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  • 同种异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死后心电生理异常和左室重构的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前干细胞移植修复梗死心肌及改善心脏功能这一作用已被接受,但移植细胞是否和宿主细胞形成有效的电-机械藕联,是否易形成一个有收缩功能的相对电独立体系,并产生移植后严重的恶性室性心律失常等尚缺乏系统观察。目的:观察心肌梗死大鼠行同种异体骨髓间充质干细胞移植后,其心电生理异常及左室重构情况。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-12/2008-10在广西医科大学实验中心完成。材料:健康Wistar大鼠120只,随机分为正常对照组、假手术组、盐水对照组、细胞移植组,30只/组。另取1月龄健康Wistar大鼠数只用于抽取骨髓。方法:取体外培养的第3代大鼠骨髓间充质干细胞,加入诱导剂5-氮胞苷使之转化为心肌样细胞,在移植前2h行DAPI标记。盐水对照组、细胞移植组大鼠结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎冠状动脉。结扎后7d,细胞移植组将2×1010L-1骨髓间充质干细胞分多点注射到心肌梗死的边缘区和中心区,其余3组注射等量生理盐水。主要观察指标:体表ECG及心电生理检测,UCG检测左室功能,左室病理检查测定梗死面积,荧光显微镜下观察DAPI标记的供体细胞迁移、分布情况。结果:骨髓间充质干细胞体外诱导可分化为自发搏动的心肌样细胞,表达心肌特异性肌钙蛋白T,并形成肌丝结构。细胞移植后4,8,12周与盐水对照组比较,细胞移植组PR间期、QRS时限和心室有效不应期缩短,而室颤阈值增加(P〈0.05);左室收缩末期内径减小,左室射血分数、左室短轴缩短率均显著增加(P〈0.05);移植后8,12周心肌梗死面积明显缩小(P〈0.05)。移植后4周,在荧光显微镜下梗死区可见DAPI标记带蓝色荧光的移植骨髓间充质干细胞细胞核,至12周仍然存在,但随移植时间延长荧光强度逐渐减弱。结论:骨髓间充质干细胞具有分化为心肌样细胞的可塑性,同种异体骨髓间充质干细胞移植可有效改善心肌梗死后的心电生理异常和左室重构。
  • 电针联合骨髓基质细胞移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究认为骨髓基质细胞在损伤、缺血的脑脊髓组织中定向神经分化与损伤局部的微环境变化有关,特别是神经营养因子的诱导作用。课题组前期实验已证实,针刺可以通过增加各种细胞因子及营养因子的表达,促进神经的再生及修复。目的:观察电针联合骨髓基质细胞移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-03/2006-07在哈尔滨医科大学细胞生物实验室完成。材料:健康纯系SD大鼠80只,取8只用于骨髓基质细胞的分离培养,剩余72只随机分为4组:空白对照组、细胞移植组、电针组、联合组,18只/组。KWD-808II型脉冲电针仪由江苏武进第三无线电厂生产。方法:取体外分离培养的第3代骨髓基质细胞,移植前72h行BrdU标记,调整细胞浓度为1×1011L-1备用。4组大鼠均建立脊髓损伤模型,造模后细胞移植组将骨髓基质细胞悬液缓慢注入到脊髓损伤临近区域的灰白质交界处,总细胞数6×105个;空白对照组同法注射等量磷酸盐缓冲液;电针组于造模成功后24h采用脉冲电针仪进行夹脊电针治疗,在距损伤处上下端两个椎体的棘突间隙旁开距中线3.0~4.0mm处取穴,针刺20min,1次/d;联合组行骨髓基质细胞移植+夹脊电针治疗。主要观察指标:移植后3,7,14d,应用联合行为评分评估大鼠脊髓损伤后神经功能的改善状况;免疫双标法检测BrdU标记的骨髓基质细胞胶质纤维酸性蛋白、神经元烯醇化酶的表达。结果:损伤后3,7,14d与空白对照组比较,细胞移植组、电针组、联合组联合行为评分均有显著性差异(P〈0.05,0.05,0.01);联合组神经功能恢复情况明显优于细胞移植组、电针组(P〈0.05);而细胞移植组、电针组之间比较无明显差异(P〉0.05)。与空白对照组相比,细胞移植组、电针组损伤区脊髓结构相对较完整,联合组脊髓结构更加完整,骨髓基质细胞移植的组织内可见BrdU标记细胞在损伤区及其周边区明显聚集并存活;移植后14d细胞移植组神经元烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率分别分7.2%和1.5%,联合组阳性细胞率分别为7.9%和2.1%。结论:骨髓基质细胞移植后可在宿主体内存活,电针可以促进骨髓基质细胞向神经细胞的分化,电针与骨髓基质细胞移植联合应用可以明显改善脊髓损伤大鼠的运动及感觉功能。
  • 动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血8例 免费阅读 收费下载
  • 目的:总结分析动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血的效果。方法:南方医科大学附属南方医院儿科2005-01/2009-03行同胞骨髓+脐血混合移植的重型β-地中海贫血患儿8例,男5例,女3例,年龄4.0-7.5岁,按Pesaro标准进行地中海贫血临床分度,Ⅰ-Ⅱ度7例,Ⅲ度1例。供者年龄1-4岁,预处理前4d开始予以粒细胞集落刺激因子10μg/(kg·d),共5d,第5天抽取骨髓以及输注脐带血至患儿体内。结果:所有患儿均在移植后4周内恢复造血。8例患儿中有7例发生感染,4例患儿出现Ⅰ度肝静脉闭塞,2例患儿出现Ⅰ度急性移植物抗宿主病,1例患儿发生局限型慢性移植物抗宿主病。移植后32d因肺部感染和心脏衰竭1例死亡,7例存活。结论:动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血安全可靠,初步结果满意,但移植后存在一定的并发症需高度重视。
  • 骨髓间充质干细胞移植对家兔急性肺损伤的保护作用 免费阅读 收费下载
  • 背景:急性呼吸窘迫综合征重要病理改变是肺泡-毛细血管膜屏障的损伤,以及所导致肺泡渗出液中富含蛋白质的肺水肿。骨髓间充质干细胞能够继续分化和不断自我更新,并最终分化为多种类型细胞,这有可能为治疗肺损伤提供一个新的途径。目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对内毒素诱发急性肺损伤模型兔的保护作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-10/2008-01在唐都医院中心实验室完成。材料:家兔20只,2只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余18只随机分为3组:盐水对照组、肺损伤模型组、细胞移植组,6只/组。内毒素为Sigma公司产品。方法:Ficoll法分离培养兔骨髓间充质干细胞,传至第3代备用。肺损伤模型组、细胞移植组兔通过向气管内滴注内毒素建立急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征模型,造模成功30min后,细胞移植组经右侧颈静脉注入骨髓间充质干细胞悬浮液2mL(细胞数1×105),盐水对照组、肺损伤模型组同法给予等量生理盐水。主要观察指标:支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、肺组织湿干比及蛋白含量,肺组织病理变化。结果:湿干比值升高提示肺水肿的存在,中性粒细胞数量增加提示较重的炎性反应存在,蛋白含量升高提示肺泡-毛细血管内膜屏障受损。移植48h后与盐水对照组比较,肺损伤模型组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、蛋白含量均明显降低(P〈0.01),湿干比明显升高(P〈0.01);与肺损伤模型组比较,细胞移植组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、蛋白含量均明显升高(P〈0.01),湿干比明显降低(P〈0.01)。苏木精-伊红染色结果显示,盐水对照组肺泡组织结构正常,肺损伤模型组肺组织出现典型的急性肺损伤改变,细胞移植组肺组织病理变化较轻。结论:利用骨髓间充质干细胞移植可显著减轻内毒素诱导的急性肺损伤。
  • 膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子预防造血干细胞移植后出血性膀胱炎发生 免费阅读 收费下载
  • 背景:出血性膀胱炎是造血干细胞移植后常见并发症之一。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子除影响造血干/祖细胞的增殖和分化外,还能调节炎性反应中单核细胞、粒细胞、淋巴细胞以及内皮细胞的功能。目的:探讨膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对造血干细胞移植后出血性膀胱炎的预防作用。设计:病例分析。对象:中山大学附属中山医院2004-01/2006-08接受异基因造血干细胞移植的血液病患者15例作为常规治疗组,2006-09/2008-12接受异基因造血干细胞移植的血液病患者16例作为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组。方法:常规治疗组采用常规方法即美司钠、水化、碱化尿液预防出血性膀胱炎,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组在其基础上,在应用环磷酰胺前24h开始向膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,至环磷酰胺停用3d后拔除导尿管,用生理盐水冲洗膀胱后排空膀胱,然后向300μg粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子中加入生理盐水10mL、利多卡因5mL注入膀胱,保留60-120min。主要观察指标:出血性膀胱炎的发生及其与移植物抗宿主病的相关性,巨细胞病毒感染及泌尿系统感染的发生情况。结果:与常规治疗组比较,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组出血性膀胱炎发生率明显降低(χ2=4.39,P〈0.05),出血性膀胱炎平均持续时间、患者平均住院时间均明显缩短(t=3.97,P〈0.05;t=3.13,P〈0.05),Ⅲ度以上出血性膀胱炎发生率明显降低(χ2=5.04,P〈0.05)。出血性膀胱炎严重程度与移植物抗宿主病严重程度、持续时间有关(r=0.76)。与常规治疗组比较,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组巨细胞病毒感染率略微下降但无明显差异(χ2=0.28,P〉0.05),巨细胞病毒感染阳性患者Ⅲ度以上出血性膀胱炎发生率升高。与常规治疗组比较,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组泌尿系统感染发生率略微下降但无明显差异(χ2=0.28,P〉0.05)。结论:粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子膀胱内灌注耐受性好,临床取得了较好疗效,是预防造血干细胞移植后出血性膀胱炎的有效措施。
