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  • 骨髓间充质干细胞旁分泌作用与脑缺血后的细胞凋亡 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血的机制之一是骨髓间充质干细胞的旁分泌作用,而目前对于这一机制的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对脑缺血后细胞凋亡的抑制作用并探索相关机制。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠大脑中动脉缺血模型。24只SD大鼠随机数字表法分为4组,每组6只。细胞移植给药组:大鼠纹状体内移植骨髓间充质干细胞后给予ERK1/2抑制剂U0126;非移植给药组:注射等量的PBS后给予U0126;细胞移植对照组:移植骨髓间充质干细胞后给予溶剂对照;非移植对照组:注射等量的PBS后给予溶剂对照。7d后通过Westernblot检测血管内皮细胞生长因子、磷酸化ERK1/2蛋白的表达;TUNEL染色检测梗死区周围及皮质区细胞凋亡情况。结果与结论:细胞移植组较非移植组大鼠纹状体内血管内皮细胞生长因子蛋白的表达明显增高,磷酸化ERK1/2表达增强,细胞凋亡数明显减少;经U0126处理后,血管内皮细胞生长因子的表达没有变化,而随着磷酸化ERK1/2的表达受到抑制,细胞凋亡数明显增高。提示骨髓间充质干细胞在大脑纹状体内可以旁分泌血管内皮细胞生长因子,并通过激活ERK1/2抑制了脑梗死区细胞的凋亡。
  • 血清剥夺法分离U87细胞系中的胶质瘤干细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:细胞周期分析已证实,90%以上的干细胞处于G0静止状态,因此采用不含任何生长因子和其他相关营养添加剂的血清剥夺培养基更适合筛选分离肿瘤干细胞。目的:应用血清剥夺法培养胶质瘤U87细胞,并筛选鉴定该细胞系中的胶质瘤干细胞。方法:将U87细胞培养在只含有DMEM和L-谷氨酰胺的培养基中培养6d,筛选出胶质瘤干细胞,接着更换为神经干细胞培养基,观察细胞肿瘤球的形成过程;将肿瘤球接种于血清培养基,观察其在体外的分化特点;免疫荧光鉴定血清剥夺后尚存的细胞、增殖形成的肿瘤球细胞和分化细胞。结果与结论:应用血清剥夺的方法成功地筛选出了表达CD133的肿瘤干细胞,并能增殖形成肿瘤球;肿瘤球可多向分化,子代细胞表达胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶。说明U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞。
  • 表皮生长因子干预小鼠非黏附骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落形成及向神经元样细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:非黏附骨髓间充质干细胞在体外可以不断形成成纤维细胞集落形成单位,并且可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,表现出一定的多分化潜能。目的:探讨表皮生长因子对非黏附骨髓间充质干细胞形成成纤维细胞集落的影响,及其在体外向神经细胞分化的能力。方法:分离小鼠双侧股骨、胫骨,全骨髓法分离总骨髓细胞,采用反复转移非黏附的骨髓细胞培养法纯化非黏附骨髓间充质干细胞。取第5代总骨髓细胞和非黏附骨髓间充质干细胞,加入含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的神经细胞诱导液培养2周。观察非黏附骨髓细胞产生成纤维细胞集落形成单位的能力,表皮生长因子对成纤维细胞集落形成单位的影响,甲苯胺蓝和免疫细胞化学染色鉴定相关蛋白的表达。结果与结论:总骨髓细胞、反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位。给予表皮生长因子处理后,非黏附骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落形成单位的效率明显增高。诱导2周后,免疫细胞化学染色显示,总骨髓细胞和非黏附骨髓间充质干细胞均表达神经细胞特异性蛋白NeuN和NF-200;经甲苯胺蓝染色在部分细胞中可见神经元特异性标记尼氏体。证实表皮生长因子可有效促进小鼠非黏附骨髓间充质干细胞形成成纤维细胞集落形成单位的效率,经反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞能够诱导分化为神经细胞。
