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  • 抗坏血酸诱导新生鼠神经干细胞向多巴胺能神经元的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:针对帕金森病进行细胞移植治疗的研究进程中,除寻求合适的细胞系外,如何将各种有分化潜能的细胞诱导为含量丰富、有功能的多巴胺能神经元尤为关键。目的:观察不同浓度抗坏血酸对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-01/12在广西医科大学科学实验中心完成。材料:清洁级新生24h内SD大鼠30只,由广西医科大学实验动物中心提供。抗坏血酸为Sigma产品。方法:取新生鼠脑组织,组织块胰蛋白酶消化法体外分离培养神经干细胞,传至第2代以5×10^8L^-1密度接种。设立4组:空白对照组不给予抗坏血酸,仅加入含体积分数为10%的胎牛血清、2%B27的DMEM/F12培养基:剩余3组在此基础上分别加入50,100,200μmol/L抗坏血酸进行诱导,10d后终止诱导。主要观察指标:RT-PCR检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶基因mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞,检测神经干细胞向多巴胺能神经元分化率。 结果:各浓度抗坏血酸诱导组均得到795bp的扩增片断,即均表达酪氨酸羟化酶mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较,50,100,200μmol/L抗坏血酸诱导组酪氨酸羟化酶阳性细胞率均明显升高(P〈0.05);且100,200μmol/L抗坏血酸诱导组升高幅度明显高于50μmol/L(P〈0.05),100,200μmol/L抗坏血酸诱导组间比较无明显差异(P〉0.05)。结论:从新生鼠脑组织分离出的神经干细胞在体外具有自我更新、多向分化潜能及表达巢蛋白的能力。50~200μmol/L抗坏血酸均能促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化,抗坏血酸浓度从100μmol/L增加至200μmol/L时酪氨酸羟化酶阳性细胞率无明显变化。
  • 骨髓间充质干细胞与丹酚酸B预处理内皮祖细胞共移植对急性心肌梗死大鼠心功能及分化基因表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:由于心肌细胞自身增殖能力有限,急性心肌梗死后细胞移植是目前流行的再生心肌方法。骨髓间充质干细胞的存活受心肌微环境的影响,而内皮祖细胞参与血管新生,可为骨髓间充质干细胞提供微环境。 目的:探讨骨髓间充质干细胞联合中药丹酚酸B预处理的内皮祖细胞共移植后,对急性心肌梗死大鼠心功能改善及骨髓间充质干细胞分化早期基因表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/2008-03在天津中医药大学完成。 材料:清洁级雄性Wistar大鼠45只,由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心提供。丹酚酸B为天津天士力现代中药资源有限公司产品,批号20060601。方法:分别取2只和1只大鼠,采用密度梯度离心法+贴壁筛选法分离培养纯化内皮祖细胞、骨髓间充质干细胞。剩余42只大鼠随机分为4组:假手术组9只、模型组11只、骨髓间充质干细胞组12只、共移植组10只。假手术组只开胸穿线,不结扎左冠状动脉;其余3组结扎左冠状动脉建立心肌梗死模型。结扎冠状动脉15min后再次开胸,共移植组吸取骨髓间充质干细胞悬液250uL(浓度1×10^10L^-1)+8mg/L丹酚酸B预处理的内皮祖细胞悬液250μL(浓度1×10^8L^-1),于结扎区附近心肌组织分5点注射;骨髓间充质干细胞组同法注射单纯骨髓间充质干细胞悬液500μL,模型组注射等量细胞培养液。主要观察指标:采用超声心动仪测定左室功能,Real-timePCR检测心肌分化基因Nkx25,GATA-4的表达。结果:细胞移植4周后与模型组比较,骨髓间充质干细胞组左室结构有改善趋势,但差异无显著性意义(P〉0.05);共移植组左室舒张末期内径、左室收缩末期内径、舒张末期室间隔厚度、收缩末期室间隔厚度均明显改善(P〈005),心室收缩功能指标射血分数、心输出量均明显改善(P〈0.05)。细胞移植4周后与模型组比较,骨髓间充质干细胞组、共移植组Nkx2.5及GATA.4mRNA表达均明显增加,且共移植组Nkx2.5mRNA增加幅度明显大于骨髓间充质干细胞组(P〈0.05)。结论:骨髓间充质干细胞联合丹酚酸B预处理的内皮祖细胞共移植方式,可上调骨髓间充质干细胞向心肌分化过程中Nkx2.5,GATA-4基因的表达,改善急性心肌梗死大鼠心室结构,增强心功能。
  • 超声辐射微泡增效骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死 免费阅读 下载全文
  • 背景:超声辐射微泡已被大量应用于临床心肌微循环诊断,其安全性已得到证实。研究显示超声靶向破坏微泡可以使骨骼肌毛细血管破坏和局部红细胞渗出,可以促进细胞穿过内皮生理屏障。 目的:探讨超声辐射微泡是否可以增加骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的效果。 设计、时间及地点:随机对照动物观察,于2006—10/2008—05在东南大学医学院完成。 材料:2月龄中国家猪20只,随机分为超声微泡组12只,细胞对照组8只。超声微泡对比剂SonoVue,国药准字J20030117,为上海博莱信谊药业有限责任公司产品。 方法:无菌条件下抽取猪骨髓液,密度梯度离心法分离纯化骨髓间充质干细胞。两组动物均建立急性心肌梗死模型,造模后14d,超声微泡组通过OTW球囊导管先把2.4mL超声微泡对比剂SonoVue经冠状动脉注入左前降支中段,同时在体表给予1MHz,2W/cm。超声辐射心肌梗死区,连续辐射90s后,再注入超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞5×10^6个;细胞对照组同法仅单纯输注骨髓间充质干细胞。主要观察指标:采用64层螺旋CT检查心功能变化,光镜观察心肌组织学检测结果,电镜观察血管内皮细胞超微结构。结果:与移植前1d比较,移植后6周两组左心室射血分数均明显增加,且超声微泡组增加幅度高于细胞对照组(P〈0.01)。与细胞对照组比较,超声微泡组普鲁士蓝阳性细胞数明显增多(P〈0.01),且多数分布于心肌梗死周边区,有2例标本可见普鲁士蓝阳性细胞分化为新生血管内皮细胞;梗死周边区毛细血管密度明显升高(P〈0.05)。两组心肌血管内皮细胞超微结构无差异,但移植后0h超声微泡组可见血管内皮间隙增宽。结论:超声辐射微泡可促进梗死心肌内猪自体骨髓间充质干细胞的移植,促进心肌血管新生,从而改善因心肌梗死而受损的心功能。
  • 嗅鞘细胞移植联合督脉电针对脊髓损伤大鼠脊髓诱发电位的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:对于嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的疗效目前尚无共识,或许单一细胞移植可能并不是修复脊髓损伤的最佳选择。如何选择适当的干预手段予以联合应用,并使之实现从实验室走向临床应用是细胞移植策略中的重点问题。目的:探讨大鼠嗅鞘细胞移植与督脉电针联合应用修复大鼠脊髓损伤的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007—08/2008—08在清华大学二附院脑神经病研究所实验室完成。材料:成年雄性Wistar大鼠70只,取10只用于制备嗅鞘细胞,剩余60只随机分为4组:模型对照组、嗅鞘细胞移植组、督脉电针组、联合组,15只/组。方法:各组大鼠均建立脊髓全横断模型。造模后暴露脊髓,嗅鞘细胞移植组、联合组向填入脊髓横断处的明胶海绵内缓慢注射唉鞘细胞悬液10μL;模型对照组、督脉电针组同法注射等量DMEM-F12培养液。从造摸成功后第2天开始,替脉电针组、联合组动物接受1次/d的督脉电针治疗,选大椎穴(DU14)、命门穴(DU4)进行针刺,针刺深度5mm,大椎穴接正极,命门穴接负极,电针15min,电针频率20Hz,持续脉冲电流12-15mV,连续7d为1个疗程,疗程间隔2d。主要观察指标:造模后BBB运动功能评分的变化,脊髓诱发电位检测结果。结果:各组动物均成活10周。与模型对照组比较,造模后4-10周嗅鞘细胞移植纽、督脉电针纽,联合组BBB运动功能评分均明显升高(P〈0.05),且联合组升高幅度明显高于嗅鞘细胞移植组、督脉电针组(P〈0.05)。与模型对照组比较,造模后4。10周嗅鞘细胞移植组、督脉电针组、联合组波幅电压明显升高(P〈0.05或P〈0.01),反应潜伏期均明显降低(P〈0.05或P〈0.01),且联合组差异变化尤为显著。嗅鞘细胞移植组与督脉电针组各指标之间比较无明显差异(P〉0.05)。结论:嗅鞘细胞移植和督脉电针联合应用可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生,改善其肢体运动功能。
  • 大鼠肌源性干细胞移植对失神经腓肠肌萎缩进程的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前,国内外有关肌源性于细胞移植的研究主要集中在治疗肌营养不良性萎缩症方面,尚未见涉及将肌源性干细胞应用于失神经肌萎缩综合治疗的报道。目的:探讨大鼠肌源性干细胞移植对失神经腓肠肌萎缩进程的影响。设计、时间及地点:随机对照动物观察,于200702/200807在沈阳医学院完成。 材料:成年健康雄性Wister大鼠19只,由沈阳医学院实验动物中心提供。 方法:取3只大鼠,无菌条件下切取肱三头肌,体外分离培养肌源性干细胞,贴壁法纯化扩增。余16只大鼠均切断右后肢胫神经,建立失神经腓肠肌模型,分为2组:细胞移植组于已切断的胫神经支配的腓肠肌的内外侧注射经DAPI标记的肌源性干细胞悬液0.2mL,模型对照组于相同位置注射等量生理盐水,培养4周。主要观察指标:采用计算机生物信号采集处理系统测定反映肌张力的腓肠肌闽强度恢复率和最适强度恢复率变化,通过电子天平计算肌湿质量残存率,应用图像分析系统测定肌纤维横截面积残存率。 结果:与模型对照组比较,细胞移植组失神经腓肠肌的阂强度恢复率、最适强度恢复率均明显降低(P〈0.01,P〈0.05),肌湿质量残存率、肌纤维横截面积残存率均明显升高(P〈0.01)。 结论:肌源性干细胞移植对大鼠失神经肌萎缩进程有较明显的延缓作用。
