗”。共检索到52篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与骨髓间充质干细胞体外诱导分化密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:重复性研究。27篇文献符合纳入标准,排除的25篇为内容陈旧或重复文献。 文献评价:文献的来源主要是骨髓间充质干细胞体外诱导分化方面的随机对照实验。5篇涉及体外诱导分化为神经细胞的研究,4篇涉及体外诱导分化为成骨组织的研究,1篇涉及体外诱导分化为软骨组织的研究,2篇涉及体外诱导分化为脂肪细胞的研究,2篇涉及体外诱导分化为成肌细胞研究,3篇涉及体外诱导分化为内皮细胞的研究,3篇涉及体外诱导分化为肝细胞的研究,7篇涉及其在医学上的应用。 资料综合:骨髓间充质千细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,在不同生物环境和细胞因子的作用下可分化为不同类型的细胞。研究表明,骨髓间充质干细胞在体外适宜的诱导条件下可以分化为神经、成骨、软骨、脂肪、心肌、肝脏等多种细胞,而且骨髓间充质干细胞在组织修复和基因治疗方面的应用已取得较大进展,在人类医学上具有广阔的应用前景。 结论:骨髓间充质干细胞被认为是细胞工程和基因工程理想的种子细胞,并开启了临床应用干细胞治疗的时代。
  • 神经递质与神经干细胞分化 免费阅读 下载全文
  • 学术背景:干细胞的自我更新、增殖和分化主要依赖于周围特殊的微环境。神经递质不仅介导神经元之间和神经元与效应器之间的信息传递,其作为细胞外环境中的一员,也参与神经干细胞的增殖与分化。 目的:深入认识几种重要的神经递质对神经干细胞分化的影响。 检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1998—01/2006—01的相关文献,检索词“nerval stem cells,differentiation,neurotransimitters”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1998-01/2006—01的相关文献,检索词“神经干细胞,分化,神经递质”,并限定文章语言种类为中文。共检索到94篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与神经递质及神经干细胞分化密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。 文献评价:文献的来源主要是通过对神经递质在神经干细胞分化中的重要作用进行汇总分析。所选用的30篇文献中,1篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。 资料综合:神经递质是神经元合成的化学物质,起着传导信息的作用。谷氨酸作为中枢神经系统一种主要的兴奋性递质,对突触信息的传递和贮存、突触可塑性的形成和维持产生重要影响。氨基丁酸是脑内含量较高的抑制性神经递质,介导大约30%~40%中枢神经系统神经元的功能,此外还具有自分泌/旁分泌功能。乙酰胆碱可通过激活α-7样烟碱乙酰胆碱受体导致原代培养新生大鼠嗅球细胞神经突起过度生长。一氧化氮广泛参与神经细胞的存活、分化和可塑性的发生。在成体脊髓、脑干和一些脑区,甘氨酸受体通过突触后细胞膜Cl^-通透性而起到突触后抑制作用。 结论:神经递质作为细胞“微环境”的一部分,与神经干细胞的分化密切相关,其如何影响神经干细胞的体外增殖及大量定向诱导分化为神经元是目前研究关键所在。
  • 许旺细胞对周围神经再生的促进效应 免费阅读 下载全文
  • 学术背景:许旺细胞是周围神经纤维的鞘细胞,是周围神经不可缺少的一部分。在周围神经损伤修复过程中,如何运用和调控许旺细胞的活性成为周围神经领域内的研究热点。 目的:深入认识许旺细胞的作用及其促周围神经再生的研究进展。 检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Science Direct及PUBMED数据库1990—01/2007—10的相关文献,检索词“schwann cells,peripheral nerve injury,proliferation,macrophage,activation,neurotrophic factors,extracellular matrix,adhesion molecule,axon,interaction,myelination,transplantation,gap,transgene,over—expressing,isolation,purification,stemcells”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1990—01/2007—10的相关文献,检索词“雪旺氏细胞,周围神经再生,人工神经移植物”,并限定文章语言种类为中文。