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  • 转染血管紧张素Ⅰ骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复烫伤后的创面 免费阅读 下载全文
  • 背景:组织工程皮肤作为可行的皮肤替代物,近年来己成为研究和开发的热点,为烧伤、皮肤溃疡等病变的刨面治疗提供了新的解决途径。目的:观察转染血管紧张素Ⅰ基因的骨髓间充质干细胞复合胶原构建的组织工程皮肤对烫伤后创面的修复及促血管形成作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008~03/11在中山大学第一附属医院实验动物中心完成。材料:鼠龄4周的雄性SD大鼠45只,体质量120-150g,用于制备烫伤模型;牛Ⅰ型胶原为美国Sigma公司产品。方法:脂质体介导质粒pEGFP—N1-hAng.Ⅰ转染大鼠骨髓间充质干细胞,转染后与牛Ⅰ型胶原复合,体外构建组织工程皮肤,修复大鼠烫伤模型创面。45只SD大鼠按随机抽签法分为3组:血管紧张素Ⅰ,胶原移植组、骨髓间充质干细胞,胶原移植组和空白对照组,每组15只。在烫伤创面分别植入复合骨髓间充质干细胞,转血管紧张素Ⅰ的组织工程皮肤、单纯骨髓间充质干细胞复合的组织工程皮肤。空白对照组不移植任何组织和细胞,其他处理与实验组相同。主要观察指标:分别在移植后3,7,14,28d取材,以扫描电镜、组织学、免疫组织化学分析等方法检测构建的组织工程皮肤结构、创面修复及血管再生情况。结果:pEGFP—N1.hAng.Ⅰ在阳离子脂质体的作用下,成功地进入大鼠骨髓间充质干细胞,转录出相应mRNA。蛋白免疫印迹分析显示转染细胞有与目的基因相对分子质量相符的血管紧张素Ⅰ抗体结合蛋白印迹条带。实验所构建的组织工程皮肤结构完整,细胞状态良好。血管紧张素Ⅰ,胶原移植组、骨髓间充质干细胞,胶原移植组和空白对照组创面的愈合时间分别为02.6±1.9),(15.4±2.3),(26.4±3.6)d,P〈0.05。组织学检查见转染细胞组毛细血管生长及新形成活跃,移植后7,14,28d骨髓间充质于细胞,胶原移植组和血管紧张素Ⅰ,胶原移植组微血管密度分别为(22.8±1.4),(34.3±2.6),(57.4±6.1)条/mm2:(38.2±3.4),(53.2±5.8),(74.2±6.9)条/mm2,P〈0.05。结论:血管紧张素Ⅰ转染细胞组较对照组血供加强,创面修复加速,与细胞因子局部定向释放,加强血管形成有关。
  • 异种小肠黏膜下层浓度水平对跟腱断裂修复的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:用猪的小肠黏膜下层重建各种组织结构是目前研究的热点,但是对于匀浆可注射形式的小肠黏膜下层的相关研究很少。目的:观察不同浓度水平的匀浆可注射形式的异种小肠黏膜下层在修复和构建跟腱组织时是否对修复和重建结果产生影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006—09/2008—12在河北医科大学第三医院骨科研究所(河北省骨科研究所)完成。材料:45只国产公山羊,1.0—2.0岁,体质量35-47kg。小肠黏膜下层均来自同一只猪,去抗原处理后用均浆机打浆制备小肠黏膜下层悬液。方法:切断45只山羊右后肢跟腱,随机分为25%,50%,100%浓度组,分别注射25%,50%,100%浓度的猪的小肠黏膜下层2mL于山羊的断裂跟腱处。注射前观察一般状况及注射侧肢体的情况,于2,4,6周各取5只切取修复后的跟腱。主要观察指标:①生物力学测试。②踝关节后凸角。③组织学分析结果。结果:各时间点25%浓度组生物力学测试值均大于50%浓度组和100%浓度组(P〈0.01)。各组踝关节后凸角注射前左侧后肢、右侧后肢和注射后右侧后肢的差别无显著性意义(P〉0.5)。4周和6周,25%浓度组几乎全为成纤维细胞,修复跟腱与正常的跟腱几近相同,100%和50%为大量的成纤维细胞,尚存浸润的炎细胞。结论:结果表明可以在浓度水平调控匀浆形式的小肠黏膜下层在跟腱修复中的作用,以达到最佳浓度效果。
  • 阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和护骨素/核因子KB受体活化因子配体mRNA表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:阿仑磷酸钠是新一代的二磷酸盐,属第2代骨质疏松药,临床上广泛用于治疗骨吸收增加类疾病。目的:观察阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和核因子KB受体活化因子配体(RANKL)及护骨素(OPG)mRNA表达的影响。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-11/2008-03在重庆医科大学基础研究所完成。材料:成骨细胞来源于手术中取得的松质骨骨块;阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司生产,批号:06130。方法:在含1×10^-9,1×10^-8,1×10^-7,1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4mol/L不同浓度的阿仑磷酸钠培养液中培养成骨细胞,以不加阿仑磷酸钠培养为对照。主要观察指标:①成骨细胞观察。②以四甲基偶氮唑盐检测阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖的影响。③以半定量反转录一聚合酶链反应方法观察不同浓度阿仑磷酸钠对成骨细胞表达OPG,RANKLmRNA的影响。结果:1×10^-5,1×10^-4mol/L的阿仑磷酸钠抑制成骨细胞增殖,1×10^-8~10^-6mol/L的阿仑磷酸钠促进成骨细胞增殖,其中1×10^-8mol/L的阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖作用最强。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性降低RANKLmRNA表达,干预72h,1×10^-5mol/L抑制作用最大(P〈0.01)。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性增加护骨素mRNA表达,干预72h,1×10^-6mol/L增加作用最明显(P〈0.01),而1×10^-5mol/L时又减低。结论:阿仑磷酸钠能使成骨细胞增殖,1×10^-8mol/L浓度增殖作用最强,其可能通过调节OPG/RANK LmRNA表达而影响骨代谢。
  • 转基因骨髓间充质干细胞移植与组织工程皮肤的血管化 免费阅读 下载全文
  • 背景:组织工程化皮肤移植后常因缺乏足够的血管化而导致低灌注和缺血损伤。利用转基因技术,可将血管生成调控因子基因导入目的细胞,使其表达某些调控因子,进而利于血管生成。目的:观察转基因骨髓间充质干细胞移植促进组织工程皮肤血管化基因治疗的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-03/11在江西省南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。材料:人骨髓间充质于细胞由试验者取自临床骨髓穿刺检查骨髓正常的患者。pShuttle—CMV/VEGF165质粒转化大肠杆菌菌种由武汉协和医院郜勇博士惠赠。16只新西兰大白兔用于皮肤缺损模型的制作,分为基因转染骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞组、真皮支架材料组进行移植。方法:采用密度梯度离心结合贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞,以pShuttle—CMV/VEGF165质粒转染骨髓间充质干细胞。于兔背部两倒制备2cm×2cm的正方形全层皮肤缺损3个,并分别以人血管内皮细胞生长因子165转染骨髓间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、不含细胞的真皮支架材料植入全层皮肤缺损创面。主要观察指标:观察局部组织微血管密度变化及移植物成活率。结果:术后7d,3组创口周围皮肤均无明显红肿及炎症反应。移植物与创面接触紧密,基因转染骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞组可见部分真皮泛红。真皮支架材料组不明显,术后3周创面基本愈合,基因转染骨髓间充质干细胞组创面的毛细血管密度较骨髓间充质干细胞组、真皮支架材料组明显增高(P〈0.01),14d时3组中基因转染骨髓间充质干细胞组j血管密度仍最高,但3组数据无统计学差异。术后二三周基因转染骨髓间充质干细胞组移植物成活率最高(P〈0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞移植可改善和促进局部血管再生,促使新的毛细血管从创面长入移植的组织工程皮肤,从而促进组织工程皮肤的早期血管化及创面愈合。
  • 新鲜自体与异体骨软骨移植修复免关节软骨缺损的比较 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨软骨移植是修复关节软骨损伤的主要方法之一,但新鲜自体骨软骨移植与新鲜异体骨软骨移植相比效果尚无定论。目的:探讨新鲜自体骨软骨移植与异体骨软骨移植修复兔关节软骨缺损的方法及疗效。设计、时间及单位:动物实验观察,于2007-01/2008-05在解放军第四军医大学唐都医院骨科完成。材料:新西兰大白兔9只,随机分为3组,3只,组,分别实施自体骨软骨移植、异体骨软骨移植、单纯软骨缺损3种手术。方法:自体移植组:在股骨内侧髁负重关节面取直径3mm骨软骨缺损,于非负重关节面取4块直径1mm骨软骨柱移植;异体移植组:在股骨内侧髁负重关节面直径3mm骨软骨缺损处植入相同直径的异体骨软骨柱:对照组:于股骨内侧髁负重关节面取直径3mm全层软骨缺损,不做处理。主要观察指标:术后12周取材,进行大体观察,组织学检查和半定量的改良Wakitaniscore评分。结果:大体观察异体移植组修复面较自体移植组稍平整,光镜可见自体和异体移植软骨均己覆盖缺损,与正常软骨高度相当。绝大部分修复面为透明软骨,增殖活跃。软骨下骨、松质骨小梁均与骨床完全骨性愈合。自体移植组软骨浅表区细胞数目及排布更接近正常透明软骨,过渡区及辐射区细胞密度、厚度也明显优于异体移植组,基质染色丰富。结论:自体与异体骨软骨移植的方法均可完成关节软骨缺损的透明软骨修复,自体骨软骨移植更优。