  • 不同培养基和不同体积分数小牛血清对许旺细胞生长状态的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:许旺细胞目前正越来越多地被运用于神经修复、构建载体细胞等,但如何高效快速地培养扶取大量许旺细胞尤为关键。传统方法存在细胞培养周期长、污染率高、生长状况不稳定等不足。 目的:观察比较不同培养基和培养基中不同体积分数血清对许旺细胞的生长、增殖能力的影响。 设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008—01/07在昆明医学院神经科学研究所完成。材料:SPF级新生一两天龄ICR小鼠30只,由昆明医学院动物科提供。DMEM/F12培养液、RPMJ1640培养液、L-DMEM培养液为Gibco公司产品,小牛血清为Hyclone公司产品。 方法:取ICR新生小鼠,无菌条件下取出坐骨神经,组织块消化法体外分离培养许旺细胞,设立4组:DMEM/F12培养液组、RPMI1640培养液组、L-DMEM培养液组、生理盐水组。每组又分为4个亚组:不含血清、含体积分数为10%,15%,20%小牛血清。各组细胞接种后进行传代培养。使用差速贴壁和阿糖胞苷处理的综合法对许旺细胞进行纯化。 主要观察指标:传代培养后1,3,5,7,9,11,13d,相差显微镜下观察细胞形态及生长情况,免疫细胞化学染包检测细胞纯度。MTT法绘制细胞生长曲线。结果:①不含血清时,各组许旺细胞生长状态均较差:添加血清后各组许旺细胞消化传代后6h即大量贴壁,48h后出现聚合增殖现象。②含血清的DMEM/F12培养液组、RPMI1640培养液组、L—DMEM培养液组许旺细胞能较好地生长,纯度均达到90%以上,且DMEM/F12培养液组在细胞纯度、细胞总数方面均略优于RPMI1640培养液组及L—DMEM培养液组;生理盐水组许旺细胞生长欠佳,纯度也不甚理想。③与生理盐水组比较,DMEM/F12、RPM/1640及L—DMEM培养液组MTT吸光度值均显著升高(F=92.814,P〈0.05),但此3种基础培养基之间比较无明显差异(F=0.909,P〉0.05)。培养1,3,5,7,9,11,13d,DMEM/F12、RPM11640及L.DMEM培养液组在含不同体积分数小牛血清的条件下MTT吸光度值均存在明显差异(F=50.850,P〈0.05),体积分数为15%时许旺细胞数量最多,且纯度也相列最高。 结论:血清体积分数的变化是许旺细胞培养过程中是主要因素,含体积分数为15%小牛血清血清的DMEM/F12培养液培养许旺细胞效率最高。
  • 五味子酮对APP转基因鼠神经干细胞分化中Tau蛋白过磷酸化水平的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:华中五味子酮有强的抗氧化活性,可高效清除羟自由基和超氧阴离子,对处于活性氧应激状态下的细胞具有保护作用。神经元内神经原纤维缠结主要是由异常磷酸化的Tau蛋白组成,与阿尔茨海默病的严重程度呈正相关。 目的:探讨五味子酮在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化成神经细胞的过程中对Tau蛋白磷酸化的作用。 设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-07/2008—10在郑州大学医学实验中心完成。 材料:自中国协和医科大学遗传动物中心购得APP基因突变小鼠30只,五味子酮由河南省中医研究院药物所提供。方法:剪取新生APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,采用PCR法检测动物是否携带有APP基因。APP转基因阳性鼠记为“APP+”,APP转基因阴性鼠记为“APP+”。分别取APP+鼠和APP+鼠海马部位脑组织,体外分离培养神经干细胞,并将纯化的神经于细胞向神经细胞方向诱导分化。将从APP+鼠来源的细胞分为五味子酮组、APP+细胞对照组,将APP-鼠来源的细胞设为APP-细胞对照组。五昧子酮组向细胞培养液中加入终浓度为50umol/L的五咪子酮溶液,余2组加入相同容积的PBS,培养24h。主要观察指标:免疫荧光化学和免疫印迹分析测定APP+、APP-细胞Tau蛋白在262、396位点的磷酸化水平。结果:与APP+细胞对照组比较,五味子酮组细胞荧光强度减轻,Tau[Ps262]、Tau[Ps396]的磷酸化水平均降低,且Tau[Ps396]位点的磷酸化水平降低尤为明显。APP+细胞对照组Tau[Ps262]、Tau[Ps396]磷酸化水平均较低。结论:在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化过程中,五味子酮可以明显降低Tau蛋白在396、262位点的磷酸化水平,减轻神经元损伤,但其磷酸化程度并未达到阴性细胞水平。
  • 黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化早期胞内钙调蛋白mRNA的转录水平 免费阅读 下载全文
  • 背景:黄芪可促进骨髓间充质干细胞向神经元方向分化,但对于诱导机制的报道较少,目前普遍认为诱导作用可能与其具有抗氧化功能有关。 目的:观察黄芪注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化早期进程中细胞内钙调蛋白mRNA转录水平的变化。 设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-10/12在河北北方学院实验中心完成。 材料:清洁级6周龄雄性大鼠1只,购自中国医科院实验动物中心。黄芪注射液为大理药业有限公司产品,批号060105。方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代按4×10^5L^-1密度接种于12孔板,加入含200g/L黄芪注射液、体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养基进行诱导分化,制备的细胞爬片行免疫细胞化学染色。传至第5代细胞平均分配到4个离心管内,1管为对照组,另外3管加入上述诱导培养基分别作用30,60,120min,消化获取的细胞采用RT-PCR技术检测钙调蛋白mRNA的转录水平。 主要观察指标:黄芪对骨髓间充质干细胞的诱导作用,诱导后钙调蛋白mRNA的转录水平。结果:黄芪诱导5h后,可见少量细胞形态发生改变,胞体变圆,自胞体伸出细长突起,免疫细胞化学染色后可见巢蛋白阳性细胞和神经元特异性烯醇化酶阳性细胞,少量细胞呈微管相关蛋白2阳性,而神经胶质纤维酸性蛋白呈弱阳性。RT-PCR实验显示,在黄苠诱导骨髓间充质干细胞分化的早期,钙调蛋白基因进行了转录,随着诱导时间的延长,钙调蛋白mRNA的相对含量逐渐增加,诱导30,60,120min组与对照组钙调蛋白mRNA的相对含量比较差异有显著性意义(F=153.315,P=0.000)。结论:黄芪诱导骨髓间充质干细胞向神经元方向分化初期细胞内钙调蛋白转录水平上调,提示其诱导作用可能与钙调蛋白介导的信号转导途径有关。
  • 菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外标记兔骨髓基质细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:为明确细胞移植后症状改善是否由移植所致,既往多采用侵袭性方法,但是这种方法不适用于动态追踪及人体研究。如果能够在合适示踪剂的帮助下,采用无创伤性影像学技术在活体识别、跟踪移植后细胞的存活状态,将显著提高细胞移植疗法的学术价值。 目的:初步探讨菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外磁性标记兔骨髓基质细胞的可行性。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03108在珠江医院神经外科实验室完成。材料:2月龄新西兰大白兔8只,由广州中医药大学实验动物中心提供。菲立磁为Advanced Magnetic公司产品,多聚赖氨酸为sigma公司产品。方法:无菌条件下穿刺抽取兔股骨骨髓,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞,收集第2代细胞,加入含白血病抑制因子、碱性成纤维细胞生长因子及胎牛血清的神经干细胞培养基诱导5d。将50mg/L菲立磁和1.5mg/L多聚赖氨酸混合,振荡30min后,将复合物加入到细胞培养基中进行标记,孵育细胞24h。主要观察指标:骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化情况,细胞内铁的鉴定,菲立磁多聚赖氨酸复合物标记对细胞增殖或分化的影响。 结果:骨髓基质细胞诱导后可见少量细胞的胞体变圆变大,突起缩短,随时间延长,圆形细胞逐渐增多,部分聚集成簇、成球,FITC荧光染色示巢蛋白呈阳性表达。普鲁士蓝染色结果显示99%以上骨髓基质细胞的胞质内出现细4、的蓝色铁颗粒。在含菲立磁-多聚赖氨酸复合物的培养基中,骨髓基质细胞可继续增殖和分化,但增殖分裂后细胞质内铁颗粒数量较增殖前有所减少,经鉴定部分为神经元特异性烯醇化酶阳性细胞。 结论:菲立磁-多聚赖氨酸复合物可在体外高效标记骨髓基质细胞,且标记后细胞的活性、增殖和分化能力不受影响。
  • 利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前人胚胎干细胞建系的技术路线主要有囊胚法、核移植法和胚胎单卵裂球法,但由于破坏胚胎,涉及诸多伦理问题。目的:探讨利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系的可行性。设计、时间及地点:细胞学体内外实验,于200501/200608在沈阳市妇婴医院生殖中心完成。材料:妊娠13.5d的ICR鼠20只用于制各小鼠胚胎成纤维细胞饲养层,10周龄SICD鼠2只用于人胚胎干细胞体内分化实验。行IVF/ICSI助孕患者自愿捐献的冷冻胚胎,由沈阳市妇婴医院生殖中心提供。方法:复苏冷冻的胚胎,采用序贯培养法进行囊胚培养,用免疫外科方法去除滋养细胞,将得到的胚胎内细胞团接种于丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎成纤维细胞上培养并传代。主要观察指标:取不同代次的培养细胞,分别进行生长特性、碱性磷酸酶染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1、肿瘤排斥抗原TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内分化全能性鉴定。结果:20个解冻卵裂期胚胎,获得9个囊胚,分离完整的内细胞团共7个,从7个内细胞团培养出2个人胚胎干细咆系,其中一个细胞系连续培养76代(20个月)。所培养的细胞具有人胚胎干细胞的共同生物学特性,即细胞呈扁平或圆形,可见1—3个核仁:碱性磷酸酶以及SSEA.3,SSEA.4,TRA-1.81,TRA-1-60,OCT-4均呈阳性表达,而SSEA-1呈阴性:核型正常,为46,XX核型;将细胞注射入SCID鼠皮下形成肿瘤,病理切片显示为成熟畸胎瘤:短串联重复分型结果显示所形成的畸胎瘤与人胚胎干细胞为相同的遗传背景。结论:实施体外受精-胚胎移植的夫妇怀孕后,多余的冷冻保存胚胎所分离培养的细胞具备人胚胎干细胞的所有特性,是建立人胚胎干细胞系很好的材料来源。