共检索到285篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与许旺细胞促周围神经再生密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。 文献评价:文献的来源主要是通过对许旺细胞促周围神经再生的作用机制与应用及其相关研究进展进行汇总分析,所选用的48篇文献中,2篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。 资料综合:①周围神经损伤后,其远侧段轴突及髓鞘崩解,同时许旺细胞大量增殖,增殖的许旺细胞在基底膜管内形成Bungner带,引导再生轴突的生长并最终形成新的髓鞘;增殖的许旺细胞还通过激活单核/巨噬细胞清除组织碎片、分泌神经营养因子以及维持受损神经元的活力、抑制其凋亡,进一步促进周围神经的再生;并且通过许旺细胞与再生轴突之间的缝隙连接和紧密连接,使得再生过程中物质交换和信息交换更为便捷和有效的进行。②目前大量研究尝试利用许旺细胞促进周围神经再生,许旺细胞与人工神经移植物共同运用在动物实验中已经取得了显著功效。随着转基因技术的发展,遗传修饰的许旺细胞成为研究热点。③许旺细胞的分离纯化技术从最早的反复植块法、消化法,到以heregulin/forskolin处理细胞然后用神经切断造模法,再到最近的抗体磁珠分选法,体外培养许旺细胞的纯度得到不断提升。④实验证明间充质干细胞诱导后可以分化为表达p75、S100、GFAP等胶质细胞的标志性分子,并能显著促进轴突生长和髓鞘形成。 结论:许旺细胞促进周围神经再生的作用已受到广泛肯定,但其作用的信号通路仍不确定。正确诱导许旺细胞分化为成熟的成髓鞘许旺细胞、保证其在损伤局部的存活是修复周围神经损伤的关键。
  • 人羊膜上皮细胞的研究进展 免费阅读 下载全文
  • 人羊膜上皮细胞源于胎盘羊膜组织,表达干细胞标志分子及相关基因,但不表达端粒酶基因,具有非致瘤性,同种异体移植后不发生免疫排斥反应,同时还可分泌免疫抑制因子,防止移植后炎性反应的发生,因此可以看作是免疫赦免细胞。人羊膜上皮细胞具有明显的可塑性和多向分化潜能,在不同生长因子的调节下,可分化为肝样细胞、心肌样细胞、神经胶质细胞、神经元细胞和胰岛样细胞等,在细胞替代治疗及组织再生医学上有广阔的应用前景。尽管如此,仍还不能将人羊膜上皮细胞称之为严格定义上的干细胞,因其不具有长期的自我更新和产生单个细胞克隆的能力,此外人羊膜细胞在体内分化成有功能的各种细胞类型需要进一步研究证实。
  • 干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究与进展 免费阅读 下载全文
  • 学术背景:干细胞是一群较原始的细胞,它们具有自我更新和多向分化潜能,可以被诱导分化为胰岛素分泌细胞,理论上可提供丰富的胰岛细胞来源。 目的:本文就近年来干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究进展做一综述。 检索策略:应用计算机检索Pubmed和CNKI数据库1990.2007年期间相关文献,检索词为“干细胞,诱导分化,胰岛素分泌细胞,stem cell,differentiation,islet-producing cell”。对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的研究进展。排除标准:重复研究。 文献评价:共收集到相关文献162篇,选择其中49篇文献进行重点阅读和分析。49篇文献中,1篇涉及糖尿病及其并发症的治疗,1篇涉及胰岛细胞移植,1篇涉及干细胞在糖尿病治疗中的应用,13篇涉及胚胎干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究,4篇涉及脐血来源的干细胞体内分化为胰岛素分泌细胞的研究,10篇涉及骨髓来源的干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究,13篇涉及胰腺干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究,6篇涉及其它器官来源的干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究。 资料综合:胰岛细胞移植可以用来治疗1型和部分2型糖尿病,但由于供体细胞来源匮乏,因而寻找新的细胞来源成了当务之急。近年来,干细胞研究为新型胰岛细胞的来源带来了希望。目前用于胰岛细胞来源研究的干细胞主要有胚胎干细胞和成体干细胞,后者根据细胞来源不同分为脐血来源干细胞、骨髓来源干细胞、胰腺干细胞及其他器官来源的干细胞。目前的研究显示,骨髓来源的干细胞可以在体内促进胰腺的再生,并且可以在体外被诱导分化为胰岛样细胞。 结论:深入了解干细胞向胰岛β细胞诱导分化的分子调控机制,将会加快糖尿病细胞治疗的研究进展。
