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文献检索:
  • CRTER杂志“干细胞研究栏目”组稿重点 免费阅读 下载全文
  • 医学英文句型正误辨析 免费阅读 下载全文
  • 让昨天告诉今天:干细胞研究的学术与技术进展 免费阅读 下载全文
  • 2000年,美国国立卫生研究院(NIH)公布实施人多能干细胞研究指南。
  • 中国干细胞研究技术可居世界前位 免费阅读 下载全文
  • 韩忠朝教授,细胞产品国家工程研究中心主任,天津昂赛细胞基因工程有限公司董事长表示,近年来,中国干细胞研究不断进步,目前中国干细胞研究整体上已排名世界前十位,其中在从脐带中提取干细胞、和从骨髓中提取干细胞的技术水平处于世界前列。尤其是脐带提取干细胞技术,在研究成本和安全性上都要优于其他方式。
  • 干细胞移植治疗进行性肌营养不良症作用途径及其效果? 免费阅读 下载全文
  • 进行性肌营养不良是一种原发于肌肉系统的X连锁隐性遗传病,一般幼年发病,四肢近端骨骼肌萎缩无力,呈缓慢进行性加重,同时累及心肌和呼吸肌,最终完全丧失运动功能,20岁左右因心力衰竭或重症感染而死亡。根据其遗传方式、发病年龄、临床表现及预后分为不同类型,以假肥大型多见。由于基因缺陷使肌细胞膜上该基因编码的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)表达异常或缺失,导致肌细胞膜形态结构异常,肌膜通透性及转运功能改变。
  • 干细胞治疗途径的临床问答 免费阅读 下载全文
  • 虽然进行性肌营养不良症的发病机制得到公认,但患儿一经确诊即被告之无法医治,被称为“超级癌症”。近年来国内外学者把目光转向具有修复和再生功能的干细胞,试图应用干细胞移植技术为患儿们带来新希望。
  • 干细胞医学词汇中英文对照 免费阅读 下载全文
  • 骨髓间充质干细胞分离培养和定向分化的研究现状 免费阅读 下载全文
  • 骨髓间充质干细胞是存在于骨髓基质中的非造血系细胞,它们能够分化成中胚层和非中胚层细胞。骨髓间充质干细胞主要有3种分离方法:贴壁法,梯度离心法和免疫选择法。文章列举了在特定的诱导条件下骨髓间充质干细胞的定向分化种类,讨论了文献报道的各种相关的诱导条件,分析这些人工调控条件后的原理并探寻统一而有效的诱导条件。得出:骨髓间充质干细胞在适当条件下不仅可以分化为同源于中胚层的间质组织细胞,还可以突破胚层界限,分化为非中胚层组织,如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等。作为组织工程的种子细胞及细胞替代治疗的一种来源,骨髓间充质干细胞被广泛应用于干细胞的研究中。
  • 神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状 免费阅读 下载全文
  • 脊髓完全横断性损伤引起的永久性神经功能障碍的治疗,目前还没有很有效的方法。文章介绍了对神经干细胞培养、神经干细胞表型控制及神经干细胞移植等方法的分析,介绍了神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状。目前神经干细胞移植的动物实验主要致力于提高轴突再生能力、替代细胞成分、阻止脱髓鞘和使髓鞘再生等方面,具有促进感觉及运动功能恢复的客观结果,有些甚至已经进入了临床实验阶段。不过神经干细胞的成功应用还受到很多凶素的影响,诸如移植剂量、细胞生长因子的活力,细胞移植的风险等,尤其是其效果还需要进一步研究、评价,并且需要长时间的随访。
  • 嗅鞘细胞与脊髓损伤的治疗 免费阅读 下载全文
  • 嗅鞘细胞是一种特殊类型的神经胶质细胞,起源于嗅基底膜,分布在嗅球、嗅神经,并可伴随嗅神经轴突迁徙入脑。尽管目前嗅鞘细胞移植技术治疗脊髓损伤的疗效已经被大量基础实验证实,并且已经开始了初步的临床试验,但其在移植后作嗣的主要机制仍然需要继续探讨。脊髓的再生与修复是一个非常复杂的过程,目前还有许多问题有待解决,如嗅鞘细胞移植治疗的主要机制、嗅鞘细胞移植时机的选择、嗅鞘细胞纯度对移植效果的影响、嗅鞘细胞植入的方法等。
  • 骨髓间充质干细胞分泌的蛋白及其功能 免费阅读 下载全文
  • 骨髓间充质干细胞的主要功能是支持和营养造血细胞,其提供的微环境由其分泌的可溶性物质、细胞表面分子以及细胞外基质组成,这三者中研究较多并且更有现实意义的是骨髓间充质干细胞分泌的可溶性物质。骨髓间充质干细胞除了可以分泌一些造血功能必须的细胞因子,如白细胞介素6、白细胞介素7、白细胞介素8、白细胞介素11、白细胞介索12、白细胞介素14、白细胞介素15、白血病抑制因子、粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、目噬细胞集落刺激因子和干细胞因子,长期支持造血干细胞的造血功能。还可以分泌许多神经营养因子,如脑源性神经营养因子、胶质源性神经营养因子、神经生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、睫状神经营养因子、肝细胞生长因子和血小板衍生的生长因子等,这些因子可以参与中枢神经系统的神经再生,促进损伤脑组织的生存与重塑。
  • 造血干细胞移植后的免疫重建 免费阅读 下载全文
  • 造血干细胞移植既可重建造血系统,又可重建免疫系统,因此被广泛用于治疗造血系统及免疫系统缺陷疾病。但移植后受者免疫重建迟于造血重建,面临着肿瘤复发和移植后感染的问题,因此移植后如何促进免疫重建成为研究热点。文章就移植后免疫状态、促进免疫重建策略及间充质干细胞在移植免疫中的作用作以综述。
  • 粒细胞集落刺激因子与血液病 免费阅读 下载全文
  • 粒细胞集落刺激因子是一种糖基化的多肽链细胞生长因子,能特异地调节粒系祖细胞的增殖与分化,并能增强成熟中性粒细胞的功能。粒细胞集落刺激因子功能的发挥有赖于与效应细胞表面的特异性受体的结合。随着基因克隆技术的发展,粒细咆集落刺激因子重组产品已广泛应用于临床,为血液系统疾病的治疗提供了有力手段。目前在临床上广泛用于白细胞减少性疾病。近年来在化疗基础卜联用粒细胞集落刺激因子的预激方案也取得良好疗效,为难治、复发、老年急性髓系白血病的治疗创造了机会。目前,粒细胞集落刺激因子是临床上应用最成功的几种造血调控因子之一。
  • 微小RNA在乳腺癌干细胞中的表达 免费阅读 下载全文
  • 微小RNA作为生物体正常生长发育的调控分子,不仪在多种恶性肿瘤中表达异常,而且在维持胚胎干细胞以及成体干细胞自我更新及多向分化潜能中起重要作用。因此,筛选乳腺癌干细胞相关微小RNA表达谱,探讨微小RNA参与肿瘤干细胞形成的分子机删,具有重要的理论意义。文章综合分析相关文献,对乳腺癌千细胞和微小RNA,方面的研究情况予以综述分析和展望。乳腺癌干细胞具有自身特征性微小RNA,随着微小RNA在乳腺癌干细胞研究的不断进展,对乳腺癌干细胞的生物学特征会不断得以揭示,为进一步从干细胞层面研究乳腺癌发病机制及靶向治疗打下基础。
  • 移植物化学修饰减轻小鼠半相合骨髓移植后的急性移植物抗宿主病 免费阅读 下载全文
  • 背景:甲氧基聚乙二醇是一种无免疫原性的兼性聚合分子,可以共价结合方式修饰各种蛋白质,减少其免疫原性。因此,在进行半相合造血干细胞移植时,若能用甲氧基聚乙二醇对移植物的T细胞进行化学修饰,阻断其激活的途径,就可能减轻移植物抗宿主病反应,提高移植成功率。目的:构建小鼠半相合骨髓移植模型,观察甲氧基聚乙二醇修饰移植物对小鼠H2半相合骨髓移植后移植物抗宿主病的影响。设计、时间及地点:随机化配对设计实验,于2003—03/11在解放军总医院医学动物实验中心和小儿内科实验室完成。材料:纳入20只8-10周龄雄性近交系BALB/cHi-2d小鼠作为供鼠,60只8-10周龄杂交获得的雌性CB6F1H-2d/b 小鼠作为受鼠。甲氧基聚乙二醇为美国Sigma公司产品。方法:常规制备供鼠骨髓及脾细胞混合悬液。受鼠行总剂量8.0Gy60Coγ射线全身均匀照射,照射后随机分为3组,每组20只。照射对照组每只受鼠经尾静脉输入RPMI-1640培养基0.5mL,单纯移植组照射后12h内经尾静脉输入未处理的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5mL,修饰移植组照射后12h内经尾静脉输入甲氧基聚乙二醇修饰的半相合供鼠骨髓及脾细胞混合悬液0.5mL。主要观察指标:移植后观察动物存活率、急性移植物抗宿主病理表现及存活小鼠的染色体核型。结果:照射对照组小鼠均花2周内死亡;修饰移植组小鼠30d存活率显著高于单纯移植组(75%,40%,x2=5.01,P=0.025)。取死亡小鼠的爪垫皮肤、肝及小肠肠管作病理组织学检查,修饰移植组急性移植物抗宿主病病理表现减轻,Thomas病理分级轻于单纯移植组。移植后75d应用染色体C带显色法检测存活受鼠的嵌合体,证实为完全供者型植入。结论:甲氧基聚乙二醇修饰移植物可明显减轻急性移植物抗宿主病,提高半相合骨髓移植存活率。
  • 异基因造血干细胞移植患者FOXP3mRNA表达与移植物抗宿主病发生的关系 免费阅读 下载全文
  • 背景:转录因子FOXP3是调节性T细胞的特异性标志,对于造血干细胞移植后移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达水平的关系目前仍存在争议。目的:观察异基凶造血干细胞移植后患者外周血FOXP3mRNA的表达,初步探讨利用FOXP3mRNA表达水平的变化进行临床早期诊断移植物抗宿主病的可能性。设计:回顾性病例分析。对象:选取2001-03/2007—06在广东省人民医院血液科行异基因造血干细胞移植的白血病患者31例,男18例,女13例,平均年龄32岁。方法:所有患者均采用改良BU/CY联合FLU方案进行预处理,经深静脉输入单个核细胞数5.48(3.7~8.4)×10^8/kg,CD34+细胞数10.45(3.6-28.0)×10^5/kg。移植后出现移植物抗宿主病的患者在治疗前、治疗好转或缓解时留取外周血标本,尚无移植物抗宿主病的患者复查时采集外周血标本。主要观察指标:采用实时定量PCR技术监测外周血样本FOXP3mRNA表达及其与患者移植物抗宿主病的发生情况。结果:31例患者行异基因造血干细胞移植后,9例未出现移植物抗宿主病,9例发生急性移植物抗宿主病,13例出现慢性移植物抗宿主病。FOXP3表达水平的变化与急性移植物抗宿主病的临床演变相关,急性移植物抗宿主病发生时FOXP3水平较临床无移植物抗宿主病时明显降低(P=0.009),好转后FOXP3水平又逐步升高或恢复到基础水平;慢性移植物抗宿主病患者FOXP3的表达水平与无移植物抗宿主病患者相比无明显差异(P=0.107)。结论:急性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达降低有关,动态检测FOXP3mRNA表达水平的变化有可能为临床早期诊断急性移植物抗宿主病或预测其发生提供参考。实验数据末发现慢性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达有关。