  • 骨髓间充质干细胞移植对兔急性心肌梗死后胶原重构的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究发现干细胞移植可明显改善心肌梗死后心功能,以往认为主要与干细胞分化为心肌细胞和促血管新生作用有关,近来研究显示旁分泌、抑制心室重构尤其是细胞外胶原重构对心功能的改善起重要作用。目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对兔急性心肌梗死后胶原重构的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/08在辽宁中医药大学针灸电生理实验室完成。材料:健康日本大耳白兔57只,购自辽宁中医药大学实验动物中心。方法:取2只兔用于制备骨髓间充质干细胞,移植前行BrdU标记。余55只兔取10只作为正常组,45只结扎冠状动脉左室支建立心肌梗死模型,共30只成功造模,随机分为模型组、盐水组、细胞移植组,10只/组。兔心肌梗死后7d,细胞移植组经耳缘静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1mL(2×106个细胞),盐水组注射1mL生理盐水,造模后饲养5周。主要观察指标:采用Masson三色染色法观察心肌间质纤维结构及测量胶原容积分数,免疫组化法测量Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。结果:细胞移植组心肌梗死区可见Brdu染色阳性细胞。细胞移植组梗死中心区和交界区内胶原纤维融合较少,排列有序;模型组和盐水组梗死中心区和交界区内胶原纤维斑块状融合明显,排列紊乱。心肌梗死5周后与正常组比较,模型组梗死区及梗死周围区胶原容积分数显著增加(P〈0.05),Ⅰ/Ⅲ型胶原比值显著下降(P〈0.05);与模型组比较,细胞移植组胶原容积分数、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值均显著下降(P〈0.05)。结论:静脉移植骨髓间充质干细胞可以在心肌梗死区定植,通过减少胶原形成、改善胶原结构来抑制心肌梗死后胶原重构。
  • 心肌梗死后骨髓造血干细胞在心肌梗死区的归巢 免费阅读 收费下载
  • 背景:有研究表明骨髓干细胞体外移植后,在心肌梗死区发现具有心肌细胞表型的幼稚细胞,相关学者认为该种细胞源于骨髓干细胞。目的:探讨心肌梗死后自体动员骨髓干细胞在心肌梗死区的归巢情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-02/2006-04在大连医科大学中日临床病理中心完成。材料:2000/2005大连医科大学病理学与法医学教研室尸检标本30例,正常心脏组15例,死因为机械性损伤或颅脑损伤,尸检心脏无异常发现;心肌梗死组15例,均有冠状动脉粥样硬化及不同程度冠脉管腔狭窄,心肌梗死发生后10d内死亡。方法:所有标本均在死后48h内进行尸检,左心室前壁、侧壁和后壁取材,制备组织切片。采用免疫组织化学方法检测造血干细胞表面标志物CD34、CD133及转化生长因子β在正常心肌、梗死心肌及梗死周围区域的表达。主要观察指标:CD34、CD133、转化生长因子β在不同部位的表达及其相关性。结果:CD34在梗死心肌处阳性表达率明显高于梗死周围区、正常心脏组织(P〈0.01);CD133、转化生长因子β在梗死心肌处阳性表达率均明显高于梗死周围区(P〈0.01),在正常心脏组织均呈阴性表达。CD34、CD133、转化生长因子β在梗死心肌及梗死周围区的表达呈明显相关性(P〈0.01)。结论:心肌梗死发生后,梗死区及梗死周围区出现骨髓造血干细胞的归巢。梗死区转化生长因子β的分泌增加为促进归巢干细胞的分化、形成新生血管及再生心肌提供了可能。
  • 骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭的效果评估 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前关于干细胞移植的疗效与分化机制尚未达成共识,但大量临床研究结果均显示干细胞移植可以改善心脏功能。目的:探讨自体骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭患者的效果。设计:病例分析。对象:河南省人民医院2003/2008收治的慢性心力衰竭患者80例,分为2组:骨髓细胞移植组48例,标准药物治疗组32例,2组患者在性别、年龄、接受标准药物治疗、移植前超声心动图、血浆脑钠肽和心肌灌注显像检测结果等基线资料方面比较无明显差异(P〉0.05),具有可比性。方法:在细胞移植前和移植后1年随访期间,2组患者均根据临床需要给予标准的药物治疗。骨髓细胞移植组患者在标准药物治疗的基础上,将自体骨髓单个核细胞悬液10mL经造影导管缓慢注入冠状动脉内,细胞数(3.1±1.6)×10^8。主要观察指标:采用超声仪测定心功能指标的变化,通过双抗夹心免疫荧光法全定量测定血浆脑钠肽含量变化,应用单光子放射计算机断层显像术检测心肌灌注缺损区面积。结果:2组患者均完成1年随访,移植前后无不良反应和并发症发生。①与移植前比较,1年后骨髓细胞移植组左室收缩末容积明显降低(P〈0.05),左室射血分数明显提高(P〈0.05);标准药物治疗组此2项指标无明显变化(P〉0.05)。与标准药物治疗组比较,1年后骨髓细胞移植组左室收缩末容积、左室射血分数均有明显改善(P〈0.05)。②与移植前比较,2组患者血浆脑钠肽含量均明显降低(P〈0.05或0.01),心肌灌注缺损面积均明显缩小(P〈0.05或0.01),且骨髓细胞移植组变化幅度大于标准药物治疗组(P〈0.05)。结论:自体骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭安全可行,移植后1年内能明显改善心功能及心肌血流灌注情况。
  • 脐血血管内皮祖细胞移植对心肌梗死血管形成的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:人体内存在一种能以血管发生方式形成新生血管的内皮祖细胞,更新了传统意义上的出生后血管生成、血管损伤修复的理论。目的:观察犬脐血血管内皮祖细胞移植对梗死心肌血管形成的影响。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2006-05/2007-03在新华医院实验中心完成。材料:接近足月的妊娠杂种犬1只,用于制备脐血血管内皮祖细胞;成年犬36只,随机分为细胞移植组、模型对照组,18只/组。方法:2组犬均于冠状动脉前降支第1对角支分出后结扎建立急性心肌梗死模型。细胞移植组向冠状动脉内注射含5×10^6个血管内皮祖细胞(经BrdU标记)的生理盐水2mL,模型对照组同法注射单纯等量生理盐水。移植后1,4,8周处死取材。主要观察指标:心肌标本苏木精-伊红染色确认梗死模型,BrdU免疫组化染色观察心肌血管新生情况,vW因子染色观察梗死心肌血管数。结果:心肌梗死区可见大量的瘢痕组织、成纤维细胞以及小血管形成。细胞移植组梗死心肌区小血管上可见部分细胞核内有棕黄色颗粒,BrdU呈阳性表达;模型对照组无明显新生血管。细胞移植组在心肌缺血区和梗死区血管内皮细胞的胞浆内有棕黄色颗粒,vW因子呈阳性表达;模型对照组不表达vW因子。心肌梗死后第1,4,8周,细胞移植组和模型对照组的心肌缺血区、梗死区的血管数均无明显差异(P〉0.05)。结论:犬脐血血管内皮祖细胞移植至梗死心肌后可参与血管形成,但尚不能够促进心肌的血管再生。
  • 基质细胞来源因子1及其受体CXCR4参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区的迁移 免费阅读 收费下载
  • 背景:骨髓基质细胞具有体内、外迁移特性,但目前关于其迁移的具体机制还不十分清楚。目的:探讨基质细胞来源因子1及其受体CXCR4在骨髓基质细胞体内、外迁移中的作用。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2007-03/06在新加坡国立大学解剖系完成。材料:清洁级Wistar新生大鼠1只,用于骨髓基质细胞培养。清洁级成年Wistar大鼠40只,随机分为损伤模型组、假手术组,20只/组。方法:骨髓基质细胞体外趋化实验在48孔Boyden小室上进行,取25μL基质细胞来源因子1,分别以5,50,500μg/L质量浓度加到趋化板的下层,以8μm孔径的聚碳酸酯膜覆盖;并设立空白对照,单纯添加DMEM条件培养基。以含牛血清白蛋白的DMEM条件培养基调整细胞浓度至1.5×10^9L-1,50μL细胞悬液加到Boyden小室上层,37℃、CO2培养箱培养10h。损伤模型组大鼠制备脊髓全横断损伤,假手术组大鼠只打开椎板。脊髓全横断后1h,将5-(6-)羟基荧光素双乙酸琥珀酰亚胺酯荧光标记的骨髓基质细胞悬液1.0mL(1×10^9L-1)经颈内静脉注入体内。主要观察指标:免疫荧光组化染色观察骨髓基质细胞趋化因子受体CXCR4的表达,基质细胞来源因子1体外对骨髓基质细胞的趋化迁移作用,Real-timePCR定量检测脊髓损伤区基质细胞来源因子1RNA的表达,荧光显微镜下观察骨髓基质细胞向脊髓损伤区的体内迁移。结果:纯化的骨髓基质细胞呈CXCR4阳性。与空白对照比较,5,50,500μg/L基质细胞来源因子1均可明显促进骨髓基质细胞的体外趋化迁移(P〈0.05),且质量浓度为50μg/L时趋化作用达峰值。与假手术组比较,损伤模型组造模后7d基质细胞来源因子1RNA的表达明显升高(P〈0.05),14d时恢复至正常水平。细胞注射2周后与假手术组比较,损伤模型组损伤区迁移细胞数明显增加(P〈0.05)。结论:基质细胞来源因子1体内、外可趋化骨髓基质细胞迁移,基质细胞来源因子1及其受体CXCR4参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区的迁移。