  • 组织多普勒超声心动图评价心肌病兔骨髓基质细胞移植后的心肌功能 免费阅读 下载全文
  • 背景:组织多普勒超声心动图被证明可以用来评价心脏的整体和局部功能,但用于评价骨髓基质细胞移植对阿霉素所致兔心肌病的连续观察研究较少。 目的:利用组织多普勒超声心动图评价骨髓基质细胞直接注射治疗阿霉素所致心肌病心肌功能的变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2002-09/2003—12在华中科技大学同济医学院附属协和医院超声科实验室完成。 材料:雄性成年日本大耳白兔28只,体质量(2.0±0.2)kg,利用阿霉素诱导其中20只制备扩张型心肌病模型。 方法:造模成功后,20只白兔分为细胞移植组和PBS组,每组10只。8只生理盐水处理组作为假手术组。细胞移植组于实验开始第8周每只兔分别取其骨髓进行骨髓基质细胞培养。第12周进行细胞荧光标记后,于心外膜直接注射回各自兔的左室侧壁心肌处。PBS组于第12周注射相同剂量的PBS培养液作为对照。另外8只作为假手术组仅开胸,每次给予相同剂量生理盐水。主要观察指标:细胞移植前及移植后4周利用常规和组织多普勒超声心动图评价左室整体和局部功能:组织学和荧光检测观察心肌细胞形态变化。结果:①细胞移植组组织多普勒发现局部注射区组织速度增高,由(4.0±1.1)cm/s到(5.3±1.2)cm/s(P〈0.05),而整体功能未见明显改善。PBS组及假手术组整体和局部心肌功能均未见改善。②细胞移植后4周存活的细胞仍可见DAPI荧光标记。组织学检查发现注射区附近心肌损伤减轻,凋亡较少。结论:骨髓基质细胞治疗扩张型心肌病可以改善局部心肌功能,组织多普勒可以检测出局部心肌功能的改善,为细胞移植提供了一种有效的评价手段。
  • 三七总皂甙通过细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向神经样细胞的增殖与分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:三七总皂甙对骨髓基质细胞向神经样细胞分化的效应及相关信号通路目前尚不明确。目的:探讨细胞外信号调节蛋白激酶1,2信号通路对三七总皂甙调节大鼠骨髓基质细胞向神经细胞增殖、分化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-05/10在汕头大学医学院分子生物学实验室完成。材料:4-6周龄雄性SD大鼠9只,由汕头大学医学院实验动物中心提供。三七总皂甙为,一两梧州制药集团股份有限公司产品,细胞外信号调节蛋白激酶的抑制剂PD98059为CellSignalingTech公司产品。方法:全骨髓法体外分离纯化大鼠骨麓基质细胞,取传至第3代细胞进行诱导分化,设立3组:单纯诱导组向培养液中加入10ug/L碱性成纤维细胞生长因子,预诱导24h后全量换为正式诱导液(含10P-g/L碱性成纤维细胞生长因子、2%DMSO、200μmol/L丁羟回醚的α-MEM培养基),每24h半量换诱导液1次;三七总皂甙组向预诱导液和正式诱导液内加入终浓度100mg/L三七总皂甙;PD98059组在三七总皂甙组培养液基础上加入10μmol/LPD98059。主要观察指标:细胞形态学观察,MTT法检测细胞增殖情况,免疫组织化学方法鉴定细胞Nestin的表达。 结果:诱导6h后,少数细胞呈锥形,细胞突起增多伸长,类似神经元,继续诱导培养后细胞突起增多,突起相互连接成网状。与单纯诱导组、PD98059组比较,诱导6,12,24h三七总皂甙组细胞均明显增殖(P〈005),且随诱导时间延长呈递增趋势(P〈0.05):单纯诱导组、PD98059组间比较无明显差异(P〉0.05)。与单纯诱导组比较,诱导24h后三七总皂甙组Nestin阳性率明显升高(P〈0.05),PD98059组Nestin阳性率明显降低(P〈0.05)。 结论:三七总皂甙可以促进骨髓基质细胞的神经分化和分化后增殖,细胞外信号调节蛋白激酶1/2的特异性抑制剂PD98059能够拈抗三七总皂甙促增殖分化作用,提示细胞外信号调节蛋白激酶1,2信号通路是三七总皂甙促进骨髓基质细胞向神经细胞分化和增殖的重要环节。
  • 瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:瘦素及其受体存中枢和外周多个部位均有表达,具有多种生物学功能,对于骨代谢有着重要的影响作用,但目前瘦素影响骨重建的机制尚未完全明了。目的:探讨瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008—03/2008—09在山西医科大学生化与分子生物学实验室完成。 材料:健康志愿者髂骨骨髓由山西医科大学第二医院提供。瘦素为Sigma公司产品。方法:采用全骨髓法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第3代以1×10^8L^-1密度接种至预置盖玻片的6孔培养板中,设立3组:成骨诱导组添加原代培养液后,再加入含10^-8mol/L地塞米松、10mmol/L β-磷酸甘油、50mg/L维生索C的成骨诱导培养基;成骨+瘦素诱导组添加成骨诱导培养基后,再加入50nmol/L瘦素;空白对照组仅加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液。主要观察指标:骨髓间充质干细胞表面标志表达、钙化结节染色结果、碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原及骨钙素含量、骨保护素和RANKL蛋白的表达。 结果:第3代骨髓间充质干细胞CD44和CD71阳性率分别为95.21%,72.31%,CD34阳性率仅为0.39%。成骨诱导21d后vonKossa染色可见呈棕黑色的细胞外基质钙盐沉积。诱导14d与空白对照组比较,成骨诱导组、成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性及Ⅰ型胶原、骨钙素含量均明显升高(P〈0.05);且成骨+瘦素诱导组各指标升高幅度明显高于成骨诱导组(P〈0.05)。与成骨诱导组比较,成骨+瘦素诱导组骨髓间充质干细胞骨保护素蛋白的表达明显上调(P〈0.05),RANKL蛋白的表达明显下调(P〈0.05)。 结论:瘦素作用于人骨髓间充质干细胞后可促使其向成骨细胞分化,可能通过骨保护素/RANKL途径发挥对骨代谢的调节作用。
  • 新生大鼠许旺细胞体外培养纯化的最佳培养条件 免费阅读 下载全文
  • 背景:许旺细胞对促进外周神经的生长、发育和修复有重要作用,目前对于许旺细胞体外培养方法的优劣情况报道不一。目的:筛选许旺细胞最佳体外培养条件。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/10在武汉大学人民医院中心实验室完成。材料:三四天龄SD大鼠24只,由武汉大学医学部实验动物中心提供。方法:无菌剥离大鼠双侧坐骨神经,应用低浓度酶快速消化法、差速贴壁法分离培养纯化许旺细胞。取处于指数生长期的细胞,调整密度为1×10^7L^-4接种到6孔培养板,然后分组实验。设定4个条件:培养基pH(6.8-8.8)、胎牛血清体积分数(2%-20%)、培养箱温度(34-39℃)、培养箱CO2浓度(3%-8%)。首先固定胎牛血清体积分数、培养箱温度和培养箱CO2浓度,改变培养基pH对细胞进行培养,从而确定最适培养基pH。然后依次改变胎牛血清体积分数、培养箱温度以及培养箱CO2浓度,进而得到其他3个指标的最佳值。镜下观察见明显克隆形成时终止培养,以含5个以上细胞的细胞团作为1个克隆,在倒置显微镜下进行克隆计数。 主要观察指标:通过许旺细胞长势及克隆形成情况,筛选许旺细胞体外培养扩增的最适pH、胎牛血清体积分数、培养温度和培养箱C02浓度。结果:在以DMEM/F12(1:1)为基础培养基的情况下,培养基pH为7.0-7.2时克隆形成最多,〈7.0或〉7.2时克隆形成明显下降:胎牛血清体积分数为10%许旺细胞长势较好且克隆数明显增加,当血清浓度过高或过低时克隆形成相对较差:34-36℃细胞生长受到明显抑制,克隆形成较少,37℃时克隆形成最多,〉37℃细胞长势开始变差,克隆形成下降,至39℃时细胞已无法贴壁;培养箱CO2浓度为3%~8%时许旺细胞克隆形成无明显变化。结论:许旺细胞体外培养的最佳条件为pH7.2的DMEM/F12(1:1)细胞培养基、胎牛血清体积分数10%、培养箱温度37℃、培养箱CO2浓度5%。
  • 胚胎干细胞梗死区中心和周边移植治疗急性心肌梗死 免费阅读 下载全文
  • 背景:现有治疗手段不足以补充梗死心肌,研究表明干细胞移植有可能促使心肌和血管再生.改善心功能和预后。目的:观察急性心肌梗死区中心和周边移植胚胎干细胞后心肌组织形态学及血液动力学的变化。 设计、时间及地点:随机对照动物观察,于2007—03/2008—10在中南大学湘雅医学院人体解剖学与神经生物学系神经生物学实验室完成。 材料:SPF级Wistar大鼠40只,随机分为4组:正常对照组、梗死模型组、中心移植组、周边移植组,10只,组。胚胎干细胞-D3株fembryonicstemcells-D3,ES—D3)、布法罗大鼠肝细胞均由中国科学院上海细胞所提供。方法:ES-D3细胞复苏后,以(2.0~5.0)×10^7一种植于培养瓶中,加入含布法罗大鼠肝细胞的条件培养基体外培养分化。除正常对照组外,余3组结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型。造模后1周接受细胞移植,ES-D3细胞于移植前1d进行BrdU标记,以胚胎干细胞培养基调整密度至1×10^7L^-1。中心移植组在梗死区选3个点,每点注入10μL细胞悬液(含10^4个细胞)至心室壁内:周边移植组在梗死区周边选3个点同法注入等量细胞悬液。 主要观察指标:免疫组化及血流动力学指标检测结果。结果:布法罗大鼠肝细胞条件培养基体外培养的ES-D3细胞,呈相对规则的巢状集落样生长,分化8d即可见部分拟胚体出现自发的节律性收缩活动,心肌肌钙蛋白T免疫染色呈阳性,电镜下可见肌管、肌纤维等肌性结构,证实己分化为心肌细胞。周边移植组BrdU免疫荧光染色呈阳性。而中心移植组呈阴性,进一步对BrdU免疫荧光染色阳性细胞行双抗染色,可见心肌肌钙蛋白T呈阳性表达。移植后4周与正常对照组比较,梗死模型组左室收缩、dp/dmax均减小(P〈0.01),左室舒张末期压上升(P〈0.01),左室质量、左室质量指数均升高(P〈0.01)。与梗死模型组比较,中心移植组各项血流动力学指标无明显变化(P〉0.05);周边移植组左室收缩压、±dp/dtmax均显著升高(P〈0.01),左室舒张末期压显著减小(P〈0.01),左室质量、左室质量指数、梗死面积均显著减小(P〈0.01)。 结论:急性心肌梗死后于梗死周边区移植胚胎干细胞可以阻止心室重构、减少瘢痕面积、改善心功能。