  • 骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后正常心肌细胞凋亡的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前的研究显示,骨髓间充质干细胞移植在治疗缺血性心血管疾病中起到了重要的作用,但干细胞移植后改善缺血心肌功能的详细机制尚不明确。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对急性心肌梗死后大鼠正常心肌细胞凋亡的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-02/08在福建省高血压研究所完成。材料:密度梯度离心法和贴壁筛选法获得SD大鼠骨髓间充质干细胞。2周龄雄性清洁级SD大鼠16只,体质量200- 250g,用于制备心肌梗死模型。方法:16只SD大鼠随机区组法分为2组,对照组:结扎冠状动脉前降支,未进行干细胞移植,只在梗死心肌周围注入等量(200μL)的生理盐水;实验组:在心肌梗死1h后,向梗死心肌的周围分4点(200μL)注入同种异体骨髓间充质干细胞1×10^11L^-1:每组8只。于移植4周后处死动物,取梗死边缘正常心肌组织,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,并计算心肌细胞凋亡率。主要观察指标:①凋亡心肌细胞的形态变化。②实验组和对照组心肌细胞的凋亡率。结果:①造模后4周,TUNEL柃测显示凋亡的心肌细胞核呈深浅不一的深褐色,细胞轮廓清楚,而正常增殖的心肌细胞不被染色。②经显微镜结合计算机显微图像分析系统检测对照组、实验组心肌细胞凋亡率分别是(112±0.06)%,(081±0.02)%,两者相比差异有显著性意义(P〈0.05)。结论:骨髓间充质干细胞移植在一定程度上可以抑制急性心肌梗死后正常心肌细胞凋亡的发生。
  • 冠状动脉自体骨髓CD34+干细胞移植治疗心绞痛:随机对照临床分析 免费阅读 下载全文
  • 背景:大量基础和临床研究结果提示,骨髓CD34+干细胞具有明显的促进血管新生作用。经作者查新检索,目前国际上仅有1篇小样本心腔内注射骨髓CD34+干细胞治疗心绞痛的报道。目的:评价冠状动脉内CD34+干细胞移植治疗心绞痛的安全性和有效性。设计:回顾性病例分析。对象:选取2007-07/2008-07解放军北京军区总医院心内科住院的32例心绞痛患者,按患者意愿分为治疗组和对照组,移植前1个月内均无急性心肌梗死病史,心绞痛加拿大心血管学会分级为Ⅱ-Ⅳ级,两组患者基线资料比较无统计学差异(P〉0.05)。方法:治疗组患者在接受最佳药物治疗的基础上,于常规PCI术后,行冠状动脉内自体骨髓CD34+干细胞移植,于冠状动脉病变近端注入CD34+干细胞悬液15mL,细胞数为(10-6.1)×10^6,对照组患者仅接受最佳药物治疗和导管置入。主要观察指标:移植后两组患者的疗效指标比较及心肌血液灌注情况。结果:骨髓干细胞移植后,治疗组心绞痛发作频率、硝酸甘油的用量、运动时间及加拿大心血管学会心绞痛分级等各项疗效指标均明显优于对照组(P〈0.001-005),且移植后6个月时的治疗效果优于移植后3个月。移植后6个月,治疗组患者心肌灌注缺损面积明显小于对照组(P〈0.01)。随访6个月内,未观察到因冠状脉动脉内注射而导致的心肌梗死、心肌酶升高、心肌穿孔、心包积液、室性心动过速或室颤等严重不良事件发生。结论:冠状动脉内注射白体骨髓CD34+干细胞后,町显著改善心绞痛患者心肌血液灌注,安全有效。
  • HLA相合同胞供者异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病40例 免费阅读 下载全文
  • 背景:异基因造血干细胞移植仍是目前惟一能根治慢性粒细胞白血病的方法。随着移植技术的同臻完善,有HLA相合同胞供者的年轻慢性粒细胞白血病患者只需冒较小的近期风险,便可获得治愈疾病的远期疗效。目的:回顾性分析HLA相合同胞供者异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病的疗效。设计:回顾性病例分析。对象:选择2002—02/2007—12在安徽省立医院血液科住院接受异基因造血干细胞移植的慢性粒细胞白血病患者40例.男29例,女11例,中位年龄35岁;慢性期30例,加速期5例,急变期5例。供者均为HLA6/6位点配型完全相合的同胞。方法:根据移植方式进行分组:异基因骨髓移植组3例、异基因外周血干细胞移植组8例,联合组29例(异基因外周血干细胞移植+异基因骨髓移植)。预处理方案采用自消安+环磷酰胺或氟达拉滨+环磷酰胺+全身照射2Gy。移植物抗宿主病预防方案为环孢素A+霉酚酸酯。随访中位时间为移植后28个月。主要观察指标:造血功能恢复,移植相关并发症,复发及治疗转归,长期生存情况。结果:40例患者均获造血重建。40例患者中,12例(30%)发生急性移植物抗宿主病,Ⅰ度5例(13%),Ⅱ度6例(15%),Ⅲ度1例(诱发)(3%)。可评估的存活100d以上的39例患者中,15例(39%)出现慢性移植物抗宿主病。与联合组比较,异基因外周血干细胞移植组慢性移植物抗宿主病发生率明显升高(P〈0.05)。40例患者中,11例发生Ⅱ度-Ⅲ度迟发性出血性膀胱炎,无急性出血性膀胱炎和肝静脉闭塞病发生。长期无病生存率80%,其中慢性期30例长期无病生存率为87%,5例急变期患者长期无病生存率为20%。加速期5例患者使用伊马替尼达到2次慢性期后进行移植,至今全部无病牛存。死亡8例,其中2例死于复发,5例死于移植相关并发疗,自杀1例。结论:HLA相合同胞供者异基因造血干细胞移植是治疗慢性粒细胞白血病的有效方法,尤其亿慢性期移植效果较好。
  • 心肌梗死大鼠血清对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓间充质干细胞的分化与微环境密切相关,心肌梗死后,心肌细胞发生坏死,补体活化,自由基产生,分泌各种细胞因子,患者的血清成分也发生改变,这些改变究竟对骨髓间质干细胞向心肌细胞分化存在怎样的影响?目的:观察急性心肌梗死大鼠血清在体外对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的作用。设计、时间及地点:对比观察体外细胞学实验,于2005—09/2006—06在中山大学干细胞与组织工程中心实验室完成。材料:体质量50-80g三四周龄SD大鼠用于骨髓间质干细胞分离培养:体质量200-300g6-8周龄SD大鼠用于制作急性心肌梗死大鼠模型。方法:采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。结扎左冠状动脉前降支制作急性心肌梗死大鼠模型,并抽取正常大鼠与模型大鼠血清备用。取第3代骨髓间充质干细胞分6组培养:未诱导组、5-氮胞苷诱导组、5-氮胞苷+心肌梗死模型大鼠血清诱导组、5氮胞苷+正常大鼠血清诱导组、心肌梗死模型大鼠血清诱导组、正常大鼠血清诱导组。主要观察指标:大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后的形态学变化。大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后心肌肌钙蛋白的表达情况。大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后GATA-4和结蛋白mRNA表达水平。结果:大鼠骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷联合血清诱导后,部分细胞渐伸长、变细,胞体中央形成球形,二三周后可见细胞呈球形、棒状,邻近细胞之间形成连接,镜下可见部分分化的细胞呈节律性跳动,呈心肌样细胞改变,其心肌肌钙蛋白、GATA-4、结蛋白表达阳性。对照组和单纯血清诱导组骨髓间充质干细胞未见形态改变,其心肌肌钙蛋白为阴性,GATA-4、结蛋白呈弱阳性。结论:单纯使用心肌梗死大鼠血清不能诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化,但心肌梗死血清能促进5-氮胞苷诱导的骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化.并促进分化的心肌细胞成熟。