  • 表皮干细胞生物学特性研究现状 免费阅读 下载全文
  • 表皮干细胞是来源于胚胎外胚层皮肤组织的专能干细胞,主要分布于表皮基底层和毛囊隆突部,形态学上具有未分化细胞的特征,在生物学方面是皮肤及其附属器发生、修复、改建的源泉。现阶段对表皮干细胞的鉴定需采用整合素、角蛋白、增殖细胞核抗原、基因物质及连接蛋白等多个标记物,其增殖分化受整合素、信号转导通路及细胞因子等因素影响。目前表皮干细胞研究在皮肤创面修复、组织工程皮肤的构建、基因治疗等方面均已取得显著进展,但仍存在如何确立一种绝对公认的特异标记物、从胚胎干细胞向表皮干细胞分化培养过程中怎样维持其干细胞特性以及快速大量扩增、应用于临床是否会恶性变而产生医疗安全等急需解决的问题。
  • 神经干细胞研究现状及在运动医学领域中的应用 免费阅读 下载全文
  • 学术背景:神经干细胞移植是修复和替代受损神经元的有效方法,可部分重建细胞环路和功能,目前基础实验研究已经应用于帕金森、癫痫和脑坏死等鼠类和灵长类动物模型,已证实行为学训练可促进脑梗死大鼠齿状回区神经干细胞的迁移能力。 目的:深入认识当前神经干细胞的研究现状及运动对其产生的影响,总结神经干细胞在运动医学领域的应用情况。 检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1994—01/2007—06的相关文献,检索词“Exercise Training,Neural stem cells,Cells Induction,Movement disorders”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1999-01/2007—06的相关文献,检索词“神经干细胞,细胞诱导,运动训练,运动性疾病”,并限定文章语言种类为中文。共检索到278篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与神经干细胞的研究现状及其在运动医学领域的应用密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。 文献评价:文献的来源主要是通过对当前神经干细胞的研究进展、运动引起神经干细胞的变化以及神经干细胞在体育教学训练和竞技体育运动方面的应用情况进行汇总分析。所选用的29篇文献中,10篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①神经干细胞源于胚胎干细胞和成年干细胞,存在部位包括胚胎脑的端脑、小脑、海马、纹状体、大脑皮质、脑室,脑室下区、室管膜,室管膜下区、脊髓和成年脑的脑室下区、纹状体、海马齿状回、脊髓等处。神经干细胞除具有自我更新和多向分化潜能两个基本特性外,还存在转分化性(可塑性)、无限增殖分裂、可对称或不对称分裂、损伤或疾病状态下能刺激其增殖分化、迁移能力、低免疫原性等特征。神经干细胞能够特异性表达巢蛋白、波形蛋白、Musashil蛋白及RCI抗原。②神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病主要表现在神经干细胞在神经发育及损伤的修复中发挥作用。植入到神经组织后可整合入神经通路,使治疗基因的表达受到微环境调控,分化产生的神经细胞将逐渐替代有缺陷或死亡的神经细胞,是脑卒中、脱髓鞘病、多发性硬化症等神经系统疾病基因治疗的理想载体。③在运动医学领域,神经干细胞研究的重点是如何将神经干细胞诱导成所需要的细胞类型用于防治一些常见的运动性疾病,诸如由于中脑的神经细胞变性引起神经递质多巴胺减少,导致运动功能发生障碍的帕金森氏病、运动性心脑血管疾病等。利用干细胞技术治疗膝关节半月板损伤,创伤小、方便易行且没有后遗症。 结论:神经干细胞在中枢神经系统疾病、基因治疗、相关的诱导分化、心肌损伤以及治愈膝关节半月板损伤等方面具有广阔应用前景。由于运动员的机体是一个错综复杂的因子网络,细胞活动受内环境信号间相互作用的调控,如何建立相应的机制或假说来解释观察到的各种相关运动所引起神经干细胞改变现象及体内效应仍需深入研究。
  • 骨髓间充质干细胞动员及在缺血性心肌疾病治疗中的应用 免费阅读 下载全文
