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  • 骨髓间充质干细胞移植后2型糖尿病鼠血糖及肾脏病变的改善 免费阅读 下载全文
  • 背景:胰岛细胞移植可改善胰岛功能,但其来源匮乏。骨髓间充质干细胞可被诱导分化成胰岛细胞,在糖尿病足、糖尿病心肌病、糖尿病神经病变中具有较强的组织修复能力。目的:观察骨髓间充质干细胞移植后在2型糖尿病模型鼠胰腺、肾脏组织中的存活及转归,及对血糖及肾脏病变的改善。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2008-02/07在山西医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。材料:雄性Wistar大鼠由山西医科大学实验动物中心提供,造模使用的链脲佐菌素为Sigma公司产品。方法:取1只大鼠体外分离培养骨髓间充质干细胞,反复贴壁纯化,传至第3代行BrdU标记后用于移植。60只大鼠随机分为3组,模型对照组、细胞移植组向标准混合饲料中添加含体积分数为0.1的猪油和蛋黄高脂成分,喂养2个月后向大鼠腹腔内注射链脲佐菌素,血糖≥16.77mmol/L且维持3d稳定代表成功建立2型糖尿病模型。正常组采用标准混合饲料喂养2个月后,向大鼠腹腔内注射等容积柠檬酸缓冲液。造模成功后,细胞移植组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液0.5mL(细胞数1×106个),其余两组注射等量PBS液。主要观察指标:各组大鼠血糖浓度及三酰甘油、胰岛素水平的变化,肾组织病理学变化,细胞在肾脏及胰腺组织中的分布。结果:与移植前比较,移植后7,14,21d模型对照组血糖浓度无明显变化,细胞移植组血糖浓度明显下降(P〈0.001);移植后21d与正常组比较,模型对照组及细胞移植组三酰甘油水平均显著升高(P〈0.001),胰岛素水平均显著降低(P〈0.001),但细胞移植组胰岛素降低幅度小于模型对照组(P〈0.001)。糖原染色结果示模型对照组肾小球发生肥大,细胞移植组肾小球基质变薄,肥大得以改善。胰岛素免疫荧光染色后,模型对照组胰岛细胞明显减少,而细胞移植组胰岛细胞增加,在胰腺、肾脏组织中均可见BrdU标记的阳性细胞。结论:经尾静脉注射骨髓间充质干细胞可定位于2型糖尿病大鼠胰腺及肾脏,并对其进行组织修复,同时可降低血糖,增加胰岛素分泌。
  • 人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活和分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:神经干细胞移植可明显改善受损的神经功能,但在体内外多种因素的影响下,移植的神经干细胞其分化数量和分化方向受到限制。目的:观察人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活、迁移和分化情况。设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2007-04/2008-04在泸州医学院附属医院分子生物实验室完成。材料:SD雌性大鼠30只,由中国医学科学院实验动物研究提供。流产胎儿由泸州医学院附属医院妇产科提供。方法:取流产胎儿大脑皮质,剪碎后消化离心,过滤后取沉淀细胞重新悬浮,加入含成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、白血病抑制因子的DMEM/F12培养基,体外培养获得人胚神经干细胞。30只大鼠通过结扎颈外动脉建立脑梗死模型,行走时向右侧转圈者为成功模型,剔除5只无上述明显症状的失败模型鼠。于造模后24h,以前囟尾侧0.8mm,中线右外侧1.2mm为注射点,每只大鼠移植行BrdU标记的1×10^9L^-1人胚神经干细胞悬液10μL,深度为硬脑膜下3.0-3.2mm。主要观察指标:免疫组织化学及免疫荧光染色观察植入的人胚神经干细胞在脑梗死区的存活、迁移和分化状态。结果:人胚神经干细胞体外培养48h后聚集成球悬浮生长,传三四代后加入血清诱导可见巢蛋白免疫荧光染色呈阳性,发出绿色荧光并聚集成球。BrdU阳性细胞为椭圆形棕褐色,移植后第2,4周均可见其在脑梗死区存活并向周围迁移,且第4周时迁移的范围更广。移植后2周,皮质颗粒层和皮质下均见较多的BrdU阳性细胞,且BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞多于BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞;移植后4周脑梗死区BrdU阳性细胞数明显减少,主要存在于脉络丛和微血管中,且BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞多于BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞。结论:人胚神经干细胞能存活于脑梗死的环境中,并逐渐分化成神经元或星形胶质细胞。移植后期脑实质内存活的神经干细胞明显减少,大量迁移到侧脑室脉络丛和脑表面微血管内,被内皮吞噬系统消化。
  • 自体骨髓单个核细胞移植改善心肌梗死并左心功能不全患者血管内皮功能 免费阅读 下载全文
  • 背景:内皮功能障碍与多种心血管疾病危险因素相关,主要体现为一氧化氮的生成减少或功能异常。自体骨髓干细胞移植进行心脏修复具有一定效果,但在治疗早期移植的干细胞对血管内皮细胞功能的影响尚不清楚。目的:探讨自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植后对心肌梗死并左心功能不全患者血管内皮功能的影响。设计、时间及地点:开放性临床实验,于2005-01/2006-12在北京大学第三医院心内科研究室完成。对象:北京大学第三医院同期收治的前壁心肌梗死并已成功再灌注治疗、置入冠状动脉内支架的男性患者16例,年龄33-75岁,按患者意愿分为细胞移植组8例,对照组8例。方法:两组患者均接受标准经皮冠状动脉支架置入和药物治疗,在此基础上,细胞移植组患者抽取自体骨髓液,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,经导管冠状动脉内注入细胞悬液(12.84±4.10)mL,细胞总数为(1.36±0.44)×10^9个,流式细胞仪测定CD34^+细胞为(17.75±8.21)×10^6个。分别于细胞移植前后采集两组患者静脉血,制备血浆标本。主要观察指标:细胞移植前后血浆中一氧化氮、血管性血友病因子及前列环素2水平的变化。结果:与对照组比较,自体骨髓单个核细胞移植后24,72h细胞移植组血浆中一氧化氮浓度均明显升高(P=0.015,P=0.03);血浆中血管性血友病因子、前列环素2水平差异无显著性意义(P〉0.05)。结论:经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植可在短期内提高血浆一氧化氮浓度,且不影响血浆血管性血友病因子及前列环素2水平,提示一定程度上可改善血管内皮舒张功能,且不损伤内皮功能。
  • 重组人粒细胞集落刺激因子动员急性心肌缺血大鼠自体骨髓干细胞归巢缺血心肌的短期安全性评价 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓中存在多潜能干细胞,利用其多向分化和归巢的能力,已成为近年来多种疾病治疗的研究方向。目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞归巢于缺血心肌的高度选择性,并评价其短期安全性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-09/2007-04在吉林大学基础医学院病理生理实验室完成。材料:选取清洁级SD大鼠82只,雌雄各半,体质量250-300g,62只大鼠结扎冠状动脉前降支制成急性心肌梗死模型,20只作为假手术组。方法:造模成功41只,分为模型组(n=20)和动员组(n=21)。模型组:皮下注射生理盐水2mL/d,连续7d;动员组:皮下注射生理盐水稀释至浓度2.5mg/L重组人粒细胞集落刺激因子15μg/(kg·d),连续7d。假手术组:在相应冠状动脉结扎部位穿线,不结扎,其余操作步骤相同,皮下注射生理盐水2mL/d,连续7d。主要观察指标:1周后计数3组大鼠外周血白细胞及单个核细胞百分比,4周后比较3组大鼠在体心功能。并取大鼠心脏、肺脏、肝脏、骨骼肌组织制切片行苏木精-伊红染色及CD34免疫组织化学染色观察心脏组织病理改变,毛细血管密度和CD34+细胞归巢情况。结果:①造模1周后动员组大鼠的外周血白细胞及单个核细胞百分比较动员前明显增加(P〈0.05),且动员组大鼠的外周血白细胞计数及微核细胞率明显高于模型组(P〈0.05)。②造模1周时,动员组较模型组大鼠心肌梗死区可见较多CD34+细胞(P〈0.05);4周时,动员组和模型组均未见CD34+细胞。各组大鼠肝脏、肺脏及骨骼肌各个时段则均无明显差异。造模后4周,动员组心功能各项指标均优于模型组(P〈0.05),梗死面积明显小于模型组(P〈0.05),毛细血管密度明显高于模型组(P〈0.05)。结论:重组人粒细胞集落刺激因子动员心肌梗死后大鼠自体骨髓干细胞到外周血循环并归巢于梗死心肌,并可分化成心肌样细胞及毛细血管内皮细胞,减少心肌梗死范围,改善心功能。短期观察重组人粒细胞集落刺激因子对肺脏、肝脏、骨骼肌无明显组织学影响。