  • 多种神经营养因子联合诱导培养骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞的定向分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:轴突再生后髓鞘化是影响脊髓损伤后恢复的一个关键性因素,而少突胶质细胞存活的多少直接影响轴突再生后髓鞘化。目的:探讨骨髓间充质干细胞经神经营养因子诱导培养后,向少突胶质样细胞定向分化的可行性。设计、时间及地点:细胞分子生物学的体外实验,于2006—09/2007—06在同济医院骨科实验室完成。材料:选用2-4周龄SD大鼠5只,雌雄不拘,取其双侧股骨、胫骨骨髓,分离培养骨髓间充质干细胞。培养用诱导因子表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子为美国Invitmgen公司产品。方法:取培养至第4代的骨髓间充质干细胞,加入含有20ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、20ng/mL表皮生长因子、N2添加剂的无血清培养基的诱导液诱导48h后,加含500ng/mL胰岛素样生长因子1、N2添加剂的分化培养液培养3d。主要观察指标:相差显微镜观察诱导过程中骨髓间充质干细胞的形态学变化。半定量RT-PCR检测少突胶质细胞特异性标志物mRNA的表达。应用神经元细胞标志物抗微管相关蛋白,星形胶质细胞标志物抗神经纤维酸性蛋白,少突胶质细胞标志物抗半乳糖脑苷脂、抗磷脂碱性蛋白抗体进行免疫细胞化学染色,检测骨髓间充质干细胞定向分化为少突胶质样细胞的阳性率。结果:①骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞诱导分化过程中的形态学变化:经诱导分化后,大部分骨髓间充质干细胞表现出少突胶质细胞的形态学特征,胞质向细胞核回缩,细胞突起向外延伸,折光性增强,随时间延长多个细胞突起相互连接形成典型的网状结构。②少突胶质细胞特异性标志物mRNA的表达:细胞诱导分化后可检测到磷脂碱性蛋白mRNA、半乳糖脑苷脂mRNA的特异性条带。③少突胶质细胞阳性率:在诱导分化条件下,半乳糖脑苷脂阳性率为65%,磷脂碱性蛋白阳性率为45%,微管相关蛋白2阳性率为10%。结论:碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子与胰岛素样生长因子联合应用能够有效促进骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞定向分化。
  • 中药单体黄芩苷体外诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:抗氧化剂法及细胞因子法是体外诱导脐血间充质干细胞定向分化为神经元的2种方法,怎样选择既可广泛保护神经,又具有较强抗氧化作用的诱导剂?通过广泛筛选,应用中药干预脐血间充质干细胞的体外纯化、扩增并向神经元细胞分化。目的:观察中药单体黄芩苷对人脐血间充质干细胞体外纯化、扩增及向神经元样细胞诱导分化的作用。设计,时间,地点:随机对照,细胞学体外观察,于2005—02/06在南昌大学第一附属医院神经内科实验室完成。材料:年龄为23-35岁的健康孕妇足月顺产儿的脐带血10份;黄芩苷,纯度〉95%,由中南大学湘雅医学院药剂科提供:抗氧化添加剂β-巯基乙醇为SABC公司产品。方法:采集胎儿脐带血,肝素抗凝,分离出脐血单个核细胞,调整细胞浓度为1×10^9L^-1,以含体积分数为20%胎牛血清、谷氨酰胺、B27、粒巨噬细胞集落刺激因子、干细胞因子的DMEM液体培养基进行纯化和扩增。按照抗氧化添加剂的不同分为4组:黄芩苷组加入黄芩苷;空白对照组不添加抗氧化剂;β-巯基乙醇组添加β-巯基乙醇;共培养组添加黄芩苷、β-巯基乙醇。连续培养4周。主要观察指标:①脐血冷冻保存后7,14,21,28dCD34及CD29阳性细胞的表达。②细胞形态学观察。③流式细胞仪检测间充质干细胞表面标志。④免疫细胞化学染色观察间充质干细胞扩增培养4周后神经细胞特异性烯醇化酶、神经微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达。结果:①与冻存前相比,冻存后7,14,21,28d脐血单个核细胞锥虫蓝拒染率均明显降低(P〈0.05)。②细胞形态学观察:脐血单个核细胞培养第2-3天开始贴壁生长,2周左右达高峰,3周后细胞生长达80%-90%融合,此时脐血原始间充质干细胞呈较均一的长梭形。4周后,黄芩苷组原来呈梭形的胞体一部分发生收缩,细胞边缘出现细的突起:一部分胞体逐渐近似圆形、锥形、三角形,伪足有多个细长突起。β-巯基乙醇组、共培养组有少量细胞存在脱落、死亡现象,且随着培养时间延长呈逐渐增加的趋势。③培养4周后,空白对照组以CD45阳性细胞为主;其余3组均以CD29和CD83阳性细胞为主,其中共培养组最多,黄芩苷组次之,β-巯基乙醇组最少,组间两两比较差异具有显著性意义(P〈0.01):各组贴壁生长细胞中均未见CD34阳性细胞。④扩增培养4周后与黄芩苷组比较,空白对照组、β-巯基乙醇组神经细胞特异性烯醇化酶及神经微管相关蛋白2阳性细胞表达率均显著降低(P〈0.01)。各组胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达率均低于1%。结论:100μmol/L黄芩苷可促进脐血间充质干细胞体外扩增,且随抗氧化作用时间的延长效果显著增强,同时在一定程度上还能够诱导其向神经元样细胞方向分化。
  • 小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上向胚胎干细胞的生长发育 免费阅读 下载全文
  • 背景:到目前为止已建立了数百个小鼠胚胎干细胞系,一般情况下实验室培养的胚胎干细胞有3个细胞来源,即胚泡内的内细胞群、胚胎生殖嵴的原始生殖细胞和应用克隆技术制造人体胚胎并提取干细胞。目的:尝试用自制的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养小鼠胚胎干细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005—12/2007—09在辽宁医学院完成。材料:妊娠14.5d的孕鼠40只,由辽宁医学院实验动物中心提供。方法:无菌条件下剪开孕鼠子宫壁,取出胚胎,去除头、尾、内脏和四肢后采用胰蛋白酶消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞,经丝裂霉素C处理35h后接种于6孔板中,细胞贴壁后即为成纤维细胞饲养层。收集3.5d的小鼠囊胚,在显微镜下将囊胚置于上述6孔板的中央,五六天后取隆起生长的内细胞团块,分离后再培养。主要观察指标:成纤维细胞饲养层的制备情况,胚胎干细胞的生长状态、碱性磷酸酶染色结果及分化趋势。结果:光镜下小鼠胚胎成纤维细胞呈不规则形,生长较快,传代比例为1:4,经丝裂霉素C处理后细胞贴壁较慢,失去分裂增殖能力。小鼠囊胚孵出透明带的时间为24-72h,从胞膜中孵出约为1d,3-5d后可形成胚胎干细胞集落,7d后集落呈“鸟巢”状。组织化学染色后可见细胞内有大量的蓝紫色颗粒沉积,连续培养20d,期间不换培养液,可见胚胎干细胞团分化为亮度较小、界限清楚的单核细胞。结论:小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可发育成胚胎干细胞,并能进行传代。
  • 孕足月羊水干细胞的分离培养 免费阅读 下载全文
  • 背景:孕中期羊水干细胞的分离培养及生物学性状研究己取得了一定进展,但孕足月羊水是否也可作为干细胞来源目前报道不多。目的:探讨从孕足月羊水中分离培养羊水干细胞的可行性。设计、时间及地点:观察性实验,于2007-10/2008-08在解放军总医院妇产科及解放军军事医学科学院干细胞及再生医学研究室完成。材料:孕足月羊水来自在解放军总医院行剖宫产、排除胎儿畸形及母体全身性疾病的孕妇,告知后同意留取羊水标本10例;鼠龄2个月雄性BALB/C裸鼠,体质量15-20g,用于致瘤实验的观察。方法:从10例孕晚期(孕38-40周)羊水中分离扩增羊水干细胞进行传代培养,取第5,10代对数生长期的细胞在酶标仪450nm波长处检测吸光度似)值,绘制羊水干细胞生长曲线:待细胞70%汇合时换为脂肪诱导培养基用于检测体外分化能力:分别于第4代,第11代行染色体核型分析;取第4-6代羊水干细胞1×10^7个注射到BALB/C裸鼠皮下,观察8周。主要观察指标:①羊水干细胞的形态学特点及生长曲线。②流式细胞仪及免疫荧光法检测羊水干细胞表面标志的表达。③体外向脂肪细胞分化的能力。④染色体核型及致瘤实验结果。结果:10例孕晚期羊水中有4例分离到梭形可持续传代的细胞群,细胞增殖旺盛;羊水干细胞原代生长较慢,传代后生长迅速,第5代,第10代细胞的生长曲线形态相似:流式细胞仪检测证实孕足月羊水干细胞表达CD44,CD29,CD105等间质来源标志,免疫荧光检测显示表达胚胎来源标志SSEA-4及oct-4:换为脂肪诱导培养基后6d,细胞内出现透明、浑圆的小液滴,表明向脂肪样细胞分化;所有标本的染色体核型均为46XX或46XY,第11代染色体核型保持正常;羊水干细胞注射到裸鼠体内后无肿瘤形成。结论:孕晚期羊水也可分离培养到干细胞,可以作为干细胞的新来源。
  • γ-分泌酶在神经干细胞分化过程中的调节作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:Notch信号通路在神经干细胞分化过程中起着关键作用,而γ-分泌酶是Notch信号通路调节的核心环节。目的:对神经干细胞分化过程中γ-分泌酶的活性、酶解产物Notch胞内段的生成量以及活性中心早老素1的表达进行检测。设计、时间及地点:细胞学基因水平检测,于2008-10/2009—01在山西医科大学生物化学与分子生物学实验室完成。材料:清洁级胚龄15d的BALB/c胎鼠由中国药品生物制品俭定所提供,质粒Notch1/kE—GVP和MH100由瑞典斯德哥尔摩诺贝尔医学学会的UrbanLendah1教授惠赠,荧光素酶质粒pRL—CMV为Promega公司产品。方法:体外分离培养胎鼠脑皮质神经干细胞,传至第5代后,按5×10^4/cm2密度接种到24孔板,每孔转染200ngMH100,100ngNotch1△E—GVP和2ngpRL—CMV质粒。主要观察指标:利用Ga14-VP16/UAS系统和双荧光素酶报告基因系统测定神经干细胞分化过程中γ-分泌酶的活性;通过Westernblot技术检测酶解产物Notch胞内段的生成量;采用实时荧光定量PCR法测定γ-分泌酶活性中心早老素1mRNA的表达。结果:在γ-分泌酶抑制剂DAPT作用下,γ-分泌酶活性呈剂量依赖性降低,与对照组相比,0.1μmol/LDAPT即可对γ-分泌酶活性产生明显的抑制作用(P〈0.05),至50μmol/L DAPT时γ-分泌酶活性降低近100倍(P〈0.001)。Notch胞内段的生成量也同步减少,与DAPT抑制γ-分泌酶活性呈剂量依赖性的结果一致。与对照组相比,早老素1mRNA表达水平经0.1μmol/LDAPT干预后开始升高,并随着DAPT浓度增加而逐渐升高。结论:神经干细胞分化过程中,γ-分泌酶抑制剂干预后γ-分泌酶活性与酶解产物生成量呈剂量依赖性降低,活性中心基因表达则呈反馈性的同步增高。