  • 软骨形态发生蛋白1诱导仔鼠脂肪干细胞裸鼠体内软骨的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:脂肪干细胞在特定的培养条件下可向软骨细胞分化,软骨形态发生蛋白1是重要的调节软骨细胞分化的生长因子。前期实验已证实了软骨形态发生蛋白1诱导大鼠脂肪干细胞体外可向软骨细胞形态分化,但是能否在体内成软骨昵?目的:验证应用软骨形态发生蛋白1体外诱导SD仔鼠脂肪干细胞,复合自制牛松质骨支架材料植于裸鼠皮下成软骨情况。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007—11/2008—05在解放军第四军医大学基础部实验动物中心、解放军第四军医大学西京医院全军骨科实验研究所完成。材料:7d龄SD仔鼠16只用于分离培养脂肪干细胞及软骨细胞,20只成年裸小鼠用于进行体内埋植实验,雌雄不限。方法:体外培养的脂肪干细胞复合于支架上,加入诱导液(基础培养液+50ug/L软骨形态发生蛋白1)继续培养2周作为实验组;将SD仔鼠软骨细胞复合于支架上,常规培养2周作为对照组。20只裸小鼠,左侧腋窝皮下均植入实验组细胞一支架复合物,右侧腋窝皮下均植入对照组细胞支架复合物。8,12周各处死10只,行甲苯胺蓝和番红O-固绿染色。主要观察指标:①细胞形态变化及扫描电镜观察细胞一支架复合物。②四甲基偶氮唑盐法测定实验组和对照组细胞各代的增殖情况。③裸小鼠体内埋植实验结果。结果:扫描电镜示,软骨细胞和经软骨形态发生蛋白1诱导的脂肪干细胞在自制牛松质骨支架上均生长良好,平均孔径约为382μm。经软骨形态发生蛋白1诱导的第2,3,4,5,6代脂肪干细胞(诱导组)生长良好并保持持续增殖趋势;对照组的软骨细胞从第4代开始生长缓慢。裸小鼠体内埋植12周时,番红O-固绿染色:实验组阳性,细胞呈球形,可见软骨陷窝;对照组阴性,细胞呈梭形。但两组支架都已降解。结论:软骨形态发生蛋白1体外诱导SD仔鼠脂肪干细胞,复合自制牛松质骨支架,裸鼠体内可成软骨。
  • 环孢素A影响脱钙骨基质诱导成骨的组织学观察 免费阅读 下载全文
  • 背景:脱钙骨可用于成骨细胞的支架材料,机体组织对脱钙骨有一定的免疫排斥反应。目的:观察环孢素A影响脱钙骨诱导成骨的组织学变化,探讨脱钙骨成为理想的骨移植材料的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/2008-04在大连医科大学附属二院实验中心完成(国家分子生物学三级实验室)。材料:用16只新西兰大白兔,分为4组,同种脱钙骨对照组和实验组,异种脱钙骨实验组和对照组,每组4只。环孢素注射液为北京诺华制药有限公司产品。方法:制备脱钙骨,取白兔的脱钙骨命名为同种脱钙骨,取自犬的脱钙骨命名为异种脱钙骨。于兔的脊旁肌肉内植入相应脱钙骨制备物,每侧2处。实验组每天肌注含环孢素A的实验液2mg/kg,对照组肌注对照液2mg/kg,共4周。植入物标本进行苏木精伊红染色,光镜观察。主要观察指标:各组脱钙骨组织学观察结果。结果:同种脱钙骨在所有动物中均引起了骨形成。环孢素A并没有改变同种脱钙骨诱导成骨的形态学。异种脱钙骨对照组在第4周时没有骨或软骨细胞生成。异种脱钙骨环孢素A实验组在第4周时有软骨、骨形成。结论:环孢素A并没有改变同种脱钙骨诱导成骨的形态学。免疫反应抑制了异种脱钙骨的成骨,环孢索A可抵消这种抑制作用,环孢素A可提高异种脱钙骨治疗骨不连或骨缺损的成功率。
  • 真皮多能干细胞复合血浆构建真皮再生模版及移植观察 免费阅读 下载全文
  • 背景:要实现组织工程皮肤生物学功能重建,应从重建功能正常的真皮入手,使之成为汗腺、血管、神经和脂肪再生的场所。目的:以真皮多能干细胞为种子细胞构建真皮再生模版,观察其移植后的成活状态。设计、时间及地点:单因素设计,重复观察,于2006—01/06在中山大学眼科中心国家重点实验室和中山大学动物中心进行。材料:6周龄BALB/c裸鼠10只,由中山大学动物中心提供。人皮肤多能干细胞来源于接受瘢痕整形手术患者的正常皮肤,由汕头大学医学院附属第二医院烧伤整形科提供。人O型血浆为大连制药有限公司产品。方法:取10mL人O型血浆,与生理盐水、氨甲环酸混匀后,添加1×10^5个经5一Brdu标记的人皮肤多能干细胞克隆,振荡致细胞团均匀分布在血浆中,再滴加氯化钙,放置37℃培养箱30min后成凝胶状,然后加入含胎牛血清、B27的DMEM/F12培养液,培养四五天细胞融合成片,吸干凝胶表面水分,使之成膜状,即为真皮模版。裸鼠麻醉后,背部制作全层皮肤缺损创面,然后植入真皮模版,覆盖创面。主要观察指标:真皮模版移植后观察血管化程度,创面上皮化后免疫组织化学检测模版中5-Brdu标记干细胞的成活状态。结果:人皮肤多能干细胞在血浆中增殖良好,真皮模版为白色生物膜,厚(500±254)μm,真皮模版中部分细胞仍表达nestin。真皮模版植入后,第3天模版下有少量的血管生成,第9天大量细胞迁入模版中。创面上皮化后第1,3周,皮肤组织的表皮和真皮中均可见大量5-BrdU阳性细胞分布。结论:人皮肤多能干细胞接种于血浆中构建的真皮模版移植后,能较快血管化,且真皮模版干细胞在受体组织中能成活下来。
  • 淫羊藿提取物对体外软骨器官生长的促进作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:结合课题组前期的研究工作,考虑到中药中含有的多种软骨活性成分可能会对软骨细胞起到多靶点调节的作用,尝试用中药代替细胞因子,以促进软骨生长。目的:观察中药淫羊藿提取物对软骨生长和软骨细胞增殖活性的影响。设计、时间及地点:以组织为观察对象的随机配对实验,于2003—04/2007—12在河南省正骨研究院完成。材料:心叶淫羊藿Epimedium.brevicornum药材由河南省洛阳市医药公司提供:罗曼鸡胚由河南省洛阳市峪口禽业有限公司提供。方法:采用体外转管培养技术培养鸡胚股骨,实验分为2组,对照组:在培养管加入含RPMI Medium1640和体积分数为10%胎牛血清的培养液;实验组:在培养管加入含淫羊藿提取物的培养液。实验组培养液中加入不同质量浓度(002,005,0.10,0.50,100,5.00,10.00,20.00mg/L)的淫羊藿,观察软骨生长情况;选上述实验中的最适宜生长质量浓度1.00mg/L及质量在(4.0±0.1)mg的标本,相同培养条件下培养20d,称量每个取样时间点的样本质量;用100mg/L最适宜生长质量浓度按上述培养条件培养7d,进行股骨生长长度、质量测定,同时四甲基偶氮唑盐检测细胞增殖。主要观察指标:①不同质量浓度淫羊藿提取物对软骨器官生长质量的影响。②1.00mg/L淫羊藿提取物不同培养时间对鸡胚股骨生长的影响。③1.00mg/L淫羊藿提取物培养7d对鸡胚股骨生长和细胞增殖的影响。结果:①在0.02~20.00mg/L质量浓度范围内,实验组股骨标本质量均高于对照组,但仅0.05-10.00mg/L质量浓度区间内两组差异有显著性意义(P〈0.05-0.01),表明淫羊藿提取物在此质量浓度范围内能够表现出明确的促进股骨生长的生物学效应。②两组的股骨质量在1.00mg/L淫羊藿提取物培养20d内均表现平稳的生长趋势,实验组股骨质量从第2天起即高于对照组(P〈0.05)。(3)1.00mg/L质量浓度培养7d后,实验组的股骨长度、股骨湿质量、股骨干质量及细胞增殖量均高于对照组(P〈0.05-0.01)。结论:淫羊蓿提取物能够在体外促进软骨器官生长和细胞增殖。
  • 人胆汁双向凝胶电泳分离技术的建立与优化 免费阅读 下载全文
  • 背景:双向凝胶电泳是目前最好的蛋白质分离方法,然而胆汁样品中的盐、脂和蛋白酶对双向凝胶电泳干扰较大,影响电泳图谱的重复性。目的:通过对胆汁样品双向凝胶电泳的几个关键环节的分析,建立起一种适合于有效分离胆汁蛋白质的双向凝胶电泳分离方法。设计、时间及地点:胆汁双向凝胶电泳图谱对照实验,于2008—03/11在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:胆汁标本取自于重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,于肝移植过程中从供体中取得。方法:将标本分别按3种不同方法进行处理:①2D—Clean-up试剂盒处理胆汁标本:用裂解液,7mol/L尿素,2mol/L硫脲,质量浓度为0.4g/L的过硫酸铵,65mmol/L二硫苏糖醇,质量浓度为0.2g/L的载体两性电解质溶解沉淀过夜。②在胆汁标本中加入4倍体积的预冷丙酮,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。③在胆汁标本中加入4倍体积的预冷三氯乙酸,丙酮混合液,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。经过一维等电聚焦和二维SDS.PAGE电泳分离人胆汁蛋白质组。将切取的蛋白质点进行脱色,酶解,萃取,冷冻抽干后,进行质谱鉴定。主要观察指标:胆汁双向电泳图谱上蛋白质点数目,位置及重复性的比较。结果:3种方法均能得到理想的一向电泳等电聚焦,与单纯的丙酮沉淀法相比较,但三氯乙酸/丙酮沉淀法损失了较多的中小分子量的蛋白质,因此不适合于胆汁标本的处理。与2D.cleanup试剂盒处理法相比,丙酮沉淀法纯化胆汁内盐、脂较丰富,去除干扰成分,具有较好的效果,具有成本低廉、操作简便等优势。结论:通过优化胆汁蛋白质提取、上样量和双向电泳重复性检测等步骤,建立了人胆汁双向凝胶电泳的方法,丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合是获取人胆汁蛋白质组的一种有效方法。