  • 脂肪基质细胞诱导分化为神经元细胞的实验 免费阅读 下载全文
  • 背景:寻找合适的种子细胞是移植治疗脑血管疾病及其他中枢神经系统疾病的关键。目的:观察人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元细胞的能力。方法:脂肪组织取自要求去除腹部多余脂肪的健康成人,供者无传染性疾病和内分泌疾病。分离培养脂肪组织来源的基质细胞,采用神经诱导培养基加GM1对其进行诱导培养。倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,免疫组织化学法鉴定神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2的表达情况。结果与结论:①经神经诱导培养基加GM1诱导后,分化后的细胞大部分呈典型的神经元样细胞形态。②倒置相差显微镜下可见,于诱导后1h出现神经巢蛋白表达阳性,5h出现神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2表达阳性。提示脂肪基质细胞可分化为神经元细胞,分化后的神经元细胞具有表达神经巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶和微管联合蛋白2的功能。
  • 音猬因子诱导恒河猴骨髓间质干细胞向神经元样细胞的分化与维甲酸方案比较其信号分子表达变化的意义 免费阅读 下载全文
  • 背景:近来研究发现在神经发育过程中,神经干细胞的分化受到来自周围微环境中诸多调控因子的作用,其中音猬因子是神经胚胎发育过程中关键性的诱导信号,有望作为一种有效的诱导剂调节神经细胞的分化。目的:探讨音猬因子诱导恒河猴骨髓间质干细胞向神经元样细胞分化过程中的信号分子表达变化。方法:常规密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓间质干细胞,诱导组加入含FGF2、B27、胎牛血清的L-DMEM预诱导24h撤离血清后,分别加入含0.5μmol/L维甲酸或400μmol/L音猬因子的DMEM诱导8d,以未诱导的细胞作为对照组。经神经元烯醇化酶荧光标记后,流式细胞仪筛选阳性细胞,应用RT-PCR与Western-blot法检测音猬因子和维甲酸诱导的细胞膜受体、细胞内信号蛋白的变化。结果与结论:音猬因子特异性膜受体Ptc、维甲酸特异性受体RARα、信号蛋白分子ptch1及Smad在正常细胞均有表达。经音猬因子诱导的细胞其Ptc表达上调,且随着诱导时间延长持续高表达,明显强于维甲酸诱导组及对照组(P〈0.01);其细胞内ptch1蛋白分子表达与此趋势一致,但不能引起RARα表达上调。经维甲酸刺激的细胞在诱导过程中没有激活Ptc通路,诱导4d后RARα表达出现小幅上调并持续至6d,但这一结果差异不具有显著性意义,ptch1的表达无明显变化。经音猬因子、维甲酸诱导的细胞Smad分子表达均上调,但无明显差异。证实音猬因子诱导方案通过持续激活其特异性受体途径参与细胞诱导分化过程,而维甲酸诱导方案和音猬因子诱导方案之间没有显著受体途径交叉。
  • 人胎脑神经干细胞在发育期脑脊液中的迁移和分化 免费阅读 下载全文
  • 目的:探讨人发育期脑脊液对胎脑神经干细胞迁移和分化行为的影响。方法:取实验室液氮冻存的孕龄16周的胎脑细胞,复苏后加入含EGF、bFGF、B27及N2的DMEM/F12培养基,14d后获得生长状况良好的神经球。胚胎组先后从蛛网膜下腔和脑室吸出脑脊液,小儿组均由腰椎穿刺或脑室穿刺获得脑脊液,将培养14d的神经球分别接种于两组脑脊液中,于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱中培养。观察神经球在脑脊液中的迁移和生长状态,免疫荧光鉴定脑脊液对神经细胞分化的影响。结果:神经球接种到脑脊液后,除小儿组有少数几个神经球未发生迁移外,其余神经球均在培养6h即向外周迁移,且神经球周边细胞向外发出突起,形成细胞索,细胞索向外周延伸后进一步编织成细胞网。与胚胎组比较,小儿组胶质纤维酸性蛋白阳性率明显升高(P〈0.01),神经纤维及巢蛋白阳性率均明显降低(P〈0.01)。此外,仅小儿组3份脑脊液培养的细胞为半乳糖脑苷脂阳性。结论:不同发育时期的脑脊液对神经干细胞的迁移和分化作用效果各异,提示脑脊液参与神经发育的调控,是脑发育的重要微环境影响因素。