  • mdx鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及向肌细胞的诱导分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:自体干细胞移植治疗可以克服异体干细胞移植治疗的局限性,但目前对于进行性肌营养不良模型mdx鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及肌分化潜能研究未见报道。目的:拟建立体外分离培养mdx鼠骨髓间充质干细胞的方法,并观察其成肌分化能力。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-01/07在中山大学附属第一医院神经病学实验室完成。材料:4-6周龄纯系雄性mdx鼠10只,购自美国Jackson实验室,饲养于中山大学北校区动物实验中心。碱性成纤维细胞生长因子和兔抗鼠MHC抗体为Chemicon公司产品。方法:全骨髓法体外分离mdx鼠骨髓间充质干细胞,差速贴壁法纯化扩增,胰酶+EDTA消化传代。取传至第3代的细胞,按1×10^4/孔接种于24孔板,置于含两性霉素B、碱性成纤维细胞生长因子、胎牛血清的DMEM培养基中向肌细胞方向诱导分化,2周后更换为不含两性霉素B、但添加马血清的DMEM培养基继续培养2周。主要观察指标:鼠骨髓间充质干细胞形态、表面标志、生长曲线及成肌诱导分化。结果:原代培养24h后,鼠骨髓间充质干细胞约80%贴壁生长,第3代细胞多呈梭形,形态比较均一。鼠骨髓间充质千细胞表达CD29和CD44等间质类细胞的表面分子,不表达CD11B和CD45等淋巴造血细胞的表面分子。接种后第一两天细胞处于潜伏期,第3天细胞增殖旺盛,进入对数生长期,至第4天细胞数增长一倍,第5天进入平台期。两性霉素B诱导后细胞有少量死亡,停用后更换马血清促进细胞成肌,7-10d可见有肌管样细胞形成,免疫荧光染色可见肌管样细胞呈MHC阳性,DAPI复染后可见肌细胞内有多个细胞核。结论:在两性霉素B与马血清依次诱导条件下,体外可成功分离培养基因缺陷mdx鼠骨髓间充质干细胞,并证明其具有成肌分化潜能。
  • 茶黄素和转化生长因子β1对免骨髓间充质干细胞向软骨细胞增殖及诱导分化的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:已有大量的实验报道,转化生长因子β1能体外促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化,而茶黄素在细胞转化过程中起重要作用。目的:拟验证在茶黄素和转化生长因子β1的协同作用下,骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化是否优于单纯使用转化生长因β1。设计、时间及地点:干细胞生物学实验,于2008-05/08在安徽省立医院中心实验室完成。材料:健康8周龄新西兰大白兔,获取骨髓间充质干细胞进行分离和原代培养。方法:取第3代骨髓间充质干细胞,分为3组:对照组:完全培养基加地塞米松10μmmol/L、维生素C10mmol/L。转化生长因子组:完全培养基加地塞米松10μmmol/L、转化生长因子β1 5μg/L、维生素C10mmol/L。茶黄素组:完全培养基加地塞米松10^-8mmol/L、转化生长因子B15ng/mL、维生素C10mmol/L、茶黄素30mg/L。主要观察指标:倒胃显微镜下观察细胞生长状况及形态变化,甲苯胺蓝染色、阿利新蓝比色法测定各板每孔中葡萄糖氨基聚糖含量、免疫检测仪测定3组的吸光度值。结果:骨髓中分离获得的骨髓问充质干细胞侄体外增殖旺盛,转化生长因子β1和茶黄素诱导后细胞生长明显减缓。加入诱导液后,转化生长因子组和茶黄素组,可见细胞小结形成,茶黄素组细胞小结明显增多并在局部形成多个呈放射状细胞集落,而对照组未见明显变化。免疫组化染色后转化生长因子组细胞呈阳性、茶黄素组细胞呈强阳性,对照组未见阳性细胞。与对照组比较,转化生长剀子组、茶黄素组吸光度值明显增(P〈0.01),茶黄索高于转化生长因子组(P〈005),差异有统计学意义。结论:茶黄素在转化生长因子β1存在的条件下能有效促进骨髓间充质干细胞在体外向软骨细胞分化。
  • 银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平 免费阅读 下载全文
  • 背景:课题组在前期研究中发现银屑病患者骨髓造血细胞活性存在异常。目的:观察银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平。设计、时间及地点:病例一对照观察,于2007-10/2008-08在太原市中心医院皮肤科实验室完成。对象:选择太原市中心医院皮肤科临床及病理确诊为寻常型银屑病的门诊患者24例,男16例,女8例:年龄16~59岁;另取血液科骨穿后经筛选的正常骨髓20例作为对照组,性别、年龄与银屑病患者匹配。方法:采用密度梯度离心法分离银屑病患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传了3代后又培养72h的骨髓基质细胞及培养上清。主要观察指标:流式细胞仪检测细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平。结果:流式细胞仪检测结果显示,90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上。银屑病组骨髓基质细胞培养上清液的干细胞因子和粒细胞集落刺激因子表达均显著高于对照组(P〈0.01)。结论:银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子存在异常,提示银屑病患者骨髓造血微环境发生了改变。
  • 血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞生长增殖的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:在体外构建组织工程材料的过程中,快速获得足够数量且纯度高的种子细胞极为重要,但目前人脐静脉间充质干细胞原代培养的增殖率仍较低。目的:观察血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞原代生长、增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/07在辽宁医学院解剖学实验室完成。材料:正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条,由锦州市凌河区妇幼保健院及辽宁医学院附属第一医院提供。方法:采用胶原酶消化法分离人脐静脉间充质干细胞,以1×10^8L^-1的密度接种于24孔培养板,设立2组,实验组加入150g/L血管内皮细胞生长因子,对照组不加入任何细胞因子。主要观察指标:观察细胞形态变化,MTT法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞CD166的表达。结果:接种后6h细胞开始贴壁,48h后细胞完全贴擘生长,出现呈椭圆形、多角形的内皮细胞,以及呈梭形的成纤维样细胞,有的形成漩涡状生长集落;原代培养1周后细胞以梭形为主:传代后24h细胞基本完成贴壁,48h细胞开始分裂增殖,5~7d可见多核的成纤维样细胞贴擘,呈长杆状、三角形、梭形等。与对照组比较,实验组细胞生长状态较好,增殖较快,单位时间内获得的细胞数量明显增加(t=2.235,P〈0.05),CD166阳性细胞率显著升高(t=1.638,P〈0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子可促进人脐静脉间充质干细胞贴壁,且更有利于间充质干细胞的增殖和纯化。
  • 基质金属蛋白酶9在慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞中表达及其对造血干细胞黏附的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓微环境中持续存在的肿瘤干细胞改变了骨髓基质细胞及细胞外基质的特征,从而参与了造血干细胞恶性转化的过程。目的:探讨慢性粒细胞自血病患者骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9的表达,及其对造血干细胞黏附的影响。设计、时间及地点:绌胞学体外对照观察,于2007-09/2008-02在北京协和医学院基础学院完成。材料:骨髓标本来源于4例慢性粒细胞白血病患者和4例健康志愿者,由解放军第三0九医院血液科提供。脐血由北京脐带血造血干细胞库提供,293T细胞由南开大学孔德领教授馈赠。方法:分别采集健康志愿者和慢性粒细胞白血病患者的骨髓,Ficoll法体外分离培养获得骨髓间充质干细胞。将脐血分装,离心奔上清,吸取中间层,同法分离培养获得脐血单个核细胞。取处于对数生长期的骨髓间充质干细胞,按1× 10^7L^-1接种于96孔板,培养至近100%融合时再将脐血单个核细胞按1× 10^6/孔接种于同一培养板中,孵育1h后对收集未黏附细胞,计算黏附率。取第2代骨髓间充质干细胞,ELISA法检测细胞培养上清中可溶性形式细胞间黏附分子1的质量浓度。构建MPP-9-siRNA干扰载体,以脂质体法转染包装293T细胞,扩增病毒后进行骨髓间充质干细胞转染。主要观察指标:健康供者与慢性粒细胞自血病患者之间的5项指标比较,病毒转染前后慢性粒细胞白血病患者自身的3项指标比较。结果:与健康供者比较,慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9mRNA及蛋白表达水平明显升高,细胞间黏附分子1的蛋白表达无明显差异,培养上清中可溶性形式细胞间黏附分子1的质量浓度明显升高(P〈0.05),对脐血单个核细胞的黏附率明显降低(P〈0.05)。与未转染的骨髓间充质干细胞比较,病毒转染后骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9mRNA表达明显降低,细胞间黏附分子1的蛋白表达未受影响,对脐血单个核细胞的黏附率明显增加(P〈0.05)。结论:慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞可能存在基质金属蛋白酶9裂解细胞间黏附分子1的作用机制,推测游离的可溶性形式细胞间黏附分子1可能阻断了LFA-1的结合位点,从而影响骨髓间充质干细胞对造血干细胞的黏附。