  • 人脂肪神经干细胞移植对大鼠脑缺血后血管新生和细胞因子的作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:大鼠脑缺血后植入脂肪源性神经干细胞可一定程度上恢复神经功能,但具体机制尚不清楚。目的:探讨人脂肪组织来源的神经干细胞移植后,对缺血性脑损伤大鼠血管新生和血管内皮生长因子表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-12/2008-07在华北煤炭医学院中心实验室及形态实验室完成。材料:脂肪组织来源于北京通州区第二医院收治的去除腹部多余脂肪的健康女性。健康雄性SD大鼠50只,随机分为正常对照组5只、假手术组5只、模型对照组20只、细胞移植组20只。方法:无菌条件下分离培养人脂肪组织来源的基质细胞,胰酶消化后取第5代细胞向神经干细胞诱导分化,移植前行BrdU标记,细胞浓度调整为4×10^9L^-1。模型对照组、细胞移植组大鼠采用线栓法复制局灶性脑缺血2h再灌注模型,造模1d后细胞移植组经尾静脉注入0.5mL人脂肪组织来源的神经干细胞悬液,模型对照组同法注入等量生理盐水。主要观察指标:免疫组织化学染色检测缺血区脑组织微血管密度,利用原位杂交技术观察缺血区脑组织血管内皮生长因子mRNA表达的动态变化。结果:缺血再灌注1周时缺血区皮质即可见大量的微血管增生,2周时微血管密度达高峰,第4,12周时有所下降,但缺血再灌注后各时间点细胞移植组缺血区脑组织微血管密度均显著高于模型对照组(t=4.859,P〈0.05)。脑缺血再灌注1,2周时,缺血区脑组织中可见大量的血管内皮生长因子mRNA阳性细胞,阳性信号主要分布于皮质及血管周围的神经细胞;第4,12周时模型对照组血管内皮生长因子mRNA阳性信号减弱,而细胞移植组阳性信号仍呈较强表达(t=5.894,P〈0.01)。结论:人脂肪组织来源的神经干细胞可能通过促进微血管增生、提高血管内皮生长因子mRNA表达来加快缺血区血运修复,从而改善脑缺血大鼠的神经功能。
  • 自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植治疗帕金森叠加综合征 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究证实脑室内、纹状体内移植骨髓基质细胞,能够改善帕金森病模型大鼠的症状,并增加脑内多巴胺的水平,目前仅有骨髓基质细胞治疗帕金森叠加综合征的个例报道。目的:探讨自体骨髓基质细胞经蛛网膜下腔移植对帕金森叠加综合征的治疗效果。设计:回顾性病例分析。对象:2006-2007年河北医科大学第一医院神经内科住院的7例帕金森叠加综合征患者,由神经内科主任医师根据患者的临床症状及辅助检查作出明确诊断。方法:移植前1d皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子进行动员。取患者自体骨髓,体外分离培养制成骨髓基质细胞悬液(细胞总数1×10^7),注入蛛网膜下腔,移植后所有患者均使用常规抗帕金森病治疗手段。分别于移植前及移植后2个月,采用统一帕金森病评定量表(partⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别评价心理活动、日常生活活动、运动神经特性、并发症的治疗)、国际共济失调量表(包括姿势步态、肢体共济失调、构音障碍、眼球运动障碍4项因子)、日常生活能力量表、简易智力量表对患者临床症状的变化进行评定。主要观察指标:移植后临床疗效及各量表评分的变化。结果:7例患者均完成12个月随访,其中自觉症状明显好转4例,移植后轻度好转或病情未进展2例,基本无效1例。与移植前比较,移植后2个月患者统一帕金森病评定量表总分、partⅡ及partⅢ分数均明显降低(P〈0.05),而partⅠ分数无明显变化(P〉0.05);国际共济失调量表总分及姿势步态、肢体共济失调、构音障碍3项因子分数均明显下降(P〈0.05),而眼球运动障碍因子分数无明显变化(P〉0.05);日常生活能力量表分数明显增高(P〈0.05);简易智力量表分数无明显变化(P〉0.05)。结论:自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植治疗能够改善帕金森叠加综合征患者的临床症状,在共济运动、言语及吞咽功能方面尤为突出,从而改善日常生活能力。
  • 人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP^+转基因鼠的有效性及安全性评估 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前阿尔茨海默病的病因不明,课题组前期实验发现人羊膜间充质干细胞静脉移植可促进阿尔茨海默病APP+转基因鼠的学习、记忆能力改善。目的:进一步评估人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP+转基因鼠的有效性和安全性。设计、时间及地点:细胞学体内实验与动物对照观察,于2008-05/12在郑州大学生物工程系、郑州大学基础医学院及河南省中医药研究院完成。材料:清洁级C57BL/6系APP+转基因胎鼠10只,合笼繁育后得到子代小鼠200只,按其繁殖情况和PCR检测结果,取29只11月龄小鼠,分为APP+对照组10只、APP+细胞移植组10只、APP-正常组9只。羊膜标本由郑州大学第一附属医院产科提供。方法:体外分离培养人羊膜间充质干细胞,传至第3代后调整浓度为1×10^9L^-1的单细胞悬液。APP+细胞移植组每只小鼠尾静脉注射人羊膜间充质干细胞悬液0.5mL,APP+对照组注射等量生理盐水,APP-正常组不作任何处理。主要观察指标:采用Morris水迷宫测定移植前后小鼠学习和记忆功能。移植当天开始称小鼠体质量,持续3周。移植后解剖小鼠,收集全血并分离血清,进行12项肿瘤标记物检测及心、肝、肾功能的血液生化指标检测,对人羊膜间充质干细胞移植的安全性作综合评价。结果:移植后15d各组逃避潜伏期比较,APP-正常组0.05),12项肿瘤标记物、9项血清肝肾功能生化指标及10项血液学指标的表达均无明显差异(P〉0.05)。结论:人羊膜间充质干细胞经尾静脉移植后,可明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习、记忆能力,未见致死致瘤现象发生,心、肝、肾功能未受影响,安全可行。
  • 端粒、端粒酶与干细胞 免费阅读 下载全文
  • 端粒、端粒酶与干细胞密切相关,在维持干细胞自我更新和增殖能力中起重要作用。端粒是真核细胞染色体末端的DNA重复序列和特异结合蛋白的复合体,富含鸟嘌呤,具有保护染色体的作用,端粒长度反映细胞的复制史及复制潜能。影响端粒长度的因素包括:端粒结合蛋白、端粒帽蛋白、端粒酶及DNA复制酶等,其中端粒酶是最主要的因素。端粒酶位于端粒末端,作用是合成端粒DNA序列,以抵消或延缓端粒随细胞分裂的不断缩短。端粒酶活性的丧失及其增殖相关基因表达的改变是造成干细胞体外复制和扩增受限的主要原因。随着组织细胞工程学的兴起,体外定向诱导干细胞分化为各种所需组织细胞已经成为研究的焦点,因此诱导和增加端粒酶的活性,维持干细胞分化、自我更新和增殖能力,延长干细胞的寿命具有重要意义。
  • 表皮干细胞向皮肤附件诱导分化的研究近况 免费阅读 下载全文
  • 皮肤组织工程技术为烧伤创面的修复提供了新的方法,但现有各类组织工程皮肤也面临着共同的难题,突出表现在:没有完整的皮肤功能,尤其是缺乏毛囊、皮脂腺和汗腺等,难以达到完全意义上的"功能愈合"。表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞,与创面修复紧密相关,是维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞和皮肤及其附属器发生、修复、改建的基础。表皮干细胞具有无限增殖潜能及多向分化潜能,通过整合素-丝裂原激活蛋白激酶通路、Wnt/β-连环素-Lef/Tcf信号通路、神经肽等途径诱导分化形成毛囊、皮脂腺、汗腺及表皮等组织。由于表皮干细胞向皮肤附件诱导分化研究尚存在许多问题,目前大部分是关于表皮干细胞向皮肤附件诱导分化的动物实验研究,而其广泛的临床应用研究有待进一步发展。
  • 非清髓性异基因造血干细胞移植的基础实验及临床研究 免费阅读 下载全文
  • 非清髓性异基因造血干细胞移植现在被广泛应用在由于年龄或合并症而不适应行传统造血干细胞移植的患者身上,采用非清髓性预处理策略,移植后形成供受体造血细胞混合嵌合状态,淋巴细胞供受体双向免疫耐受,即非清髓性干细胞移植。通过非清髓性预处理方案,移植后形成供受体细胞嵌合状态,发挥移植物抗肿瘤效应,来达到治疗目的,与传统造血干细胞移植相比有较低的移植相关死亡率,术后移植物抗宿主疾病发生减少,且扩大了适应证范围,并且非清髓性预处理方案的改进、移植后相关疾病发生的防治可以进一步提高治疗效果。目前虽然有许多治疗策略被提出,并在动物模型上取得了成功,但其在人体方面的应用仍需得到进一步的证实和研究。
  • 间充质干细胞免疫学特点及在肾脏疾病中的应用 免费阅读 下载全文
  • 间充质干细胞的多向分化潜能尤其是可分化为肾脏实质细胞的发现让肾脏移植提到了新的高度--自体肾脏移植。间充质干细胞仅低水平表达人类主要组织相容性Ⅰ类分子,而不表达人类主要组织相容性Ⅱ类分子,故而免疫原性较低。此外,间充质干细胞还可阻断树突状细胞的成熟,降低T细胞的免疫应答,并可通过分泌一些可溶性因子来介导免疫抑制。间充质干细胞上述独特的免疫调节功能使其在人和动物体内可以避免异种移植排斥反应的发生。已有较多报道利用啮齿类动物胚胎移植人的间充质干细胞异生培育出新的肾脏及输尿管,且可从成长后的输尿管收集的液体中检测到尿素氮和肌酐明显高于该动物的血清水平,这说明新的肾脏已经产生尿液,而且自体肾脏免疫原性小,植入后不良反应较少,来源供给方便,从而为自体肾脏移植的发展开辟了广阔空间。
  • 神经干细胞的鉴定方法 免费阅读 下载全文
  • 由于神经干细胞的数量很少,从细胞形态来看神经干细胞为圆形或椭圆形,无或有较短的突起,核质比大,核染色较深,形态上与其它种类的细胞没有明显的差异,并且未找到一种细胞表面特异性标志物,因此目前鉴定神经干细胞主要有以下3个方面:特异性神经抗原的表达,包括巢蛋白、Musashi、转录因子及细胞黏附分子;自我更新能力,包括单细胞克隆分析、BrdU标记S期细胞;多向分化潜能,包括免疫细胞化学法、聚合酶链反应色法。传统方法是利用神经干细胞的3种特性有效并准确地鉴定了神经干细胞,这种方法也是应用最为广泛的一种鉴定方法。随着人们对神经干细胞认识的不断深入,用超微结构法和双向电泳法也可以对神经干细胞加以鉴定,目前这两种方法并未得到广泛应用。
  • 肌萎缩侧索硬化症的干细胞移植治疗与进展 免费阅读 下载全文
  • 肌萎缩侧索硬化症是一种致死性神经变性疾病,尚无有效治疗措施,干细胞因具有分化成运动神经元的潜能而受到极大关注。用于肌萎缩侧索硬化治疗的干细胞包括胚胎干细胞、神经干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带血非造血干细胞及诱导产生多能性干细胞。其治疗的作用机制主要分为3种:细胞替代、神经营养因子释放和免疫调节。虽然动物研究和部分临床试验已证明干细胞对神经变性疾病的治疗非常有潜力,但到目前为止,人们对干细胞的了解仍存在许多盲区,依然有大量问题需要解决。