  • 不同种植密度对大鼠脂肪间充质干细胞三维培养下成软骨能力的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:软骨组织工程要求植入的软骨细胞在三维支架材料中能够合成与软骨相同的软骨基质,而植入密度是成功的关键点之一。目的:探讨壳聚糖-胶原-硫酸软骨素支架上不同种植密度对大鼠脂肪间充质干细胞成软骨能力的影响。设计、时间及地点:细胞-支架学体外观察,于2007-11/2008-07在中国医科大学细胞生物实验室完成。材料:清洁级雄性SD大鼠6只,由中国医科大学实验动物中心提供。方法:室温下以乙酸为溶剂的5g/LⅠ型胶原溶液与20g/L壳聚糖按7∶3体积比置于预冷的模具中混合,冷冻干燥后将支架切成5mm×5mm×2mm,浸入含20g/L硫酸软骨素的乙醇中室温交联,双蒸水冲洗至中性,再次冷冻干燥即为壳聚糖-胶原-硫酸软骨素支架。切取大鼠腹股沟脂肪组织,通过胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶消化后得到脂肪间充质干细胞。将制备的壳聚糖-胶原-硫酸软骨素支架分为3组,分别调整第3代细胞密度为2×109L-1,2×1010L-1,2×1011L-1,吸取细胞悬液50μL均匀的种植于每个支架上,加入成软骨诱导培养基培养3周。主要观察指标:取样制成切片进行苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色,RT-PCR检测软骨特异性基因的表达。结果:诱导培养3周后,各组细胞在支架中生长黏附良好,且高种植密度2×1011L-1组细胞排列紧密,有较多的基质形成,并有软骨陷窝样结构;各组Ⅱ型胶原均呈阳性表达,并随细胞种植密度的升高呈递增趋势。RT-PCR结果显示,随着细胞种植密度的升高,蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达逐渐增强,而Ⅹ型胶原mRNA的表达逐渐下降。结论:壳聚糖-胶原-硫酸软骨素复合支架材料可为脂肪间充质干细胞生长分化及组织形成提供一个良好的环境,2×10^11L-1高密度种植有利于脂肪间充质干细胞的成软骨分化。
  • 持续性压力培养环境对兔骨髓基质干细胞增殖的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:骨髓基质干细胞来源的成骨细胞是骨髓腔内主要的受力细胞,在人工关节置换病例中,其生命活动状况与假体传导压力有密切关系。目的:观察持续性压力培养环境对兔骨髓基质干细胞增殖的影响,揭示持续压力致假体松动下沉进展及其置换后活动影响的生物学机制。设计、时间及地点:随机分组设计,细胞学体外观察,于2004-02/2007-10在解放军第四军医大学骨科研究所完成。材料:出生1个月的新西兰幼兔1只,体质量0.5kg,取其骨髓基质干细胞用于实验。方法:传代培养兔骨髓基质干细胞,将生长良好的第3代骨髓基质干细胞按1×104个/孔随机接种于7块24孔培养板,14h后细胞完全贴壁,换新鲜含体积分数为10%胎牛血清的DMEM。实验随机将4块培养板分为4组:对照组不予加压,20kPa持续压力组,60kPa持续压力组,100kPa持续压力组分别在规定的时间内每天施以20,60,100kPa的持续3h压力。主要观察指标:四甲基偶氮唑盐法检测培养1,3,5,7d各组骨髓基质干细胞的吸光度值变化。结果:除培养第1天外,第3,5,7天各压力组骨髓基质干细胞的吸光度值均低于对照组(P〈0.01)。其中第3天20kPa持续压力组与60kPa持续压力组吸光度值差异无显著性意义(P〉0.05),但均高于100kPa持续压力组(P〈0.05)。第5天不同持续压力组吸光度值两两比较差异具有显著性意义(P〈0.05),压力越高,吸光度值越低。第7天100kPa持续压力组吸光度值低于压力20kPa持续压力组(P〈0.05)。结论:关节置换后早期患者不宜过早下地,否则将产生持续性应力,可以引起骨髓腔内骨髓基质干细胞的抑止,从而不利于骨质愈合,容易产生假体下沉和松动。
  • 第3~12周人胚肝甲胎蛋白及细胞角蛋白19和c-Met的时空表达 免费阅读 收费下载
  • 背景:现阶段对于肝干细胞在胚胎肝发育过程中的形态学特征、时空分布、分化过程的报道很少。目的:以甲胎蛋白、细胞角蛋白19、c-Met作为标志物,观察其在不同发育阶段肝干细胞中的时空分布。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-06/2006-12在潍坊医学院中心实验室完成。材料:40例胚胎标本取自3个月内的流产胎儿,由潍坊医学院附属医院提供。方法:收集流产胚胎,30min内制作切片,显微镜下根据胚层形成情况、体节数目及器官发育状况确定胎龄。选择胎龄第3-12周的标本切片,每隔10张抽出1张切片,行免疫组织化学染色。主要观察指标:第3-12周胚胎肝干细胞甲胎蛋白、c-Met、细胞角蛋白19的表达。结果:第3-5周甲胎蛋白、c-Met呈阳性反应,提示为肝干细胞;第10-12周甲胎蛋白、c-Met阳性细胞主要分布于汇管区周围,提示此时肝干细胞主要局限于汇管区周围的肝索内,与成年肝中卵圆细胞(成年肝干细胞)的分布一致。细胞角蛋白19阳性反应在第7周时开始出现;第10-11周时细胞角蛋白19阳性反应主要位于汇管区附近的肝索细胞和胆管板细胞及胆管上皮细胞;第12周时细胞角蛋白19阳性信号仅见于胆管板和胆管上皮细胞。此时所有的胆管板细胞及胆管上皮细胞均呈甲胎蛋白、c-Met和细胞角蛋白19阳性。结论:细胞角蛋白19在肝干细胞中无表达,仅在胆管上皮细胞及其祖细胞中有表达,可能不适合作为肝干细胞的标志物。所有的胆管板及胆管上皮细胞均呈甲胎蛋白、c-Met、细胞角蛋白19阳性反应,推测甲胎蛋白+/c-Met+/细胞角蛋白19+的细胞可能为胆管祖细胞。
  • 人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的体外调控 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前肝纤维化尚没有公认的特效疗法,近年来骨髓间质干细胞应用于肝纤维化的治疗已取得一定效果,但具体机制仍不明确。目的:体外探讨人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的调控作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在中山大学干细胞与组织工程研究中心、中山大学第三附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于青年健康志愿者髂骨,人肝星状细胞购自中山大学实验动物中心,人正常肝细胞系L-O2购自中山大学实验动物中心。方法:将分离提纯的人骨髓间质干细胞与肝星状细胞在6孔Transwell板上建立上下共培养体系,接种密度均为2×104cells/well。另设L-O2代替人骨髓间质干细胞作为阴性对照,单纯培养的肝星状细胞为空白对照,培养72h。主要观察指标:肝星状细胞形态及免疫细胞化学染色结果,流式细胞仪检测肝星状细胞凋亡情况,Westernblot法检测肝星状细胞活化标志α-肌动蛋白的表达。结果:倒置显微镜下活化的肝星状细胞呈扁平状,胞浆内缺乏脂肪滴,α-肌动蛋白位于肝星状细胞胞质内,呈高张力纤维状分布。与L-02+肝星状细胞组、单纯肝星状细胞组比较,骨髓间质干细胞+肝星状细胞共培养组的肝星状细胞凋亡率明显升高(P〈0.05),α-肌动蛋白表达水平明显下调。结论:人骨髓间质干细胞可抑制肝星状细胞活化,促进其凋亡,这可能是骨髓间质干细胞抗肝纤维化的作用机制。
  • 骨髓间充质干细胞体外诱导培养后的电生理特性 免费阅读 收费下载
  • 背景:骨髓间充质干细胞在宿主心肌中能够生长,并可在心肌环境诱导下分化,改善心脏功能,但目前骨髓干细胞分化过程中生物学特性尚不甚清楚。目的:观察经5-氮胞苷诱导培养后,骨髓间充质干细胞体外缝隙连接蛋白43的表达及电生理特性变化。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-07/2009-02在河北省人民医院心脏中心完成。材料:2月龄雄性冀中白猪24只,购自河北医科大学实验动物中心。方法:无菌条件下抽取猪双侧股骨骨髓,Percoll密度梯度法体外分离培养骨髓间充质干细胞,传至第2代后,加入10μmol/L的5-氮胞苷,24h后更换为不含诱导剂的DMEM培养基继续培养,分别于诱导后1,2,3周进行指标检测;并设立未经5-氮胞苷诱导的对照组。实验猪抽取骨髓后麻醉,取心室肌,组织块酶消化法分离培养正常心室肌细胞。主要观察指标:ABC法免疫细胞化学染色检测缝隙连接蛋白43的表达,以膜片钳全细胞记录模式测定Ito电流密度及动作电位。结果:5-氮胞苷诱导后1,2周,部分骨髓间充质干细胞表达缝隙连接蛋白43,呈核周散在分布的棕黄色颗粒;诱导后3周缝隙连接蛋白43阳性率为95%,细胞密度大的区域出现类似正常心肌的闰盘结构。在+80mV时与正常心室肌细胞比较,未诱导对照组及诱导1,2周的骨髓间充质干细胞Ito电流密度均明显降低(P〈0.05),诱导3周的骨髓间充质干细胞Ito电流密度升高至正常心室肌细胞水平(P〉0.05)。5-氮胞苷诱导1,2周的骨髓间充质干细胞未能检测到动作电位,诱导3周后可检测到动作电位,与正常心室肌细胞相似。结论:骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷体外诱导3周后,与正常心肌具有相似的缝隙连接蛋白43表达能力及电生理特性。