  • 成人与胎儿骨髓间充质干细胞生物学性状的比较 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前间充质干细胞主要来源于骨髓,成人骨髓中的间充质干细胞含量较低,胎儿骨髓间充质于细胞具有较弱的免疫原性和良好的分化潜能。目的:比较成人与胎儿骨髓间充质干细胞的生物学性状差异。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,下2008~02/10在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:成人骨髓血标本3份,来源于青岛大学医学院附属医院。流产胎儿骨髓样品3份,由青岛市立医院提供。方法:Percoll法体外分离培养成人、胎儿骨髓间充质干细胞,加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液,待细胞汇合至90%后消化传代。分别取相同代数的成人、胎儿骨髓间充质干细胞,加入KGla悬液以及含胎牛血清的DMEM培养液,在37℃、体积分数为0.05的C02条件下培养2h,吸出未黏附细胞。取第3代骨髓间充质干细胞,按1×10^6浓度接种,当细胞达60%~80%融合时,换为成骨细胞诱导分化培养液,诱导16d。主要观察指标:细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,计算细胞体外黏附率,碱性磷酸酶染色检测细胞成骨分化结果。结果:成人、胎儿骨髓间充质干细胞均呈成纤维细胞样梭形外观,但后者体积略小,二者倍增时间分别为50h和30h。与成人骨髓间充质干细胞黏附率比较,胎儿骨髓间充质干细胞黏附率明显降低(t=4.22,P〈005)。二者均可分化为成骨细胞。结论:从成人、胎儿骨髓中培养出的间充质干细胞在细胞形态、生长特性等方面基本相似,在体外均可有效扩增且能够成骨分化。前者促进造血功能恢复和造血重建功能强于后者,扩增潜力弱于后者。
  • 无血清条件下体外分离培养鼠胚胎脑组织神经干细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:神经干细胞的体外培养成功为治疗中枢神经系统疾病提供了新的思路,但神经干细胞的分化和功能修复机制尚不甚清楚,移植后的细胞能否与体内细胞结合以及建立起正常的神经系统突触联系急需解决。目的:在无血清条件下体外分离培养胚鼠神经干细胞,观察其生长及分化情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007—03/2008—01在天津市环湖医院神经干细胞室完成。材料:孕14-16d的SD大鼠,由北京维通利华实验动物中心提供。方法:取孕鼠胚胎的脑海马组织,通过机械分离和胰蛋白酶消化结合法体外分离培养神经干细胞,在含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及B27的无血清DMEM/F12培养基中传代扩增。取原代培养7d的神经干细胞,制备单细胞悬液,接种后加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液诱导3d。主要观察指标:倒置显微镜下观察神经干细胞的增殖分化过程,并行免疫荧光染色鉴定。通过细胞免疫化学染色检测诱导分化后的细胞类型。结果:分离培养的神经干细胞在无血清培养基中不断分裂增殖,8d左右即可形成胞体透亮、折光性好的干细胞球,悬浮生长,免疫荧光染色巢蛋白呈阳性表达。神经干细胞球诱导5d,免疫细胞化学染色后可见胶质纤维酸性蛋白及神经元特异性烯醇酶呈阳性表达的细胞。结论:体外无血清条件下,分离培养的神经干细胞生长状态良好,且具有自我更新和增殖能力,诱导后能够向神经元及星形胶质细胞方向分化。
  • 胎鼠胰腺干细胞体内移植向胰岛样细胞团的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:由于于细胞的转分化受细胞外基质和基因程序的调控,因此在体外很难模拟体内于细胞巢的微环境而使干细胞定向分化,或许干细胞原位移植是可行方法之一。目的:探讨胎鼠胰腺干细胞在糖尿病鼠体内不同部位移植后分化为胰岛细胞团的可能性。设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2006—03/2007—04在深圳市人民医院中心实验室完成。材料:16d龄SD胎鼠12只,10周龄200-250g的SD雌鼠50只,均由广东省实验动物中心提供。方法:分离纯化胎鼠胰腺干细胞,经荧光原位杂交检测为雄性的第5代胎鼠胰腺干细胞用于体内移植。50只SD雌鼠取10只作为正常对照组,余40只通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模后分为4组:胰腺实质内移植组在胰腺实质内多点注射1×10^6个雄性胎鼠胰腺干细胞,肝内移植组行门静脉穿刺注射等量细胞悬液,肾包膜下移植组于左肾包膜下注射等量细胞悬液,模型对照组胰腺实质内多点注射相同体积的PBS液,10只,组,培养8周。主要观察指标:定期监测大鼠血糖及血浆胰岛素水平,观察胰腺、肝脏及肾脏组织病理学变化。结果:雄性胎鼠胰腺干细胞培养传3代后,巢蛋白阳性细胞率为74.1%。胰腺实质内移植组在移植后第3周血糖开始下降,血浆胰岛素水平逐渐升高;第5周血糖降至正常水平并维持,血浆胰岛素达到正常水平,病理学观察在胰腺内可见外源性胰岛样细胞团,胰岛素免疫组化染色呈阳性,巢蛋白免疫组化染色呈强阳性,荧光原位杂交检测Y染色体呈阳性。肝内移植组、肾包膜下移植组大鼠仍维持高血糖状态,相应组织内均未见外源性细胞团形成。结论:分离纯化的胎鼠胰腺干细胞在胰腺内原位移植后,于体内可转分化为胰岛样细胞团,并使血糖降至正常水平。
  • 大鼠附睾脂肪垫脂肪源性干细胞的分离培养及分化潜能 免费阅读 下载全文
  • 背景:相对于骨髓基质干细胞,脂肪源性干细胞来源丰富,取材方便,干细胞丰度高,极易培养,具有多向分化潜能,有望成为组织工程、细胞治疗以及基因转染良好的源细胞,但目前对脂肪源性干细胞的研究尚处于初级阶段。目的:拟在体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞,并探讨其分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008~06/2009—01在南方医科大学组胚教研室和南方医院临床医学实验中心完成。材料:SPF级成年雄性SD大鼠1只,由南方医科大学实验动物中心提供。方法:无菌条件下切取大鼠双侧附睾尾脂肪垫,胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞,胰蛋白酶消化法传代扩增。取第4代脂肪源性干细胞接种到96孔板,5×10^4个细胞/皿,待细胞贴壁后分成3组:成骨诱导组加入成骨培养基,成脂诱导组加入成脂培养基,对照组仍用基础培养基,培养14d。主要观察指标:脂肪源性干细胞的形态变化、体外增殖能力、细胞免疫化学鉴定结果。脂肪源性干细胞成骨和成脂分化能力。结果:体外培养的脂肪源性干细胞易扩增,传代后以长梭形细胞为主,呈旋涡状排列,克隆样生长:经多次传代仍能保持较强的增殖能力,细胞生长曲线呈“S”形:细胞表面标志CD44和CD49d呈阳性表达,CD106呈阴性表达。脂肪源性干细胞经成骨诱导7d后,碱性磷酸酶染色呈阳性;成脂诱导3d后,油红O染色示胞浆内有脂滴出现:对照组细胞碱性磷酸酶染色呈阴性,无脂滴存在。结论:从大鼠附睾脂肪垫内分离的脂肪源性干细胞易于培养和传代扩增,在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。
  • 新生昆明小鼠胰腺巢蛋白阳性细胞的自然分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:胰腺干细胞在常规培养条件下易于分化,难以获得足够数量的种子细胞。目的:探讨体外培养条件下小鼠胰腺内、外分泌部的巢蛋白阳性细胞的分化情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-08/2007-08在广西医科大学基础医学院中心实验室完成。材料:SPF级新生昆明系小鼠25只,由广西医科大学实验动物中心提供。方法:以Ⅳ型胶原酶消化小鼠胰腺组织,采用Percoll不连续密度梯度法分离单个细胞混悬液,分别从第1界面(磷酸盐缓冲液门.068g/LPercoll液)、第2界面(1.068g/LPercoll液门.096g/LPercoll液)、第3界面(1.096g/LPercoll液,1.118g/LPercoll液)收集细胞,添加角质细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的低糖DMEM培养基进行体外连续培养。主要观察指标:双硫腙染色判断各界面细胞的来源,免疫组织化学检测各界面细胞巢蛋白、胰十二指肠同源盒基因蛋白1、角蛋白19的表达。结果:从第1,2界面收集到的细胞80%-90%双硫腙染色后胞质呈铁红色,表明主要来源于胰腺的内分泌部;从第3界面收集到的细胞双硫腙染色后胞质不染色,表明来源于胰腺的外分泌部。从胰腺的内、外分泌部均可分离出大、圆、单个核的细胞,巢蛋白染色呈阳性表达。随着体外培养时间的延长,来源于胰腺内分泌部的巢蛋白阳性细胞形态保持不变,呈集落样生长,表达胰十二指肠同源盒基因蛋白1,有向胰腺内分泌部β-细胞分化的趋势;来源于胰腺外分泌部的巢蛋白阳性细胞呈铺路石样形态,表达细胞角蛋白19,出现向导管上皮细胞分化的趋势。结论:新生昆明小鼠胰腺的内分泌部和外分泌部均存在巢蛋白阳性的细胞,前者具有分化为β-细胞的能力,后者具有分化为导管上皮细胞的能力。
  • 胎儿骨髓源Flk1+间充质干细胞的归巢机制 免费阅读 下载全文