  • 骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元的理论研究现状 免费阅读 下载全文
  • 骨髓间充质干细胞除了分化为间质细胞谱系外,还具有向非间质细胞谱系,如神经细胞分化的多向分化潜能,可充当多种器官改建或损伤后修复反应的细胞源。骨髓间充质干细胞的多向分化潜能和超强的自我更新能力,在细胞和基因治疗中可能更具有优越性。值得注意的是,无论是自体移植还是异体移植,局部移植还是全身注入,均未引起宿主体内的免疫反应,提示骨髓间充质干细胞可在基因治疗中作为理想的基因转移载体。尽管骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的研究已获得了一些令人鼓舞的结果,并且自体骨髓间充质干细胞用于个体化治疗已经取得了较满意的动物试验和初步临床试验结果,但仍存在许多尚待解决的问题。
  • 医学英文句型正误辨析 免费阅读 下载全文
  • 干细胞医学词汇中英文对照 免费阅读 下载全文
  • 关于多功能干细胞(iPS细胞)的研究 免费阅读 下载全文
  • 美国科学家诱导多能干细胞分化出运动神经细胞2009年2月23日出版的《StemCells》杂志发表了美国加州大学洛杉矶分校科学家在干细胞研究领域,首次将人体多能干细胞诱导分化成电活跃的运动神经细胞。
  • 让昨天告诉今天:干细胞研究的学术与技术进展 免费阅读 下载全文
  • 1999年12月,美国科学家在《美国科学院院刊》中发表了“小鼠肌肉组织的成体干细胞可以横向分化为血液细胞”的研究成果。随后,世界各国的科学家相继证实,成体干细胞,包括人类的成体干细胞具有可塑性。
  • 诱导的多能干细胞(iPS细胞)相关问题的临床问答 免费阅读 下载全文
  • 1什么是iPS技术?iPS技术,即诱导多能性干细胞技术,是一种将分化细胞重编程为类似胚胎干细胞的新兴技术,它通过病毒载体将特定转录因子组合转入被诱导细胞,使其发生重编程。
  • 脐血干细胞自体移植重建早产儿免疫系统 免费阅读 下载全文
  • 2004-01/2007-01中山市人民医院收治的30例早产低出生体质量儿,男19例,女11例,胎龄28-34周,出生体质量950-1995g。患儿出生后留脐带血,标记后体外分离培养脐血干细胞。取培养的脐血干细胞悬液50mL(细胞数1×10^9L^-1),通过静脉回输早产儿体内。与移植前比较,脐血干细胞自体移植后T细胞亚群CD3,CD4,CD8百分率及CD4/CD8细胞比值均明显升高(t=6.81,25.74,7.60,11.78,P均〈0.01),其中CD4升高幅度最为显著;免疫球蛋白IgG,IgA,IgM质量浓度均明显升高(t=5.53,7.02,10.79,P均〈0.01)。提示早产低出生体质量儿免疫功能低下,通过脐血干细胞自体移植可重建其免疫系统,改善免疫功能。
  • 单倍体外周血干细胞移植治疗急性白血病2例 免费阅读 下载全文
  • 异基因外周血造血干细胞移植是目前能够治愈急性白血病的最佳方法,随着国内独生子女家庭的日益增多,同胞供体减少,从中华骨髓库中检索配型全相合造血干细胞供者概率较低,耗时长,而单倍体造血干细胞移植如能成功开展将是解决供者来源困难的主要手段,但其面临植入困难和移植物抗宿主病发生率高且重这两大风险。通过改良预处理方案及在经典的环孢素A+短程甲氨蝶呤的基础上,加用霉酚酸脂、白细胞介素11、抗人淋巴细胞免疫球蛋白及经重组人粒细胞集落刺激因子动员后的供体造血干细胞输注给受体联合预防移植物抗宿主病,成功的进行了2例单倍体外周血造血干细胞移植,2例患者均顺利植入,且无严重的移植物抗宿主病。
  • 自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死6例4年随访 免费阅读 下载全文
  • 选取2003-11/2004-06在同仁医院住院的急性ST抬高性心肌梗死男性患者6例,平均年龄52.5岁,在经皮穿刺冠状动脉球囊成形处理和支架植入血运重建后,经患者及其家属知情同意,进行自体骨髓干细胞移植治疗,移植前1周皮下注射粒细胞集落刺激因子行干细胞动员,外周血CD34+细胞达到1%-3%时,采集从骨髓动员出来的外周血单个核细胞,进一步纯化后经球囊导管注入梗死相关血管。每半年随访1次,4年后心肌梗死面积在干细胞移植后3个月时平均下降42.7%的基础上进一步缩小8.03%,总梗死面积平均下降50.73%,心脏射血分数增加至55.4%,冠状动脉造影无严重狭窄和需要行血运重建的病变出现。
  • 异基因造血干细胞移植治疗白血病9例 免费阅读 下载全文
  • 重庆医科大学附属第一医院血液内科2007-01/2008-04应用异基因造血干细胞移植治疗白血病患者9例,6例急性髓细胞性白血病,3例慢性髓系白血病;供者中6例为HLA完全相合的同胞,2例为HLA9/10相合的无关供者,1例为半相合供者;预处理采用经典的BU/CY方案或GIAC方案;移植物抗宿主病的预防采用环孢菌素A+吗替麦考酚酯+甲氨喋呤方案或环孢菌素A+吗替麦考酚酯+甲氨喋呤+抗胸腺细胞球蛋白方案。结果全部患者均获得造血重建,中性粒细胞≥0.5×10^9L^-1、血小板〉20×10^9L^-1的中位时间分别是11,15d;无急性移植物抗宿主病发生,1例发生慢性移植物抗宿主病;随访3-16个月无病生存率为77.8%。死亡2例。
  • CRTER杂志对涉及中医药、针灸内容稿件提出的修稿要求 免费阅读 下载全文
  • CRTER杂志对文章中图片的要求 免费阅读 下载全文
  • 本刊“干细胞”栏目发稿重点 免费阅读 下载全文
  • ORTER发表文章被SCI引文库、CA、EM数据库收录的最新数据 免费阅读 下载全文
  • SCI收录的《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志 免费阅读 下载全文
  • SCI收录的NRR杂志2008年出版参数及被SCI数据库和引文库以及CA、EM收录情况 免费阅读 下载全文
  • 本刊“干细胞”栏目发稿重点 免费阅读 下载全文
  • SCI收录的NRR杂志近期出版方向 免费阅读 下载全文
  • CRTER为国际投稿作者服务 免费阅读 下载全文
  • 微载体cytodex3培养技术在大量扩增成人骨髓间充质干细胞中的应用 免费阅读 下载全文
  • 背景:间充质干细胞可以在体内或体外分化成肝样细胞,但是间充质干细胞数量少,在1×10^4-1×10^5 个骨髓有核细胞中仅有一个,肝细胞移植和生物人工肝的治疗都需要1×10^10 级的细胞数,利用常规的单层培养方法难以实现。目的:建立一种体外分离、大量扩增培养成人骨髓间充质干细胞的方法。设计、时间及地点:随机对照实验。实验于2005-09/2006-04 在上海市消化外科研究所(上海市教委重点实验室)及上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科和器官移植中心完成。材料:骨髓标本收集于上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科骨髓检查正常者,供者均为知情同意志愿者。方法:采用 Percoll 梯度离心结合贴壁法分离人骨髓间充质干细胞。应用微载体cytodex3 培养人骨髓间充质干细胞,以普通单层聚苯乙烯(TCPS)培养作对照,用流式细胞仪(FCM)和 MTT 法对其细胞表型和增殖活性进行检测。主要观察指标:①hMSCs 的分离及培养。②hMSCs 的形态学观察。③hMSCs 在cytodex 3 表面生长时的增殖活性测定。④hMSCs 在 cytodex 3 表面生长时 FCM 细胞周期测定。结果:①流式细胞仪检测表明,微载体cytodex3 表面生长的人骨髓间充质干细胞表面标记与普通单层聚苯乙烯培养时一致,表达 CD29、CD44 和 CD105,而不表达CD14、CD34、CD45、VLA-1 和 HLA-DR。②MTT 检测显示,人骨髓间充质干细胞第1-3 天处于适应期,3 d 后进入对数生长期,人骨髓间充质干细胞此期间在 TCPS 和cytodex3 表面的增殖活性无差异 (P 〉 0.05),而在普通单层聚苯乙烯表面培养时,人骨髓间充质干细胞 6 d 后进入衰退期,而cytodex3 表面生长第 9 天时仍然处于对数生长,差异显著(P 〈 0.05)。③流式细胞仪分析表明,人骨髓间充质干细胞在 TCPS 和cytodex3 表面培养细胞周期分布相同,差异不显著(P 〉 0.05)。结论:微载体 cytodex3 培养技术可以很好地大量扩增人骨髓间充质干细胞,并能保持其良好的增殖活性。
  • 脐血CD34^+细胞体外诱导分化为成熟巨核细胞及产出血小板 免费阅读 下载全文
  • 背景:据作者查新检索,国外尚无通过体外诱导干细胞生成具有功能的血细胞并形成产品的报道。目的:体外诱导脐血CD34+细胞向成熟巨核细胞分化,并观察血小板产出情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2004/2006在湘雅医院及湘雅三医院中心实验室完成。材料:脐带来源于足月妊娠健康产妇,由湘雅医院提供。方法:免疫磁珠法分选脐血CD34+细胞,按5×10^7L^-1密度接种于24孔培养板,加入含L-谷氨酰胺、铁饱和的人转铁蛋白、CaCl2、胰岛素、去离子牛血清白蛋白及重组人血小板生成素的StemPro-34无血清培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下向巨核细胞诱导培养14-21d。吸取细胞培养液,离心取上清,再次离心弃上清,余下物质即为细胞培养液中比重较小的血小板样颗粒。同法分离正常富血小板血浆中的血小板。主要观察指标:培养细胞与上清液中血小板样颗粒的形态变化、免疫组织化学染色结果、显微及超微结构观察,血小板聚集情况及CD41的表达。结果:培养第10天,巨核细胞诱导培养体系中出现丝状物质,并有血小板样颗粒产生,第16天达高峰;培养细胞强阳性表达血小板特异性抗原GPⅡbⅢa;光镜观察培养细胞呈成熟巨核细胞形态,但也可见幼稚巨核细胞样,巨核细胞旁可见血小板样颗粒;电镜观察培养细胞大多呈成熟巨核细胞形态,少量呈凋亡状态,上清液中血小板样颗粒与富血小板血浆中的血小板大小、超微结构基本一致,有的血小板表面光滑,有的则呈现不规则表面。上清液中血小板样颗粒与正常富血小板血浆中的血小板均能对凝血酶产生聚集反应,流式细胞仪检测两者具有同样的CD41高表达率。结论:脐血CD34+细胞能在体外诱导生成高纯度且成熟的巨核细胞,并产出血小板。