  • 离心力对兔骨髓基质细胞成骨分化的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:在骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,离心力是一种促进因素。目的:探讨离心力是否能促进复合于聚羟基乙酸共聚物材料上的兔骨髓基质细胞向成骨方向分化。方法:全骨髓法分离培养兔骨髓基质细胞,贴壁法纯化,至细胞达80%融合时胰酶-EDTA消化传代,调整细胞浓度为1×109L-1。将聚羟基乙酸共聚物切割成5mm×5mm大小,预先浸泡入含血清培养基内24h,然后将第3代骨髓基质细胞悬液按300μL/块密度接种于支架材料表面,将复合物置入离心管底,细胞滴加面朝上,加入含抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、地塞米松的成骨诱导培养基。设立2组:离心力刺激组每间隔12h将离心培养管置于离心机上,按1000r/min离心30min,相对离心力132g;对照组培养管中细胞不作离心静态培养。通过光镜观察及检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、组织钙含量,评估成骨细胞的分化水平。结果与结论:体外培养第16天,离心力刺激组支架表面被多层细胞和矿化基质所覆盖,而对照组仅支架表层见一薄层细胞。与对照组比较,离心力刺激组培养后第2天碱性磷酸酶活性明显降低(P〈0.05),第4天碱性磷酸酶活性明显升高(P〈0.05)。在整个培养期间对照组骨钙素质量浓度一直维持低水平,离心力刺激组第12,16天骨钙素质量浓度明显高于对照组(P〈0.05)。培养16d后离心力刺激组的钙质量浓度明显高于对照组(P〈0.05)。提示离心力能促进接种于聚羟基乙酸共聚物的兔骨髓基质细胞成骨分化,并形成矿化产物。
  • 人脐带间充质干细胞分离培养及成骨分化 原子力显微镜观察细胞膜表面的超微结构变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前,人们对间充质干细胞的观察研究多采用扫描电镜、透射电镜和倒置显微镜等,但是这几种方法对观察细胞膜超微结构及细胞骨架的研究则有不足之处。目的:探讨并优化人脐带间充质干细胞体外获取及培养增殖的方法并鉴定;应用原子力显微镜观察其向成骨诱导过程中超微结构的变化。方法:用酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,通过传代培养,扩增。体外向骨方向诱导分化,并通过碱性磷酸酶钙钴法染色、茜素红染色鉴定其分化能力。流式细胞仪检测人脐带间充质干细胞免疫表型;诱导过程中利用原子力显微镜的高空间分辨率从可视化的角度观察其在诱导前后细胞表面超微结构的变化。结果与结论:采用酶消化法能有效分离纯化人脐带间充质干细胞。接种24h,贴壁细胞形态多为长梭形,多边形或成纤维细胞样形态,大小均一。流式细胞仪分析第3代细胞均表达CD29、CD44、CD105,不表达CD34、CD45和HLA-DR。经成骨诱导分化4周后,碱性磷酸酶染色呈强阳性,茜素红染色可见明显钙结节;通过原子力显微镜对分化前后的细胞骨架分析:未分化的干细胞其细胞骨架的微管突出不明显,分化后的细胞骨架其微管明显突出,并呈平行分布状态。
  • 转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:转化生长因子β1是关节软骨组织工程研究的首选生长因子,适当浓度能刺激关节软骨细胞增殖、分裂和分化。目的:建立含有转化生长因子β1的特殊诱导体系培养条件下骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的能力,观察诱导后的细胞形态及表型变化。方法:于兔胫骨结节内侧抽取骨髓,采用贴壁培养法分离纯化兔骨髓间充质干细胞,取第3代骨髓间充质干细胞行流式细胞仪检测鉴定其表面抗原,以含有转化生长因子β1的特殊软骨诱导体系的培养条件下对第3代骨髓间充质干细胞诱导培养21d,诱导后与人鼻中隔软骨细胞进行比较。采用免疫组织化学法对Ⅱ型胶原进行定性检测。结果与结论:贴壁培养法可分离并纯化兔骨髓间充质干细胞,所得第3代骨髓间充质干细胞表面抗原CD44阳性,CD34、CD45阴性。经诱导培养21d后细胞形态变为不规则,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示可见阳性细胞。提示含有转化生长因子β1的特殊软骨诱导体系的培养条件下,骨髓间充质干细胞可以转化为软骨细胞,且与正常软骨细胞无明显差异。