  • 背景:间充质干细胞移植后是否成功,依赖于经静脉输注后能否定居于靶器官并长期存活,这个过程被称为归巢。然而,调节和控制间充质干细胞归巢的分子机制目前尚不十分清楚。目的:探讨胎儿骨髓源Flk1+间充质干细胞向骨髓归巢的机制,观察基质细胞衍生生长因子1及其受体CXCR4对干细胞归巢效率的影响,摸索提高其归巢和长期植入效率的方法。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2005—09/2006-07在中国医学科学院、中国协和医科大学组织工程中心完成。材料:Flk1+骨髓间充质干细胞来源于流产胎儿,由天津医科大学第二附属医院妇产科提供。6-8周龄NOD/SCID小鼠购自中国医学科学院实验动物研究所。方法:采用流式细胞仪、实时定量PCR等方法检测特定细胞因子刺激前后Flk1+间充质干细胞CXCR4表达和体外迁移能力的变化。NOD/SCID小鼠预先经全身亚致死量照射后,从尾静脉输入经或未经细胞因子刺激的Flk1+间充质干细胞,对照组注射等体积生理盐水。移植后24h,应用流式细胞仪分析骨髓中供体细胞的含量,或在移植后定期从小鼠的尾静脉取血,分析外周血中白细胞、红细胞及血小板的数量变化。移植后6个月,实时定量PCR法检测小鼠骨髓中的人特异性DNA含量,了解人源细胞的植入情况。结果:Flk1+间充质干细胞的胞浆中有CXCR4表达,在适当细胞因子刺激下,能够在短时间内被诱导至细胞表面表达。通过24h短时间细胞因子刺激,不仅能够上凋细胞表面及内部的CXCR4,而且可以增加细胞在体外沿基质细胞衍生生长因子1浓度梯度迁移的活性,促进细胞植入经亚致死量照射的NOD/SCID小鼠体内后向骨髓的归巢及长期存活,同时也加快了受体小鼠的造血恢复;用CXCR4中和抗体处理的Flk1+间充质干细胞,则明显减少其移植后在受体小鼠中的归巢和植入。结论:基质细胞衍生生长因子1及其受体CXCR4在Flk1+间充质干细胞迁移和归巢中发挥着重要作用,增加细胞表面CXCR4的表达,有助于促进Flk1+间充质干细胞向骨髓归巢和加快受体造血恢复。
  • 枸杞多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:近年研究表明,枸杞多糖具有很强的抗氧化作用,可以清除超氧阴离子(O2^-·)和羟自由基(·OH),具备诱导剂的基本条件,但将其用作诱导剂的报道甚少。目的:以枸杞多糖作为诱导剂,探讨其体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008—09/12在辽宁医学院解剖实验室完成。材料:SD大鼠8只,由锦州医学院动物中心提供。枸杞多糖为宁夏杞瑞康有限公司产品。方法:无菌条件下取出大鼠股骨,利用贴壁筛选法体外分离培养骨髓间充质干细胞。取生长状态良好的第2代细胞进行诱导实验,将1×10^7L^-1细胞悬液1mL接种于预先放置盖玻片的24孔板内,每孔加入1mL预诱导液(含枸杞多糖1g/L、体积分数为15%胎牛血清的DMEM完全培养基),置37℃、体积分数为5%的CO2孵箱内继续培养,24h后更换诱导液(含1g/L枸杞多糖的无血清DMEM培养基),于上述CO2孵箱内诱导。并设立添加全反式维甲酸的阳性对照组,以及空白对照组。主要观察指标:诱导过程中镜下动态观察细胞形态学变化。诱导第8,24h采用免疫组织化学技术检测细胞内nestin,NF,GFAP的表达。结果:骨髓间充质干细胞原代培养24h大部分贴壁生长,第3天进入指数生长期,细胞增殖加速,7-9d接近汇合。传代细胞较原代细胞生长加快,第3代细胞纯度较高且增殖活跃,传至12代细胞仍然存活。预诱导后骨髓间充质干细胞形态无明显变化,诱导4h后细胞变凸,从胞体伸出突起:24h后细胞突起明显,突起相互连接呈网状,表现出典型的神经细胞形态。免疫组织化学检测结果显示,诱导后细胞浆内nestin,NF均呈阳性表达,GFAP呈阴性。结论:在体外枸杞多糖能够成功诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞。
  • 人骨髓间充质干细胞体外培养增殖过程及分化为心肌样细胞后的致瘤性实验 免费阅读 下载全文
  • 背景:人骨髓间充质干细胞在长期体外培养传代过程中,可突变为肿瘤干细胞,且移植后在体内能够形成恶性肿瘤,具有多向恶性分化特征,如畸胎瘤等。目的:探讨应用自体血清培养的人骨髓间充质干细胞在体外增殖过程中及其诱导分化为心肌样细胞后的潜在致瘤性。设计、时间及地点:细胞学体外观察及体内植入实验,于2007-11/2008-04在河南省肿瘤医院干细胞实验室完成。材料:非恶性肿瘤的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者骨髓3mL和外周静脉血50mL。近交系BAL13/C清洁级雌性小鼠12只,随机分为骨髓间充质干细胞组、心肌样细胞组、空白对照组,4只,组。方法:分离的人骨髓间充质干细胞从第2代开始,用自体血清培养并传至第9代。取生长良好的第6代细胞,加入10μmol/L5氮杂2’-脱氧胞苷向心肌样细胞定向诱导40d。将经或未经诱导的骨髓间充质干细胞制成单细胞悬液,调整浓度至3.0×10^10,吸取02mL分别接种于骨髓间充质干细胞组、心肌样细胞组小鼠皮下,空白对照组注射等量含胎牛血清的DMEM/F12培养液,40d后留取活检组织。主要观察指标:流式细胞仪检测第1,3,6,9代细胞表面抗原CD34,CD44,CD45,HLA-DR的表达,测定细胞周期,并进行染色体核型分析,光镜下观察诱导后免疫组化结果。TRAPELISA法检测端粒酶活性。Westernblotting法分析C-myc和p16基因的表达。结果:第1,3,6,9代人骨髓间充质干细胞在自体血清体外培养过程中生长状态良好,数量充足,表面抗原标志CD44呈阳性,CD34,CD45及HLA—DR均呈阴性,80%以上细胞处于G0,G1期,正常二倍体分裂象〉90%,染色体核型正常,诱导后细胞Vimentin呈附f生表达,且表达心肌特异性标记Desmin,TroponinT。第3,6,9代人骨髓间充质干细胞及诱导后的心肌样细胞端粒酶活性分别呈弱阳性、阳性,但差异无显著性意义(P〉0.05),且c-myc和p16蛋白表达亦无明显差异。结论:人骨髓间充质干细胞在体外用自体血清培养可满足临床需要,数量充足,生长良好,无核型变异,定向诱导能分化为心肌样细胞。植入动物体内后无肿瘤发生,且端粒酶活性和c-myc,P16基因的表达无显著改变。
  • 香丹注射液诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:选择一种高效、细胞损伤低的诱导人脐血间充质干细胞分化为神经细胞的方法是其应用丁临床的前提。目的:拟采用传统中药香丹注射液联合生长因子诱导脐血问充质干细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子的诱导作用进行比较。设计、时间及地点:免疫细胞化学水平的细胞观察实验,于2006—09/2008—04在潍坊医学院组织胚胎学教研室完成。材料:人脐血标本取自潍坊市妇幼保健院,香丹注射液的有效成分为丹参素。方法:采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,贴壁法筛选出人脐血间充质干细胞,体外扩增,以免疫荧光方法检测表面抗原。分为2组进行诱导分化,香丹注射液联合生长因子诱导组采用30g/L香丹注射液联合表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血间充质干细胞向神经细胞方向分化,并且与单纯生长因子诱导组进行比较。主要观察指标:采用免疫细胞化学方法和免疫荧光方法检测诱导前后神经元特异性标志(神经元核抗原、β -TubulinⅢ)和神经胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:香丹注射液联合生长因子诱导法对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高。脐血间充质干细胞经香丹注射液诱导后出现类似神经细胞的形态改变,胞体呈椭圆形,伸出长突起。免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达神经元核抗原和β -TubulinⅢ,而神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较少。香丹注射液联合生长因子诱导组的β -TubulinⅢ和神经元核抗原的阳性细胞率显著高于生长因子诱导组(P〈0.05),神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率明显低于生长因子诱导组(P〈0.05)。结论:香丹注射液联合生长因子诱导对脐血间充质干细胞损伤作用小,诱导效率高,优于生长因子诱导法。且体外诱导后细胞主要分化为神经元样细胞,而非星形胶质细胞。
  • 不同细胞饲养层支持脐血CD34+细胞体外扩增的效果比较 免费阅读 下载全文
  • 背景:成纤维细胞饲养层与基质细胞饲养层一样能分泌多种细胞因子,其中包括起正性作用和负性作用的细胞因子,它们对共培养体系内的干/祖细胞起双向调节作用,但何时表现为抑制性或促进性作用目前尚无定论。目的:分析比较骨髓基质细胞及皮肤成纤维细胞饲养层对脐血CD34+细胞体外扩增的影响,以了解共培养体系对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2003—08/2004—05在广东医学院附属医院中心实验室完成。材料:原代成纤维细胞、骨髓标本由广东医学院附属医院提供,脐血标本由广东医学院附属医院妇产科及湛江市妇幼保健院妇产科提供。方法:体外分离培养人脐血单个核细胞,应用免疫磁珠(阳性)分选法提取脐血CD34+细胞。设立3组:液体培养对照组为脐血CD34+细胞(3×10^8L^-1)+RPMI1640培养液(含体积分数为10%牛血清白蛋白、10μg/L粒-巨噬细胞集落刺激因子、10μg/L干细胞因子、10μg/L白细胞介素3),接种于24孔培养板;骨髓基质细胞饲养层组、成纤维细胞饲养层组分别将体外分离培养的第4代人骨髓基质细胞,皮肤成纤维细胞接种于24孔培养板,70%融合时加入等量脐血CD34+细胞及相同成分的RPMI1640培养液。主要观察指标:脐血CD34+细胞增殖情况与集落形成能力。结果:与骨髓基质细胞饲养层组比较,液体培养对照组、成纤维细胞饲养层组脐血CD34+细胞增殖率及集落形成能力均显著降低(P均〈0.01);后2组间比较差异无显著性意义(P〉0.05)。结论:骨髓基质细胞饲养层培养体系能促进脐血CD34+细胞体外扩增,并可以较好地保持脐血CD34+细胞的干细胞特性,效果显著优于成纤维细胞饲养层及液体培养体系。