  • NR2B受体拮抗剂抑制成年大鼠齿状回新生神经元诱导的长时程增强 免费阅读 下载全文
  • 背景:新生神经元可诱导产生长时程增强,NMDA受体亚基NR2B的激活在成熟神经元诱导的长时程增强中有重要作用,但其对由新生神经元诱导的长时程增强的影响尚未见报道。 目的:观察NR2B受体拮抗剂R025-6981在大鼠齿状回新生神经元诱导的长时程增强中的作用。 设计、时间及地点:脑片电生理实验,于2007—02/06在山西医科大学神经生物实验室完成。 材料:3月龄雄性Wistar大鼠26只,由山西医科大学实验动物中心提供。方法:大鼠麻醉后断头取脑,分离海马,制备400μmol/L脑片。采用细胞外微电极记录技术,于海马齿状回分子层内侧1,3处采用双极钨电极进行低频刺激,获得稳定的刺激曲线后,在高频强直刺激下诱导长时程增强。长时程增强的诱导程序为每串刺激频率100Hz,持续500ms,间隔20s,共4串刺激,记录到兴奋性突触后电位〉1mV以上的脑片用于下述两项实验。①NR2B拮抗剂Ro25—6981阻断人工脑脊液诱导的长时程增强:脑片分为2组,人工脑脊液组持续通以含有95%O2和5%CO2的人工脑脊液,人工脑脊液+Ro25.6981组在强直刺激前应用3μmol/LNR2B拮抗剂Ro25-6981作用10min,后续步骤同上组。②NR2B拮抗剂Ro25—6981抑制荷包牡丹碱诱导的长时程增强:脑片分为2组,荷包牡丹碱组在强直刺激前给予10μmol/L荷包牡丹碱灌流10min,荷包牡丹碱+Ro25—6981组在强直刺激前同时给予3μmol/L Ro25.6981和10μmol/L荷包牡丹碱灌流10min。主要观察指标:长时程增强记录结果。结果:①强直刺激后50-60min,人工脑脊液组长时程增强(107.85±1.34)%,人工脑脊液+Ro25-6981组长时程增强(100.75±2.75)%,两组比较差异有显著性意义(P〈0.05)。②强直刺激后50-60min,荷包牡丹碱组长时程增强(164.67±2.40)%,荷包牡丹碱+Ro25-6981组长时程增强(147.56±6.63)%,两组比较差异有显著性意义(P〈0.05)。结论:在大鼠海马齿状回区域,NR2B受体拮抗剂Ro25-6981阻断了人工脑脊液诱导的长时程增强,并部分抑制了荷包牡丹碱诱导的长时程增强,提示NR2B受体拮抗剂可以抑制新生神经元诱导的长时程增强。
  • 冻存和传代后脂肪间充质干细胞向心肌样细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:脂肪间充质干细胞是一种成体多能干细胞,将成为一种重要的用于心肌组织工程和心脏病细胞治疗研究的种子细胞。 目的:观察脂肪间充质干细胞经液氮冻存和长期传代后向心肌样细胞分化的能力。 设计、时间和地点:对比观察,于2007—09/2008-06在解放军军事医学科学院卫生装备研究所组织工程实验室完成。 材料:大鼠脂肪间充质干细胞,来自2月龄Wistar大鼠附睾脂肪垫。方法:第3代大鼠脂肪间充质干细胞液氮冻存6个月,复苏后用10μmol/L5-氮胞营诱导,2周后检测细胞分化状况。另外,将间充质干细胞长期传代培养,用10μmol/L5-氮杂胞苷处理,2周后检测细胞分化状况。以未经5-氮杂胞苷处理的脂肪组织间充质干细胞为对照。 主要观察指标:免疫组织化学染色观察α-肌节型肌动蛋白、骨骼肌快肌肌浆球蛋白(骨骼肌细胞特有)和GATA-4的表达。结果:液氮冻存后的脂肪间充质干细胞,经诱导后α-肌节型肌动蛋白和GATA-4免疫组织化学染色均为阳性,骨骼肌快肌肌浆球蛋白免疫组织化学染色为阴性;第6代脂肪间充质干细胞,经诱导后免疫组织化学染色结果与冻存后相同;第9代脂肪间充质干细胞,经诱导后n一肌节型肌动蛋白、骨骼肌快肌肌浆球蛋白和GATA-4免疫组织化学染色均为阳性。对照组均为阴性表达。 结论:脂肪间充质干细胞冻存后可向心肌样细胞分化;长期传代的脂肪间充质干细胞也能向心肌样细胞分化,但经5-氮杂胞苷诱导也可能同时向骨骼肌样细胞分化。
  • 人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转号 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究证实多数造血生长因子通过JAKs-SWATs途径转导信号,调节血细胞的增殖与分化。人参总皂苷能够促进早期的造血干,祖细胞向红系细胞分化,具有类似造血生长因子的功效,在红系血细胞发生中造血细胞膜表面红细胞生成素受体起着关键性的作用。 目的:通过红细胞生成素及其受体介导的JAK2/STAT5信号转导途径,分析人参总皂苷定向诱导红系血细胞发生的分子机制。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006—05,2008—10在在重庆医科大学基础医学研究所、组织胚胎学教研室完成。材料:脐血细胞来源于正常足月妊娠产妇分娩脐带血,由重庆医科大学第一附属医院提供。人参总皂苷由重庆中药研究所惠赠,纯度95%以上,添加MI-1640培养液配成1g/L的工作液。 方法:①集落形成实验:取5×10^6L^-1脐血单个核细胞,添加含马血清的RPMI-1640培养液,10,25,50,75,100mg/L人参总皂苷组分别加入对应终浓度的人参总皂苷,并设立空白对照组。在96孔板上培养,0.2mL/孔,14d计数早期红系祖细胞,6d计数晚期红系祖细胞。②取脐血单个核细胞悬液100uL(5×10^8L^-1),进行MTT检测。(3)分别将0,25,50,100mg/L人参总皂苷与脐血造血细胞1×10^9L^-1共培养24h,进行Westemblot检测。④取脐血造血细胞1×10^9L^-1,对照组加入含体积分数为10%马血清的RPMI-1640培养液,人参总皂苷组在常规培养体系中加入终浓度25mg/L人参总皂营。分别用5U/mL红细胞生成素诱导0,2,5,30min后终止反应,进行免疫沉淀检测。 主要观察指标:人参总皂苷刺激红系造血祖细胞增殖的能力,红细胞生成素对脐血细胞增殖的影响,人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响,JAK2、STAT5蛋白酪氨酸磷酸化情况。结果:10~75mg/L人参总皂营均能提高脐血细胞形成早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞的集落产率,以25mg/L提高幅度最为明显。2—50U/mL红细胞生成素均能促进脐血细胞的增殖,以5U/mL促进增殖效果最为明显。0—100mg/L人参总皂苷作用脐血细胞24h后,红细胞生成素受体的表达无明显变化。人参总皂苷作用造血细胞24h后,加入红细胞生成素继续刺激0~30min.JAK2和SWAT5的酪氨酸磷酸化程度均明硅增强。 结论:人参总皂苷在促进造血细胞增殖的过程中,尽管对造血细胞红细胞生成素受体的表达无明显影响,但可能通过在红细胞生成素受体介导的信号转导过程中增强JAK2和SWAT5的酪氨酸磷酸化程度发挥作用。
  • 昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离与培养 免费阅读 下载全文
  • 背景:对于神经千细胞的分离培养,目前多采用胰蛋白酶对组织细胞予以消化,但消化时间较难把握。 目的:采用胰酶消化与机械分离法相结合的方式对昆明种小鼠胚胎脑神经干细胞进行分离、培养,并进行初步的免疫组织化学检测。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006~10/2007—09在广西医科大学基础医学实验室完成。材料:孕14-16d的昆明种小鼠由广西医科大学实验动物中心提供。 方法:分离昆明种小鼠胎鼠的脑组织,经胰酶消化加机械吹打后,在加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的B27无血清DMEMIF12培养基中培养。主要观察指标:用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞。结果:培养24h后,细胞以悬浮方式生长,聚集成团:48h后形成由数十个细胞组成的细胞球,形态规则,体积大小不等,细胞无突起,形成典型的神经球,可传代扩增。免疫细胞化学染色结果示细胞巢蛋白呈阳性表达。 结论:在含有表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清B27培养基条件下,有利于小鼠胚胎神经干细胞的体外培养和传代增殖。
  • P21^Cip/WAF1及P27^Kip1与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达木术 免费阅读 下载全文
  • 背景:P21^cip/WAF1, P27^Kip1 是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中P21^cip/WAF1, P27^Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细胞学基因水平观察,于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。 材料:骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。方法:全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第5代后,加入含20ug/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEM1低血清培养基向肝细胞诱导分化。 主要观察指标:诱导后RT-PCR检测细胞内P21^cip/WAF1, P27^Kip1及增殖细胞核抗原基因mRNA的表达。结果:骨醢间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0,1,3,5,7d,细胞内P21^cip/WAF1, mRNA表达的相对量逐渐升高(P〈0.01),1, P27^Kip1mRNA表达的相对量无明显差异(P〉0.05),增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0,1d无明显差异(P〉0.05)外,其余各时间点均逐渐降低(P〈0.01)。结论:P21^CipANAF1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖,同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用,P27Kip1可能并不起作用,增殖细胞核抗原的表达则与P21CipWAF1相反,呈逐步减少趋势。