  • 超顺磁性氧化铁标记神经干细胞及对其生物学特性的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:细胞标记与核磁共振联合,可无创性活体标记移植的神经干细胞存在部位、存在方式及其一些生物学特性。目的:观察超顺磁性氧化铁体外标记人神经干细胞的效果。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-12/2007-06在解放军海军总医院儿科实验室完成。材料:流产人胚胎由解放军海军总医院提供。超顺磁性氧化铁,Lot number97060601,为Advanced magnetics,inc.American产品。方法:取人胚胎脑海马组织,机械法分离单细胞悬液,加入含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的神经干细胞培养基体外培养。取11.2g/L超顺磁性氧化铁,用神经干细胞培养基稀释成28mg/L后,加入1.0mg/L多聚赖氨酸8μL混匀,制成超顺磁性氧化铁-多聚赖氨酸复合物的标记培养基。取增殖活跃的神经干细胞球,机械吹散制成浓度为1×109L-1的单细胞悬液,加入等体积的含超顺磁性氧化铁的无血清培养液。1周后撤除各种细胞因子,添加体积分数为5%的胎牛血清诱导神经干细胞分化24h。主要观察指标:普鲁士蓝染色鉴定标记阳性率,免疫荧光染色检测分化细胞胶质纤维酸性蛋白和神经丝的表达。结果:超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞球颜色微黄,与未标记细胞比较,其克隆形成的速度并没有减慢。经超顺磁性氧化铁标记20h后,神经干细胞胞浆中含有蓝色铁颗粒,阳性率达90%。诱导后超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞胶质纤维酸性蛋白、神经丝均呈阳性表达。结论:在体外超顺磁性氧化铁能够高效标记神经干细胞,且标记后不影响其生物学特性,仍可以正常扩增和定向分化为神经元、星形胶质细胞。
  • 杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞成骨及抑制其成脂肪分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:传统诱导剂只具有单纯诱导成骨或成脂的分化作用,应用较为局限。杜仲叶提取物具有提高骨密度、抑制骨吸收、调节骨代谢功能的药效作用,可促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶分泌。目的:探讨杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的同时,是否具有抑制成脂肪分化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-02/10在南昌大学第二附属医院分子中心实验室完成。材料:健康12月龄羊6只,由南昌大学提供。杜仲叶提取物由江西师大生物技术公司制备。方法:采用全骨髓法体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,取第3代细胞,设立6组:空白对照组,加入DMEM+胎牛血清;传统成骨诱导剂组,加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸的DMEM高糖培养基;传统成骨诱导剂+杜仲叶提取物组,在传统诱导剂组基础上加入10^-5g/mL杜仲叶提取物;10^-4,10^-5,10^-6g/mL杜仲叶提取物组分别加入对应质量浓度的杜仲叶提取物。同时另取第3代细胞行成脂肪诱导,分组同上,仅将传统成骨诱导剂更换为传统成脂诱导剂。主要观察指标:成骨诱导后,钙钴法检测碱性磷酸酶活性,VonKossa法观察矿化结节的形成,RT-PCR法检测成骨细胞中Cbfa1mRNA基因的表达;成脂诱导后,油红O染色观察骨髓间充质干细胞成脂分化情况。结果:与空白对照组比较,各成骨诱导组细胞内碱性磷酸酶合成增多,形成矿化结节,且传统成骨诱导剂+杜仲叶提取物组、10^-4,10^-5g/mL杜仲叶提取物组诱导成骨情况优于传统成骨诱导剂组、10^-6g/mL杜仲叶提取物组;RT-PCR显示各成骨诱导组均能高效扩增出171bp的Cbfa1基因转录片段,且成骨细胞中Cbfa1mRNA表达水平差异无显著性意义(P〉0.05)。油红O染色结果显示,加入杜仲叶提取物的各成脂诱导组,其脂滴数量明显少于传统成脂诱导剂组。结论:杜仲叶提取物能诱导体外分离纯化培养的羊骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化增殖,同时抑制其向脂肪细胞分化,实现双向调节作用。
  • 构建稳定表达血管内皮细胞生长因子的人间充质干细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:血管内皮细胞生长因子可有效治疗缺血性心脏病,但其在体内难以保持持续的有效浓度。目的:构建稳定表达血管内皮细胞生长因子的人骨髓间充质干细胞株,检测经基因转染后外源基因的表达。设计、时间及地点:观察实验,于2006-03/2007-04在上海胸科医院完成。材料:人骨髓间充质干细胞株、血管内皮细胞生长因子由上海市胸科医院胸部肿瘤研究所基础实验室提供。方法:扩增血管内皮细胞生长因子片断,构建pcPGK-hVEGF 165真核表达质粒,利用脂质体介导转染人骨髓间充质干细胞,然后进行阳性细胞克隆筛选。主要观察指标:以RT-PCR、PCR、Western Blot、ELISA方法检测在稳定转染了pcPGK-VEGF165-IRES-GFP的3株细胞和稳定转染pcPGK-IRES-GFP的3株细胞中,人血管内皮细胞生长因子165在人骨髓间充质干细胞中的表达情况。结果:扩增血管内皮细胞生长因子后,成功了构建质粒pcPGK-hVEGF165,并利用脂质体顺利转染了人骨髓间充质干细胞,并筛选出稳定表达的细胞株。RT-PCR、PCR检测结果显示,在稳定转染血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞中表达的血管内皮细胞生长因子165信使RNA明显高于对照及未转染的人骨髓间充质干细胞,WesternBlot、ELISA检测结果显示,稳定转染血管内皮细胞生长因子人骨髓间充质干细胞及培养上清中的血管内皮细胞生长因子蛋白明显高于对照及未转染的人骨髓间充质干细胞。结论:采用脂质体介导基因转移技术可将人血管内皮细胞生长因子165顺利转染人骨髓间充质干细胞中,并获得稳定表达血管内皮细胞生长因子165的细胞株。
  • 在兔外周血源性及骨髓源性单核细胞向树突状细胞转化过程中人粒-巨噬细胞集落刺激因子与人白细胞介素4的作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前常用鼠作为动脉粥样硬化动物模型,但其体型较小,试验条件受限。兔也是常用的动脉粥样硬化动物模型之一,但其树突状细胞的培养和鉴定方式需要进一步摸索。目的:探讨兔外周血源性及骨髓源性单核细胞体外向树突状细胞转化的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-12/2008-10在南方医科大学珠江医院儿科实验室、中山医科大学达安医学检测中心完成。材料:6周龄雄性纯种新西兰大白兔12只,购自南方医科大学实验动物中心。人粒-巨噬细胞集落刺激因子、人白细胞介素4、脂多糖为美国Pepro Tech Inc产品。方法:兔心尖穿刺抽取血液20mL,同时行骨髓穿刺抽取骨髓10mL,采用密度梯度离心法分离收集中间云雾状细胞层,加入适量的含双抗的胎牛血清的1640培养液,培养2h后弃去未贴壁细胞,即为兔外周血源性和骨髓源性单核细胞。2种不同来源的单核细胞均分为2组:实验组以含有20μg/L人粒-巨噬细胞集落刺激因子、20μg/L人白细胞介素4的上述培养基隔日换液培养6d,其中在第5天加入10mg/L脂多糖刺激并孵育过夜;对照组未添加任何细胞因子。主要观察指标:光镜及电镜观察细胞形态,流式细胞仪鉴定细胞表型。结果:培养6d后,外周血源性和骨髓源性对照组细胞呈圆形或椭圆形,表面有小杆状突起,符合巨噬细胞的特征;实验组细胞呈不规则形,表面粗糙,胞体有形态不一的突起,符合树突状细胞的特征。流式细胞仪检测结果显示,外周血源性和骨髓源性的实验组细胞均高表达HLA-DR,CD86,低表达CD14,组间比较差异无显著性意义(t=0.5187,t=1.7151,t=0.0250,P均〉0.05);对照组细胞HLA-DR,CD86,CD14的表达则与实验组相反。结论:在人粒-巨噬细胞集落刺激因子、人白细胞介素4及脂多糖联合作用下,兔外周血源性单核细胞及骨髓源性单核细胞均能转化为成熟树突状细胞。
  • 趋化因子CXCL-8趋化骨髓间充质干细胞迁移的体外效应 免费阅读 下载全文
  • 背景:早期研究表明趋化因子参与骨髓间充质干细胞的体外趋化,确定骨髓间充质干细胞体内迁移的分子机制,对其介导的细胞治疗中枢神经系统损伤和疾病有重要作用。目的:观察体外条件下趋化因子CXCL-8对大鼠骨髓间充质干细胞迁移的趋化作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-06在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所完成。材料:纯种SPF级成年Wistar大鼠8只,由青岛市实验动物和动物实验中心提供。鼠重组趋化因子CXCL-8为Santacruz公司产品。方法:采用全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,胰蛋白酶消化传代。取500μL趋化因子CXCL-8,加入含体积分数为0.5%胎牛血清的DMEM条件培养基,分别将质量浓度调整为5,50,250,500μg/L加到趋化板下层,对照组单纯添加DMEM条件培养基,以8μm孔径的聚碳酸酯膜覆盖。调整骨髓间充质干细胞浓度至1.5×10^9L^-1,取100μL细胞悬液加到趋化板上层。为验证趋化因子CXCL-8作用的特异性,将经抗CXCR6多克隆抗体孵育12h后的骨髓间充质干细胞加到趋化板上层,趋化因子CXCL-8加到趋化板下层。主要观察指标:骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR1的表达,趋化因子CXCL-8对骨髓间充质干细胞体外趋化迁移作用及其特异性检测。结果:骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR1呈阳性表达,位于细胞膜和细胞浆中,RT-PCR琼脂糖凝胶电泳后出现215bp特异性扩增条带。与对照组比较,加入5-500μg/L趋化因子CXCL-8后,骨髓间充质干细胞迁移数均明显增加(P〈0.05)。加入抗CXCR1多克隆抗体后,骨髓间充质干细胞迁移数较250μg/L趋化因子CXCL-8组明显减少(P〈0.05)。结论:体外条件下趋化因子CXCL-8在5-500μg/L质量浓度范围可趋化骨髓间充质干细胞迁移,封闭趋化因子受体CXCR1后其趋化迁移作用明显减弱。