  • 人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因慢病毒表达载体的构建 免费阅读 下载全文
  • 背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设计、时间及地点:开放性实验,单-样本观察,于200706/200803在暨南大学生物工程研究所及暨南大学附属第-医院中心实验室完成。材料:pBABE.puro.hTERT质粒由Robert Weinberg教授惠赠,质粒pDONR221,pLenti6N5-DEST,ccdBSurvival,Stbl3及293FT细胞由暨南大学生物工程研究所提供。方法:以pBABE—pure—hTERT质粒为模板聚合酶链反应法获取目的基因人端粒酶反转录酶(包含酶切位点BglⅡ、HindlⅡ,通过BP反应克隆至pDONR221,以质粒pEGFP.N1为模板,以聚合酶链反应法获取目的基因增强型绿色荧光蛋白(包含酶切位点HindⅢ,BgⅢ),通过酶切及连接反应形成pDONR221-hTERT-EGFP。采用LR重组酶将pDONR221-hTERT—EGFP和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST—hTERT—EGFP。将pLenti6/V5-DEST—hTERT—EGFP与包装质粒混合,利用脂质体共转染293FT细胞。主要观察指标:通过酶切、聚合酶链式反应及测序验证重组质粒pDONR221-hTERT—EGFP和pLenti6/V5-DEST-hTERT.EGFP是否构建成功。包装重组慢病毒,应用荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白在293FT细胞中的表达情况。结果:测序发现慢病毒入门载体pDONR221包含目的基因hTERT1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6N5-DEST.hTERT—EGFP成功构建。转染后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光。结论:实验成功构建了人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因的慢病毒表达载体,为人端粒酶反转录酶稳定转染提供快速、简洁的方法。
  • 真核表达载体pcDNA3-CTLA41g的构建及体内表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:CTLA-41g的制备过程比较复杂,单克隆抗体的价格比较昂贵,而且应用CTLA-41g单克隆抗体注射本身存在着血浆药物浓度不稳定的问题。目的:探讨Ctla41g表达质粒构建的可行性。设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2005/2006在中国医科大学中心实验室完成。材料:雄性Wistar大鼠10只,近交系昆明小鼠10只。方法:提取Wistar大鼠总RNA,反转录成cDNA第1链,PCR扩增CTLA4基因,将其和真核表达载体pcDNA3酶切、连接。转化感受态菌DH5a,培养后挑取阳性克隆、提取质粒,酶切鉴定重组子、测序,最后转染近交系昆明小鼠,应用WestenBlot法检测血清CTLA41g水平。主要观察指标:构建的Ctla41g表达质粒基因序是否正确以及能否在小鼠体内进行蛋白表达。结果:对含有pcDNA3.CTLA4质粒的LB菌液进行鉴定测序,目的基因片断大小为288bp,与Genebank上公布的CTLA4序列完全一致,质粒构建正确。利用阳性脂质体载体包被pcDNA3-CTLA41g转染小鼠,有3只在第7天血清检测CTLA41g阳性,显示pcDNA3-CTLA41g能够在鼠肌细胞内表达。结论:利用基因合成和重组技术成功构建了真核表达载体pcDNA3-CTLA41g,利用脂质体法成功的将pcDNA3-CTLA41g转染到鼠肌细胞内并进行表达。
  • 构建胶质原纤维酸性蛋白原核表达载体及蛋白表达鉴定 免费阅读 下载全文
  • 背景:胶质原纤维酸性蛋白在神经损伤的发生发展过程中具有重要作用。目的:对胶质纤维酸性蛋白进行基因克隆,构建原核表达质粒并加以鉴定。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008—09/11在上海市长征医院神经外科实验室完成。材料:中间载体pGEM.TEasy质粒购于Pmmega公司,原核表达质粒pGEX-4T一2由上海市长征医院神经外科实验室保存。方法:从人脑胶质瘤组织提取mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法扩增胶质纤维酸性蛋白序列并表达,然后与载体pGEX-4T.2连接,转化宿主菌BL21构建重组质粒,诱导表达后纯化,Western—blot鉴定。主要观察指标:总RNA鉴定结果,聚合酶链反应扩增产物分子质量的鉴定,重组表达载体的酶切鉴定,Western-blot鉴定。结果:抽提肿瘤组织总RNA后,电泳清晰可见rRNA28S、18S、5S3条带。且总RNA的A260nm/A280nm值为1.903。聚合酶链反应结果显示,在约1300bp左右有一条特异性条带,与预期的胶质原纤维酸性蛋白基因大小一致。重组表达载体的酶切鉴定及测序结果与GenBank的胶质原纤维酸性蛋白序列一致,经Western—blot验证为目的蛋白。结论:用双酶切、DNA测序与Western-blot的方法证实原核表达载体构建成功。
  • MAPK信号转导通路中ERK、JNK和P38在大鼠肝脏缺血再灌注和缺血后处理中表达的变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:近年来,随着器官移植的不断开展和深入研究,人们逐渐认识到供肝原发性无功能是引起肝移植患者早期死亡的主要原因,而缺血再灌注损伤是导致供肝功能不良的重要因素。如何减轻或消除缺血再灌注损伤一直是临床研究的热点。目的:观察肝缺血再灌注损伤和缺血后处理后MAPK级联通路中P38,JNK和ERK活化的情况。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007—05/10在中南大学湘雅医院动物实验中心完成。材料:102只Wistar大鼠随机分为假手术组6只,缺血30min再灌注组48只和缺血后处理组48只,后2组又分为0,0.5,1,2,4,8,12,24h不同时间处理亚组,每亚组6只。方法:建立大鼠肝脏体内局部缺血再灌注一缺血后处理模型,于复灌后0,0.5,1,2,4,8,12,24h取肝脏组织。主要观察指标:应用免疫组织化学的方法对磷酸化的P—P38、p-JNK和P-ERK进行免疫组化检测并作半定量分析。结果:Op—ERK,P—JNK在缺血后即有轻度增高,但在再灌注后30min开始增岛明显,持续到再灌注后4h,高峰出现在再灌注后2h。缺血后处理组P—ERK,P—JNK的表达在再灌注后1,2,4h较缺血再灌注组增高(P〈0.05)。②p—P38在缺血后即有轻度地增高,但在再灌注后30min开始增高明显,高峰出现在再灌注后1h,2h后开始下降,表达程度维持在缺血后水平。与缺血再灌注组相比,缺血后处理组P.P38的表达增高,但仅在再灌注后1h明显增高(P〈0.05)。结论:缺血后处理可通过增高ERK和P38的磷酸化水平,降低JNK的磷酸化水平减轻缺血再灌注导致的肝脏损伤。
  • 局部注射肾上腺素对大鼠跨区皮瓣的延迟作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:在修复大面积组织缺损或复杂畸形时,确保皮瓣移植成功的传统方法是进行旷日持久的延迟术,患者需承受高昂的医疗费用和2次以上的手术痛苦。目的:探索超大组织皮瓣延迟新方法以提高皮瓣延迟效率。设计、时间及地点:细胞形态学观察,于2007—09/2008—03在南华大学实验室完成。材料:健康雄性Wistar大鼠120只。取大鼠下背部皮瓣,5cm-1cm大小,跨越中线区2.5cm,双侧主干血管在中线区有着恒定的吻合支。方法:将120只大鼠随机分为手术组、。肾上腺素组和生理盐水组,40只,组,每组皮瓣又分成未延迟组,延迟3,7,14h皮瓣组。手术组:取皮瓣后,彻底止血后原位缝合。。肾上腺素组:以左侧髂支为蒂,在皮瓣右侧髂支附近注射1:400000肾上腺素盐水0.1mL至皮下,原位缝合。生理盐水组:操作同肾上腺素组,在相同部位注射生理盐水0.1mL。主要观察指标:观察各组大鼠的皮瓣乳酸含量、皮瓣成活情况及皮瓣毛细血管的密度。结果:延迟7,14d时,手术组皮瓣成活率最高,肾上腺素组次之,生理盐水组最低。手术组皮瓣白延迟3d开始,皮瓣中线区血管密度开始增加,随着延迟时间的延长,乳酸浓度依次下降,皮瓣成活率依次升高。肾上腺素组乳酸含量在注射7,14d后没有逐渐下降反而处于一个比较稳定的值。手术组和肾上腺素组的皮瓣成活率、毛细血管密度、乳酸含量与生理盐水组比较,均增高(P〈0.05)。结论:局部反复注射肾上腺素与手术方法起到相同的皮瓣延迟效果。
  • 高脂饲料喂养与动脉内膜球囊损伤结合建立兔腹主动脉粥样硬化模型 免费阅读 下载全文