  • 学术背景:自体骨髓间充质干细胞动员修复坏死心肌是一种安全有效治疗缺血性心肌病的方法。 目的:总结骨髓间充质干细胞动员治疗缺血性心肌病的研究进展。 检索策略:由作者检索Pubmed数据库1996—12/200612的相关文献,检索词“bone marrow stem cells,myocardial infarction”。对资料进行初审,纳入标准:①与骨髓间充质干细胞治疗缺血性心肌疾病中的应用。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:重复性研究。 文献评价:文献的来源主要是骨髓间充质干细胞治疗缺血性疾病的随机对照试验。所选用的28篇文献中,2篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。 资料综合:①骨髓间充质干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,在合适细胞因子调控下可分化为心肌样细胞。②研究表明,骨髓血液循环中的干细胞可以定向到达梗死心肌并参与组织再生。③关于骨髓间充质干细胞在治疗缺血性心脏疾病方面的研究虽已取得较大进展,但仍存在许多问题,如种子细胞的保存;细胞体外培养中分化增殖的调控机制不十分清楚;产生的心肌样细胞的生物力学性能不太满意。 结论:骨髓间充质干细胞动员在治疗缺血性心肌病方面,具有操作方法简便、快捷,对患者创伤小,自体移植不存在免疫排斥的优势,但仍存在许多尚未解决的问题。
  • 骨髓间充质干细胞在软骨组织工程中的应用 免费阅读 下载全文
  • 骨髓基质干细胞应用于软骨组织工程已近20年,这方面的研究也成为干细胞领域的研究热点。本文通过检索文献对骨髓间充质干细胞在软骨组织工程中应用的情况、取得的最新进展及面临的主要问题作一综述。随着分子生物学、生物材料学、计算机及纳米生物技术的发展,以骨髓间充质干细胞为种子细胞复合生物材料支架构建的组织工程软骨在修复关节软骨缺损中将具有广阔的应用前景。
  • 人胚胎嗅鞘细胞脑内移植治疗脑卒中后疼痛1例 免费阅读 下载全文
  • 目的:探讨人胚胎嗅鞘细胞脑内移植对脑卒中后中枢性疼痛的有效性。 方法:取4个月中期流产胚胎的嗅球,孕妇及其家属对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准,消化成单个嗅鞘细胞后,培养2周。供、受体细胞HLA配型后行人胚胎嗅鞘细胞脑内移植。1例72岁男性患者因“右侧肢体感觉、运动障碍伴疼痛8年”入院。入院后诊断:①脑出血后遗症。②原发性高血压。于入院后第4天在局麻下采用人胚胎嗅鞘细胞脑内移植,细胞植入到脑出血侧放射冠处,注射细胞数约1×10^10L^-1。移植前后2~4周分别采用临床神经功能评定量表、Barthel Index评定量表评价患者神经功能。临床神经功能缺损评定标准:轻型:0~15分,中型:16~30分,重型:31—45分;Barthel Index评定量表评定标准:60分以上提示被检查者生活基本可以自理,41-60分者生活需要帮助,20—40分者生活需要很大帮助,20分以下者生活完全需要帮助,Barthel指数40分以上者康复治疗的效益最大。 结果:嗅鞘细胞移植后患者无发热、血小板变化等血液相容性不良反应及其他并发症。术后第1天,患者自诉右侧肢体疼痛较以前减轻70%,肌张力较以前有所减轻,右手活动较以前灵活。腰部肌力较以前增加。术后第2天,右侧肢体疼痛较以前减轻80%,右手及脚趾活动较以前灵活。术后第5天,右侧肢体疼痛较以前减轻90%,肌张力继续降低。术后3周患者病情平稳出院。临床神经功能缺损评分总分由12分增至14分;Barthel Index评分前后无变化为85分。 结论:人胚胎嗅鞘细胞脑内移植对卒中后疼痛近期效果理想,长期效果有待随访。
  • 广西中医学院附属瑞康医院器官移植泌尿外科 免费阅读 下载全文
  • 广西中医学院附属瑞康医院器官移植泌尿外科是该院重点临床学科及外科学硕士培养点,是厂西区内学科分组最完善、技术力量最雄厚、仪器设备最先进、人员学历最高的泌尿外科之一。现有专业技术人员38人,其中教授、主任医师1人,副教授、副主任医师3人,博士2人,硕士6人,硕士生导师3人,出国进修1人,主治医师8人。目前有中华医学会广西器官移植分会副主任委员、广西中西医结合学会外科常委、广西中西医结合男科委员会主任委员秘书长、《中国组织工程研究及临床康复》常务编委、
  • [技术与方法]
    特发性血小板减少性紫癜患者CD4^+CD25^+Treg细胞的表达(沈权 司今 俞立权 金哈斯)
    血管内皮生长因子对骨髓瘤骨髓基质细胞分泌白细胞介素6的影响
    白血病小鼠单倍型相合骨髓移植的归巢
    自体骨髓间充质干细胞移植治疗免肾缺血再灌注损伤
    人骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者T细胞增殖影响的体外实验(董毅 李庆生 夏瑞祥 曾庆曙 蔡学杰)
    以SEAM预处理方案行自体外周血干细胞移植治疗非何杰金淋巴瘤