  • 胶质细胞系源性神经营养因子修饰脂肪间质干细胞与共培养多巴胺能神经元的存活 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前尚未见脂肪间质干细胞体外诱导分化成多巴胺能神经元的报道,且有关脂肪间质干细胞维持多巴胺能神经元存活的机制也缺乏实验证据。目的:观察腺病毒介导胶质细胞系源性神经营养因子基因修饰的脂肪间质干细胞对共培养条件下多巴胺能神经元存活的影响。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2007-03/12在吉林省耳鼻咽喉研究所和教育部吉林大学人兽共患病重点实验室完成。材料:3周龄Wistar大鼠、孕14 d Wistar大鼠由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。方法:采用pAdTrackCV和pAdEasy-1系统构建重组胶质细胞系源性神经营养因子腺病毒。取孕14d大鼠,采用酶消化法培养中脑多巴胺能神经元。取Wistar大鼠腹股沟处脂肪,酶消化法分离培养脂肪间质干细胞,体外培养至第3代当细胞生长至60%融合时,以病毒滴度为1×109vp/mL的胶质细胞系源性神经营养因子重组腺病毒作用细胞1h后,转移到生长培养基继续培养,通过ELISA法检测培养上清胶质细胞系源性神经营养因子水平。设立3组:Ad-GDNF转染共培养组、Ad-GFP转染共培养组分别在脂肪间质干细胞经相应病毒转染24h后加入分离的多巴胺能神经元,继续培养7d;单纯多巴胺能神经元培养组不加入脂肪间质干细胞。主要观察指标:采用免疫荧光技术检测共培养环境对多巴胺能神经元存活的影响,共培养环境对胶质细胞系源性神经营养因子修饰脂肪间质干细胞分化的影响。结果:脂肪间质干细胞在pAd-GDNF转染24h后细胞上清中出现胶质细胞系源性神经营养因子蛋白,72h达高峰,pAd-GDNF对脂肪间质干细胞的转染效率约为80%。酪氨酸羟化酶免疫荧光染色结果发现,Ad-GDNF转染共培养组多巴胺能神经元存活率明显高于单纯多巴胺能神经元培养组、Ad-GFP转染共培养组(55%,15%,25%,P〈0.01)。对共培养7d的细胞进行酪氨酸羟化酶免疫荧光染色,分别以波长为488nm和563nm进行单通道扫描,未发现同时表达绿色荧光蛋白和酪氨酸羟化酶的细胞,表明此共培养环境可能不具备诱导脂肪间质干细胞分化为多巴胺能神经元的条件。结论:胶质细胞系源性神经营养因子基因修饰的脂肪间质干细胞与胚胎中脑分离出的多巴胺能神经元共培养,能够维持和促进多巴胺能神经元的存活,但可能不具备诱导脂肪间质干细胞分化为多巴胺能神经元的作用。
  • 外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞增殖的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:肌源性干细胞在体外培养过程中存在纯化、扩增、定向分化等难题,碱性成纤维细胞生长因子作为生物活性因子的一员,因其生物活性的多效性而备受关注。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞体外增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-04/07在沈阳医学院完成。材料:健康雄性Wister大鼠5只,由沈阳医学院实验动物中心提供。碱性成纤维细胞生长因子为珠海生物制品有限公司产品。方法:无菌条件下取大鼠左前肢肱三头肌,采用酶消化法分离肌源性干细胞,应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化。取第2代肌源性干细胞,分别用终浓度为6.25,12.50,25.00,50.00,100.00μg/L碱性成纤维细胞生长因子进行干预;以单纯加入200μL生长培养基作为空白对照组,以加入200μL生长培养基+肌源性干细胞作为阴性对照组。分别于培养24,48,72,96h加入MTT溶液。主要观察指标:免疫细胞化学法鉴定大鼠肌源性干细胞,MTT比色法检测细胞增殖情况。结果:肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应,少数呈Desmin阳性反应。①不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞的促增殖效应:与阴性对照组比较,各浓度碱性成纤维细胞生长因子组对肌源性干细胞均有明显的促增殖效应(P〈0.05);浓度为6.25~50.00μg/L时促增殖作用随其质量浓度升高而显著增强(P〈0.01),至50.00μg/L时其促增殖作用接近顶峰。②碱性成纤维细胞生长因子在不同培养时间点对肌源性干细胞的促增殖效应:随培养时间的延长肌源性干细胞明显增殖,与阴性对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组出现显著促增殖效应(P〈0.01)的时间为培养96h。结论:碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的大鼠肌源性干细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性增加,50.00μg/L与96h为较佳的体外培养质量浓度和时间。
  • 血管内皮生长因子在海马伞-穹窿横断后隔区神经干细胞增殖分化中的作用 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前已经证实成熟脑中存在神经干细胞,如何定向诱导其分化为某种特异性神经元从而替代损伤神经元有效治疗神经系统疾病非常关键。目的:探讨血管内皮生长因子对体内神经干细胞增殖和分化的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-06在中南大学湘雅医学院人体解剖学及神经生物学系完成。材料:健康雄性SD大鼠24只,随机分为模型对照组、抗体处理组、假手术组,8只/组。方法:模型对照组、抗体处理组大鼠建立海马伞-穹窿横断模型,假手术组大鼠仅做开颅手术。造模后即刻,抗体处理组吸取抗血管内皮生长因子抗体4μL,于损伤侧前囟+0.6mm,外侧+0.6mm,腹侧-5.5mm插入进针;模型对照组、假手术组注射等量生理盐水。主要观察指标:免疫组织化学法观察隔区血管内皮生长因子、巢蛋白、增殖细胞核抗原的表达,计算增殖细胞核抗原增殖指数。结果:与假手术组比较,模型对照组海马伞-穹窿横断后隔区血管内皮生长因子及巢蛋白的表达强度均明显增高(P〈0.01);与模型对照组比较,抗体处理组巢蛋白表达强度明显降低(P〈0.01)。假手术组增殖细胞核抗原在神经元胞浆内呈弥漫表达,表现为非特异性染色,增殖指数几乎为0;模型对照组出现少量增殖细胞核抗原阳性的神经元,增殖指数为1%;经抗体处理后增殖指数又降为0。结论:隔区损伤后血管内皮生长因子表达增加的同时确实有神经干细胞的出现。血管内皮生长因子的高表达可能是神经干细胞生成与分化的促进因素,是脑损伤后自我修复的基础。
  • 无血清悬浮培养肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达 免费阅读 收费下载
  • 背景:有研究表明端粒酶活性抑制剂不仅能抑制或杀死肾癌细胞,而且对决定肾癌发生发展的干细胞也有作用。目的:观察无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达情况,并与含血清培养的肾癌细胞作比较。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-02在江苏大学完成。材料:手术切除肾癌周围新鲜的正常肾组织标本由江苏大学附属医院提供,肾癌干细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。方法:取处于对数生长期的肾癌干细胞OS-RC-2,胰酶消化后离心弃上清,悬浮于含EGF、bFGF的DMEM/F12无血清培养基中,调整细胞浓度为2×10^8L-1进行接种,在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中悬浮培养。以含血清培养的肾癌细胞及正常肾组织细胞作为对照。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测肾癌干细胞CD133及CD34的表达,采用TRAP实时定量检测肾癌干细胞端粒酶活性。结果:肾癌干细胞接种于无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中;2d后有细胞球生成,每个细胞球含3~8个细胞,折光性较强;7d后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形。无血清悬浮培养的肾癌干细胞球CD133+CD34-率明显高于含血清培养的肾癌细胞CD133+CD34-率,正常肾组织细胞未测出有CD133及CD34的表达,3者间比较差异有显著性意义(F=328.25,P〈0.05)。肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞(F=278.74,P〈0.05),而前2者间端粒酶活性无明显差异。结论:与含血清培养的肾癌细胞相比,无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133呈明显高表达,二者端粒酶活性均高于正常肾组织。