  • 学科新闻:间充质干细胞可调节树突状细胞的分化增殖 免费阅读 下载全文
  • 国际血液学领域权威杂志《血液》(Blood,2009,113(1):46-57)以封面文章形式发表了中国医学科学院基础医学研究所赵春华教授有关树突状细胞的研究。
  • 胰岛素样生长因子1基因转染兔脂肪间质干细胞的增殖 免费阅读 下载全文
  • 背景:基因工程是目前软骨修复的主要方法,脂肪间质干细胞以其来源丰富、取材容易、免疫相容性良好、体外培养可以较长时间保持分化表型、有较强的向软骨细胞转化的能力而成为理想的种子细胞。目的:探讨胰岛素样生长因子1基因转染对兔脂肪间质干细胞增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学基因转染体外观察,于2006-03/2007-03在中国医科大学细胞生物实验室完成。材料:成年新西兰大白兔3只,由中国医科大学实验动物中,心提供。含有全长人胰岛素样生长因子1cDNA片段的质粒pcDNA3.1.hlGF-1由吉林大学徐莘香教授惠赠。方法:取兔颈后皮下脂肪,Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养兔脂肪间质干细胞。取传至第2代细胞,以.0.5×10^6/孔密度接种于6孔板,细胞融合至90%-95%时随机分为未转染组、转染空载体pcONA3.1组、转染质粒pcDNA3.1-hlGF-1组,采用脂质体介导基因转染法进行质粒pcDNA3.1-IGF-1转染,经G418筛选后培养4周。主要观察指标:采用RT-PCR及Westernblot方法检测胰岛素样生长因子1的表达情况,MTT法及流式细胞仪检测细胞增殖情况。结果:转染pcDNA3.1-hlGF-1组的脂肪间质干细胞内有大量胰岛素样生长因子1mRNA及蛋白表达,未转染组及转染空载体pcDNA3.1组无表达。细胞增殖曲线显示,转染质粒pcDNA31-hlGF-1组的脂肪间质干细胞增殖速度较其他2组细胞明显加快。流式细胞仪检测显示,转染质粒pcDNA3.1-hlGF.1组的脂肪间质干细胞较其他2组细胞的S期比例显著增加(户〈0.05),G1期比例显著下降(P〈0.05)。结论:质粒pcDNA3.1-IGF-1转染兔脂肪间质干细胞后,可以获得稳定表达,并能明显促进脂肪间质干细胞的增殖。
  • 骨髓间充质干细胞移植在大鼠急性肝损伤组织中的定植能力 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前对于移植后的骨髓间充质干细胞在肝组织中的分化途径以及能够在多大程度上修复损伤的肝细胞等问题,尚未达成统一共识。目的:观察经尾静脉移植的骨髓间充质干细胞在急性肝损伤大鼠肝组织中的定植分化情况。设计、时间及地点:细胞学体内对照观察,于2007-12/2008—06在兰州大学中心实验室地点完成。材料:清洁级6-8周龄雄性SD大鼠47只,取5只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余42只随机分为3组:肝正常细胞移植组15只、肝损伤细胞移植组14只、肝损伤盐水对照组13只。方法:肝损伤细胞移植组、肝损伤盐水对照组大鼠通过腹腔注射D-氨基半乳糖建立急性肝损伤模型。造模后24h,肝损伤细胞移植组、肝正常细胞移植组经尾静脉注入BrdU标记的第3代大鼠骨髓间充质干细胞悬液1mL,含(15~2.0)×10^6个细胞;肝损伤盐水对照组大鼠同法注入等量生理盐水。主要观察指标:移植后肝功能恢复情况,肝脏免疫组织化学检测结果。 结果:与造模后24h比较,移植后2,3周肝正常细胞移植组、肝损伤盐水对照组血清谷丙转氨酶活性无明显变化(P〉0.05);肝损伤细胞移植组血清谷丙转氨酶活性明显降低(P〈0.05),肝功能恢复较好。与肝正常细胞移植组比较,肝损伤细胞移植组Brdu’细胞数明显增多(P〈0.01),多分布在汇管区及中央静脉周围,但随着时间延长BrdU’细胞数逐渐减少。 结论:经尾静脉移植的骨髓间充质干细胞可促进急性肝损伤大鼠的肝功能恢复,并能够在受损肝脏及正常肝脏中定植分化,且定植与分化的程度可能与肝脏损伤程度有关。
  • 不同发育阶段人皮肤表皮干细胞增殖分化相关基因的表达特征 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前研究认为表皮干细胞数量及增殖分化潜能的差异,可能是创面愈合能力随年龄增大而逐渐降低的重要原因之一。目的:探讨不同发育阶段人皮肤表皮干细胞B1整合素、角蛋白19、p63转录因子和端粒酶反转录酶的表达特征。 设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2005—09/2007—04在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。材料:流产胎儿皮肤标本由南昌大学第一附属医院产科提供,4~12周岁少儿、25~45岁成人烧伤整形植皮手术剩余皮片标本由南昌大学第~附属医院烧伤科提供。方法:标本取材后立即用中性甲醛固定,常规石蜡包埋,4℃保存。所有标本经系列切片后,分别采用鼠抗人角蛋白19、β1整合素、p63转录因子、端粒酶反转录酶单克隆抗体作为一抗,以免疫组织化学EnVision法检测皮肤组织中表皮干细胞标志物的表达。 主要观察指标:200倍光镜下观察免疫组化染色结果,测定表皮干细胞标志物阳性表达率。结果:胎儿皮肤、少儿皮肤和成人皮肤表皮的基底部、毛囊周围细胞B1整合素、角蛋白19、p63和端粒酶反转录酶均呈棕黄色阳性表达。胎儿表皮基底层细胞β1整合素、角蛋白19和p63均呈强阳性表达:少儿表皮基底层细胞叶1大部分表达β1整合素、角蛋白19和p63,阳性细胞均匀分布;成人表皮基底层细胞B1整合素、角蛋白19和p63呈弱阳性表达,阳性细胞散在分布;胎儿表皮基底层端粒酶反转录酶阳性细胞表达强度,少儿表皮〉成人表皮。随年龄的增加,β1整合素、角蛋白19、p63和端粒酶反转录酶在胎儿、少儿、成人皮肤组织中的阳性表达率呈下降趋势(F=5.06,P〈0.01)。 结论:胎儿皮肤、少儿皮肤和成人皮肤表皮干细胞主要位于表皮基底层,端粒酶表达阳性区域及信号强度与表皮干细胞的定位分布及阳性表达强度相一致。提示表皮干细胞的数量、端粒酶活性表达的强弱可能与不同发育阶段皮肤组织的修复能力差异密切相关。
  • 重组腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前仍没有合适的标记方法追踪观察兔骨髓间充质干细胞组织修复及基因治疗的效果。 目的:观察重组腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在兔骨髓间充质干细胞中的表达,及转染后干细胞活性的变化,以寻找稳定标记兔骨髓间充质干细胞的方法。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/05在南京市第一医院骨科干细胞实验室完成。 材料:健康2月龄纯种新西兰大白兔4只,由南京医科大学实验动物基地提供。重组腺病毒Ad5/F35-EGFP为北京本元正阳基因有限公司产品。 方法:用密度梯度离心法分离纯化兔骨髓间充质干细胞,贴壁法纯化扩增。取传至第4代细胞,流式细胞仪检测细胞标志的表达,消化离心重悬后进行计数,平均分成5组,每组细胞数5.0×10^5个,接种于25m^2培养瓶,空白组加入50μL的PBS液,剩余4组加入重组腺病毒Ad5/F35-EGFP进行转染,感染复数(MOI)分别为10,20,50,100,继续传代培养。 主要观察指标:骨髓间充质干细胞的生长状态及表面标志鉴定,转染后骨髓间充质干细胞增强型绿色荧光蛋自的表达及活性变化。 结果:原代培养48h后见细胞贴壁,8d时细胞铺满瓶底80%以上,绝大多数呈梭形,传代后细胞增殖速度加快,三四天即可传代,第4代细胞CD29和CD44呈阳性表达,CD34与CD45呈阴性表达。转染后24h可见绿色荧光,7d时荧光最强,细胞转染率与感染复数值的呈线性增长关系,至49d时仍可见绿色荧光。转染后0,7,14,28,49d,感染复数=50组的骨髓间充质干细胞数量均与空白组基本相似(P均〉0.05),即转染后细胞增殖能力无明显变化。 结论:重组腺病毒载体能高效标记骨髓间充质干细胞,感染复数为50时较为理想,增强型绿色.荧光蛋白基因可持续表达49d,且标记后不影响骨髓间充质干细胞的增殖活性。
  • 人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞向永生化细胞的转变 免费阅读 下载全文
  • 背景:颅神经嵴干细胞可以作为颌面部各种组织和器官分化研究的重要细胞来源,如何使其获得永生化具有重要意义。人类细胞自发永生化的频率非常低,而一些永生化的基因可以显著增加这种频率。 目的:观察人端粒酶催化亚基基因在大鼠颅神经嵴干细胞永生化过程中的作用。设计、时间及地点:观察性实验,于2007—09/2008-06在解放军第四军医大学完成。材料:选择清洁级孕8.5dSD大鼠3只,6周,体质量180g;先天性细胞免疫缺陷动物雄性Balb/c裸小鼠,体质量18~21g,均由解放军第四军医大学实验动物中心提供。质粒PCIneo-hTERT由解放军第四军医大学口腔医院牙体牙髓科提供。 方法:原代培养大鼠颅神经嵴干细胞后,将含有人端粒酶催化亚基基因的质粒PCIneo-hTERT转入大鼠颅神经嵴干细胞。经G418筛选后扩增,并连续培养。采用免疫细胞化学法观察转染细胞内人端粒酶催化亚基基因和颅神经嵴干细胞的特异标志物P75的表达,检测细胞的端粒酶活性,绘制细胞生长曲线观察其增殖能力,并通过裸鼠移植实验了解转染细胞的特性。 主要观察指标:细胞克隆、特异性蛋白P75表达、端粒酶活性、增殖能力及致瘤性实验结果。结果:①质粒PCIneo—hTERT转染细胞后24h,有少量细胞死亡。加G418后48h,细胞逐步开始大量死亡。12d后出现抗性细胞克隆,共有3个细胞克隆生长良好。分别命名为克隆1、2、3。克隆1和克隆2经过20~25代的传代后,细胞发生衰老、死亡:而克隆3在体外长期培养条件下生长状态良好,稳定表达人端粒酶催化亚基和P75。经转染后颅神经嵴干细胞的端粒酶活性明显升高,且能持续表达。②人端粒酶催化亚基基因转染后,3个细胞克隆在初期的增殖能力较强,随后克隆1、2的增殖速度逐渐变慢,出现死亡,克隆3越过衰老期,且无致瘤性。 结论:人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞后,细胞得以永生化,其表型稳定,可作为颅颌面部细胞分化和组织工程研究的种子细胞。
  • 外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导神经干细胞凋亡的抑制效应 免费阅读 下载全文