  • 背景:以往研究多采用单纯饲喂高脂饲料、正常或高脂血症动物动脉内膜损伤致动脉粥样硬化狭窄模型。目的:拟采用喂养高脂饲料与动脉内膜球囊损伤相结合的方法建立腹主动脉粥样硬化的模型。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007—01/03在解放军总医院动物实验中心完成。材料:新西兰白兔20只,随机分为单纯饲喂高脂饲料组、高脂饲料与动脉内膜损伤结合组,每组10只。高脂饲料由普通颗粒饲料+4%胆固醇+10%猪油组成+10%蛋黄粉组成。方法:单纯饲喂高脂饲料组单纯喂养高脂饲料,高脂饲料与动脉内膜损伤结合组喂养高脂饲料4周后,行腹主动脉内膜球囊损伤术。主要观察指标:12周后取主动脉行病理检查,计算机计算脂纹脂斑厚度,内、中膜厚度,内膜厚度比值,并进行血清总胆固醇、三酰甘油和高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的测定。结果:12周后,两组兔血脂血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇均升高,高脂饲料与动脉内膜损伤结合组升高更明显(P〈0.05)。喂养高脂饲料的两组动物均出现动脉粥样硬化斑块,横段面纤维斑块切片出现钙化。与单纯饲喂高脂饲料组比较,高脂饲料与动脉内膜损伤术结合组内膜明显增厚,形成了明显的斑块及纤维帽结构,斑块厚度与内中膜厚度比值增加明显(P〈0.01)。结论:所诱导产生的斑块与人类斑块成分具有一定相似性,包括斑块的纤维帽、钙化、脂核等,提示采用动脉内膜损伤与高脂饮食结合方式来制作动脉粥样硬化斑块的模型是可行的、实用的。
  • 氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖及周期素D1的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:氧化型低密度脂蛋白可通过Ras/Raf/丝裂原活化蛋白激酶激酶,丝裂原活化蛋白激酶途径诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期蛋白的表达。目的:观察胞外信号调节激酶是否参与了氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞周期推进以及周期素01的表达。设计、时间及地点:对照观察细胞学实验,于2008—02/10在广州医学院完成。材料:人血浆低密度脂蛋白来自健康志愿者血清。SD大鼠由广州医学院实验动物中心提供。方法:采用超速离心法分离人低密度脂蛋白进行氧化修饰及鉴定。以酶消化法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用免疫组织化学染色法鉴定。主要观察指标:在静止的血管平滑肌细胞中加入MEK1/2选择性抑制剂10μmol/LPD98059和,或50mg/L氧化型低密度脂蛋白,以CCK-8和细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术观察细胞周期,蛋白印迹检测周期素D1蛋白表达及胞外信号调节激酶的活性。结果:CCK-8和细胞计数法显示,氧化型低密度脂蛋白能明显诱导血管平滑肌细胞增殖,PD98059抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖,并且呈时间依赖性。流式细胞术分析表明,经氧化型低密度脂蛋白处理24h后,血管平滑肌细胞从Go/G1期进入S期,S期细胞百分比明显增高(P〈0.01),加入PD98059处理24h后,血管平滑肌细胞由Go/G1期向S期的推进受到抑制。蛋白印迹结果显示,氧化型低密度脂蛋白能明显诱导周期素D1蛋白表达及胞外信号调节激酶的磷酸化,PD98059抑制氧化型低密度脂蛋所诱导的周期素D1蛋白表达以及胞外信号调节激酶的磷酸化。结论:氧化型低密度脂蛋白能诱导血管平滑肌细胞增殖,促进细胞由G0/G1期向S期转换以及周期素D1表达,其作用部分是由胞外信号调节激酶所介导。
  • 人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1表达与氟伐他汀的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1作为氧化型低密度脂蛋白的特异性受体,参与血管性炎症和粥样斑块的发生发展过程,近年发现他汀类药物调脂外抗炎症作用可能是其抗动脉粥样硬化机制之一。目的:验证氟伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。设计、时间及地点:对比观察,实验于2006—08/2007—05在中南大学湘雅医学院附属第二医院医学实验中心完成。材料:人脐静脉内皮细胞株购自美国ATCC公司。氟伐他汀原粉购白北京诺华制药有限公司。方法:培养人脐静脉内皮细胞株,按以下方法处理:①用氧化型低密度脂蛋白刺激细胞(终浓度分别为25,50,100mg/L)。②以氧化型低密度脂蛋白受体1中和抗体干预后,再加入50mg/L氧化型低密度脂聋白干预。③以核因子kB抑制剂PDTC干预后,再加入50mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。④以不同浓度(O.01,0.1,1μmol/L)氟伐他汀干预后,再加入50mg/L氧化型低密度脂蛋白干预。⑤空白组为对照。主要观察指标:采用反转录聚合酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达水平。结果:在氧化型低密度脂蛋白各剂量组(25,50,100mg/L)均可上调人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达,在25-50mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系(P〈0.01)。预先分别给予氧化型低密度脂蛋白受体1中和抗体和核因子KB抑制剂PDTC干预,氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达均下调。予以不同浓度氟伐他汀干预呈浓度依赖性降低氧化型低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达。结论:氟伐他汀呈浓度依赖性降低氧化型低密度脂蚩白刺激下人脐静脉内皮细胞氰化型低密度脂蛋白受体1的表达,可能与其抑制核因子kB的表达,减轻内皮细胞炎症反应,从而发挥其独立于降脂外的抗炎效应。
  • 三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:氧化低密度脂蛋白能诱导血管内皮细胞活化和黏附分子表达,在动脉粥样硬化形成早期起重要作用。三七总皂苷在心血管系统方面具有保护血管内皮细胞、显著改善动脉粥样硬化病变程度的药理作用。目的:验证三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响。设计、时间及地点:体外实验,分组对照,于2007—03/2008—05在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成。材料:原代人脐静脉内皮细胞为美国CascadeBiologics公司产品;三七总皂苷(血塞通冻干粉针)为黑龙江珍宝岛制药有限公司产品,成分为三七总皂苷,批号:20040207。方法:以培养原代人脐静脉内皮细胞作为靶细胞,用氧化型低密度脂蛋白造成人脐静脉内皮细胞损伤模型。将培养的人脐静脉内皮细胞分为5组:氧化型低密度脂蛋白组(100mg/L)、氧化型低密度脂蛋白+三七总皂苷组(终浓度分别为200,100,50mg/L)、正常对照组。主要观察指标:光镜下观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达。结果:氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞后12,24.h时,人脐静脉内皮细胞损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率显著升高,人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达水平也均明显升高,_均明显高于正常对照组(P〈0.05,P〈0.01),而三七总皂苷能使氧化型低密度脂蛋白损伤的人脐静脉内皮细胞形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,以及显著降低血管细胞黏附分子1的蛋白的表达水平,与氧化型低密度脂蛋白组相比均有显著性差异(P〈0.05,P〈001),这种作用随着剂量的增加而增强。结论:三七总皂苷能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核一血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗动脉硬化闭塞症的机制之一。