  • 人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前所报道的脐带间充质干细胞体外培养条件及培养效率不尽相同,尚缺乏统一标准。而且由于不同来源的间充质干细胞生物学特征尚有一定差异,因此建立脐带间充质干细胞简便、高效的培养体系十分必要。目的:观察人脐带来源的间充质干细胞在体外不同培养体系中的生长状态,以及不同腺病毒感染的效率。方法:采用胶原酶消化法从正常足月新生儿脐带中分离出间充质干细胞,贴壁法纯化培养,细胞贴壁后利用低糖DMEM,MesenPRO RSTM Medium和STEMPRO MSC SFM这3种培养体系进行体外扩增。取对数生长期的第3~5脐带间充质干细胞,应用腺病毒Ad5-EGFP,Ad5/11-EGFP,Ad5/35-EGFP分别以感染复数=1,10,100进行感染,分别于感染后24,56,72h倒置荧光显微镜观察病毒感染及绿色荧光表达情况。结果与结论:使用低糖DMEM培养的细胞初期融合时间长,STEMPRO MSC SFM培养的细胞虽然连接紧密,但消化传代后不易贴壁,而MesenPRO RSTM Medium培养的细胞在相同时间内能达到较高的细胞密度,更适于脐带间充质干细胞的体外扩增。Ad5/35-EGFP感染脐带间充质干细胞的效率明显高于其他两种腺病毒,但可导致细胞凋亡;腺病毒Ad5/11-EGFP对脐带间充质干细胞的感染效率较佳,随着感染复数的升高,所表达的荧光强度也逐渐增大。
  • 人脐血间充质干细胞向类肝细胞分化 人肝细胞共培养诱导法的可行性? 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究表明共培养条件下,骨髓间充质干细胞可向心肌细胞、肝样细胞等方向分化。目的:探讨人脐血间充质干细胞与人肝细胞在体外共培养条件下,诱导人脐血间充质干细胞分化为类肝细胞的可行性。方法:无菌条件下采集新生儿脐带血,采用密度梯度离心法与贴壁法分离纯化脐血间充质干细胞,待细胞融合至80%时胰蛋白酶消化传代。应用具有微孔滤膜的插入式细胞培养皿和培养板构建人脐血间充质干细胞-肝细胞共培养模型,脐血间充质干细胞按1×107L-1密度接种于下层6孔板内,LO2人肝细胞按1×105L-1密度接种到上层插入式培养皿中。以上、下两层均接种人脐血间充质干细胞作为对照组。采用流式细胞仪检测贴壁细胞的表面标志,倒置相差显微镜观察共培养后细胞形态变化,RT-PCR法检测肝细胞表面抗原mRNA的表达。结果与结论:贴壁细胞呈长梭形,强表达CD44和CD29,不表达造血细胞表型CD34和CD45。共培养组5d时长梭形细胞数量减少,随共培养时间的延长,不规则圆形或多角形的细胞逐渐增多,与肝细胞形态相似;对照组培养4周时,人脐血间充质干细胞仍呈形态均一的长梭形。共培养组5d时甲胎蛋白mRNA呈阳性表达,其余均为阴性;14d时细胞角蛋白19mRNA、白蛋白mRNA开始表达,随着时间延长有增强趋势,甲胎蛋白mRNA表达则较前减弱;对照组各抗原的表达均呈阴性。提示与LO2人肝细胞共培养后,人脐血间充质干细胞可诱导分化为类肝细胞。
  • 新式分层共培养环境下人骨髓间充质干细胞诱导髓核细胞的分化 免费阅读 下载全文
  • 背景:诱导分化的骨髓间充质干细胞或髓核细胞移植都存在一定的局限性,抑制自体髓核细胞的退行性变有望成为未来治疗椎间盘退变的有效方法。目的:通过建立骨髓间充质干细胞和髓核细胞分层共培养模型,观察骨髓间充质干细胞对髓核细胞分化的影响。方法:取传至第4代的骨髓间充质干细胞,分为2组:新式分层培养组将髓核细胞接种于去掉挂臂的Transwell小室,膜孔0.4μm,其与骨髓间充质干细胞比例为1∶1;传统分层培养组同法将髓核细胞接种于带有挂臂的Transwell小室。同时设立单独髓核细胞培养组,各组均培养7d。免疫组织化学法检测Ⅱ型胶原的表达,35S放射标记渗入放免定量检测蛋白多糖的合成。结果与结论:与单独髓核细胞培养组比较,传统分层培养组、新式分层培养组Ⅱ型胶原阳性细胞数、蛋白多糖合成量均明显增加(P〈0.05,P〈0.01),且新式分层培养组增高幅度大于传统分层培养组(P〈0.05)。提示骨髓间充质干细胞与髓核细胞接触共培养后,能显著增加髓核细胞分化增殖和特征性物质的表达,且新式分层培养环境优于传统分层培养。