  • 兔外周血间充质干细胞的体外分离培养及诱导成骨 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究证明外周血中存在间充质干细胞,但含量极少。目的:拟从兔外周血中提取间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在山东省立医院中心实验室完成。材料:新西兰大白兔6只,购自山东省农科院。α-MEM培养基、L-DMEM培养基为Hyclone公司产品。方法:每隔2d从兔背部不同部位切去3cm×3cm的全层皮肤(保留背部肌层),所切皮肤做原位移植后包扎,每只兔连续创伤4次。分别于创伤前及末次创伤1周后从股静脉取外周血,采用密度梯度离心法获取间充质干细胞,设立2组,分别加入含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养基或L-DMEM培养基。细胞传至第2代以1×10^5/cm2密度接种于12孔板,加入含成骨诱导剂的H-DMEM培养液进行成骨诱导。主要观察指标:创伤前后细胞形态观察,成纤维样细胞集落形成率,成骨诱导效果。结果:创伤前所获得的细胞首次换液后,未见有梭形细胞贴壁;创伤后所获得的细胞接种24h即可见有短梭形及多角形细胞贴壁,五六天后出现细胞集落。与L-DMEM培养基组比较,α-MEM培养基组外周血成纤维样细胞集落形成率明显升高(P〈0.05)。外周血间充质干细胞成骨诱导后,呈梭形、三角形或多角形,有突起,可见两三个核仁和细胞分裂相,增殖速度缓慢,诱导7d后碱性磷酸酶阳性率达80%以上,诱导21d后茜素红染色形成钙结节。结论:皮肤损伤刺激后可成功从兔外周血中获取间充质干细胞,且具备成骨分化特性,α-MEM培养基较L-DMEM培养基更适合外周血间充质干细胞的体外生长。
  • EpCAMhigh/CD44+结直肠癌干细胞的形态特征及分布 免费阅读 收费下载
  • 背景:肿瘤干细胞已成为生命科学研究领域的热点问题,EpCAMhigh/CD44+结直肠癌干细胞的发现使对肿瘤干细胞形态特征及分布的观察成为可能。目的:观察结直肠癌干细胞数量、位置、分布方式及苏木精-伊红染色形态。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-03/08在解放军兰州军区兰州总医院病理科完成。材料:67例结直肠癌石蜡包埋标本取自解放军兰州军区总医院病理2005/2007外检档案。所有标本术前均未行放化疗。患者中男27例,女40例,年龄29-90岁。方法:根据结直肠癌干细胞特异性表面标记EpCAM和CD44,标记石蜡包埋结直肠癌标本中的肿瘤干细胞,应用常规苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及免疫组织化学双重染色方法,定位EpCAM和CD44双阳性细胞,并在苏木精-伊红染色切片的对应位置上观察其形态特征。主要观察指标:EpCAM和CD44双阳性细胞的数量、位置、分布方式及苏木精-伊红染色形态。结果:双阳性细胞的数量占肿瘤细胞的0.1%-30.0%,它们沿腺管样结构的基底侧呈局灶状或散在分布;细胞呈卵圆形或立方状,胞浆稀少,胞核大小较一致,均质深染,呈卵圆形或高柱状;且其数量与结直肠癌的分化程度呈负相关,分化越低,数量越多。结论:肿瘤干细胞是肿瘤发生发展、转移、复发及耐药的根源,观察结直肠癌干细胞的数量、位置、分布方式、苏木精-伊红染色形态,并分析其与结直肠癌病理参数的关系,可为结直肠癌的病理诊断和分期、预后评估及临床治疗提供参考。
  • 深Ⅱ度烧伤创面磨痂治疗后残留皮肤组织中表皮干细胞标记物角化蛋白19的表达 免费阅读 收费下载
  • 背景:大面积烧伤往往需要削痂清除痂皮,但削痂手术往往会导致人为因素除去过多的残留再生皮肤组织。目的:观察磨痂治疗深Ⅱ度烧伤创面对残留皮肤组织中表皮干细胞标记物角化蛋白19表达的影响。设计、时间及地点:随机分组对比观察,于2002-10/2004-01在广西医科大学完成。对象:烧伤整形外热烧伤科患者40例,年龄18-37岁,平均烧伤面积为15%-45%,深Ⅱ度烧伤面积为15%-30%。随机分组方法分为磨痂组(n=20)、削痂组(n=20)。方法:磨痂组采用电动磨痂仪对创面进行磨痂,由浅入深磨去坏死组织,至创面基底呈现红色充血,有珠状的小出血点为止。削痂组采用滚轴削痂刀对创面进行削痂,削至创面基底呈瓷白色、组织致密,湿润面有光泽,无网状血管栓塞和呈灰暗棕色的无光泽组织,放松止血带后可见密集点状出血较均匀,但有时因操作原因削痂过深,基底露出脂肪组织。两组创面术后用辐照猪皮覆盖。主要观察指标:取术前、术后小块创面组织以免疫组织化学SP法检测标皮肤再生组织中标记物角化蛋白19的表达,在100倍光学显微镜下,任意选取5个视野计数细胞团的表达数;观察两组创面愈合时间,记录超过4周不愈合的肉芽创面,需要再次手术植皮修复创面。结果:磨痂保留了较多的真皮组织,毛囊,汗腺,皮脂腺等皮肤附件。削痂后创面基底组织有薄层网状组织残留及部分毛囊及汗腺,有些标本视野中可见无真皮组织,为脂肪组织。细胞团的表达数比较结果显示,两组前及术后创面均有创面残留皮肤组织中标记物角化蛋白19表达,磨痂组术前、术后数量无明显变化(P〉0.05),削痂组术后较术前数量减少(P〈0.05);磨痂组创面较削痂组提前愈合(P〈0.05)。需要手术植皮创面磨痂组2处,削痂组8处(P〈0.05)。结论:应用磨痂术治疗烧伤深Ⅱ度创面能有效掌握磨痂深度,对组织损伤小,与削痂比较保留更多的再生皮肤组织,通过表皮干细胞的再生,利于创面再上皮修复,缩短创面愈合时间。
  • 人乳牙牙髓基质细胞的分离培养与牙再生能力 免费阅读 收费下载
  • 背景:在牙组织工程和牙再生的研究中,寻找合适的种子细胞是当前的中心和热点。目的:分离培养儿童乳牙牙髓基质细胞,比较研究矿化诱导前后牙本质涎磷蛋白表达的差异。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-12/2007-12在大庆油田总医院中心实验室完成。对象:选择8-10岁儿童8名,男4名,女4名,排除传染病及内分泌疾病史,乳牙排除牙体牙髓牙周疾病。牙髓取材于颌外门诊拔除的滞留乳磨牙。方法:通过组织块贴壁法获得乳牙牙髓基质细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基中原代培养14d,消化传代后用添加有10-8mol/L地塞米松,50μmol/L左旋抗坏血酸,10nmol/L维生素D3,10mmol/Lβ-磷酸甘油钠的DMEM/F12培养基诱导培养14d,用不含添加成分的完全DMEM培养基培养作对照。主要观察指标:显微镜下观察细胞形态变化和生长规律。免疫细胞化学染色比较诱导前后牙本质涎磷蛋白的表达差异。结果:乳牙牙髓基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,经矿化诱导14d后多数细胞由梭形转变成多角形和柱型,胞核大而圆,80%以上细胞的细胞质牙本质涎磷蛋白表达阳性。而未经诱导的细胞仍为梭形,仅有2%的细胞牙本质涎磷蛋白染色呈阳性。结论:乳牙牙髓基质细胞经矿化诱导培养后具有向成牙本质细胞分化的潜能,可以尝试作为牙再生研究新的种子细胞来源。
  • 体外诱导脐血间充质干细胞分化为成骨细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:脐血间充质干细胞在特定的诱导条件下可以分化成为多种类型的细胞,易于体外培养扩增,但脐血中间充质干细胞的建立时间长、频率低是其主要缺点。目的:体外分离培养脐血间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞方向分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-01在青岛大学医学院试验室完成。材料:脐血取自足月正常分娩的产妇,由青岛市立医院妇产科提供。方法:采用percoll密度梯度法体外分离培养人脐血间充质干细胞,当细胞汇合90%单层细胞后胰蛋白酶消化传代。取第3代脐血间充质干细胞,以1×10^6密度接种,当细胞达50%-60%融合时,加入含0.1μmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μmol/L维生素C的DMEM成骨细胞诱导液;对照组加入普通低糖DMEM培养液培养。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长及增殖情况,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,细胞生长曲线分析,透射电镜观察细胞超微结构,vonKossa染色和碱性磷酸酶染色检测向成骨细胞诱导分化情况。结果:原代培养的脐血间充质干细胞形态与骨髓间充质干细胞相似,传代后细胞形态均一,呈梭形旋涡状排列。第3代脐血间充质干细胞高表达CD29,CD44,CD13,不表达CD34。生长潜伏期为两三天,第三四天进入对数增殖期,1个月后进入平台期。胞核呈类圆形或不规则形,核膜清晰,有一两个核仁,染色质较粗,胞质中细胞器丰富,细胞表面有微绒毛。第3代脐血间充质干细胞成骨诱导7d后逐渐汇合呈铺路石状,14d后von Kossa染色出现钙化结节,碱性磷酸酶染色呈阳性;对照组未见钙化结节,碱性磷酸酶染色呈阴性。结论:采用percoll密度梯度法可成功从人脐血中分离出间充质干细胞,并在体外诱导分化为成骨细胞。
  • 人脐血间充质干细胞体外分离培养条件的优化及其鉴定 免费阅读 收费下载
  • 背景:相对于骨髓间充质干细胞来说,脐血间充质干细胞是一种较为理想的新的组织工程种子细胞来源,但其培养成功率较低。目的:通过对培养基的选择、离心速度及时间、接种密度、生长因子的选择、首次换液时间等条件进行优化,拟建立一种稳定可靠的人脐血间充质干细胞的体外分离培养方法。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/10在白求恩国际和平医院输血科完成。材料:健康足月剖宫产新生儿脐带血20份,由白求恩国际和平医院干细胞中心提供,产妇及其家属均知情同意。方法:无菌条件下采集脐血,采用密度梯度离心法(1500r/min离心15min)结合直接贴壁法体外分离脐血间充质干细胞,加入含体积分数为10%人脐带血血清、5μg/LGM-CSF、15μg/L白细胞介素3的DMEM/F12培养基,调整细胞密度为1×1010L-1接种于人脐带血血清包被过的塑料培养瓶中,置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度环境下培养,3d后首次换液,去除未贴壁细胞,以后每隔24h换液1次。当培养瓶中的细胞生长到80%融合时,胰酶-EDTA混合液消化传代。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞免疫表型。结果:24h后可见有少量细胞贴壁,48h后贴壁细胞增多,并出现少量单极梭形细胞,7d后可见细胞形成集落,培养两三周形成平行排列、辐射状或漩涡状细胞界限不清楚的成纤维样细胞,且80%-90%呈现融合。第2代细胞接种后12h开始贴壁,10d即可达80%-90%融合。流式细胞仪分析显示,此类细胞稳定地表达相关抗原标记CD29及CD44,但不表达造血细胞系表面标记CD34。结论:实验在体外改良培养条件下成功分离出人脐血间充质干细胞,培养周期较短,细胞纯度较高,贴壁细胞稳定表达间充质干细胞表面相关抗原。