  • 2型糖尿病大鼠骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核心结合因子α1mRNA表达与骨折的愈合 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓间充质干细胞成骨分化与成脂分化方向对骨再生和修复的影响是目前的研究热点,过氧化物酶体增殖物激活受体γ特别是过氧化物酶体增殖物激活受体γ2和核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞分化方向有调控作用。目的:分析2型糖尿病大鼠骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核心结合因子α1的表达变化与骨折愈合障碍的关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007—08/12在中南大学第三附属医院中心实验室完成。材料:选用雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为2组,对照组10只,实验组20只,分别给予普通饲料、高糖高脂饲料喂养。方法:大鼠喂养8周后断尾法取血,实验组腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg,对照组注射等量枸橼酸盐缓冲液。注射2周后断尾法取血,建立大鼠左胫骨牵引成骨模型,行左胫骨中上段骨干横行截骨,安置特制延长外固定架,牵引14d。主要观察指标:行X射线摄片比较2组大鼠牵引间隙内骨痂的形成;在组织学水平观察牵引骨痂内微骨柱及初始基质前沿形成及骨折两端髓腔内脂肪细胞形成,并计算骨折两端髓腔内脂肪细胞与骨髓腔面积百分比:以反转录-聚合酶链反应法检测双侧股骨骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核心结合因子α1mRNA的表达。结果:实验组大鼠高糖高脂饲料喂养8周后,总且日固醇、三酰甘油及空腹胰岛素浓度均高于对照组(P〈0.05~0.01);实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素2周后:空腹血糖、总胆固醇及三酰甘油浓度高于对照组(p〈005—001),说明2型糖尿病建立成功。X射线摄片显示,实验组大鼠骨折断端之间牵引骨痂形成明显减少,骨痂组织学检查表现为微骨柱基质排列紊乱,初始基质前沿浅染。组织学检查显示,实验组大鼠骨折两端髓腔内脂肪细胞及脂肪细胞占骨髓腔面积百分比高于对照组(P〈0.01)。反转录-聚合酶链反应法检测显示,实验组大鼠双侧股骨骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体ymRNA表达上调(P〈0.05),核心结合因子α1mRNA表达下调(p〈0.05)。结论:2型糖尿病大鼠骨折愈合障碍可能与2型糖尿病条件下骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体ymRNA表达增加及核心结合因子α1mRNA的表达受抑制有关。
  • 分子伴侣辅因子热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白真核表达载体pDsRed2-N1(+)/CHIP构建及在COS-7细胞中的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白与许多神经退行性疾病的相关蛋白质存在相互作用,并促进这些蛋白质的降解,因此对热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白功能的研究具有非常重要的意义。目的:构建分子伴侣辅因子热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白真核表达载体pDsRed2-N1(+)/CHIP,检测其转染COS-7细胞后的表达。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007—05/2008-02在广东省人民医院医学研究中心完成。材料:大肠杆菌EcoliDH5a,质粒pDsRed2-N1(+)为广东省人民医院医学研究中心肖定璋主任馈赠;人cDNA文库为中南大学湘雅医院神经内科馈赠。方法:用聚合酶链反应方法从人cDNA文库DNA中扩增热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白全长cDNA,该基因片段两端设计了HindIII和BamHI限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白的cDNA构建到真核表达载体pDsRed2-N1(+)上,酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术将所构建的载体导入COS-7细胞中,体外培养,于转染48h后利用反转录-聚合酶链反应和WesternBlotting方法检测目的基因的表达情况。主要观察指标:①热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白cDNA扩增产物检测。(2)pDsRed2。NI(+)/CHIP重组体酶切鉴定。③反转录-聚合酶链反应。④免疫荧光及Western-blotting。结果:经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,聚合酶链反应获得的片段与GenBank中登记的热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白序列完全相同:pDsRed2-N1/CHIP酶切片段的长度与理论大小相符:转染48h后的COS-7细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白的表达。结论:热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白真核表达载体构建成功,在COS-7细胞中可获得表达。
  • 去卵巢后大鼠骨组织中核因子kB受体活化因子配体和骨保护素表达的变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:核因子KB受体活化因子配体在破骨细胞分化、活化和存活的生理过程中起十分重要的作用。骨保护素作为核因子KB受体活化因子配体的诱骗受体,对破骨细胞有相反作用。目的:观察去卵巢后大鼠骨组织内核因子KB受体活化因子配体、骨保护素mRNA、蛋白表达和骨密度的时间变化规律。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006—05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室完成。材料:6月龄健康雌性SD大鼠50只,体质量300-320g。随机平均分成去卵巢组和对照组。方法:建立去卵巢大鼠模型,于术后2,4,6,8,10周取股骨髁。主要观察指标:测量股骨髁的骨密度,检测骨组织核因子KB受体活化因子配体、骨保护素的mRNA、蛋白表达情况。结果:去卵巢后大鼠股骨髁的骨密度与对照组相比于第6周开始出现显著降低(P〈0.05);核因子KB受体活化因子配体mRNA水平在第4周达到高峰,蛋白水平在第6周达到高峰,此后均呈持续高表达,与对照组相比,各时间点表达水平差异具有显著性(P〈0.05):骨保护素mRNA水平在第4周达到高峰,蛋白水平在第2周达到高峰,此后均迅速下降,与对照组相比,各时间点表达水平差异具有显著性(P〈0.05)。结论:大鼠去卵巢后股骨髁是骨密度变化的敏感部位;核因子KB受体活化因子配体持续高表达,骨保护素表达短期内升高,迅速降低是骨质疏松的直接原因。
  • 转化生长因子β1在大鼠房水中的药物浓度 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究证实,转化生长因子β1滴眼液具有促进角膜损伤愈合的作用。目的:观察转化生长因子β1滴眼液表面应用后在房水中的药物浓度,验证其在预防和治疗角膜移植排斥反应中的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008—04/07在珠江医院中心实验室完成。材料:成年雌性SPF级SD大鼠32只,体质量200-250g。干粉状转化生长因子β1为美国SANTA公司产品。方法:将32只大鼠随机分为4组,空白对照组,转化生长因子B,0.5,1,2mg/L组,每组各8只。分别给予生理盐水、0.5,1,2mg/L转化生长因子B1滴眼液,3次/d,用药1周。主要观察指标:①观察眼部刺激症状。②应用酶联免疫吸附法定量测定房水中的转化生长因子β1质量浓度。结果:大体与裂隙灯显微镜观察,实验前后和实验过程中,各组大鼠眼均无结膜分泌物、球结膜充血、角膜水肿、角膜后沉着物、前房炎性反应及晶状体混浊改变。空白组和3种不同浓度的转化生长因子β1滴眼液滴眼后房水中药物质量浓度分别是(0.429±0.187),(0964±0.284),(2.127±0.673),(2.282±0.745)ug/L。结论:1mg/L和2mg/L转化生长因子β1滴眼液能有效提高大鼠眼房水中转化生长因子D1的质量浓度(P〈0.05),具有良好的角膜穿透性,在房水中可以达到有效的治疗浓度。转化生长因子β1滴眼液能够在局部发挥药物的作用,避免药物全身应用的不良反应。
  • 转化生长因子β1质粒对静脉移植的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:大量实验表明,转化生长因子β1质粒在神经移植过程中可抑制或减弱移植排斥反应,而对静脉移植的影响却很少有报道。目的:探讨大鼠局部注射转化生长因子β1质粒诱导同种异体异基因股静脉移植免疫耐受的作用途径。设计、时间及地点:随机分组,动物实验观察,于2007—03/2008—04在哈尔滨医科大学动物实验中心完成。材料:供体Wistar大鼠18只,受体SD大鼠48只随机分为白体移植组,异体移植组,免疫抑制剂组,转化生长因子131质粒组,每组12只。方法:免疫抑制剂组在移植前3d开始腹腔内注射环孢霉素A00mg/kg),1次/d,直到处死。转化生长因子β1质粒组大鼠于局部股静脉两断端内注射40ug,只的转化生长因子β1质粒。自体移植和异体移植组仅进行静脉移植。主要观察指标:于2周后进行影像学、组织学、免疫学检测。结果:白体移植组:内皮细胞扁平,核膜增厚。异体移植组:脱落内皮细胞及碎片,可见内膜下层。免疫抑制剂组:血管内皮细胞核膜增厚,广泛粗面内质网扩张。转化生长因子β1质粒组:血管内皮细胞可见粗面内质网扩张,线粒体空泡变。相邻细胞间可见紧密连接。转化生长因子β1质粒组优于免疫抑制剂组和异体移植组。4组混合淋巴细胞培养A值分别为1.07±0.14、4.15±0.67、1177±O23和1.38±023。转化生长因子β1质粒组与异体血管移植组和免疫抑制剂组比较,有显著差异(P〈0.05)。异体血管移植组对供体大鼠淋巴细胞的刺激呈正常反应,转化生长因子β1质粒组对供体鼠淋巴细胞的刺激反应性减弱,与免疫抑制剂组比较,差异有显著性意义(P〈0.05)。结论:局部注射转化生长因子β1质粒可以协同减轻移植后产生的免疫排斥反应。