  • 锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:锌通过直接和间接作用对DNA聚合酶和RNA聚合酶产生影响,在细胞的DNA复制、RNA转录、增殖、分化等活动中起重要作用。目的:探讨锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008-09/12在辽宁医学院完成。材料:清洁级1月龄SD大鼠7只,由辽宁医学院动物中心提供。方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代时,对照组向细胞中加入含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养液,锌处理组向上述培养液中加入硫酸锌,使锌终浓度分别达到0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,4.0,6.0mg/L。胰酶消化后按5×10^7L^-1密度接种,培养21d。主要观察指标:细胞表面抗原的表达,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞DNA含量、蛋白质含量和增殖周期。结果:第3代细胞表面抗原CD106呈阳性表达。锌对骨髓间充质干细胞活性的促进作用呈量效关系,0.2-4.0mg/L锌处理组细胞活性显著高于对照组(P〈0.01),尤以质量浓度为2.0mg/L时最为明显;当锌的质量浓度达6.0mg/L时,细胞活性明显降低(P〈0.01)。培养7,14,21d与对照组比较,2.0mg/L锌处理组骨髓间充质干细胞DNA含量、蛋白质含量均显著升高(P〈0.01);细胞增殖指数、S期和G2^+M期细胞百分率均明显升高,G0/G1期细胞百分率则显著下降(P〈0.01)。结论:0.2-4.0mg/L锌能促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、DNA复制和蛋白质合成,且2.0mg/L为最佳质量浓度。
  • 表皮生长因子对外周血间充质干细胞原代克隆形成的影响及其传代后多向分化潜能 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前已有很多实验证明外周血中存在间充质干细胞,但由于所用分离筛选方法、培养条件的不同导致了结果的多样性,且实验可重复性较差。目的:观察表皮生长因子对体外分离培养的原代小鼠外周血间充质干细胞克隆形成的影响,以及外周血间充质干细胞传代后的多向分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-09在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料:雄性成年C57BL/6J小鼠16只,购于南京医科大学骨与干细胞研究中心实验动物中心。重组人表皮生长因子为Sigma公司产品。方法:无菌条件下从小鼠心脏采血,裂解红细胞后应用贴壁法分离外周血间充质干细胞,通过传代进行纯化和扩增。将原代细胞分2组进行体外培养,实验组向α-MEM培养液中加入10μg/L表皮生长因子,对照组给予不含表皮生长因子的α-MEM培养液,16d后行亚甲基蓝染色,计算克隆面积。取第3代外周血间充质干细胞,以1×10^4/cm^2密度接种后,分别向成骨和脂肪方向诱导分化。主要观察指标:外周血间充质干细胞的生长特性,外周血间充质干细胞体外诱导成骨、成脂能力。结果:倒置相差显微镜下,外周血间充质干细胞贴壁生长,形态类似于骨髓间充质干细胞,呈成纤维细胞样;但其形成克隆的时间较骨髓间充质干细胞有所推迟,且原代细胞克隆形成率低于骨髓间充质干细胞;亚甲基蓝染色结果示实验组外周血间充质干细胞克隆形成率明显高于对照组(P〈0.05)。外周血间充质干细胞成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、总胶原染色及茜素红染色均呈强阳性;成脂诱导后油红染色呈阳性,有一定数量的脂滴形成。结论:外周血中存在少量的间充质干细胞,能自我增殖,表皮生长因子可有效促进原代外周血间充质干细胞克隆的形成;体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨和成脂分化特性。
  • 基因芯片筛选大鼠骨髓间充质干细胞及软骨细胞的差异表达基因 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前所用的生物因子诱导骨髓间充质干细胞后尚未获得成熟的软骨细胞,以骨髓间充质干细胞为种子细胞的软骨组织工程也未得到有临床应用价值的组织工程化软骨,所得到的被证明只是软骨样组织。目的:应用基因芯片技术筛选大鼠骨髓间充质干细胞及软骨细胞的差异表达基因。设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2007-07在大连医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料:健康2月龄SD大鼠8只,由大连医科大学实验动物中心提供。27K Rat Genome Array芯片由北京博奥基因芯片公司提供。方法:无菌条件下体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞和耳部软骨细胞,采用Trizol一步法提取两种细胞的总mRNA并纯化,反转录为双链cDNA探针,用Cy5-dCTP,Cy3-dCTP分别标记骨髓间充质干细胞和软骨细胞,杂交并清洗,应用双通道激光扫描仪进行扫描,所得荧光信号图像用GenePixPro4.0图像软件进行分析。主要观察指标:基因表达谱芯片杂交结果。结果:按差异显著性标准(差异为2倍),以骨髓间充质干细胞为对照,在软骨细胞中有1226条基因上调,888条基因下调。由于骨髓间充质干细胞和软骨细胞的差异表达基因数量较多,所以将Cy5/Cy3〈0.05及Cy5/Cy3〉20的基因定义为显著差异基因,结果发现两种比较重要的细胞因子:软骨调节素、结缔组织生长因子。结论:基因芯片技术可作为组织工程软骨研究中筛选细胞因子的有效手段。软骨调节素与结缔组织生长因子在软骨细胞中高表达,提示二者与骨髓间充质干细胞向软骨的分化关系密切。
  • 体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:尽管目前研究将骨髓间充质干细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白高表达作为细胞向某一方向分化的重要标志,但未分化的骨髓间充质干细胞是否表达该类蛋白目前尚无定论。目的:观察分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达情况。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-10/2008-05在广东药学院完成。材料:ICR小鼠3只,1d龄ICR乳鼠1只,由广东省医学实验动物中心提供。方法:利用差速贴壁法体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞,待细胞至70%-80%融合时传代。取1d龄ICR乳鼠皮肤组织,自行分离传代并冻存,经复苏后获得乳鼠皮肤成纤维细胞。实验组将稳定传代3次的小鼠骨髓间充质干细胞接种到6孔培养板中,按109L-1密度接种,1mL/孔;对照组同法接种乳鼠皮肤成纤维细胞,培养72h。主要观察指标:骨髓间充质干细胞的形态及生长情况,RT-PCR法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达。结果:原代培养的小鼠骨髓间充质干细胞集落形成初期,细胞核较大,胞浆较少,细胞呈三角形、多角形和长梭形等多种形态;传代后细胞生长旺盛,多数呈长梭型,细胞表面有大量微绒毛。培养48h时,实验组无Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达,对照组表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原;培养72h时,实验组Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达量显著低于对照组(t=42.692,85.349,P〈0.01)。结论:传代培养48h时,骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因尚未启动,至72h后Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因出现低表达,其并非像成纤维细胞那样在生长过程中持续的表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。
  • 小鼠胎肝干细胞的分离培养与鉴定 免费阅读 下载全文