  • 联合应用碱性成纤维细胞生长因子和脑源性神经营养因子对成年大鼠脑海马神经干细胞分化为神经元的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:调控神经干细胞分化的微环境因素很多,数种因素可以不同程度地刺激神经干细胞向神经元分化,如何使神经干细胞更有效地分化为神经元尤为关键。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子与脑源性神经营养因子联合应用对成年大鼠脑海马神经干细胞分化为神经元的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察.于2008-05在中国医科大学神经解剖研究室完成。材料:清洁级雄性SD大鼠3只,由中国医科大学实验动物部提供。方法:无菌条件下分离大鼠脑海马组织,胰蛋白酶消化后采用无血清培养技术体外培养神经干细胞,传至第4代克隆球直径约为200um时,滴加含B27、表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12进行单细胞克隆培养。传代的神经干细胞分成4组:空白对照组加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养液,碱性成纤维细胞生长因子组、脑源性神经营养因子组、联合组分别在空白对照组培养液的基础上加入10μg/L碱性成纤维细胞生长因子、200μg/L脑源性神经营养因子、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子+200μg/L脑源性神经营养因子,培养1周。主要观察指标:免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞,检测神经干细胞分化为神经元的比例。结果:单细胞克隆培养后,克隆球细胞表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达。与空白对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组、脑源性神经营养因子组、联合组神经干细胞分化为神经元的比例均明显提高(t=3.409-7.558,P〈0.05),且联合组升高幅度尤为显著。结论:适宜浓度的碱性成纤维细胞生长因子和脑源性神经营养因子联合应用,比其单独应用具有更强的促神经干细胞向神经元分化的作用。
  • 脐血干细胞的实验与临床应用 免费阅读 收费下载
  • 大量实验已证实脐带血造血干细胞比骨髓和动员的外周血来源的造血干细胞更原始、更具有自我更新、增殖分化和体外扩增潜能。脐带血干细胞的保存及脐带血移植等临床应用均取得了显著的进展,但也面临许多问题。文章对脐带血中存在的多种干/祖细胞的生物学特性、干细胞的增殖、分化,脐带血库建设及在神经科的临床应用进行探讨,从而寻找解决造血重建迟缓和排斥率高等问题的有效途径。
  • 流式细胞术及其在细胞凋亡检测中的应用 免费阅读 收费下载
  • 流式细胞术是采用流式细胞仪对单个细胞或其他生物微粒进行快速定性、定量分析与分选的一门技术。它不仅快速、灵敏和准确,而且还具有客观、直接和同时进行多参数检测的优点。细胞在凋亡时产生的一系列形态学、生物化学及分子生物学性质的变化,包括细胞皱缩,核染色质凝聚,细胞膜通透性改变,诱导蛋白酶凋亡分子激活,线粒体跨膜电位降低,膜磷酯酰丝氨酸外化,胞质Ca2+浓度升高,DNA片段化及含量变化等特点,进行定性、定量测试分析,从而实现对细胞凋亡的准确测定。
  • 成体骨髓细胞向神经细胞转化的特征 免费阅读 收费下载
  • 体外诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞已经成为神经科学研究的热点之一。目前在某些实验条件下,组织特异性的干细胞在组织和器官中能衍生为各种细胞谱系。已经有报道称骨髓基质细胞能衍生为骨骼细胞、胃贲门细胞、椭圆形肝细胞、神经胶质细胞和神经元样细胞。因此,通过资料研究分析出生后的骨髓细胞被诱导增殖进而分化为神经胶质细胞和神经元细胞,对其转化的特征作出探讨。
  • 神经干细胞移植治疗血管性痴呆的最新理论研究 免费阅读 收费下载
  • 目前应用于实验研究的神经干细胞主要来源于早期胚胎、脐带血、成人脑组织、骨髓等8种组织,神经干细胞的分离方法有反复传代法、基因转染法等4种方法。国内外研究热点大都集中于对神经干细胞体内移植存活发育与定向分化的调控,研究结果多来自啮齿类动物体内或体外实验,显示神经干细胞发育和分化可受许多种生物因子和药物的影响,而且其对不同种类或相同种类不同浓度的外源性因子的反应具有多样性,在神经干细胞发育分化的不同阶段,相同细胞因子的作用亦有差异。神经干细胞移植的存活受局部微环境的影响,采用内外源性神经干细胞治疗均显示效率不足,且外源性神经干细胞移植尚具有排异反应。由此,使得从体外实验结果确定某种因子在神经干细胞成熟过程中的实际作用较为困难。在临床应用上,神经干细胞移植仍然面临着如何提高移植效率、应用内源性还是外源性神经干细胞的选择等一系列重大难题。
  • 神经干细胞来源的研究与进展 免费阅读 收费下载
  • 神经干细胞是近期神经生物科学领域和神经外科领域的研究热点。应用神经干细胞自我更新和多分化潜能的生物学特性,移植治疗神经系统损伤或神经系统退行性疾病,已形成一种全新概念的神经外科治疗途径。然而如何获取大量的神经干细胞用于动物实验和临床应用成为限制该技术发展的难题,文章从介绍胚胎干细胞、成体神经干细胞和间充质干细胞的获取方法入手,希望将细胞移植治疗以一种安全有效的方式引入到临床治疗方案中。
  • 人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化 免费阅读 收费下载
  • 骨髓间充质干细胞具备取材方便、对组织损伤小等优点,其低免疫原性及易于诱导机体的免疫耐受性,使得在不需要HLA配型的前提下也可以进行异体移植,从而减少免疫抑制剂的副作用。目前常采用密度梯度离心法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,可根据生物学特性、细胞表面标记、多分化潜能、低免疫原性和免疫调节功能对其进行鉴定。骨髓间充质干细胞虽来源于中胚层,但在相应的诱导下可以向内胚层或外胚层的方向分化,一般选取传至第5代的骨髓间充质干细胞,除在培养液中加入传统的诱导剂如神经生长因子、维甲酸、脑源性生长因子、碱性成纤维生长因子、表皮生长因子外,向培养液中加入二十二碳六烯酸和花生四烯酸可诱导加速骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,并促进神经元轴突的生长。但是骨髓间充质干细胞移植的安全性,尤其是致瘤性的问题仍有待进一步研究。
  • 脂肪间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病 免费阅读 收费下载
  • 阿尔茨海默病是一种神经退行性疾病,其典型特征是进行性神经元缺失,迄今为止还没有一种药物和治疗方法对其彻底根治。随着干细胞技术与理论的发展和完善,阿尔茨海默病的治疗研究主要集中在神经干细胞移植方面。为避免免疫反应,最好用自体干细胞进行移植,而获取自体神经干细胞是非常困难的。与神经干细胞相比,间充质干细胞具有更广泛的来源,可以从肝脏、骨髓、脂肪等多种组织中获得,且具有多向分化潜能的特质,在一定诱导条件下可分化为骨、肌肉、脂肪等多种组织,其中脂肪间充质干细胞因其具有容易获得、对患者损伤小等特性而备受关注。新近研究显示,脂肪间充质干细胞具有神经分化潜能,预测其很可能在阿尔茨海默病治疗中发挥重要作用。
  • 白藜芦醇对神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元移植治疗帕金森模型鼠的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病仍面临细胞存活率低的问题,大部分细胞因氧自由基形成及脂质过氧化而发生程序性凋亡。目的:探讨白藜芦醇对神经干细胞体外诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后的细胞存活及移植效果的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-10/2008-06在中山大学动物实验中心完成。材料:成年健康雄性SD大鼠32只,随机分为模型对照组、多巴胺能神经元组、白藜芦醇组、联合组,8只/组;孕十四五天的健康SD大鼠4只,取胎鼠用于神经干细胞的分离培养。白藜芦醇为深圳晶美生物工程有限公司产品。方法:取体外分离培养的胎鼠中脑神经干细胞,在含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中传代扩增后,在分化液中诱导向多巴胺能神经元方向分化。各组大鼠均应用6-羟基多巴胺制备帕金森病模型。采用两点移植法,多巴胺能神经元组向大鼠毁损同侧纹状体注入多巴胺能神经元细胞悬液3μL(1×105个/μL);白藜芦醇组注入40mg/L白藜芦醇3μL;联合组注入40mg/L白藜芦醇3μL+多巴胺能神经元细胞悬液3μL(1×105个/μL);模型对照组注入DMEM/F12细胞培养液3μL。主要观察指标:胎鼠神经干细胞诱导分化的酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率,细胞移植后帕金森模型鼠不对称旋转行为的变化,纹状体移植区酪氨酸羟化酶染色阳性细胞存活情况。结果:流式细胞仪检测诱导分化6d的细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞率为(17.8±4.2)%。与模型对照组比较,联合组大鼠移植后10d不对称旋转行为有显著性改善(P〈0.01),移植后20d不对称旋转圈数开始明显下降(P〈0.01)。移植后10~60d,联合组大鼠的不对称旋转圈数明显低于多巴胺能神经元组(P〈0.01)。白藜芦醇组、模型对照组均未见酪氨酸羟化酶染色阳性细胞,联合组酪氨酸羟化酶染色阳性细胞数明显多于多巴胺能神经元组(P〈0.01)。结论:胎鼠神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植至帕金森模型鼠后,白藜芦醇可提高纹状体移植区植入细胞的存活率,改善大鼠不对称旋转行为。