  • 胰岛素样生长因子1在糖尿病骨折大鼠骨痂组织中对成骨细胞增殖和骨钙素表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:有研究表明,糖尿病患者骨折愈合过程中局部骨痂组织胰岛素样生长因子1明显降低,成骨细胞增殖能力下降。目的:观察以胰岛素样生长因子1治疗糖尿病大鼠骨折愈合过程中骨痂组织成骨细胞增殖和骨钙素表达,分析胰岛素样生长因子1在糖尿病大鼠骨折愈合过程中的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008—09/12在昆明医学院动物实验中心完成。材料:40只SD雄性大鼠,30只腹腔内注射链脲佐菌素破坏胰岛细胞诱导为糖尿病大鼠后,随机分为胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、模型对照组,10只为正常对照大鼠,腹腔内注射等容量生理盐水。方法:4组大鼠右胫骨上段骨折后,胰岛素样生长因子1组用胰岛素样生长因子1治疗,30ug/kg,胰岛素组用胰岛素治疗,6-8U,模型对照组及正常对照组未进行治疗。主要观察指标:伤后第1,2,4,6周×射线片观察骨折愈合情况,光镜下观察骨痂内成骨细胞数量,免疫组织化学测定血清骨钙素表达。结果:胰岛素样生长因子1组、胰岛素组X射线片显示骨痂生成量多,骨折愈合程度明显优于模型对照组(P〈0.05),胰岛素样生长因子1组、胰岛素组差异无显著性意义。光镜观察显示,胰岛素样生长因子1组、胰岛素组成骨细胞数量明显多于模型对照组,但低于正常对照组。各组血清骨钙素均呈上升趋势,在第2周达到峰值,第4周下降,至第6周进一步下降。模型对照组骨钙素升高幅度明显低于正常对照组(P〈0.01),并且低于胰岛素样生长因子1组、胰岛素组。胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、正常对照组的骨钙素差异无显著性意义。结论:糖尿病大鼠骨折愈合过程中,用胰岛素样生长因子1治疗可提高骨钙素水平,促进成骨细胞增殖,与胰岛素治疗效果相当。
  • 重组人促红细胞生成素联合高压氧对移植大鼠背部逆行超长缺血皮瓣存活率的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:有研究表明,重组人促红细胞生成素可诱导内皮前细胞分化成新生内皮细胞,高压氧则为新生内皮细胞提供增殖所需的充足氧分,加速了新生血管的发生。目的:分析重组人红细胞生成素、高压氧及其联合应用时对大鼠背部逆行超长缺血皮瓣的影响。设计、时间及地点:随机分组,细胞形态学观察,于2008-04/09在山东大学实验动物中心进行。材料:40只Wistar大鼠,于背部制作逆行超长缺血皮瓣。方法:于大鼠背部按4:1设计逆行超长缺血随意皮瓣,皮瓣原位缝合后按照不同的干预方式均分为4组,常压氧组:给予生理盐水+常压氧;高压氧组:高压氧+生理盐水:重组人促红细胞生成素组:重组人促红细胞生成素+常压氧;综合组:重组人促红细胞生成素+常压氧。干预方法:重组人促红细胞生成素的注射量为400IUng与生理盐水等量,1次/d,连用10d。高压氧为202.65kPa,体积分数为95%:常压氧为101kPa:体积分数为35%,给氧均于缝合后8h进行,1h/次,2次/d,共10d。主要观察指标:于缝合后10d测量各组皮瓣成活率。以血管内皮细胞生长因子和CD34作为血管标记行免疫组化染色,计数皮瓣新生血管密度。结果:定性分析:常压氧组局部坏死,腺体萎缩。高压氧组腺体形态较好,重组人促红细胞生成素组腺体增生,而综合组增生更加明显。定量分析:与常压氧组比较,后3组的血管密度值均增高(P〈0.01),且呈递增趋势,以d=0.05的检验标准,各组之间的差别有显著性意义(P〈0.01),方差分析结果显示重组人促红细胞生成素和高压氧之间存在协同作用,同时使用效果更好。结论:重组人促红细胞生成素和高压氧以及二者联合应用,可以促进缺血皮瓣下的毛细血管生成,提高皮瓣存活率并扩大皮瓣长宽比例,重组人促红细胞生成素促进皮瓣成活效果好于高压氧,二者同时使用效果更好。
  • 免抗凋亡诱导因子多克隆抗体的制备、纯化与鉴定 免费阅读 下载全文
  • 背景:凋亡诱导因子是存在于线粒体膜间隙中的黄素蛋白,它不仅具有氧化还原和电子传递功能,还具有促细胞凋亡功能,从而在维持细胞正常生理活动中具有重要作用。目的:制备抗凋亡诱导因子多克隆抗体并进行特性鉴定。设计、时间及地点:单一样本观察,于200609/200808在新乡医学院免疫学研究中一心完成。材料:新西兰大白兔雌性2只,体质量1.9-2.1kg;JurkatE6-1细胞系购自美国ATCC公司。食管癌组织取自新乡医学院普通外科手术患者。抗原肽KLH由上海华大天源生物科技公司合成。CNBr活化的Sepharose4B购自美国Pharmacia公司。方法:利用美国过敏和感染疾病研究所(NIAID)主办的抗原袁位分析网站(http://beta.immuneepitope.org/home.php)的在线软件对凋亡诱导因子蛋白的氨基酸序列进行分析设计凋亡诱导因子抗原肽,制备多克隆抗体并纯化。主要观察指标:采用间接ELISA、Westernblot、免疫组织化学3种方法对获得的多克隆抗体进行特性鉴定。结果:间接EUSA法检测显示,血清抗凋亡诱导因子抗体的效价达到1:128000。Westernblot结果显示,存在Mr67000条带。免疫组织化学检测结果显示,在食管癌细胞的胞质中有棕黄色的阳性颗粒存在,说明此抗体也可以用于免疫组织化学染色。结论:实验获得了高效价的特异性的抗凋亡诱导因子抗体。
  • 大鼠Akt1基因真核表达载体构建及其在293细胞中的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:Akt在细胞存活、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等活动中扮演着重要角色。虽然Akt的作用机制目前尚有很多的未知领域,但其作为生存信号的一个重要组件.已成为近年分子生物研究中的一个重要课题。目的:构建Akt1基因真核表达载体pDC316-Akt1,观察其在293细胞(人胚肾母细胞冲的表达。设计、时间及地点:观察性实验,于2006—09/12在解放军军事医学科学院分子生物实验室完成。材料:pDC316质粒,由本元正阳公司提供:DH5a、293细胞为自备。方法:采用反转录聚合酶链反应方法自大鼠肝组织总RNA中克降Akt1DNA片段,测序鉴定正确后,插入真核表达载体pDC316的EcoRI、HindⅢ的酶切位点,构建Akt1真核表达载体Akt-pDC316,脂质体介导法转染293细胞。主要观察指标:蛋白免疫印迹检测转染293细胞中Akt1的表达。结果:经测序鉴定,构建的Akt1氨基酸序列与野生型Akt1序列完全相符。将Akt—pDC316转入293细胞,蛋白免疫印迹检测可见相对分子质量55000位置有Akt1的表达。结论:构建Akt1基因真核表达载体在293细胞中可以充分的表达。
  • 2009年3月6日《Cell》杂志发表一种新的iPS技术路线 免费阅读 下载全文
  • iPS技术中一直备受关注的是其中的一个致癌基因c-Myc,因为慢病毒载体具有将致癌基因整合到宿主基因组上的风险,因此这也是致癌性成为iPS技术应用到临床上的主要障碍之一。
  • 学科新闻:2009年3月1日《Nature》公布iPS最新技术 免费阅读 下载全文
  • 2009—03—01西奈山医院、多伦多大学以及英国Wellcome Trust基因科学园等处的研究人员发现了一种获得iPS的新方法。该方法最令人振奋的地方在于舍弃了对健康有高风险的慢病毒载体。
  • 学科新闻:骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的平衡调控机制研究 免费阅读 下载全文
  • 2009年3月((细胞与分子医学杂志》(Journal of Cellular and Molecular Medicine,JCMM)在线发表了中科院健康所戴魁戎院士研究组关于骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化平衡调控机制方面的研究进展。在本研究中,范启明等研究人员着眼于骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化平衡,选择C/EBPα为靶基因,研究它在BMP-2诱导的C3H10T1/2细胞向成骨细胞定向分化和成骨一成脂转分化过程中的基因表达模式、
  • 神经组织工程临床问答① 免费阅读 下载全文
  • 1神经修复时间对神经再生的影响? 神经损伤后何时进行修复,修复时间的延迟对神经感觉和运动功能的影响如何,文献报告的很少。研究表明,修复时间延迟对运动功能恢复的影响要比对感觉功能恢复的影响严重得多。Scarff认为这和失神经的骨骼肌存活时间有关。通过对二战中神经损伤患者的研究发现,损伤到修复之间每延迟陇望蜀6d,可造成不同程度的恢复能力丧失,平均为最大功能的1%;
  • 让昨天告诉今天:神经组织工程研究的学术与技术进展 免费阅读 下载全文
  • 神经组织工程研究按时间年限的导读;1850年,英国生理学家Waller首次描述神经的Waller变性(Wallerian degeneration),即神经断裂后轴浆流动阻断远侧轴突失去营养,两三天断成颗粒。1903年,1939年,1953年,1982年,1986年,美国芝加哥大学Dunn教授采用未成熟的神经组织进行神经组织移植。德国生理学家Theodor Schwann首次发现许旺细胞(schwann cells,Scs)是一种神经胶质细胞。
  • 离心运动重复效应及肌肉生物力学适应论 免费阅读 下载全文
  • 初次进行离心运动容易引起运动性肌肉损伤,但是间隔一定时间重复相同的离心运动后肌肉损伤明显减轻的现象被认为是肌肉适应的结果,也被称作运动的重复效应或保护效应。很多因素可以影响到重复效应的效果,其中初次训练损伤恢复期的训练,小负荷量与强度的预先训练以及连续训练的适应效果仍需要更多更详细的研究。重复效应的具体机制目前尚不明确,很可能是细胞适应,连接组织适应以及神经适应等多种机制相互作用的结果。