  • 背景:已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一,而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用,但其机制尚不清楚。 目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17.2神经干细胞凋亡的抑制作用。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2006-11/2008—06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。 材料:C17.2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。 方法:以直线加速器进行总量为8Gy外照射C17.2神经干细胞建立离体放射性损伤模型,以1×10^7L^-1的细胞浓度接种C17.2神经干细胞悬液至96孔板,每孔加细胞悬液200uL,按0,25,50,100μg/L(0μg/L作对照)分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。主要观察指标:四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果:随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高,C17.2神经干细胞增殖比明显增加(P〈0.01),呈现明显剂量效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100ug/L时活性最强,未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示:对照组细胞凋亡率高于25,50ug/L碱性成纤维细胞生长因子组(P〈0.01),25,50,100μg/L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比,差异具有显著性意义(P〈0.05~0.01)。 结论:外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17.2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。
  • 不同刺激因子对脐血干/祖细胞体外增殖影响的比较 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前细胞因子支持的脐血体外扩增是安全性较高、最有可能运用于临床的方法之一。 目的:比较白血病抑制因子、白细胞介素6及脂多糖对脐血干/祖细胞体外增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外对照实验,于2003-08/2004—05在广东医学院附属医院中心实验室完成。材料:10例正常脐血标本取自广东医学院附属医院妇产科及湛江市妇幼保健院妇产科,自血病抑制因子为达科为试剂公司产品,白细胞介素6为晶美试剂公司产品,脂多糖由广东医学院附属医院李延平教授自制。 方法:密度梯度法体外分离培养脐血单个核细胞,应用磁分选器和单克隆抗体免疫磁珠(阳性)分选法提取脐血CD34+细胞。建立液体培养体系,为含体积分数为40%的胎牛血清、20g/L牛血清白蛋白、20μg/L粒巨集落刺激因子、20ug/L干细胞因子、20μg/L自细胞介素3的RPMI1640培养液。取2×10^8L^-1脐血CD34+细胞,加入配制的液体培养体系50μL,设立8组:第1组仅加入RPMI1640作为对照,第2-4组分别单独加入脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6,第5—7组分别加入脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6的两两混合液,第8组加入3种刺激因子的混合液,上述各组脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6的终浓度分别为10u,mL,10μg/L,10mg/L。主要观察指标:MTT法测定不同刺激因子在液体培养体系中对脐血CD34+细胞增殖的影响。结果:培养3d后与对照组比较,单用白血病抑制因子对脐血CD34+细胞具有促增殖作用(F=3.33,P〈0.01),单用脂多糖或白细胞介素6的效果均不显著(F=-2.14,183,P〉0.05);刺激因子两两联用及3种刺激因子联用时,对脐血CD34+细胞均具有促增殖作用(F=3.54-4.06,P均〈0.01),且3种刺激因子联用时的促增殖效果尤为显著。 结论:在特定的液体培养体系中,单独使用白血病抑制因子可明显促进脐血干,祖细胞体外增殖,联合情况下白细胞介素6、脂多糖与白血病抑制因子具有促增殖协同作用。
  • 表皮生长因子对非黏附骨髓间充质干细胞克隆形成效率的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前普遍认为骨髓间充质干细胞是一类高度黏附的成纤维样细胞,但也有研究显示处于非黏附状态的骨髓间质细胞也具有自我复制及多向分化潜能。目的:探讨表皮生长因子对骨髓中存在的非黏附骨髓间充质干细胞产生成纤维细胞集落形成单位的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-07/12在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料:4周龄雄性C57/BL6小鼠6只,由南京医科大学实验动物中心提供。表皮生长因子为美国Sigma公司产品。方法:全骨髓法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞浓度为2×10^9L^-1。收集第3代细胞,分别接种于向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的培养液中进行诱导。取30mL骨髓间充质干细胞悬液,平均分到两管中,表皮生长因子处理组加入终浓度为10μg/L表皮生长因子,空白对照组加入普通完全培养基,采用反复转移非黏附骨髓细胞培养法,每天将非黏附骨髓细胞转移到新的培养皿,原来的皿中为总骨髓来源的贴壁细胞,转移第1次定义P01,第2次为P02,依次类推,培养12d终止。 主要观察指标:骨髓间充质干细胞的鉴定结果,亚甲基蓝染色显示每皿细胞克隆的形成情况,计算克隆形成区域占皿底面积的百分比及克隆数目。结果:非黏附骨髓间充质细胞在第4天转移到新的培养皿后,继续培养仍能够贴壁生长,并逐渐扩增形成克隆;诱导后能够分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。给予表皮生长因子处理后,无论是总骨髓来源的贴壁细胞,还是反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞,均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位,且数量明显多于空白对照组(P〈005)。表皮生长因子处理组总骨髓来源的贴壁细胞、P01-P05非黏附骨髓间充质干细胞所形成的贴壁细胞数分别是空白对照组的1.54倍,4.25倍,2.51倍,1.56倍,1.25倍,2.01倍:所产生的克隆数分别是空白对照组的12倍,18倍,1.4倍,1.4倍,1.1倍。结论:表皮生长因子能有效促进骨髓中的非黏附骨髓间充质干细胞在悬浮状态下增殖,明显提高了骨髓间充质干细胞的富集效率。
  • 骨髓基质干细胞向神经元样细胞诱导分化前后相关基因表达谱的变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:一系列研究发现,骨髓基质于细胞可在体外经人工诱导分化为神经元样细胞,有望用以移植治疗神经退行性疾病,但是其分化的分子机制尚不明了。 目的:观察骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化前后基因表达谱的变化。 设计、时间及地点:观察性实验,于2006-12/2007-12在苏州大学附属第二医院神经外科脑肿瘤研究室完成。 材料:健康成年近交系Wistar大鼠,体质量约300g。方法:体外培养和纯化大鼠骨髓基质干细胞,用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对其进行诱导,分别于诱导前和诱导后第7天抽提RNA后利用Affymetrix基因芯片检测分析诱导前后差异基因表达谱,并有选择地对其中的一些重要基因进行实时定量PCR验证。主要观察指标:①骨髓基质干细胞的培养及诱导分化。②诱导分化后神经细胞的鉴定。③诱导分化前后基因芯片的捡测。④基因芯片结果的分析。⑤实时定量PCR的验证。结果:骨髓基质干细胞经诱导后形态上呈神经元样细胞改变,免疫荧光证实β-TubulinⅢ染色后阳性率为(69.04±5.63)%。基因芯片共发现差异基因215条,其中上调基因125条,下调基因g0条。明确与神经元发育密切相关的基因有13条,其中上调7条,下调6条。挑选重要的4条基因Bmp4、Robo2、Numb、Enc1进行实时定量PCR验证,其结聚与基因芯片结果相符。 结论:骨髓基质干细胞在体外诱导分化为神经元样细胞的相关基因表达谱中,有一些明确与神经元分化密切相关的基因存在差异表达,深入研究这些基因可能为基因工程改造骨髓基质干细胞奠定基础。
  • 低氧对人骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR4和CX3CR1表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:移植的骨髓间充质干细胞能向损伤病灶部位定向迁移,进而发挥治疗作用,但关于其向病灶定向迁移的具体机制还不十分清楚。 目的:观察低氧对人骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR4和CX3CIR1表达的影响。 设计、时间和地点:细胞学体外观察,于2008-02/2009-02在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室进行。 材料:骨髓标本取自解放军第三军医大学附属新桥医院血液科收治的15-40岁正常或原发病未累及骨髓患者。方法:穿刺采集骨髓,密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化入骨髓间充质干细胞。取生长良好的第3代细胞接种于25cm。培养瓶中,培养至70%-80%融合后,置于37℃、体积分数分别为3%O2、5%CO2,92%N2的饱和湿度孵育箱内培养48h,以常氧培养作为对照。主要观察指标:相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标记物,Realtime荧光定量PCR法检测CXCR4和CX3CR1 mRNA的表达,免疫细胞化学和Westernblot法检测CXCR4和CX3CR1蛋白的表达。 结果:体外分离纯化的人骨髓间充质干细胞呈成纤维细胞样,培养12-14d达90%汇合,呈极性排列,集落呈漩涡状:CD105和CD29阳性率分别为99.38%和99.13%,而CD14,CD45均呈阴性表达。在体积分数为3%的02培养条件下,人骨髓间充质干细胞CXCR4和CX3CR1mRNA的表达分别是常规培养条件下的2.130倍和2.361倍,CXCR4和CX3CR1蛋白的表达分别是常规培养条件下的1.69倍和1.93倍,CXCR4和CX3CR1主要表达于人骨髓间充质干细胞的胞膜和胞浆。 结论:体积分数为3%的02低氧条件能够促进人骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR4和CX3CR1mRNA及蛋白的表达,这可能是体内移植的骨髓间充质干细胞向损伤病灶定向迁移的机制之一。