  • BrdU体外示踪大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前还未找到一个理想的标记性分子用来鉴定骨髓间充质干细胞,因此也就不能保证骨髓间充质干细胞的同质性。目的:以BrdU体外示踪标记验证大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导后的分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/10在山西医科大学完成。材料:4周龄Wistar大鼠由山西医科大学实验动物中心提供。方法:密度梯度离心+贴壁培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,达80%融合时胰蛋白酶消化传代扩增。取5×10^10L-1个骨髓间充质干细胞接种于25mm培养皿,加入含地塞米松、β-磷酸甘油、维生素C和体积分数为10%胎牛血清的L-DMDM培养基进行成骨诱导。取第3代骨髓间充质干细胞,加入终浓度为10μmol/LBrdU进行体外示踪,200倍荧光显微镜下随机选取10个视野,通过计数阳性细胞与非阳性细胞数得到BrdU标记率。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原,观察诱导后成骨分化潜能,体外BrdU标记率。结果:分离纯化的骨髓间充质干细胞呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主,传至第3代呈明显的同向性改变,漩涡状盘旋排列,细胞存活率均大于95%,至第7代仍未见细胞生长减缓现象;CD44,CD71,CD105均呈阳性表达,CD45呈阴性表达;成骨诱导后Vonkossa染色可见骨髓间充质干细胞中有黑色颗粒沉积;BrdU标记率〉90%。结论:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,可在体外长期培养,并具有成骨分化潜能;BrdU可成功标记骨髓间充质干细胞,是安全、有效、便捷的体外示踪方法。
  • 羊水来源胎儿间充质干细胞向成骨细胞的诱导分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:羊水细胞已广泛应用于与基因突变有关疾病的产前诊断,但目前关于羊水来源胎儿间充质干细胞的分离培养、细胞表面特征鉴定、细胞分化及其应用前景的文献并不多见。目的:体外诱导孕中期羊水来源的胎儿间质干细胞向成骨细胞方向分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-08/2006-05在新华医院实验中心完成。材料:10例羊水标本取自孕18-22周行产前诊断或流产的孕妇,取前均征得孕妇本人同意。方法:采用机械手段挑取孕中期羊水细胞培养体系中的胎儿间充质干细胞集落,体外培养扩增。取第3代胎儿间充质干细胞,以100nmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸和50mg/L维生素C持续诱导14d。主要观察指标:免疫组化染色检测碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原的表达,Western Blot蛋白印记法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达,Von Kossa染色法检测钙结节形成能力,激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白形成。结果:分离出的胎儿间充质干细胞为CD44和HLA-ABC阳性,CD34、CD45、HLA-DR阴性,符合间充质干细胞特点。成骨诱导14d后,细胞碱性磷酸酶染色阳性率达91%,Ⅰ型胶原阳性率达87%;表达Ⅰ型胶原蛋白;随诱导时间的延长钙结节逐渐增多、增大;镜下可见细胞胞质中的微丝呈绿色荧光,细胞周围的微丝形成致密的周围束。结论:羊水来源的胎儿间充质干细胞可以分化为成骨细胞,且与典型的成骨细胞具有相似的形态学和生物学特征。
  • 睫状神经营养因子和丹参注射液体外诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:在干细胞异体移植时神经细胞的低存活率成为异体细胞移植失败的主要诱因。核因子κB是细胞信号传导的主要转录因子之一,参与细胞的增殖和分化过程。目的:观察睫状神经营养因子和丹参注射液联合诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化情况,以及分化过程中核因子κB的表达。设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2008-03/05在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成。材料:新生7d龄SD乳鼠10只,由辽宁医学院实验动物中心提供。睫状神经营养因子为Sigma公司产品,丹参注射液购自正大青春宝药业有限公司。方法:体外分离培养鼠肌源性干细胞,差速贴壁法和酶消化法纯化后接种于6孔板内,诱导组用含睫状神经营养因子的DMEM预诱导24h,更换培养液,洗涤3次,再加入含丹参注射液的无血清DMEM诱导5h;对照组使用无血清DMEM培养基处理。主要观察指标:RT-PCR及Western blotting法检测神经丝蛋白、核因子κB抑制蛋白的表达。结果:诱导前肌源性干细胞未见神经丝蛋白表达,诱导后的神经元样细胞神经丝蛋白呈阳性表达。凝胶电泳及Western blot检测结果显示,与诱导前比较,诱导后对照组核因子κB抑制蛋白的表达无明显变化,诱导组核因子κB抑制蛋白的表达明显下降。结论:睫状神经营养因子和丹参注射液可联合诱导肌源性干细胞分化为神经元样细胞,分化过程中核因子κB的活化被抑制。
  • 影响干细胞移植治疗心肌梗死效果的因素分析 免费阅读 收费下载
  • 急性心肌梗死后如何实现梗死区的再血管化以及延缓左心室重构并恢复心脏的正常收缩功能一直是研究的热点。研究显示,移植的干细胞可在心肌梗死区域定植,同时通过发挥分泌血管内皮细胞生长因子等营养效应和向心肌细胞、血管内皮细胞的分化作用来实现梗死区的再血管化,并能改善心室重构和恢复心脏功能。然而,干细胞对心肌梗死的上述修复作用与干细胞的组织来源相关密切,而且不同的预处理方法也可直接影响到干细胞的修复效果。同时,合适的干细胞供者与受者选择以及移植窗口、移植途径的正确把握是取得良好临床疗效的重要因素。
  • 成体干细胞向血管内皮细胞定向分化的研究现状 免费阅读 收费下载
  • 成体干细胞存在于已分化的组织器官中,具有明显的可塑性,能跨系统、跨胚层分化,在组织工程和损伤修复领域具有重要的应用价值。在血管组织工程研究领域中,成体干细胞作为种子细胞得到越来越广泛而深入的研究。目前研究表明,具有向血管内皮细胞分化的成体干细胞主要有骨髓间充质干细胞、造血干细胞、脂肪来源的干细胞以及羊膜来源的干细胞等。基于此,就成体干细胞作为种子细胞在血管组织工程领域研究现状进行综述。
  • 北京生命科学研究所王晓东教授小组发现诱导细胞坏死的关键蛋白 免费阅读 免费下载
  • 2009年6月12日,北京生命科学研究所王晓东实验室在《细胞》(Cell)上发表题为“ReceptorInteractingProteinKinase.3DeterminesCellularNecroticResponsetoTNF-α”的文章。该文章报道了蛋白激酶RIP3是决定TNF-α诱导的细胞坏死的关键蛋白。
  • 复旦大学马兰教授研究组发现GRK在胚胎发育中的新功能 免费阅读 免费下载
  • 复旦大学脑科学研究院和上海医学院马兰教授研究组一项最新研究发现,细胞内G蛋白偶联受体激酶GRK2通过调控细胞周期蛋白可影响斑马鱼胚胎早期发育,这一新发现揭示了GRK在调控受体信号和胚胎发育中的关键作用和GRK具有蛋白激酶活性非依赖的新功能,为进一步研究GRK参与人类胚胎发育的机制奠定了基础,这一研究成果已刊登在最新一期国际一流杂志美国《国家科学院院刊》(PNAS)上。
  • 南方医科大学珠江医院神经医学研究所郭洪波博士 免费阅读 免费下载
  • 郭洪波,女,1971年4月生,汉族。1988年就读于南方医科大学(原第一军医大学)临床医学专业(六年制),毕业后一直在临床一线工作;2002年获得神经生物学硕士学位,2005年获得神经生物学博士学位,并获得广东省南粤优秀研究生三等奖。
  • 干细胞移植治疗自身免疫性病 免费阅读 免费下载
  • 1996年意大利学者Marmont首先报道用自体骨髓移植(ABMT)治疗重症红斑狼疮取得成功后,国内外迅速开展了自体外周血干细胞移植和自体骨髓移植治疗重症红斑狼疮、类风湿关节炎、系统性硬化等多种难治性免疫病,取得了较好的疗效。造血干细胞移植能使部分患者达到病情控制,但其费用高、并发症多,病情复发率高达40%-50%,不能被常规使用。
  • 星星的品格 免费阅读 收费下载
  • 我上小学时,最得意的岁月莫过于每年署假期间那些个夏天的夜晚。拉着纳鞋底的姥姥,坐在她家落地窗前的水泥台阶上,听着麻绳来回穿梭的嘶嘶声,听着台阶下笼中瓶中蝈蝈蛐蛐此起彼伏的呜叫声,嗅着被晚风吹开的夜来香在清风中传过来的馨香,此刻,我最想做的事便只有一件。倚在姥姥的膝盖上,自由地数着天上的星星,在姥姥反复吟唱“天上星儿亮晶晶,一颗一颗数不清”的歌谣中,我常常会渐入梦乡,梦见我乘着那颗最明亮的星儿.在繁星闪烁着的夜空中飞翔。