  • 纤维环细胞的培养技术及生长因子调控 免费阅读 下载全文
  • 椎间盘退行性病变表现为细胞数量和细胞基质代谢如胶原、蛋白聚糖等代谢的改变。生长因子有调整细胞增殖、分化及细胞基质代谢的作用,可用于椎间盘退变的生物学治疗,其作用成为研究热点。在腰椎间盘退变阶段,纤维环损伤的修复对预防髓核疝出有重要意义。但目前有关生长因子对纤维环细胞作用的研究少于髓核细胞,有待加强。椎间盘细胞不易培养,目前其培养技术渐趋成熟,但国内涉及椎间盘细胞培养的研究偏少。文章首先介绍了国外一些成熟细胞培养技术,如单层、三维培养的对比等,其对实验有明确指导作用。其次综述了国内外目前有关生长因子对纤维环细胞增殖、基质代谢作用的研究成果,尤其是近年来的新成果,目的在于总结对纤维环细胞有良好作用的生长因子,探讨生长因子生物学修复退变椎间盘的趋势;同时促使人们注意未进行研究的因子,扩展生长因子的研究领域。
  • 软骨组织工程研究中的刺激因子 免费阅读 下载全文
  • 组织工程中刺激因子的作用是诱导、加速或,和增强软骨形成。生长因子与其添加物加入体外培养介质中或加入支架中体内递送以控制细胞分化和组织形成。目前,许多生长因子以及其他可溶性因子如透明质酸、硫酸软骨素和胰岛素已开始被单一地或协同地应用于软骨组织工程,其作用效果依赖于细胞的类型和培养条件。基因治疗利用过分表达的生物活性分子作用于细胞是另一种局部转导的方法。另一种刺激因子是调节负载方式的机械信号,如流体静压和动态压力或通过生物反应器。目前应用于软骨组织工程中的生物反应器包括:平行平板生物反应器、旋转壁式生物反应器以及同轴圆柱生物反应器。生物反应器可以提高营养传输能力,提供流体动力环境,施加液诱导剪应力,进而促进软骨特异性基质蛋白的合成。
  • 小腿中下1/3骨及皮肤软组织缺损的组织皮瓣移植 免费阅读 下载全文
  • 文章阐述了研究小腿组织缺损修复的重要意义,介绍了皮瓣修复的类型及方法。其中,重点介绍了皮神经营养血管复合瓣,特别是皮神经营养血管复合瓣修复小腿中下1/3骨及皮肤缺损的重要作用。同时详细介绍了目前国内外非主干营养血管皮瓣,复合瓣的移植修复研究情况,分析了目前在小腿骨及皮肤软组织缺损组织皮瓣移植修复研究方面存在的问题,并提出了今后在小腿中下1/3骨及皮肤软组织缺损组织皮瓣移植修复中的研究发展方向。
  • 运动性骨骼肌微损伤与细胞骨架 免费阅读 下载全文
  • 综述了细胞骨架结构和功能的研究现状与发展趋势,分析了骨骼肌细胞骨架在维持骨骼肌肌小节正常结构和功能中的重要性。重点介绍了骨骼肌细胞骨架结蛋白、肌养蛋白、肌聚糖、肌联蛋白和伴肌动蛋白在运动中的变化,对细胞骨架蛋白在运动性骨骼肌微损伤中的作用进行了讨论。
  • 脊柱结核植骨融合时间与术后血沉多样性的相关分析 免费阅读 下载全文
  • 背景与目的:临床实践中观察到脊柱结核患者行结核病灶清除、植骨、加或不加钢板内固定术后患者的血沉变化与植骨块骨性融合时间有一定的联系,分析脊柱结核患者术后血沉多样性和植骨融合时间的相关性。方法:检索Pubmed数据库和CNKI数据库1997—01/2007-12相关文章,以了解脊柱结核患者植骨块骨融合时间与血沉的关系。同时收集2007—01/2008—12右江民族医学院附属医院脊柱骨病外科收治的脊柱结核患者60例进行临床验证。患者男28例,女22例,年龄27—66岁,平均44岁,均行结核病灶清除、自体髂骨植骨、加或不加钢板内固定术,并经病理证实。患者术后1,7,14d晨间空腹血沉检查,按血沉平均值分4组:轻度增快、中度增快、高度增快组和极度增快组。术后12,16,24周行X射线或CT检查及复查血沉,记录植骨块骨性融合情况并记录融合时间,对4组脊柱结核患者术后血沉多样性和植骨块骨性融合时间进行差异性和相关性分析。结果:检索结果证明,血沉是非特异性指标,许多因素均可引起血沉升高。临床验证表明,脊柱结核患者轻度增快组16例,中度增快组20例,高度增快组13例,极度增快组11例;骨性愈合时问:≤12周8例,≤16周34例,≤24周18例。4组植骨块骨性融合时间差异性分析显示,x2=10.814,P=O.013,Spearman相关分析显示相关系数为r=0.414,P=0001。结论:术后血沉多样性与脊柱结核术后植骨块骨性融合时间呈正相关。
  • 慢性下腰痛患者腰部肌肉放电的均衡性 免费阅读 下载全文
  • 目的:观察慢性下腰痛患者腰部肌肉放电的均衡性。方法:实验于2007—05在沈阳体育学院重点实验室完成。以14名健康受试者和14名慢性下腰痛患者为观察对象,让其在静力性收缩的条件下观察腰部肌肉放电的情况。使用表面肌电技术测量受试者腰部3个节段(L1,L2,L5)两侧最长肌、髂腰肋肌、多裂肌的放电情况,令受试者躯干分别在40%最大随意收缩和80%最大随意收缩的情况做等长收缩30s,观察受试者腰部脊柱两侧肌肉的疲劳时的失衡情况。结果:慢性下腰痛患者腰部肌肉的最大随意收缩仅仅是对照组最大随意收缩的55%,与对照组相比慢性下腰痛患者腰部肌肉疲劳程度较低,可能与他们并没有产生真正的最大随意收缩有关:慢性下腰痛患者腰部两侧肌肉失衡程度较大。结论:下腰痛患者出现疼痛时,其腰部两侧的肌肉活动重新分布:同时表面肌电可能成为一种无创伤地检测肌肉失衡的有效工具。
  • 神经组织工程临床问答② 免费阅读 下载全文
  • 3如何鉴别臂丛神经根部损伤时的节前损伤与节后损伤? 臂丛神经根性损伤主要分两大类,一类为椎孔内的节前损伤;另一类为椎孔外的节后损伤。节后损伤可以观察保守治疗,而节前损伤是在椎管内前后根丝状结构处断裂,既没有自行愈合的能力也没有通过外科手术修复的可能,因此,一旦诊断确定,应争取及早进行神经移位术,故在临床上节前与节后损伤的鉴别诊断具有重要的意义。
  • 解放军第二军医大学附属长海医院烧伤科肖仕初博士 免费阅读 下载全文
  • 肖仕初,男,37岁,医学博士,解放军第二军医大学附属长海医院烧伤外科主治医师、讲师。1995年毕业于解放军第二军医大学,1998年获硕士学位,2001年获博士学位。一直从事皮肤组织工程与创面修复的研究,先后参与包括国家“973”计划、国家“863”计划等重大课题的研究工作。在有关组织工程皮肤的体外构建与移植及皮肤种子细胞的研究方面积累了丰富的经验。
  • 社长的话 免费阅读 下载全文
  • 神经导管研究的现状与问题 免费阅读 下载全文
  • 应用神经导管桥接修复周围神经缺损经历了上百年的探索,虽然取得了显著进展,但距离临床推广使用仍需时日。早期在临床上常用自体的血管、肌肉桥接神经缺损,引导神经轴突的再生。随后人们又尝试用人工合成的非降解和可降解材料制成神经导管,作为神经再生的临时通道,引导神经向远端生长。不过研究表明,对于较长距离的神经缺损,无论使用何种单一神经导管,
  • 同种异体骨移植治疗胫骨平台骨折22例 免费阅读 下载全文
  • 1998—02/2004—04吉林大学第一医院骨科采用骨折切开复位钢板内固定,同时应用深低温冷冻和Y射线照射处理的同种异体松质骨移植治疗胫骨平台骨折22例。所有患者移植后12-24个月,根据Rasmussen膝关节功能评分和移植后X射线摄片评价其修复效果。移植后随访Rasmussen膝关节功能评分优12例,良6例,可2例,差2例,优良率88.9%。仅1例患者出现感染,移植骨与宿主骨没有融合,其余患者未出现免疫排斥反应和感染,无骨质再吸收,未出现明显骨质疏松及移植骨周围硬化现象。提示经过深低温冷冻和Y射线照射处理保存的同种异体骨移植降低了免疫源性,避免了自体骨移植的弊端,可以作为胫骨平台骨折植骨的理想方法之一。
  • 大块同种异体骨移植重建骨肿瘤巨大骨缺损78例 免费阅读 下载全文
  • 回顾性分析1999—08/200701解放军广州军区广州总医院骨科收治的骨肿瘤切除后骨缺损患者78例,男47例,女31例,年龄7-56岁,平均21.5岁。其中骨巨细胞瘤34例,骨肉瘤12例,动脉瘤样骨囊肿11例,平滑肌肉瘤2例,腺泡状软组织细胞瘤1例,骨纤维结构不良18例。以Enneking外科分期标准为原则,对肿瘤进行切除。主要发病部为股骨上端,股骨干,股骨下端,胫骨上端,骨盆。重建方式以行大块骨移植63例,骨干移植10例,髂骨移植2例,人工关节一异体骨复合物移植3例。全部患者均获得随访,平均37.9个月。移植后结果以Mankin等所提出的评定标准为原则优36例,良29例,中4例,差9例。出现局部排斥反应18例,予反复抽吸积液及抗排斥反应治疗7-54d后症状消失,肿瘤复发7例,感染4例,骨不连5例,异体骨骨折1例,关节不稳定2例。大块异体骨与宿主骨在移植后1周就可在接合部出现明显的骨痂生成,在接合部和异体骨表面尽量布满细小的异体骨或自体骨可明显加强骨诱导。提示采用大块异体骨重建骨肿瘤术后大的缺损,临床效果起好,取得满意效果。
  • 双叶皮瓣修复鼻部皮肤缺损92例 免费阅读 下载全文
  • 目的:探讨双叶皮瓣修复鼻部皮肤组织缺损后创面即刻修复的过程及优点。方法:局部麻醉下取双叶皮瓣修补鼻部组织缺损,于缺损部位附近的正常皮肤处设计双叶皮瓣,皮瓣最大1.8cm×2.5cm,最小0.8cm×1.0cm。转移至修复缺损部位,切口距病变边缘:血管瘤为0.2cm,基底细胞癌0.5-0.7cm,黑色素瘤1.0cm,瘢痕沿其边缘即可,切除深度达浅筋膜层,创面彻底止血。结果:92例患者,修复后随访6个月50例,随访1年42例,病变组织切除后均完整修复,创面I期愈合,鼻外形轮廓较好,修复组织色泽、质地与周围皮肤匹配良好。结论:采用双叶皮瓣修复鼻部皮肤缺损的方法比较简单,且效果满意。
  • 同种异体肌腱移植重建跖腱膜32例 免费阅读 下载全文
  • 文章对承德医学院附属医院足底跖腱膜缺损的32例患者进行回顾性病例分析,所有患者应用同种异体肌腱重建跖腱膜,以期最大限度地恢复足的外观,保留足的功能。手术分2期进行:一期完成足底创面的覆盖和修复,根据患者足底损伤的情况,20例患者应用小腿内侧皮瓣修复足底创面,其余12例患者的撕脱皮瓣进行了原位缝合,在创面完全愈合后1个月,进行2期手术。2期手术根据跖腱膜的损伤情况,26例跖腱膜完全缺失的患者应用3条同种异体肌腱进行修复,其余6例跖腱膜部分缺损的患者应用2条同种异体肌腱进行了重建,修复的同时均应用钢丝进行了辅助固定。术后6周,患者扶拐F地行功能锻炼,术后6个月抽出钢丝。32例患者未出现排斥反应,创面均1期愈合。26例术后6个月复查,患者己部分负重行走,X射线甲片示足弓形状维持良好;1年后复查,患者已完全负重行走,X射线平片示足弓形状维持良好;2年后复查,患足功能良好,外形满意,X射线平片示足弓形状维持良好。可见,应用同种异体肌腱重建跖腱膜,不损坏正常的组织结构,不涉及到肌腱粘连的问题,可以维持足的基本形态结构,保留足的功能,是一种可行术式。