  • 干细胞临床移植稿件的选题范围 免费阅读 下载全文
  • 腺病毒介导骨形态蛋白9基因转染免脂肪干细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:已证实骨形态蛋白9是骨形态蛋白家族最具潜力的促骨分化生长的因子之一,目前国内在成骨方面对骨形态蛋白9的报道非常少。目的:探讨腺病毒介导的人骨形态蛋白9基因转染兔脂肪干细胞的可行性,及其转染后的成骨作用。设计、时间及地点:细胞基因学体外观察,于2007—08,2008—06在重庆医科大学附属儿童医院儿研所外科研究室完成。 材料:新西兰大白兔5只,由重庆医科大学实验动物中心提供。携带人全长骨形态蛋白9基因的腺病毒载体由莺庆医科大学附属儿童医院罗庆研究员构建并惠赠。方法:取兔颈后部脂肪组织,体外分离纯化脂肪干细胞。取生长良好的第3代细胞,以1×10^8L^-1密度接种于6孔板,转染组经感染复数为100的载有人骨形态蛋白9基因的腺病毒转染脂肪干细胞,并设立未转染对照组。主要观察指标:细胞形态及生长曲线变化,荧光显微镜及RT-PCR检测转染后人骨形态蛋白9基因mRNA的表达,碱性磷酸酶及钙茜素红染色测定转染后成骨活性。 结果:转染1周后细胞汇合呈铺路石状,2周后形成钙化结节:未转染对照组细胞形态较前无明显变化,无明显的钙化结节形成。与未转染对照组比较,转染组细胞停滞期延长,数量轻度下降,倍增时间延长。脂肪干细胞转染骨形态蛋白9基因后12h后即有荧光表达,转染3,6,9,12d后人骨形态蛋白9mRNA均里阳性表达且逐渐增强,未转染对照组呈阴性。转染组碱性磷酸酶活性随转染时间的延长呈升高趋势,钙茜素红染色可见钙化结节;未转染对照组碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色均呈弱阳性表达。 结论:携带人全长骨形态蛋白9基因的腺病毒可成功转染兔脂肪于细胞,转染后脂肪干细胞高表达骨形态蛋白9,且具有明显的成骨作用。
  • 干细胞研究相关英语词汇:中英文对照 免费阅读 下载全文
  • 血管生成素1通过整合素对大鼠骨髓间充质干细胞的黏附、活力及抗凋亡影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:前期实验已证实骨髓间充质于细胞表面存在整合素受体,但血管生成素1是否能通过整合素受体促进骨髓间充质干细胞的生存、抗凋亡目前尚不明确。目的:探讨血管生成素1对大鼠骨髓间充质干细胞黏附、活力、抗凋亡的影响,并初步分析其信号转导机制。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008—01/10在厦门大学附属中山医院开放实验室完成。 材料:清洁级SD大鼠40只,由中科院上海实验动物中心提供。人血管生成素1为R&D公司产品。方法:密度梯度离心结合贴壁分离法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,第346代细胞用于实验。分别以不同的基质包被24孔培养板1h,清洗后再加入单细胞悬液,设立7组:第1组作为对照,以含0.1%牛血清白蛋白的PBS包被;第2-4组分别以玻粘连蛋白、纤维粘连蛋白、血管生成素1包被;第5-7组单细胞悬液预先分别与乙二胺四乙酸、β1抗体、RGD抗体孵育10min后再加入24孔板,行血管生成素1包被。主要观察指标:通过黏附测定、锥虫蓝染色、MTT试验、Hoechst染色和AnnexinV/PI法检测血管生成素1对骨髓间充质干细胞的黏附、活力、抗凋亡等生物学效应,结合整合索抗体和信号转导阻滞剂通过Western blotting法检测磷酸化丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶B、总丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶B、Bcl.2和B-actin水平。结果:成功分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪鉴定其纯度达98.3%。黏附试验显示与对照组比较,培养1,2,3d血管生成素1均能促进骨髓间充质干细胞的黏附(P〈0.01),该效应能被乙二胺四乙酸、整合索亚单位B1抗体和RGD抗体所抑制(P〈0.01)。血管生成素1能促进骨髓间充质干细胞在血清饥饿下的存活(P〈0.01)、增殖(P〈0.01)和提高磷酸化丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶B、Bcl-2的表达来拮抗紫杉醇诱导的凋C(P〈0.01),RGD抗体能抑制上述作用。结论:血管生成素1可与整合素受体结合促进骨髓间充质干细胞的黏附、存活和增殖,并通过上调磷酸化丝氨酸,苏氨酸蛋白激酶B和Bcl-2的表达发挥抗凋亡作用。
  • 干细胞研究临床问答:干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的疗效评价? 免费阅读 下载全文
  • 根据5年多采用自体干细胞移植在治疗下肢缺血的经验,平均近期疗效在80%-90%之间。单纯骨髓干细胞和外周血干细胞移植的疗效在80%-87%之间,而动员后的骨髓千细胞移植的疗效在85%-90%之间。
  • 骨髓间充质干细胞移植时机及移植时间长短对大鼠肝纤维化病变进程的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究发现肝纤维化环境是骨髓间充质干细胞适宜的分化环境,提示通过骨髓间充质干细胞移植治疗肝纤维化成为可能。 目的:探讨骨髓间充质干细胞不同移植时期及移植时间长短对大鼠肝纤维化进程的影响。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2007—11/2008—08在福建医科大学及福建省科研所完成。 材料:普通级五六周龄雄性SD大鼠5只用于制备骨髓间充质干细胞:清洁级成年雌性SD大鼠68只,分别于造模10周、12周后处死,前者分为对照组、造模第6周细胞移植组2个亚组,12只,组:后者分为对照组、造模第6周细胞移植组、造模第8周细胞移植组3个亚组,动物数量分别为16只,16只,12只。方法:各组大鼠均通过腹腔注射四氯化碳建立肝纤维化模型。取体外分离培养的第4代骨髓间充质干细胞悬液0.2mL(含5×10^6个细胞),分别于造模后第6,8周经尾静脉注入各细胞移植组大鼠体内。对照组同法注入L-DMEM培养基,各组于培养对应时间点处死。主要观察指标:大鼠一般情况及肝纤维化和炎症程度。 结果:①造模10周后处死:与对照组比较,造模第6周细胞移植组肝纤维化评分均值明显降低(t=-2.45,P=0.023),炎症程度方面无明显差异(t=0.60,P=-0.554)。②造模12周后处死:对照组、造模第8周细胞移植组的肝纤维化及炎症程度评分均值均基本相似(t=-0.21,P=0.84:t=-0.18,P=0.86),2组均明显高于造模第6周细胞移植组(t=6.17,t=8.61,P〈0.01)。(3)造模10周后处死与造模12周后处死比较:随细胞移植时间的延长,造模第6周细胞移植组肝纤维化及炎症程度评分均值均明显降低(t=-6.98,t=-9.78,P〈0.01)。 结论:早期移植骨髓间充质干细胞可以减轻CCl4引起的肝脏炎症程度,同时改善大鼠的肝纤维化程度,此作用与移植时间成正相关。
  • 骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠脑源性神经营养因子表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:近年来关于骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤修复方面的研究较多,但目前相关机制尚不清楚。目的:观察间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子表达的影响。 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-04/07在中国医科大学神经解剖学实验室完成。材料:选取鼠龄3个月的SD大鼠64只,雌雄不拘,体质量250-300g,随机抽取4只大鼠用于骨髓间充质干细胞的分离与培养。其余60只用于制备脊髓横断损伤模型。方法:60只大鼠随机抽签法分为3组,细胞移植组(n=24):脊髓损伤后第7天,无菌条件下以微量注射缓慢注入含骨髓问充质干细胞(1×10^9L^-1)的培养液5μL至脊髓损伤区:PBS组(n=24):注入等量(5uL)磷酸盐缓冲液体:空白对照组(n=12):注入生理盐水5uL。主要观察指标:分别子造模后7,14,28d取材,观察骨髓间充质干细胞的形态变化:免疫组织化学法检测间充质干细胞移植后大鼠脊髓损伤区脑源性神经营养因子的表达。 结果:60只SD大鼠均进入结果分析。10代以后细胞增殖能力有所减弱,胞体变得扁平,若加入碱性成纤维细胞生长因子,则可维持其增殖能力和形态。大鼠脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达,细胞移植后第7,14,28天,细胞移植组脑源性神经营养因子表达均高于PBS组和空白对照组(P〈0.05):空白对照组与PBS组脑源性神经营养因子表达无明显差异(P〉0.05)。 结论:骨髓间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生,可能是治疗脊髓损伤的重要机制。
  • 医学英文句型正误辨析 免费阅读 下载全文
  • 《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志与《中国组织工程研究与临床康复》(CRTER)杂志共同举办国际投稿临床选题——作者论证会 免费阅读 下载全文
  • 想向SCI收录的优秀的国际期刊投稿吗? 您所撰写的文章如何能选择到影响因子较高的国际优秀期刊发表呢?