  • 脐带间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:体外扩增是目前解决脐带血干细胞移植所面临的单份脐血造血干祖细胞数不足问题的主要手段。已有许多关于不同来源的间充质干细胞联合不同细胞因子支持脐血造血干祖细胞体外扩增的报道,而单独应用间充质干细胞对人脐血CD34+细胞体外扩增的报道仍很少。目的:观察应用脐带源间充质干细胞作基质层的体外培养体系对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006—03/2007-05在中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所、实验血液学国家重点实验室完成。材料:经产妇知情同意,采集健康足月分娩胎儿脐带9份。方法:应用贴壁培养的方法从正常足月出生儿脐带中分离培养间充质干细胞,通过细胞形态学、免疫表型、分化实验进行鉴定。利用免疫磁珠分离法从正常足月出生儿脐带血中分离CD34+细胞。应用3种不同培养体系进行脐血CD34+细胞的体外扩增:单独应用脐带源间充质干细胞作基质层、细胞因子培养体系和间充质干细胞联合细胞因子培养体系。主要观察指标:应用细胞计数法、集落培养计数法和流式细胞学检测法对扩增后细胞数量、集落形成能力和免疫表型进行分析比较。RT—PCR检测间14充质干细胞中细胞因子的表达情况。结果:培养第14天后,间充质干细胞组的CD34+细胞比例明显高于细胞因子联合间充质干细胞组;CD34+细胞总数为培养前的f4.19±1.37)倍,明显高于细胞因子组。培养第7天和第14天,间充质干细胞组的CD34+CD38-细胞亚群比例均高于另两组。RT-PCR结果显示,脐带源间充质干细胞体外可表达干细胞因子和血小板生成素早期干细胞效应因子。结论:单独应用脐带源间充质干细胞可有效地对脐血CD34+细胞进行体外扩增,更有利于保持较早期干、祖细胞的扩增。
  • 人脱细胞羊膜对间充质干细胞向神经系细胞分化的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:成体干细胞在细胞外基质加细胞因子作用下向神经系细胞分化的报道甚少。目的:根据干细胞巢原理,探讨羊膜间充质干细胞体外向神经系细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的表达。设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2007—12/2008—04在郑州大学医学院实验中心完成。材料:产妇自愿捐献的羊膜由郑州大学第一附属医院产科提供。维甲酸、碱性成纤维细胞生长因子为Sigma公司产品。方法:体外分离培养、扩增羊膜间充质干细胞,调整细胞密度为4×10^7L^-1,同时通过酶一化学法制作膜样基质。设立2组:诱导组羊膜间充质干细胞以基础培养基预诱导后,按4×10^7L^-1接种在膜样基质上,并以神经基础培养基培养2d,然后替换为含10^3mmol/L维甲酸、20μg/L β-神经生长因子的DMEM/F12神经诱导培养基,继续培养24h,换基础培养基继续培养3d。对照组除不用膜样基质外,余步骤同诱导组。主要观察指标:细胞形态学变化,蛋白分子水平鉴定神经细胞表型。结果:诱导组接种到膜样细胞外基质24h可见细胞呈球形,紧贴膜样基质,胞体伸出突起,折光性强:第3天大部分细胞突起延伸并相互连接;4-6d突起形成网状结构且排列具有一定的方向性:对照组3d时见多个突起,4-6d细胞又恢复纤维细胞形态。预诱导后,两组巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶表达明显增高,突触素、胶质纤维酸性蛋白表达无明显变化;诱导6d时与对照组比较,诱导组神经元特异性烯醇化酶表达无明显差异(P〉0.05),突触素表达显著升高(P〈0.01),巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白表达显著降低(P〈0.01)。结论:在膜样细胞外基质上,羊膜间充质干细胞可显示典型神经元特有的形态特征、表达标记。提示应用基质加细胞因子的诱导程序,可以从羊膜间充质干细胞高效获得神经元前体细胞,并抑制其向神经胶质细胞的分化。
  • 绿色荧光蛋白基因体外转染骨髓源性血管内皮祖细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:寻找合适的标记分子作为血管内皮祖细胞谱系追踪观察的标志成为其体内、外诱导分化机制研究中的一项晕要课题。目的:体外研究绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基凶转染骨髓源性血管内皮祖细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性。设计、时间及地点:细胞基因工程对照观察,于2007—07/2008—05在苏州大学附属第二医院实验中心完成。材料:3周龄清洁级Wistar大鼠15只用丁制备骨髓源性血管内皮祖细胞,绿色荧光蛋白基因及重组腺病毒由苏州大学附属第二医院李晓强教授惠赠。方法:体外分离培养Wistar大鼠血管内皮祖细胞,EGM-2MV培养基培养大鼠骨髓中的单个核细胞。以腺病毒为载体,293A细胞为包装细胞,介导GFP转染血管内皮祖细胞,与未转染的同期细胞作对照。主要观察指标:住荧光显微镜下观察GFP表达效率。酶联免疫吸附法检测培养上清中血管内皮生长因子蛋白水平评价GFP转染血管内皮祖细胞后对细胞功能的影响,MTT法评价GFP转染血管内皮祖细胞后对细胞活性的影响。结果:成功构建了携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad—GFP),成功培养了大鼠骨髓源性内皮祖细胞,重组Ad-GFP可高效率转染血管内皮祖细胞,病毒感染组阳性细胞与未感染组细胞血管内皮生长因子蛋白水平表达相当,Ad—GFP转染后对血管内皮祖细胞的增殖没有影响。结论:构建了带有GFP的缺陷型重组Ad—GFP,转染Wistar大鼠血管内皮祖细胞得到了高效表达,且感染细胞的生物学特性和增殖能力未受影响。
  • 人脐带间充质干细胞体外向胰岛样细胞诱导分化及其治疗糖尿病效果 免费阅读 下载全文
  • 背景:相对于其他来源的干细胞而言,脐带间充质干细胞免疫排斥反应和免疫原性较小,但并不等同于无任何免疫排斥反应。目的:观察人脐带间充质干细胞体外向胰岛样细胞的诱导分化,及其移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。设计、时间及地点:细胞学体内对照观察,于2008—11在辽宁医学院解剖学教研室实验室完成。材料:清洁级雄性SD大鼠36只,随机分为4组:胰岛样细胞组12只、间充质干细胞组12只、模型对照组6只、止常对照组6只。人脐带间充质干细胞由天津国家干细胞中心提供。方法:取传至第3代的人脐带间充质干细胞,待细胞融合至70%-80%后,换用含碱性成纤维细胞生长因子、尼克酰胺的DMEM高糖培养基,向胰岛样细胞诱导分化。除正常对照组外,其余3组大鼠均腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。造模后,胰岛样细胞组于肾被膜下植入胰岛样细胞2×10^6个,间充质干细胞组同法植入等量未诱导的脐带间充质干细胞,模型对照组植入不含任何细胞的培养液1mL。主要观察指标:诱导后胰岛样细胞的鉴定,胰岛样细胞的移植效果。结果:诱导前脐带间充质干细胞呈长梭形贴壁生长;诱导4d后细胞向中央聚集,出现胰岛样细胞团,此后胰岛扦细胞团逐渐增大且数量增多;诱导7d双硫腙染色呈阳性表达。移植后2周,胰岛样细胞组血糖浓度明显降低,一直维持至第6周;间充质干细胞组血糖浓度在移植后很快下降,但4周后血糖浓度上升;模型对照组血糖浓度一直处于糖尿病血糖浓度范围内。免疫组化染色结果显示,移植后4周胰岛样细胞组胰腺管腔内可见大量胰岛素表达,间充质干细胞组仅有表达少量胰岛素,正常对照组胰岛素表达无明显变化。结论:人脐带间充质干细胞体外可诱导分化为胰岛样细胞。与脐带间充质干细胞相比,胰岛样细胞能够较长时间维持大鼠血糖浓度在正常水平,且植入后可迅速发挥降糖作用。
  • 实验性牙移动大鼠外周血内皮祖细胞的培养 免费阅读 下载全文
  • 背景:观察血管内皮祖细胞在牙周血管改建中的作用规律对于研究正畸牙周改建机制具有重要意义。目的:对牙移动大鼠外周血内皮祖细胞进行体外分离、培养及鉴定,探讨牙齿移动是否可动员骨髓内皮祖细胞进入外剧血。设计、时间及地点:细胞体外分离培养及生物学指标检测,随机对照动物实验。于2007—09/2008—04在吉林省口腔牛物医学工程重点实验室完成。材料:24只Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组,每组12只。方法:实验组建立大鼠牙移动模型,对照组置牵拉装置但不加力。加力第2天取两组动物外周血制作细胞涂片,检测其巾CD133阳性细胞数。同时以Percoll密度梯度分离提取其外周血单个核细胞,培养至第12天,取两组细胞爬片进行相关指标榆测。主要观察指标:以免疫细胞化学染色和免疫荧光化学染色检测细胞表面标志物,荧光化学检测细胞吸收乙酰化低密度脂蛋白及荆豆凝集素1情况,MTT法检测细胞增殖情况。结果:实验组细胞涂片中CD133阳性细胞率明显高于对照组(P〈0.05)。所培养细胞可同时吸收Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白、FITC标记的荆豆凝集素1,呈CD133、Ⅷ因子、CD34阳性。实验组细胞增殖活性高于对照组(P〈0.05)。结论:实验初步证实了实验性牙移动可动员大鼠骨髓内皮祖细胞进入外周血。
  • 大鼠骨髓间充质干细胞的原代培养条件 免费阅读 下载全文