  • 人工血管移植治疗髂动脉瘤33例 免费阅读 下载全文
  • 回顾性分析1997—01/2007—06收治孤立性髂动脉瘤患者共33例,男19例,女14例,其中单侧髂动脉瘤29例,双侧4例。均在全身麻醉下行动脉瘤切除、人工血管移植血管重建。结果显示4例双侧病变中,主动脉双侧股动脉人工血管移植1例,主动脉-双侧髂总动脉人工血管移植3例;29例单侧病变中,主-髂总动脉人工血管移植1例,髂-股动脉人工血管移植3例,髂总-髂外动脉人工血管移植21例,髂总-髂外动脉转流4例。移植后3,6个月,1,3,5,8,10年行彩色多普勒和螺旋CT血管造影检查或DSA检查,平均随访5年。2例分别于移植后3年和6年死于急性脑梗死和心肌梗死,1例移植后2年死于交通事故,余健康存活,无复发,无吻合口狭窄或下肢缺血表现。提示动脉瘤切除人工血管移植是治疗孤立性髂动脉瘤的良好措施,仍然是目前医疗条件下有效治疗孤立性髂动脉瘤的主要手术方式。
  • 经皮骨膜下注射成骨细胞治疗骨折延迟愈合与骨不连26例 免费阅读 下载全文
  • 26例患者中骨折延迟愈合14例,骨不连12例,均行骨膜下及骨折间隙注射成骨细胞治疗。从患者自身髂后上棘抽取骨髓组织,经体外诱导、培养、扩增为成骨细胞,按无菌操作术在X射线定位下于骨折延迟愈合或骨不连病变部位骨膜下及骨折间隙注射浓度为1×10^5cells/mL的成骨细胞5~8mL,注射后4,6,10,14周定期摄X射线片观察病变部位骨痂生长情况。所有病例随访3-12个月,平均53个月。复查X射线片见4周有骨痂形成,6周骨痂包绕骨折断端,10周骨折线模糊,14周骨折线消失。所有患者骨折均愈合,平均愈合时间为12.1周。提示经皮骨膜下注射成骨细胞治疗骨折延迟愈合与骨不连是一种有效的修复方法。
  • CRTER杂志发稿要求、编辑目标及投稿作者群体 免费阅读 下载全文
  • 医学英文句型正误辨析 免费阅读 下载全文
  • 组织工程医学专业词汇中英文对照 免费阅读 下载全文
  • CRTER杂志“人体器官与组织工程”栏目近期组稿重点② 免费阅读 下载全文
  • CRTER杂志“人体器官与组织工程”栏目近期组稿重点 免费阅读 下载全文
  • CRTER发表文章被SOI引文库、CA、EM数据库收录的最新数据 免费阅读 下载全文
  • CRTER杂志“绿色特快通道”栏目申请发稿条件 免费阅读 下载全文
  • CRTER杂志“骨及软骨组织工程”栏目近期组稿重点 免费阅读 下载全文
  • SCI收录的NRR杂志近期出版方向 免费阅读 下载全文
  • SCI收录的《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志 免费阅读 下载全文
  • [研究与报告]
    转染血管紧张素Ⅰ骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复烫伤后的创面(柳晖 李新强 陈武鹏 向红霞 胡检 张显文)
    异种小肠黏膜下层浓度水平对跟腱断裂修复的影响(张建兵 陈百成 孙然 陈小珍)
    阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和护骨素/核因子KB受体活化因子配体mRNA表达的影响(朱芸 陈世荣 曾俊 彭李华)
    转基因骨髓间充质干细胞移植与组织工程皮肤的血管化(张向荣 刘德伍 郭光华 彭燕)
    新鲜自体与异体骨软骨移植修复免关节软骨缺损的比较(周程沛 曹安 方春抒 王兴勤 文艳华 李军)
    软骨形态发生蛋白1诱导仔鼠脂肪干细胞裸鼠体内软骨的分化(杨亚军 高俊 马锋 沈军 岳建民 冯西林 王立峰)
    环孢素A影响脱钙骨基质诱导成骨的组织学观察(袁亮 李靖年 张彦)
    真皮多能干细胞复合血浆构建真皮再生模版及移植观察(柯昌能 唐世杰 易先锋 朱镇森)
    淫羊藿提取物对体外软骨器官生长的促进作用(冯坤 谢文 陈宝龙 凌春莹)
    [技术与方法]
    人胆汁双向凝胶电泳分离技术的建立与优化
    人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因慢病毒表达载体的构建(梁旭竞 陈小佳 金玲 李丽玲 汤绍辉 陈友鹏 杨冬华)
    真核表达载体pcDNA3-CTLA41g的构建及体内表达(赵国华 许国岩)
    构建胶质原纤维酸性蛋白原核表达载体及蛋白表达鉴定(曹鹏 吕立权 王爽 胡国汉 齐向前 陈怀瑞 骆纯 侯立军 于明琨 卢亦成)
    MAPK信号转导通路中ERK、JNK和P38在大鼠肝脏缺血再灌注和缺血后处理中表达的变化(周正 朱云祥 李强 叶启发 牛英)
    局部注射肾上腺素对大鼠跨区皮瓣的延迟作用(王晖 罗成群 陈容容)
    高脂饲料喂养与动脉内膜球囊损伤结合建立兔腹主动脉粥样硬化模型(冯斌 杨庭树 张华巍)
    氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖及周期素D1的表达(涂永生 王红艳)
    人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白受体1表达与氟伐他汀的影响(张小炼 姜德谦 张社兵)
    三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响(秦建辉 朱陵群 崔巍 扬博华)
    2型糖尿病大鼠骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核心结合因子α1mRNA表达与骨折的愈合(刘振东 高敏伟 钟杰林 张朝跃 陶建春)
    分子伴侣辅因子热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白真核表达载体pDsRed2-N1(+)/CHIP构建及在COS-7细胞中的表达(刘越存 张玉虎 王丽娟 王丽敏 王艳艳)
    去卵巢后大鼠骨组织中核因子kB受体活化因子配体和骨保护素表达的变化(高延征 高坤 沈彬 张晖 裴福兴)
    转化生长因子β1在大鼠房水中的药物浓度(王恒 陆晓和 周瑾 袁伟 宫玉波)
    转化生长因子β1质粒对静脉移植的影响(张捍军 李卫 杨琪)
    胰岛素样生长因子1在糖尿病骨折大鼠骨痂组织中对成骨细胞增殖和骨钙素表达的影响(李溪 向盈盈 龚跃昆 刘劲松)
    重组人促红细胞生成素联合高压氧对移植大鼠背部逆行超长缺血皮瓣存活率的影响(李明 贾堂宏 龚维明 杜红霞 刘淑恒 郭舒亚 张庆国 陶世强)
    免抗凋亡诱导因子多克隆抗体的制备、纯化与鉴定(戴启宇 石瑛 宋蓓)
    大鼠Akt1基因真核表达载体构建及其在293细胞中的表达(张睿 宋纯 王辉)
    [本刊特稿]
    2009年3月6日《Cell》杂志发表一种新的iPS技术路线
    学科新闻:2009年3月1日《Nature》公布iPS最新技术
    学科新闻:骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的平衡调控机制研究
    神经组织工程临床问答①(范存义)
    让昨天告诉今天:神经组织工程研究的学术与技术进展
    [综述与专论]
    离心运动重复效应及肌肉生物力学适应论(王雷 汪黎明 刘向辉)
    纤维环细胞的培养技术及生长因子调控(林旺 王万明)
    软骨组织工程研究中的刺激因子(刘耀升 刘蜀彬 李鼎锋)
    小腿中下1/3骨及皮肤软组织缺损的组织皮瓣移植(方翔星 林松庆)
    运动性骨骼肌微损伤与细胞骨架(赵世飞)
    [学术探讨]
    脊柱结核植骨融合时间与术后血沉多样性的相关分析(蓝常贡 唐毓金 陆敏安 韦玮 谢克恭 潘生才 卢贤哲)
    [调查分析]
    慢性下腰痛患者腰部肌肉放电的均衡性(杨继强 侯义伟 张日辉)

    神经组织工程临床问答②(范存义)
    解放军第二军医大学附属长海医院烧伤科肖仕初博士
    社长的话
    神经导管研究的现状与问题
    [病例报告]
    同种异体骨移植治疗胫骨平台骨折22例(冯卫 付莉 刘建国 齐欣 李叔强 杨晨)
    大块同种异体骨移植重建骨肿瘤巨大骨缺损78例(郑小飞 黄华扬 丁焕文 张余 尹庆水)
    双叶皮瓣修复鼻部皮肤缺损92例(梁杰 李响)
    同种异体肌腱移植重建跖腱膜32例(王培 闫洪伟 李哲 赵淑清)
    人工血管移植治疗髂动脉瘤33例(王春喜 胡海地 宋清彬 段志泉 陈刚 梁发启)
    经皮骨膜下注射成骨细胞治疗骨折延迟愈合与骨不连26例(江正康 周炳华 陈飞强 陶卫明 吴瑞岳 崔彩)
    [信息导读]
    CRTER杂志发稿要求、编辑目标及投稿作者群体
    医学英文句型正误辨析
    组织工程医学专业词汇中英文对照
    CRTER杂志“人体器官与组织工程”栏目近期组稿重点②
    CRTER杂志“人体器官与组织工程”栏目近期组稿重点
    CRTER发表文章被SOI引文库、CA、EM数据库收录的最新数据
    CRTER杂志“绿色特快通道”栏目申请发稿条件
    CRTER杂志“骨及软骨组织工程”栏目近期组稿重点
    SCI收录的NRR杂志近期出版方向
    SCI收录的《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志
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