  • 背景:胎肝细胞可能具有比骨髓干细胞等更强的增殖分化能力和更低的免疫原性,但目前涉及胎肝干细胞直接分离、培养的报道甚少。目的:拟在体外分离培养小鼠胎肝干细胞,并对其生物学特性进行初步鉴定。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/06在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:SPF级13.5d龄昆明种胎鼠9只,由重庆医科大学实验动物中心提供。方法:采用胶原酶+EDTA联合消化法与差速贴壁法体外分离胎鼠肝干细胞,按2×10^8L^-1接种,待细胞80%-90%汇合后消化传代。采用链霉亲和素-生物素-过氧化酶复合物技术对原代接种后5d的贴壁细胞进行多种肝干细胞表面标志物的标记。主要观察指标:原代胎肝干细胞形态变化,胎肝干细胞的传代扩增情况,胎肝干细胞表面标志的表达。结果:原代培养24h细胞贴壁,呈致密圆形,边缘清楚;3d左右部分细胞呈梭形,7d后细胞铺展呈上皮样;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第5代仍保持较均一的上皮细胞状。原代接种后5d的贴壁细胞,人干细胞因子受体与甲胎蛋白呈阳性表达,白蛋白与细胞角蛋白19呈阴性。结论:胎肝干细胞原代培养早期表达甲胎蛋白与人干细胞因子受体,不表达白蛋白和细胞角蛋白19,提示所分离的胎肝干细胞可能是一种较原始的干细胞,尚处在未分化的早期阶段。
  • 体外诱导人外周血单个核细胞向肝样细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:外周血具有收集方便、供者不需麻醉、无骨髓穿刺痛苦等优点,利用人外周血干细胞移植的方法来获得转分化后的肝样细胞临床应用前景较好。目的:探讨人外周血单个核细胞在肝细胞生长因子及成纤维细胞生长因子4诱导下分化为肝样细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-05/10在中国科学院大连化物所1806组细胞培养室和大连医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料:外周血由大连市红十字血液中心11名健康志愿献血者提供。肝细胞生长因子、巨噬细胞集落刺激因子、成纤维细胞生长因子4为Peprotech公司产品。方法:采集志愿者外周血,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,加入RPMI1640液培养2h后,去除未贴壁细胞。将贴壁细胞分为4组:对照1组加入含140μmol/Lβ-巯基乙醇、体积分数为0.1胎牛血清的RPMI1640液培养6d;对照2组、肝细胞生长因子组、成纤维细胞生长因子组均在其基础上向RPMI1640液中加入5μg/L巨噬细胞集落刺激因子、0.4μg/L白细胞介素3。洗涤后,对照组换用含胎牛血清的RPMI1640培养液继续培养20d,肝细胞生长因子组在其基础上加入20μg/L肝细胞生长因子,成纤维细胞生长因子组加入10μg/L成纤维细胞生长因子4。主要观察指标:诱导分化过程中细胞形态学变化,免疫荧光检测诱导后甲胎蛋白及白蛋白的表达。结果:刚分离的单个核细胞形态呈较均一的圆形,活细胞率〉95%,培养2h后贴壁细胞呈毛糙的圆形,6d后肝细胞生长因子组、成纤维细胞生长因子组细胞呈集落样生长,细胞趋向融合,对照组细胞未形成集落,呈单个细胞生长。经诱导培养后,4d时部分细胞体积变大,向类圆形细胞转变,随培养时间延长,类圆形细胞比例增加,至20d后细胞数量逐渐减少;对照组培养20d后多数细胞呈梭形或纤维样,少部分细胞呈圆形。诱导培养后第6,10,14,20天,肝细胞生长因子组、成纤维细胞生长因子组甲胎蛋白、白蛋白均呈阳性表达,对照组各时间点均呈阴性表达。结论:在肝细胞生长因子及成纤维细胞生长因子4诱导条件下,人外周血单个核细胞具有向肝样细胞分化的潜能。
  • 人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究发现NOTCH-1信号通路在神经干细胞或神经前体细胞的自我更新、增殖及分化中起重要作用。目的:探讨NOTCH-1信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中的调控作用。设计、时间及地点:开放性实验,于2005-01/2007-03在解放军第三军医大学新桥医院完成。材料:人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外科提供。U251胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠;CHG-5胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠。方法:取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株,采用免疫磁珠法分选获得CD133^+脑胶质瘤干细胞,加入DMEM/F12无血清培养基进行增殖培养,形成细胞克隆后,加入含体积分数为10%胎牛血清的培养液,2h后行抗CD133和抗巢蛋白免疫荧光双标染色。主要观察指标:人脑胶质瘤干细胞的生长和鉴定,采用WST-8法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实验检测NOTCH-1信号通路蛋白的表达。结果:在无血清培养基中,细胞呈悬浮生长,培养24-48h可见单个细胞开始分裂生长,形成肿瘤球,将肿瘤球转入含胎牛血清的培养基后,4h周边细胞伸出突起并逐渐分化,24h后肿瘤球迁移出的细胞增多,形成单细胞层。肿瘤球能同时表达干细胞标志物CD133和巢蛋白,CD133^+脑胶质瘤干细胞核浆比例达2/3-3/4,突起少,胞浆中线粒体等细胞器较少,核糖体丰富,未见胶质丝等分化结构,符合干细胞超微结构特点。NOTCH-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织(P〈0.01),在CD133+U251及CHG-5胶质瘤细胞中有很强的表达,在GFAP+和MAP2+U251及CHG-5胶质瘤细胞中的表达强弱不等,在MBP+U251及CHG-5胶质瘤细胞中呈弱表达或不表达。在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1mRNA及NOTCH-1,HES-1蛋白表达;而在细胞分化时NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1mRNA和HES-1蛋白表达逐渐减弱。结论:NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子NOTCH-1在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达,而在正常成人脑组织中仅微弱表达。NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1和HES-1的表达强弱可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控。
  • 骨髓间充质干细胞对K562细胞增殖及化疗敏感性的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:近年来研究发现,骨髓造血微环境尤其是骨髓间充质干细胞在白血病细胞恶性克隆的增殖、分化和凋亡中发挥重要作用。目的:探讨联合正常人骨髓间充质干细胞共培养后,K562细胞的增殖情况及对化疗敏感性的变化。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-06/2008-06在南京医科大学附属南京儿童医院完成。材料:骨髓来源于南京医科大学附属南京儿童医院骨科收治的下肢骨折需手术的患儿。方法:percoll密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞。设立2组:单独培养组培养皿中只接种处于对数生长期的K562细胞1×10^6个;共培养组培养皿中按2×108L-1接种第3代人骨髓间充质干细胞,3d后全量换液,再加入处于对数生长期的K562细胞1×106个,共培养24h。消化收集两组K562细胞,分别加入质量浓度为0.1,0.2,0.4,0.8mg/L的阿糖胞苷,再次培养24h。主要观察指标:骨髓间充质干细胞对K562细胞生长曲线、细胞周期的影响。不同质量浓度阿糖胞苷干预后K562细胞凋亡率的变化。结果:与单独培养组比较,共培养组K562细胞数明显降低,至第7天仅为单独培养组的57.7%;G0/G1期、G2期共培养组K562细胞比例明显增加(P均〈0.05),S期、S+G2期共培养组K562细胞比例显著减少(P〈0.01,P〈0.05)。阿糖胞苷质量浓度为0.1-0.8mg/L时,对K562细胞诱发凋亡作用逐渐增强;在相同质量浓度的阿糖胞苷干预下,共培养组K562细胞凋亡率明显低于单独培养组(P〈0.05)。结论:与骨髓间充质干细胞共培养后,K562细胞的生长受到抑制,且处于增殖期的细胞比例下降,主要阻滞于G0/G1期。骨髓间充质干细胞对K562细胞具有保护作用,可降低阿糖胞苷诱导K562细胞的凋亡率,产生化疗耐药。
  • 兔脂肪干细胞的体外分离培养特性 免费阅读 下载全文
  • 背景:现有国内外文献报道的脂肪干细胞分离、培养方法并不完全一致,所应用的消化酶、消化方法、培养基等均存在差异。目的:观察体外分离培养的兔脂肪干细胞生物学特性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/2008-03在昆明医学院生物医学中心干细胞所完成。材料:健康成年新西兰大白兔6只,由昆明医学院实验动物中心提供。Ⅰ型胶原酶为美国Gibco公司产品,胰蛋白酶为美国Sigma公司产品。方法:无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞,待细胞生长至80%融合时传代。主要观察指标:倒置显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞形态及生长情况,免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达,MTT比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞增殖指数。结果:自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速,低密度生长时呈三角形或短梭形,核/浆比例较大,接近融合时呈成纤维细胞样外观,长期传代形态无明显改变。第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达,CD34为阴性;细胞生长曲线呈“S”形,在对数生长期其细胞倍增时间为59h。随传代次数的增加,来自同一供体的兔源性脂肪干细胞增殖指数逐渐升高,至第8代达到最高,以后逐渐降低。结论:兔皮下脂肪组织中含有丰富的间充质干细胞,兔源性脂肪干细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长,表达CD44表面标志物,具有较强的体外增殖能力。