  • 背景:间充质干细胞适合生长、培养的条件尚不十分明确,目前对于间充质干细胞的分离纯化以及体外培养亦没有统一的方法,而培养出生长状态良好、数量足够多的大鼠骨髓间充质干细胞是进行以上实验的重要前提。目的:寻求适宜有效的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件,观察培养的间充质干细胞生物学特性。设计、时间及地点:分组对比观察,实验于2007—04/09在重庆医科大学附属第一医院实验中心完成。材料:6-8周龄雄性Wislar大鼠1只,体质量120g,用于间充质干细胞的分离及培养。方法:采用全骨髓培养法获取间充质干细胞,按不同接种密度(1×10^6,5×10^5,1×10^5,5×10^4,1×10^4cm^-2)、血清体积分数(体积分数5%,10%,15%的胎牛血清)、首次换液时间(接种后6,12,24,48,72h)及pH值(分别为7.0-7.1,7.1—7.2,7.2-7.3,7.3-7.4,7.4-7.5)分组接种,10d后进行活细胞计数。主要观察指标:不同培养条件对间充质干细胞生长的影响;倒置显微镜下观察原代及传代间充质干细胞的形态变化:采用四甲基偶氮唑盐法绘制细胞的生长曲线,并计算细胞倍增时间:常规SABC免疫组织化学法检测传代间充质干细胞CD44、CD34的表达;流式细胞仪检测传代间充质干细胞生长周期。结果:①以1×10^6,5×10^5cm2密度接种的细胞数较多,余3种接种密度获得细胞数明显低于上述2种密度(P〈0.05)。首次换液时间为48h获得的细胞数量最多,各组间相比,差异有显著性意义(P〈0.05)。体积分数5%血清组较体积分数10%、15%血清组细胞数量少(P〈0.05)。pH值为7.1—7.2,7.2-7.3的培养液细胞生长活跃,细胞数量多,以pH值为7.0-7.1和pH7.4-7.5培养的细胞生长缓慢,数量较少。②刚接种的间充质干细胞呈圆形,培养6-8h后开始贴壁,呈纺锤状或类圆形;约10d左右细胞基本汇合长满瓶底;传代后,细胞形态以梭形为主:经过一二次传代后,细胞呈放射状或平行排列,形态趋于一致。③传代一二天细胞生长缓慢,生长停滞期;自3d起,细胞生长进入对数生长期,四五天达到高峰:之后进入平台期,细胞倍增时间约为39.5h。④传代间充质干细胞存在CD44抗原表达,而CD34呈阴性表达。⑤传代后82.93%的间充质干细胞处于G0/G1期,G2+M+S期细胞占17.07%。结论:细胞较佳接种密度为5×10^5cm^-2,合适血清体积分数为10%,首次换液时间为48h,pH值为7.2左右;在适宜的培养条件下,间充质干细胞在体外生长状态良好,增殖速度快。
  • 苏州大学附属第一医院心血管外科沈振亚教授 免费阅读 下载全文
  • 沈振亚,1957年生,主任医师、教授;博士生导师,现任苏州大学附属第一医院心血管外科和心血管外科研究室主任,苏州大学医学临床一系大外科教研室主任。1993年毕业于美国宾夕法尼亚大学医学院心脏外科,博士后。
  • 引领数字化医学期刊出版的平台 免费阅读 下载全文
  • 《中国神经再生研究(英文版)》令国际神经再生研究者感兴趣的SCI收录杂志 免费阅读 下载全文
  • 更正 免费阅读 下载全文
  • 《中国组织工程研究与临床康复》杂志社第9届编委会名单 免费阅读 下载全文
  • 编作读对话评刊(2) 免费阅读 下载全文
  • 在这优秀期刊大战取决于优秀稿源竞争大战的状态中,CRTER的编辑们将以啥样的标准决定优秀稿源之取舍呢?
  • 干细胞治疗进行性肌营养不良 免费阅读 下载全文
  • 进行性肌营养不良是一组肌肉系统X连锁隐性遗传病,主要表现为缓慢进行性加重的对称性骨骼肌萎缩和无力,最终完全丧失运动功能。其发病机制虽得到公认,但一经确诊即被告之无法医治。
  • [信息导读]
    CRTER杂志“干细胞研究栏目”组稿重点
    [本刊特稿]
    医学英文句型正误辨析
    让昨天告诉今天:干细胞研究的学术与技术进展
    中国干细胞研究技术可居世界前位
    干细胞移植治疗进行性肌营养不良症作用途径及其效果?(杨晓凤)
    干细胞治疗途径的临床问答(杨晓凤)
    干细胞医学词汇中英文对照
    [综述与专论]
    骨髓间充质干细胞分离培养和定向分化的研究现状(裴瑛波)
    神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状(李剑锋 闫金玉)
    嗅鞘细胞与脊髓损伤的治疗(秦聪聪 孙天胜 叶超群 王晓伟 程徽 步晓虹)
    骨髓间充质干细胞分泌的蛋白及其功能(马晓伟 马芹颖 王彦永 顾平 王铭维)
    造血干细胞移植后的免疫重建(官立萍 黄冰)
    粒细胞集落刺激因子与血液病(马玉杰 梁辉)
    微小RNA在乳腺癌干细胞中的表达(陈佳 张蕴莉 萧红 徐华)
    [研究与报告]
    移植物化学修饰减轻小鼠半相合骨髓移植后的急性移植物抗宿主病(杨光 唐锁勤 王建文)
    异基因造血干细胞移植患者FOXP3mRNA表达与移植物抗宿主病发生的关系(杜欣 耿素霞 翁建宇 陆泽生 吴穗晶 林秋雄)
    骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后正常心肌细胞凋亡的影响(王挹青 李远鹏 王淼)
    冠状动脉自体骨髓CD34+干细胞移植治疗心绞痛:随机对照临床分析(王世宏 崔俊玉 路敏 王显 李晓明 谭琛 张健 赵怀兵)
    HLA相合同胞供者异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病40例(王兴兵 刘会兰 耿良权 刘欣 杨会志 韩永胜 汤宝林 朱薇波 王祖贻 孙自敏)
    [技术与方法]
    心肌梗死大鼠血清对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响(刘建华 洪亮 钟雪云 陈嘉榆 陈运贤)
    多种神经营养因子联合诱导培养骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞的定向分化(许永涛 李锋 刘铁 游洪波 方忠)
    中药单体黄芩苷体外诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞的分化(管让宪 颜小华 陈启文)
    小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上向胚胎干细胞的生长发育(李济强 马天驰)
    孕足月羊水干细胞的分离培养(刘慧 刘大庆 闫志风 李宝伟 管利东 岳文 吕阳 裴雪涛 李亚里)
    γ-分泌酶在神经干细胞分化过程中的调节作用(王江涛 杨丽红 张悦红 解军)
    mdx鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及向肌细胞的诱导分化(王淑辉 尚延昌 张成 于美娟 张雅妮 熊符 申本昌 卢锡林)
    茶黄素和转化生长因子β1对免骨髓间充质干细胞向软骨细胞增殖及诱导分化的影响(吴险峰 尚希福 胡飞)
    银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平(刘瑞风 尹国华 张开明)
    血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞生长增殖的影响(单伟 秦书俭 曾瑞霞 张海锋 李德华 郑德宇)
    基质金属蛋白酶9在慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞中表达及其对造血干细胞黏附的影响(朱希山 张斌 刘瑞 豆晓伟 刘慧英 赵春华)
    成人与胎儿骨髓间充质干细胞生物学性状的比较(孙晓娟 杨乃龙)
    无血清条件下体外分离培养鼠胚胎脑组织神经干细胞(李明新 阚世廉 张建国)
    胎鼠胰腺干细胞体内移植向胰岛样细胞团的分化(张悦 张育森 余小舫 周汉新 李富荣)
    大鼠附睾脂肪垫脂肪源性干细胞的分离培养及分化潜能(张丽华 汤银娟 刘杰明 杨林 董为人 郭家松 王海红 戴翔 宋建武 陈英华 肖应庆)
    新生昆明小鼠胰腺巢蛋白阳性细胞的自然分化(叶健 何少健 刘琼东 陈维平 莫似恩 袁路 胡利霞)
    胎儿骨髓源Flk1+间充质干细胞的归巢机制(史明霞 李静 廖联明 陈斌 李炳宗 陈磊 赵春华)
    枸杞多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化(刘霞 单伟 曾瑞霞 房艳 李德华 秦书俭)
    人骨髓间充质干细胞体外培养增殖过程及分化为心肌样细胞后的致瘤性实验(马林业 戴国友 刘煜昊 高传玉)
    香丹注射液诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化(于丽 张炳强 管英俊 张雪莉 马丽 张华芳)
    不同细胞饲养层支持脐血CD34+细胞体外扩增的效果比较(张宇明 江黎明 熊丹 李庆华 杨志刚)
    脐带间充质干细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的影响(袁晓莉 孟恒星 郝牧 李长虹 韩俊领 邱录贵)
    人脱细胞羊膜对间充质干细胞向神经系细胞分化的影响(胡炜 关方霞 杨波 杜英 马建 李祥生 胡祥 焦红亮 李远)
    绿色荧光蛋白基因体外转染骨髓源性血管内皮祖细胞(李传勇 李晓强 姜坤 孟庆友 于小滨 雷锋锐)
    人脐带间充质干细胞体外向胰岛样细胞诱导分化及其治疗糖尿病效果(李俊林 李德华 赵宝东 王长辉 王志云 裴丹)
    实验性牙移动大鼠外周血内皮祖细胞的培养(刘超 苗雷英 孙新华)
    大鼠骨髓间充质干细胞的原代培养条件(王佳南 张晓刚 汤为学 郑丽娜)
    [科研报道]
    苏州大学附属第一医院心血管外科沈振亚教授
    引领数字化医学期刊出版的平台

    《中国神经再生研究(英文版)》令国际神经再生研究者感兴趣的SCI收录杂志
    更正
    《中国组织工程研究与临床康复》杂志社第9届编委会名单
    编作读对话评刊(2)(王莉莎)
    干细胞治疗进行性肌营养不良
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

    主管单位:中华人民共和国卫生部

    主办单位:中国康复医学会 《中国组织工程与临床康复》杂志社

    社  长:王莉莎

    主  编:刘昆

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