  • 让昨天告诉今天:干细胞多能性相关研究的学术与技术进展 免费阅读 收费下载
  • 2003年,以色列专家发现骨髓干细胞转变为肝脏细胞的机制。以色列魏兹曼研究院免疫研究学部的拉皮道特教授领导的研究小组发现,当肝脏遇到损害时,会产生过量的与肝脏正常发育有关的某些分子,它会向骨髓干细胞发出求救信号。这些干细胞会及时“赶来”,帮助修复受到损害的肝脏细胞。分泌这些信号分子的是肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质细胞衍生因子(SDF-1)。骨髓干细胞一旦感知基质细胞衍生因子从肝脏发出的信号后,会不断产生并释放出来,然后再移向肝脏,此时肝脏由于大量生产和发送基质细胞衍生因子而变大。
  • 干细胞研究相关英语词汇的中英文对照 免费阅读 免费下载
  • 医学英文句型正误辨析 免费阅读 免费下载
  • “细胞编程和重编程的表观遗传机制”项目开始申报 免费阅读 免费下载
  • 国家自然科学基金委员会2009—07-02公布了“细胞编程和重编程的表观遗传机制”重大研究计划2009年度项目指南。
  • 干细胞治疗自身免疫性疾病的临床问答 免费阅读 免费下载
  • 造血干细胞移植和间充质干细胞移植治疗自身免疫性疾病尚存在的问题?两种治疗虽然对患者都有不同程度的短期疗效,移植后有可能使部分患者达到长期缓解,但均不能彻底根治自身免疫性疾病,部分患者存在复发的问题。因此,干细胞移植特别是造血干细胞移植不是治疗自身免疫性疾病的首选方法,对一些各种治疗无效的患者可以考虑使用,特别是异体间充质干细胞移植治疗可能有效。
  • 神经训导康复治疗体系第三届专项培训班招生通知 免费阅读 免费下载
  • 国家级继续医学教育项目(批准号:2009-16-00-006(国))各有关单位及专业人员:中枢神经(CN)细胞坏死和运动程序破坏是运动功能障碍的根源,恢复的方法需符合CN可塑性变化的“技巧性使用一依赖”原理并能重建运动程序方可。赵文汝教授根据上述机理将以调神、调息和调形为基本技术、完全主动运动的我国古老中医导引术改良成六步法以更好开发CN潜能,
  • 异基因脐血间充质干细胞移植治疗Emery-Dreifuss型肌营养不良1例 免费阅读 收费下载
  • 2008-02南京医科大学附属无锡第二医院神经内科收治的男性患者1例,32岁,体质量38kg,四肢无力、肌萎缩18年,突发头晕、呕吐3d后入院,经基因分析和肌肉活检确诊为Emery-Dreifus型肌营养不良并发小脑梗死。经HLA配型在上海市脐血库中寻找到一个与受者非血源相关、HIA全相合、Rh血型相合、ABO血型主侧不合的脐血供体,于入院后第9天采用白消安+环磷酰胺+兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后,通过外周静脉移植异基因脐血间充质干细胞悬液40mL,10滴/min,实际输入的有核细胞数为31.98×108。细胞移植5周后,患者头晕消失,吞咽困难、饮水呛咳症状明显好转,可连续饮水,双手协调动作较移植前好转,可操作电脑,体质量约增长4kg;移植后半年,血清肌酸磷酸激酶由移植前35.79μkat/L降至9.55μkat/L,血清肌酸磷酸激酶同工酶由移植前18.20μkat/L降至4.78μkat/L,肌红蛋白由移植前413.50μg/L降至213.20μg/L,功能独立性评分由71分提高至101分,未见免疫排斥反应及致瘤趋性。提示脐血间充质干细胞移植后能在短期内使血清肌酸磷酸激酶水平下降,改善运动功能,有助于Emery-Dreifuss型肌营养不良的治疗,近期安全性可靠。
  • 人脂肪源间充质干细胞治疗ABO血型不合造血干细胞移植后的顽固性单纯红细胞再生障碍性贫血2例 免费阅读 收费下载
  • 回顾性分析2004-04/2006-02河南省血液病研究所收治的2例接受异基因造血干细胞移植后并发单纯红细胞再生障碍性贫血的患者,病例1为一处于第2次完全缓解期的25岁女性急性淋巴细胞白血病患者;病例2为一处于第2次完全缓解状态的16岁女性急性髓细胞白血病患者。均经中心静脉输入脂肪源间充质干细胞进行治疗,剂量为1.0×10^6/kg。结果2例接受脂肪源间充质干细胞治疗的患者病情很快得以缓解,且均无明显不良反应出现。提示应用脂肪源间充质干细胞治疗ABO血型不合造血干细胞移植后出现的顽固性单纯红细胞再生障碍性贫血有一定的疗效。
  • [研究与报告]
    同种异体骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死后心电生理异常和左室重构的影响(李金轶 钟国强 何燕 温丽娜 柯红红 韦卓 邓燕 吴志福)
    电针联合骨髓基质细胞移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响(张力 熊东林 陈葵好 王荣蓉 缪映香)
    动员后的同胞骨髓联合脐血混合移植治疗儿童重型β-地中海贫血8例
    骨髓间充质干细胞移植对家兔急性肺损伤的保护作用(张峰 程瑾 楚东岭 孙亚妮 王翠莲 黄洁)
    膀胱内灌注粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子预防造血干细胞移植后出血性膀胱炎发生(牛晓敏 许晓军 郭子文 何慧清 邱大发 林淑华 任志娟 黎伟超)
    骨髓间充质干细胞移植对兔急性心肌梗死后胶原重构的影响
    心肌梗死后骨髓造血干细胞在心肌梗死区的归巢(潘茜 孙雷 于霄)
    骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭的效果评估
    脐血血管内皮祖细胞移植对心肌梗死血管形成的影响(李博 赵宏光 钟竑 柳瑞军 马南 单根法 梅举 张辅贤 李国庆)
    基质细胞来源因子1及其受体CXCR4参与骨髓基质细胞向脊髓全横断损伤区的迁移
    [技术与方法]
    不同种植密度对大鼠脂肪间充质干细胞三维培养下成软骨能力的影响(于志永 付勤 张涛)
    持续性压力培养环境对兔骨髓基质干细胞增殖的影响
    第3~12周人胚肝甲胎蛋白及细胞角蛋白19和c-Met的时空表达(齐安东 张杰 于树娜 刘洪国 王箐 蒋吉英)
    人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的体外调控
    骨髓间充质干细胞体外诱导培养后的电生理特性(党懿 齐晓勇 孟存良 李树仁 李英肖 刘惠良 王天红)
    胶质细胞系源性神经营养因子修饰脂肪间质干细胞与共培养多巴胺能神经元的存活
    外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肌源性干细胞增殖的影响(吕丹 姜殿君 张庭深)
    血管内皮生长因子在海马伞-穹窿横断后隔区神经干细胞增殖分化中的作用
    无血清悬浮培养肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达(潘鹏 田福起 郭涛 孙浩 马克钧 周留正)
    兔外周血间充质干细胞的体外分离培养及诱导成骨
    EpCAMhigh/CD44+结直肠癌干细胞的形态特征及分布(张秋菊 刘斌 邢传平 苏勤军 董亮 钱震 高自芳)
    深Ⅱ度烧伤创面磨痂治疗后残留皮肤组织中表皮干细胞标记物角化蛋白19的表达
    人乳牙牙髓基质细胞的分离培养与牙再生能力(闫征斌 侯景秋 王天样)
    体外诱导脐血间充质干细胞分化为成骨细胞
    人脐血间充质干细胞体外分离培养条件的优化及其鉴定
    联合应用碱性成纤维细胞生长因子和脑源性神经营养因子对成年大鼠脑海马神经干细胞分化为神经元的影响(佟雷 谢大龙 高海 佟晓杰)
    脐血干细胞的实验与临床应用(梁燕丹 王培福 杜继臣)
    流式细胞术及其在细胞凋亡检测中的应用
    成体骨髓细胞向神经细胞转化的特征(聂海祺 李剑平)
    神经干细胞移植治疗血管性痴呆的最新理论研究
    神经干细胞来源的研究与进展(陈涛 田增民)
    人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化(徐隋意 李光来)
    脂肪间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病

    白藜芦醇对神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元移植治疗帕金森模型鼠的影响
    BrdU体外示踪大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
    羊水来源胎儿间充质干细胞向成骨细胞的诱导分化
    睫状神经营养因子和丹参注射液体外诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化
    影响干细胞移植治疗心肌梗死效果的因素分析(赵新华 尹德录)
    成体干细胞向血管内皮细胞定向分化的研究现状(宋秀军 江其生)
    北京生命科学研究所王晓东教授小组发现诱导细胞坏死的关键蛋白
    复旦大学马兰教授研究组发现GRK在胚胎发育中的新功能
    南方医科大学珠江医院神经医学研究所郭洪波博士
    干细胞移植治疗自身免疫性病
    星星的品格(王莉莎)
    [本刊特稿]
    让昨天告诉今天:干细胞多能性相关研究的学术与技术进展
    干细胞研究相关英语词汇的中英文对照
    医学英文句型正误辨析
    “细胞编程和重编程的表观遗传机制”项目开始申报
    干细胞治疗自身免疫性疾病的临床问答(孙凌云)
    [信息导读]
    神经训导康复治疗体系第三届专项培训班招生通知
    [病例报告]
    异基因脐血间充质干细胞移植治疗Emery-Dreifuss型肌营养不良1例(廖瑜)
    人脂肪源间充质干细胞治疗ABO血型不合造血干细胞移植后的顽固性单纯红细胞再生障碍性贫血2例
    《中国组织工程研究与临床康复》封面

    主管单位:中华人民共和国卫生部

    主办单位:中国康复医学会 《中国组织工程与临床康复》杂志社

    社  长:王莉莎

    主  编:刘昆

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