  • 人乳腺病变组织乳腺癌耐药蛋白及细胞角蛋白8和嗜铬蛋白A的表达 可能与多向分化潜能干细胞相关? 免费阅读 下载全文
  • 背景:多数学者认为正常乳腺组织中无神经内分泌细胞,乳腺病变后出现神经内分泌细胞是乳腺上皮干细胞分化过程中受局部微环境和激素水平影响所发生的突变、异常分化结果。目的:通过检测人乳腺病变组织中乳腺癌耐药蛋白、细胞角蛋白8及嗜铬蛋白A的表达,从干细胞多向分化的角度探讨人乳腺病变中出现神经内分泌细胞的可能机制。方法:用乳腺癌耐药蛋白作为SP干细胞标记物,用细胞角蛋白8作为腺上皮分化标记物,用嗜铬蛋白A作为神经内分泌分化指标标记物,采用免疫组化方法分别检测这3种蛋白在89例人乳腺组织中的表达情况,并分析3者间的相关性。结果与结论:乳腺癌耐药蛋白与细胞角蛋白8在正常乳腺组织、乳腺增生组织、乳腺病变组织中均有表达,乳腺癌耐药蛋白在病变组织中的表达呈上升趋势,细胞角蛋白8的表达则随乳腺组织异常分化程度的降低呈逐渐减少,嗜铬蛋白A只在乳腺病变组织中有表达。在正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺病变组织中,乳腺癌耐药蛋白与嗜铬蛋白A的阳性表达呈显著相关(P〈0.01),与细胞角蛋白8的阳性表达无明显相关(P=0.069)。上述结果表明正常及增生乳腺组织中未发现神经内分泌细胞,乳腺病变组织中发现神经内分泌细胞,其机制可能与多向分化潜能干细胞的分化有关。
  • SCI收录的干细胞期刊介绍 免费阅读 下载全文
  • 英文刊名:CLONING AND STEM CELLS 中文刊名:克隆与干细胞 影响因子:2.622 出版周期:季刊 出版单位:Mary Ann Liebert,Inc 创刊时间:1999年 网站:http://www.liebertpub.com/publication.aspx?pub_id=9 杂志简介:《克隆与干细胞》出版有关干细胞培养和分化,以及生物学等方面的研究。期刊涉及从生殖细胞,
  • SCI期刊投稿要点之一二三:本刊发展部 免费阅读 下载全文
  • 您需要向SCI期刊投稿吗? 您了解SCI期刊投稿流程吗? 您知道向SCI期刊投稿要注意哪些要点吗? 今天我们通过总结多年研究SCI期刊投稿的一些体会,供大家参考与讨论。 1、正确选择对口的SCI期刊(见CRTER上期"国际投稿服务")。原则上是先向高影响因子的杂志投稿,然后不断降低IF,但是每改投一种杂志,
  • 2010年CRTER杂志对综述、学术探讨、病例报告及调查分析类文章的体例要求:本刊中文部 免费阅读 下载全文
  • 与干细胞研究相关学术会议介绍:本刊学术部 免费阅读 下载全文
  • 干细胞研究有价值的近期新闻回顾:本刊学术部 免费阅读 下载全文
  • 内容简介 2009-12-16,中国科学院院士、原北京大学校长许智宏,苏格兰再生医学研究中心主任、"多利羊之父"伊恩威尔穆特,北京大学干细胞研究中心主任李凌松为核心的北京大学代表团成员,爱丁堡大学―罗斯林研究所所长大卫休谟为首的英国代表团成员,在中国无锡马山生物医药研发服务外包区内共同见证了"国际干细胞联合研究中心"的开工起建。
  • 转化生长因子β1基因转染鼠脂肪间充质干细胞的可行性 免费阅读 下载全文
  • 背景:脂肪间充质干细胞在转化生长因子β1等生长因子的调控下可被诱导分化为软骨细胞。然而,外源性转化生长因子β1存在引起趋化性、激发炎症反应、造成局部损伤、有效成分容易被稀释或丢失、半衰期短、缺少理想的转运蛋白等缺陷。因此,利用基因重组技术,使种子细胞表达转化生长因子β1,对软骨组织工程的进一步发展具有重要的指导意义。目的:探讨真核表达载体pcDNA3.1-转化生长因子β1质粒的构建方法,并观察其转染脂肪间充质干细胞的可行性。方法:利用基因重组技术,将大鼠转化生长因子β1全长基因的PCR产物与克隆载体pT7Blue连接,并用大肠杆菌筛选阳性重组体构建真核表达质粒,采用XboⅠ、HindⅢ双酶切及测序方法对质粒进行鉴定;将已经纯化的pcDNA3.1-转化生长因子β1质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别采用阳离子脂质体试剂LipofectamineTM2000转染脂肪间充质干细胞,经G418抗性筛选后扩大培养,同时用pcDNA3.1-绿色荧光蛋白观察转染效率。结果与结论:重组质粒经XboⅠ、HindⅢ双酶切后出现1.35bp和5.4kb2条带,测序结果显示重组质粒所包含的转化生长因子β1全长碱基序列完全正确,绿色荧光蛋白显示其转染脂肪干细胞的转染效率〉80%,且转染细胞后有转化生长因子β1mRNA和蛋白的表达上调。提示利用基因重组技术可成功构建能转染脂肪间充质干细胞的真核表达载体pcDNA3.1-转化生长因子β1质粒。