  • 人脐带血间充质干细胞分离培养体系的优化筛选 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前所报道的脐带血间充质干细胞体外培养条件不尽相同,尚缺乏统一标准,且培养效率较低。目的:拟对人脐带血间充质干细胞的分离方法、培养条件进行优化筛选。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-05/2008-04在中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院中心实验室完成。材料:35份脐带血标本来源于北京协和医院妇产科顺产或剖宫产胎儿。方法:应用淋巴细胞分离液法、羟乙基淀粉沉降法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法分别从脐带血中获得单个核细胞。细胞接种后,应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12、L-DMEM和MesencultTM不同培养基,在不同体积分数胎牛血清(5%,10%,20%)、不同细胞接种密度(5×10^6,1×10^7,5×10^7,1×10^8)下进行细胞培养。细胞传至第3代诱导成骨,行VonKossa染色。主要观察指标:不同分离方法、培养基、胎牛血清浓度、种植密度分离培养细胞的效果,脐带血间充质干细胞表面标记的表达及成骨情况。结果:与淋巴细胞分离液法比较,羟乙基淀粉沉降法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法获得的单个核细胞数量明显增多(P〈0.05,P〈0.01),羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法细胞原代培养时间显著短于另2种方法(P〈0.01)。应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12或MesencultTM培养基,T25培养瓶中细胞接种密度为5×107时,培养效率高于其余各种条件组合(P〈0.01)。贴壁细胞表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45,CD90及CD133,经成骨诱导培养21d后VonKossa染色可见黑色矿化结节。结论:应用羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法可以获得较多数量的脐带血单个核细胞,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12或MesencultTM培养基、细胞接种密度为5×10^7时可以提高脐带血间充质干细胞的培养效率。
  • 白细胞介素12重组腺病毒质粒转染骨髓间充质干细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:有研究表明,骨髓间充质干细胞易于外源基因的导入和表达,且具有较弱的免疫抗原性和免疫调节功能,强大的迁移力和趋瘤性,因而逐渐显露其具有作为抗肿瘤基因治疗负载体系的优越性。目的:拟应用白细胞介素12重组腺病毒质粒AdEasy-白细胞介素12转染骨髓间充质干细胞,构建表达外源性白细胞介素12的骨髓间充质干细胞。设计、时间及地点:以细胞为对象的开放性实验,于2008-06在辽宁医学院实验中心及中国医科大学实验中心完成。材料:原代骨髓间充质干细胞由辽宁医学院外科学实验室构建,白细胞介素12重组腺病毒载体AdIL-12由辽宁医学院分子生物学实验室构建。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,免疫组织化学及流式细胞技术鉴定细胞表面标志物,应用腺病毒介导白细胞介素12基因转染大鼠骨髓间充质干细胞。主要观察指标:以反转录-聚合酶链反应及Western Blotting技术检测转染后的骨髓间充质干细胞的白细胞介素12基因mRNA及蛋白表达。结果:腺病毒介导白细胞介素12基因转染骨髓间充质干细胞后,通过反转录-聚合酶链反应及Western Blotting技术检测,结果证实白细胞介素12基因在mRNA及蛋白水平均有表达,而未经转染的骨髓间充质干细胞内无白细胞介素12基因及蛋白表达。结论:应用白细胞介素12重组腺病毒质粒成功构建了在mRNA及蛋白水平表达外源性白细胞介素12基因的骨髓间充质干细胞。
  • 大鼠骨髓间充质干细胞表达心肌基因表型的时间依赖效应 免费阅读 下载全文
  • 背景:前期实验已经证实30%心肌培养上清是诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的最佳浓度。目的:在前期实验基础上,观察30%心肌培养上清条件下诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的时间依赖效应。设计、时间及地点:对比观察,于2007-08/2008-06在徐州市心血管病研究所完成。材料:健康成年SD大鼠,体质量180-220g。方法:分离大鼠骨髓间充质干细胞和心肌细胞并在体外培养纯化。以1×10^8L^-1的细胞密度种植心肌细胞,培养72h后收集上清。将骨髓间充质干细胞的DMEM/F12培养基换为含有30%M199心肌细胞培养上清作为实验组,对照组仍将细胞接种在DMEM/F12培养基上继续培养。主要观察指标:30%心肌细胞培养上清诱导7,14,21d后,应用免疫细胞化学技术检测骨髓间充质干细胞中α-平滑肌肌动蛋白、β-肌动蛋白和心肌特异性肌钙蛋白T的表达。结果:30%心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞后,细胞的形态没有改变,但与对照组相比,α-平滑肌肌动蛋白、β-肌动蛋白和心肌特异性肌钙蛋白T的表达均呈阳性,其中以第14天的蛋白表达量最高(P〈0.01)。结论:30%心肌细胞培养上清诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的最佳诱导时间是14d。
  • 大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染。目的:拟实现大分子BAC载体对鸡胚原始生殖细胞的转染。设计、时间及地点:基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成。材料:种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5℃、相对湿度为65%的条件下孵化68~72h。BAC-TDN-GID载体由佛山大学分子生物学实验室保存。方法:以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hIFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大量抽提。取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养。采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定。结果:第19期鸡胚性腺原始生殖细胞体外培养48h呈桑椹状或者椭圆状,72h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色。分子量达30kb的大分子转基因载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48h可见荧光细胞,表明转染成功。经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基因hIFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达。结论:实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞。
  • 《中国神经再生研究(英文版)》令国际神经再生研究者感兴趣的SCI收录杂志 免费阅读 下载全文
  • 昆明医学院第一附属医院张桂敏博士 免费阅读 下载全文
  • 张桂敏,45岁,昆明医学院第一附属医院心血管外科主任医师,硕士导师,博士后。中国医师协会心血管外科分会委员,云南省胸心血管外科学会委员。《中华现代外科学杂志》与《家庭医学》杂志编委。农工民主党员。1985年毕业于昆明医学院,获学士学位。分别于1997年、2000年获得华西医科大学胸心外科专业硕士、博士学位,2002年在山东医科大学完成博士后研究后顺出站,同年破格晋升为主任医师。
  • 山东省血栓病防治工程技术研究中心房淑欣副教授 免费阅读 下载全文
  • 1962年出生,汉族,山东招远人,山东省血栓病防治工程技术研究中心副主任,山东省交通医院血栓病房主任,山东中医药大学教授,山东省中西医结合学会神经内科专业委员会委员。
  • 北京中医药大学朱燕波教授 免费阅读 下载全文
  • 朱燕波,女,医学学士及管理学硕士。2001—04/2002-03和2005—04/2006—03分别作为碴川医学研究者和特别研究者由卫生部派遣到日本富山大学进行“东洋医学临床流行病学”研究2年,现为北京中医药大学教授,社会医学与卫生事业管理专业硕士生导师。
  • 河北医科大学第四医院内分泌科王富军教授 免费阅读 下载全文
  • 王富军,现任河北医科大学第四医院内分泌科主任,主任医师,教授,医学硕士,硕士生导师。担任中华医学会医学工程学分会干细胞工程专业委员会委员,河北省医学会内科分会委员,河北省中西医结合内分泌学会副主任委员,河北省内分泌糖尿病学会委员,石家庄市内分泌学会常委。河北省医学会内科分会委员;河北省中西医结合内分泌学会副主任委员;河北省内分泌糖尿病学会委员;石家庄市内分泌学会常委。
  • 辽河油田中心医院邹本警副院长 免费阅读 下载全文