    内皮祖细胞移植对大鼠心肌梗死后缺血心肌血管再生及心功能的影响
    经冠状动脉内注射体外培养骨髓间充质干细胞的安全性
    骨髓间充质干细胞成肌诱导后移植对延缓失神经肌肉萎缩的作用(彭建平 何继业 王栋梁 陈晓东)
    转化生长因子β2诱导鼠脂肪间充质干细胞向软骨细胞的分化(鞠晓东 于长隆 敖英芳)
    胰岛干细胞转分化胰岛样细胞与天然胰岛功能的比较(李富荣 龙爱梅 齐晖 李路 任莉莉)
    穴位移植同种异体骨髓间充质干细胞对梗死区心肌再生的影响
    在人子宫内膜饲养层上生长的人原始生殖细胞生物学特性
    重组腺病毒介导的肝细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞源性脂肪细胞
    鼠表皮干细胞的稳定分选方法及其体外培养体系建立
    细胞因子在体外诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化过程中的作用
    AdCMV-BMP-7促进兔骨髓基质细胞的成骨分化
    骨髓间充质干细胞对缺氧微环境的耐受性
    大鼠气管干细胞增殖分化过程中Wnt/β-Catenin信号分子的表达
    中药祛脂素对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞脂肪分化的干预
    不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较
    成人脂肪间充质干细胞冻存前后的生物学特性
    小鼠子宫蜕膜基质细胞的分离培养(徐英萍 王家富 李伟 宋文刚)
    bmi-1原癌基因在不同来源CD34^+细胞的表达
    人CD4和IHLA-DR0401表达载体转化扩增及其在L929细胞中的表达
    骨髓间充质干细胞移植修复大鼠坐骨神经挤压伤
    胎儿肠壁结缔组织诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞
    大鼠肝卵圆细胞体外分离培养和向肝细胞的诱导分化
    应用超声技术评价骨髓间充质干细胞移植后兔缺血心肌的变化
    Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达
    改良体外培养方法及诱导剂配比条件下骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化
    脐血间充质干细胞静脉移植治疗缺氧缺血性脑损伤的时效性
    转染血管内皮细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死区血管新生的影响(周文武 高纪平 李梨平)
    不同胎龄大鼠神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化的比较
    黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞(杨新文 王勇)
    [信息导读]
    2008年向CRTER投稿登陆作者稿件远程处理平台
    CRTER2008年综述类稿件体例(4.0-6.0版/篇)
    NRR近期组稿重点内容
    NRR已出版的文章被SCI引文库、CA、EM数据库收录情况
    NRR杂志2006年出版稿件的基本参数及被SCI引文库、CA、EM数据库收录情况
    CRTER发表文章被SCI引文库、CA、EM数据库收录的最新数据
    CRTER为国际投稿作者服务
    [综述与专论]
    骨髓间充质干细胞体外诱导分化及在细胞工程和基因工程中的应用
    神经递质与神经干细胞分化
    许旺细胞对周围神经再生的促进效应(顾丹丹 张沛云)
    人羊膜上皮细胞的研究进展
    干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究与进展
    表皮干细胞生物学特性研究现状(蓝蔚 刘德伍 毛远桂)
    神经干细胞研究现状及在运动医学领域中的应用(屈红林 彭瑞)
    骨髓间充质干细胞动员及在缺血性心肌疾病治疗中的应用(虞桂平)
    骨髓间充质干细胞在软骨组织工程中的应用(黄涛 吕刚)
    [经验交流]
    人胚胎嗅鞘细胞脑内移植治疗脑卒中后疼痛1例

    广西中医学院附属瑞康医院器官移植泌尿外科
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

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