  • 干细胞研究临床问答:干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的安全性评价? 免费阅读 下载全文
  • 自2003—03—04宣武医院完成了国内首例自体骨髓干细胞移植治疗以来,加上采用的外周血干细胞移植技术,已经治疗了400多例患者。目前全国范围内行干细胞移植治疗下肢缺血性疾病患者的总例数已经突破1000例,均未发现肿瘤或者血管瘤的发生,自体干细胞移植是非常安全的技术。但是作为胚胎干细胞移植,目前已经有临床上和实验的报告,它具有诱发肿瘤的生长和形成肿瘤作用。
  • 非清髓性双份脐血移植治疗成人重型再生障碍性贫血8例 免费阅读 下载全文
  • 选择1998-06/2007-12广州市第一人民医院收治的成人重型再生障碍性贫血患者8例进行非清髓性双份供者脐血移植,预处理方案采用减量环磷酰胺+抗淋巴细胞球蛋白方案,输入的脐血总有核细胞数为5.69×10^7/kg,CD34+细胞数为4.10×10^5/kg。移植物抗宿主病的预防采用短程甲氨蝶呤联合甲基强的松龙方案。结果中性粒细胞绝对值〉0.5×10^9L^-1的中位时间为移植后17d(7-25d),血小板计数回升〉20×10^9L^-1的中位时间为移植后35d(13~102d)。7例患者DNA指纹图检测显示为供受者嵌合体;2例患者出现Ⅰ~Ⅱ度急性移植物抗宿主病,均得到控制;1例患者出现Ⅱ度慢性移植物抗宿主病,予甲基强的松龙后控制。目前5例患者无病存活10~10^8个月。提示对于成人受者接受非清髓性双份脐血移植在临床上是可行的,非清髓性预处理可保证脐血干细胞的有效植入。
  • 中山大学附属第二医院王彤医学博士 免费阅读 下载全文
  • 男,1969年3月出生,1992年6年制本科毕业。2000年获中山大学急诊医学硕士学位。2008年获中山大学急诊医学博士学位。2005~2007年在美国南加州大学危重症研究院从事干细胞的研究。2007年晋升为副主任医师,2008年被中山大学聘为急诊医学硕士研究生导师。从事急诊科的临床工作以及急诊医学、心肺脑复苏的临床研究共16年。
  • 《中国神经再生研究(英文版)》令神经再生研究领域感兴趣的SCI收录杂志 免费阅读 下载全文
  • 让昨天告诉今天:干细胞多能性相关研究的学术与技术进展 免费阅读 下载全文
  • 2002年,美国男科研究所所长呼吁国会通过让克隆人合法化的法案。 美国生育研究专家扎沃斯在美国众议院一个专业委员会作证时表示,他领导的小组计划在今年之内培育出克隆人胚胎。他还呼吁美国国会通过法案,让克隆人合法化。扎沃斯称,应该资助克隆人研究,并制订有关的管理制度,以最大限度降低克隆人过程中的风险。扎沃斯惊世骇俗的言行遭到一些关国议员们的反击,克隆人是“对社会的威胁”,必须得到有效制止。
  • 毛囊干细胞参与创伤修复及相关信号通路 免费阅读 下载全文
  • 皮肤的毛囊干细胞具有多分化潜能,可以分化成毛干、内髓鞘、外髓鞘、和皮肤表皮角质细胞以及皮脂腺,毛囊干细胞作为皮肤中储存的主要干细胞在维持毛囊周期和表皮创伤修复中都发挥重要作用。毛囊细胞参与创伤后表皮修复的过程研究相对较早,但对于毛囊干细胞参与此过程的研究近些年较为深入,这些过程受不同的信号通路调节,包括Wnt、BMP、FGF、Notch、SHH等。文章综述了毛囊干细胞如何参与表皮创伤修复及相关信号转导通路调节机制的研究现状,加深毛囊干细胞在临床中构建皮肤组织工程以及在整形美容医学应用中的理解。
  • 干细胞移植治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的研究现状 免费阅读 下载全文
  • 冠状动脉粥样硬化性心脏病可引起心肌细胞的不可逆性改变,干细胞移植治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病能改善心脏功能,但其机制尚不完全清楚,可能与心肌再生、血管新生、心脏结构重建和干细胞旁分泌等作用相关联。文章针对干细胞移植技术、生物学特点、移植途径等进行综述,并具体分析了干细胞移植成功的判断,干细胞改善心脏功能的机制以及干细胞移植的安全性等问题。
  • 自体外周血干细胞移植糖尿病足36例血管内皮功能检测 免费阅读 下载全文
  • 为评价自体外周血千细胞移植对糖尿病足的临床疗效及对血管内皮功能的影响,选取河北医科大学第四医院内分泌科收治的已确诊2型糖尿病伴糖尿病足患者36例,同期选择12例与患者性别、年龄相匹配的健康体检者作为正常对照组。患者组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子进行自体外周血干细胞动员,3-7d后采集单个核细胞,配成千细胞混悬液,2h内行双下肢多点肌肉注射,根据血管造影结果选择注射范围。与移植前比较,移植后1周患者双下肢冷感、麻木、疼痛明显好转;移植后1个月溃疡基本愈合;移植后3个月踝肱压指数明显升高(P〈0.05),数字减影血管造影示新生侧支血管数量明显增多,内皮依赖性血管舒张功能明显好转(t=8.28,P〈0.01),但仍低于正常对照组(t=3.08,P〈0.01),未出现严重并发症和不良反应。提示动员后的自体外周血干细胞移植治疗糖尿病足方法简单,安全有效,且可改善血管内皮功能。
  • 脐血干细胞移植治疗糖尿病足11例 免费阅读 下载全文
  • 2006-11/2008-10青岛市城阳人民医院行脐血间充质干细胞移植的糖尿病足患者11例,病程6~18年,经药物治疗6个月以上及(或)支架置入治疗,血管搭桥效果均不佳。本组患者均有足部和(或)下肢发凉、疼痛、间歇性跛行,静息痛7例,足部皮肤色泽异常7例,足部溃疡6例,坏疽4例,合并感染2例。脐血间充质干细胞来自健康分娩孕妇的脐带血,由深圳市北科细胞工程研究所提供。患者硬膜外麻醉或腰麻后,将脐血间充质干细胞悬液分多点注射到病变下肢,细胞数(1—6)×10^11L^-1,每点0.3—05mL,各点间距约3cm×3cm,肌肉组织丰富的部位可分层注射。移植后1~4周,9例足部疼痛缓解或减轻,10例冷感明显改善;移植后4~16周,4例溃疡面有不同程度的缩小、愈合,2例足部坏疯创面缩小并基本愈合,且下肢得以保留,1例患肢截肢,但降低了截肢平面;移植后12~24周,6例间歇性跛行有明显改善,3例患肢的踝肱指数有所增加,3例血管造影示有不同程度的侧支血管形成。脐血间充质干细胞移植方法简单,创伤小,能有效地增加患者下肢血流,促进溃疡愈合,使一部分患者避免截肢或降低截肢平面。
  • [技术与方法]
    抗坏血酸诱导新生鼠神经干细胞向多巴胺能神经元的分化
    骨髓间充质干细胞与丹酚酸B预处理内皮祖细胞共移植对急性心肌梗死大鼠心功能及分化基因表达的影响
    超声辐射微泡增效骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死
    嗅鞘细胞移植联合督脉电针对脊髓损伤大鼠脊髓诱发电位的影响
    大鼠肌源性干细胞移植对失神经腓肠肌萎缩进程的影响(张庭深 赵建文 苏秋香 牛犁)
    不同培养基和不同体积分数小牛血清对许旺细胞生长状态的影响
    五味子酮对APP转基因鼠神经干细胞分化中Tau蛋白过磷酸化水平的影响
    黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化早期胞内钙调蛋白mRNA的转录水平(王新生 李海峰 赵荧 赵铁军 张晓丽 薄爱华)
    菲立磁-多聚赖氨酸复合物体外标记兔骨髓基质细胞(何骁 李贵涛 唐晓军 金勋杰 罗狄鑫 齐勇)
    利用冷冻胚胎建立人类胚胎干细胞系
    组织多普勒超声心动图评价心肌病兔骨髓基质细胞移植后的心肌功能
    三七总皂甙通过细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向神经样细胞的增殖与分化
    瘦素对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
    新生大鼠许旺细胞体外培养纯化的最佳培养条件(贺斌 刘世清 李皓桓)
    胚胎干细胞梗死区中心和周边移植治疗急性心肌梗死
    NR2B受体拮抗剂抑制成年大鼠齿状回新生神经元诱导的长时程增强
    冻存和传代后脂肪间充质干细胞向心肌样细胞的分化(郭勇 李瑞欣 张西正 郭春 孙鹃 魏严 徐晓莹)
    人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转号
    昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离与培养
    P21^Cip/WAF1及P27^Kip1与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达木术

    学科新闻:间充质干细胞可调节树突状细胞的分化增殖
    胰岛素样生长因子1基因转染兔脂肪间质干细胞的增殖(安春厚 程扬 原泉 李建军)
    骨髓间充质干细胞移植在大鼠急性肝损伤组织中的定植能力(何琼 朱陇东 陈红)
    不同发育阶段人皮肤表皮干细胞增殖分化相关基因的表达特征
    重组腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞(张全彬 王黎明 徐燕)
    人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞向永生化细胞的转变
    外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导神经干细胞凋亡的抑制效应
    不同刺激因子对脐血干/祖细胞体外增殖影响的比较(张宇明 江黎明 李庆华 熊丹 杨志刚)
    表皮生长因子对非黏附骨髓间充质干细胞克隆形成效率的影响
    骨髓基质干细胞向神经元样细胞诱导分化前后相关基因表达谱的变化(张荣俊 贡志刚 闫西刚 兰青 黄强)
    低氧对人骨髓间充质干细胞趋化因子受体CXCR4和CX3CR1表达的影响(朱洁 周竹娟 龚自力 郑健)
    干细胞临床移植稿件的选题范围
    腺病毒介导骨形态蛋白9基因转染免脂肪干细胞
    干细胞研究相关英语词汇:中英文对照
    血管生成素1通过整合素对大鼠骨髓间充质干细胞的黏附、活力及抗凋亡影响(陈国欢 王挹青 郭晋村)
    干细胞研究临床问答:干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的疗效评价?(谷涌泉)
    骨髓间充质干细胞移植时机及移植时间长短对大鼠肝纤维化病变进程的影响(焦艳 江家骥)
    骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠脑源性神经营养因子表达的影响(陈晓春 牛庆飞 杨爽)
    医学英文句型正误辨析
    《中国神经再生研究(英文版)》(NRR)杂志与《中国组织工程研究与临床康复》(CRTER)杂志共同举办国际投稿临床选题——作者论证会
    干细胞研究临床问答:干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的安全性评价?(谷涌泉)
    非清髓性双份脐血移植治疗成人重型再生障碍性贫血8例(许世林 李庆山 毛平 王顺清)
    中山大学附属第二医院王彤医学博士
    《中国神经再生研究(英文版)》令神经再生研究领域感兴趣的SCI收录杂志
    [本刊特稿]
    让昨天告诉今天:干细胞多能性相关研究的学术与技术进展
    [综述与专论]
    毛囊干细胞参与创伤修复及相关信号通路(邬宗周 邓辉 袁定芬)
    干细胞移植治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的研究现状(谢杰睿)
    [病例报告]
    自体外周血干细胞移植糖尿病足36例血管内皮功能检测(王富军 杜亚萍 杨艳辉 齐惠卿 刘月芹 高丽霞 丁海霞 葛洁 岳琳)
    脐血干细胞移植治疗糖尿病足11例(于崇岗)
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

    主管单位:中华人民共和国卫生部

    主办单位:中国康复医学会 《中国组织工程与临床康复》杂志社

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    主  编:刘昆

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