  • 邹本警,现任辽河油田中心医院常务副院长,泌尿外科主任,主任医师,辽宁医学院教授,硕士研究生导师。为中华医学会辽宁分会泌尿外科分科学会委员;中华医学会辽宁分会器官移植分科学会委员;辽宁省中西医泌尿外科学会委员。盘锦市医学会医疗事故技术鉴定专家。
  • 大鼠外周血单个核细胞体外向内皮细胞诱导分化时的表型变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:内皮祖细胞在贴壁分化过程中其干细胞标记以及内皮细胞表型的变化过程将有助于了解内皮祖细胞的分化特性。但目前还未找到区别于成熟内皮细胞特异性的细胞标记。目的:观察大鼠外周血单个核细胞外分化为内皮细胞的过程中干细胞标志物以及内皮细胞表型的变化。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2004-06/2008-12在青岛市市立医院心脏外科实验室完成。材料:抽取雄性SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞。方法:单个核细胞体外培养于纤连蛋白处理的培养皿中,同时应用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导,使之向内皮细胞转化。主要观察指标:以免疫组织化学方法检测细胞CD31、CD34、Flk-1、vWF在第1-7天的表达。结果:贴壁细胞的CD31、CD34、Flk-1、vWF在不同时段呈不同程度的表达。干细胞标志物CD31、CD34在培养的第2天开始表达,第4天最强,以后逐渐减弱,第6天消失。而Flk-1在第3天开始表达,以后逐渐增强,第7天时最强。vWF表达是逐步出现的,第7天时表达为100%。结论:大鼠外周血干细胞向内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志物逐渐消失,内皮细胞的表型逐步出现。
  • 无血清培养基体外分离培养人胶质瘤干细胞与鉴定 免费阅读 下载全文
  • 背景:最近有研究者采用神经干细胞的无血清培养基从脑肿瘤组织中培养出肿瘤干细胞。目的:探讨利用无血清培养基从原发胶质母细胞瘤组织中分离培养胶质瘤干细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08在山东省青岛市脑科研究所完成。材料:胶质瘤组织来自青岛大学医学院附属医院神经外科手术切除标本,DMEM/F12培养基、B27为GIBCO公司产品,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子为Peprotech公司产品。方法:无菌条件下取肿瘤深部无坏死囊变、未电凝组织,剪切消化成单细胞悬液后,加入含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27添加剂的无血清DMEM/F12培养基,体外分离培养获得胶质瘤干细胞。待培养孔中细胞团数量增多、培养液刚刚变色时,吸取含有细胞团的培养液进行传代。取第3代胶质瘤干细胞,加入巢蛋白和CD133抗体行免疫荧光检测;加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导5d,行胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色观察分化情况。主要观察指标:原代与传代培养的胶质瘤干细胞形态及生长情况,胶质瘤干细胞巢蛋白、CD133的表达及其分化。结果:原代培养7-10d可形成大小不一的细胞团,球形或近似球形,呈悬浮或半悬浮状态生长,细胞形态均一,折光性好;传代24h后次代细胞团形成,细胞的大小、形态与原代无明显差别,连续传代5次后细胞团增殖活跃。第3代胶质瘤干细胞呈巢蛋白和CD133阳性表达,加入胎牛血清后细胞球贴壁分化,呈胶质纤维酸性蛋白阳性。结论:人脑胶质瘤组织中存在胶质瘤干细胞,在体外无血清条件下可保持未分化的悬浮状态;加入血清后贴壁分化呈胶质瘤细胞样或神经元样,符合干细胞的自我繁殖和多向分化特征。
  • 编作读对话评刊 免费阅读 下载全文
  • 中国组织工程研究与临床康复 免费阅读 下载全文
  • [研究与报告]
    骨髓间充质干细胞移植后2型糖尿病鼠血糖及肾脏病变的改善
    人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活和分化
    自体骨髓单个核细胞移植改善心肌梗死并左心功能不全患者血管内皮功能(聂颖 郭艳红 郭丽君 崔鸣 高炜)
    重组人粒细胞集落刺激因子动员急性心肌缺血大鼠自体骨髓干细胞归巢缺血心肌的短期安全性评价(杨洋 吴迪 王颜 刘全)
    人脂肪神经干细胞移植对大鼠脑缺血后血管新生和细胞因子的作用
    自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植治疗帕金森叠加综合征
    人羊膜间充质干细胞静脉移植治疗阿尔茨海默病APP^+转基因鼠的有效性及安全性评估
    [综述与专论]
    端粒、端粒酶与干细胞
    表皮干细胞向皮肤附件诱导分化的研究近况
    非清髓性异基因造血干细胞移植的基础实验及临床研究(金楠 陈宝安)
    间充质干细胞免疫学特点及在肾脏疾病中的应用(刘楠梅 张金元)
    神经干细胞的鉴定方法
    肌萎缩侧索硬化症的干细胞移植治疗与进展(刘强 卢锡林 姚晓黎)
    骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元的理论研究现状(姜永辰 任甫)
    [本刊特稿]
    医学英文句型正误辨析
    干细胞医学词汇中英文对照
    关于多功能干细胞(iPS细胞)的研究
    让昨天告诉今天:干细胞研究的学术与技术进展
    诱导的多能干细胞(iPS细胞)相关问题的临床问答
    [病例报告]
    脐血干细胞自体移植重建早产儿免疫系统(方慧云 陈敬国)
    单倍体外周血干细胞移植治疗急性白血病2例(王智明 王琳 孟娟 罗贤生 陈晓霞 吴琴 何丽莉 符容香 王云英 黎丽琼 黄海妹 黄姿英 谭莲)
    自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死6例4年随访
    异基因造血干细胞移植治疗白血病9例(唐晓琼 刘林 陈建斌 王建渝 张红宾 肖青 疗明燕 胡宗惠)
    [信息导读]
    CRTER杂志对涉及中医药、针灸内容稿件提出的修稿要求
    CRTER杂志对文章中图片的要求
    本刊“干细胞”栏目发稿重点
    ORTER发表文章被SCI引文库、CA、EM数据库收录的最新数据
    SCI收录的《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志
    SCI收录的NRR杂志2008年出版参数及被SCI数据库和引文库以及CA、EM收录情况
    本刊“干细胞”栏目发稿重点
    SCI收录的NRR杂志近期出版方向
    CRTER为国际投稿作者服务
    [技术与方法]
    微载体cytodex3培养技术在大量扩增成人骨髓间充质干细胞中的应用
    脐血CD34^+细胞体外诱导分化为成熟巨核细胞及产出血小板
    超顺磁性氧化铁标记神经干细胞及对其生物学特性的影响(汪兆艳 杨印祥 栾佐)
    杜仲叶提取物诱导羊骨髓间充质干细胞成骨及抑制其成脂肪分化(陈伟才 罗军)
    构建稳定表达血管内皮细胞生长因子的人间充质干细胞(陈铭 沙慧方 冯久贤 李颖则)
    在兔外周血源性及骨髓源性单核细胞向树突状细胞转化过程中人粒-巨噬细胞集落刺激因子与人白细胞介素4的作用(雷霄 李志樑 傅强 缪绯 余志国 刘芃 刘映峰)
    趋化因子CXCL-8趋化骨髓间充质干细胞迁移的体外效应(李兴泽 孟庆海 金澎 袁鲁)
    锌对大鼠骨髓间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响
    表皮生长因子对外周血间充质干细胞原代克隆形成的影响及其传代后多向分化潜能(陈燕玲 王燕 贲晓明 周晓玉 苗登顺)
    基因芯片筛选大鼠骨髓间充质干细胞及软骨细胞的差异表达基因(冯亚 翟立杰 王志强)
    体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达(张黎 刘靖 周畅)
    小鼠胎肝干细胞的分离培养与鉴定(吴必刚 张晓刚 常静)
    体外诱导人外周血单个核细胞向肝样细胞的分化
    人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控
    骨髓间充质干细胞对K562细胞增殖及化疗敏感性的影响(周莉 张兰芳 陆勤 贲晓明)
    兔脂肪干细胞的体外分离培养特性
    人脐带血间充质干细胞分离培养体系的优化筛选
    白细胞介素12重组腺病毒质粒转染骨髓间充质干细胞
    大鼠骨髓间充质干细胞表达心肌基因表型的时间依赖效应(王秀力 王洁 宫海滨)
    大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞

    《中国神经再生研究(英文版)》令国际神经再生研究者感兴趣的SCI收录杂志
    昆明医学院第一附属医院张桂敏博士
    山东省血栓病防治工程技术研究中心房淑欣副教授
    北京中医药大学朱燕波教授
    河北医科大学第四医院内分泌科王富军教授
    辽河油田中心医院邹本警副院长
    大鼠外周血单个核细胞体外向内皮细胞诱导分化时的表型变化(孙龙 池一凡 侯文明 孙忠东 牛兆倬 孙勇 生伟)
    无血清培养基体外分离培养人胶质瘤干细胞与鉴定
    编作读对话评刊
    中国组织工程研究与临床康复
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

    主管单位:中华人民共和国卫生部

    主办单位:中国康复医学会 《中国组织工程与临床康复》杂志社

    社  长:王莉莎

    主  编:刘昆

    地  址:沈阳市和平区南京南街121号

    邮政编码:110004

    电  话:024-23380576 23389106

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