  • 胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖和分化的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究表明,胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对细胞的增殖分化有重要作用,但对人类牙乳头间充质细胞生物学特性有何影响尚不清楚。目的:观察胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人类牙乳头间充质细胞增殖和分化能力的影响。方法:在建立人类牙乳头间充质细胞培养模型的基础上,①分别用含体积分数为1%或10%胎牛血清的DMEM/F12培养基将两种生长因子配制成不同的实验终浓度,取第4代生长良好的人类牙乳头间充质细胞,分别加入含0,0.1,1,10,100μg/L碱性成纤维细胞生长因子和0,25,50,75,100μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ的培养基(0μg/L作对照),培养96h后四甲基偶氮唑盐法测增殖活性。②设10μg/L碱性成纤维细胞生长因子组、100μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ组、碱性成纤维细胞生长因子+胰岛素样生长因子Ⅰ组和对照组。同上述方法每孔分别加含相应质量浓度生长因子的培养液,分别在培养1,3,5,7d后,四甲基偶氮唑盐法测细胞增殖活性,改良酶动力学法测定细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论:在0~100μg/L质量浓度范围时,两种生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖具有促进作用,碱性成纤维细胞生长因子的促增殖作用比胰岛素样生长因子Ⅰ大,联合作用时有协同促增殖作用。碱性成纤维细胞生长因子的最大有效质量浓度为10μg/L,胰岛素样生长因子Ⅰ的最大作用质量浓度为100μg/L。在0~7d时,碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞的碱性磷酸酶活性影响不明显,随时间的增加,胰岛素样生长因子Ⅰ对细胞碱性磷酸酶活性影响增加,与碱性成纤维细胞生长因子联用时,对增加碱性磷酸酶的活性有协同作用。
  • 利用基因芯片分析碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血干细胞CD34~+与CD133~+细胞基因表达的差异 免费阅读 下载全文
  • 背景:迄今为止,人们利用基因芯片对碱性成纤维细胞生长因子诱导CD34+和CD133+干细胞分化后细胞生物学性状、功能调控、基因变化及其表达差异等方面的认识尚不足,有待深入研究。目的:利用基因芯片比较脐血CD34+和CD133+细胞基因表达的差异,并探讨碱性成纤维细胞生长因子体外诱导脐血CD34+和CD133+造血干/祖细胞分化的基因表达变化,及其对碱性成纤维细胞生长因子反应性差异。方法:利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD34+和CD133+干/祖细胞,经含碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10~15d,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEArray芯片和GEArray表达分析软件进行芯片数据分析。流式细胞仪检测CD34+和CD133+造血干细胞回收率。碱性成纤维细胞生长因子诱导前后CD34+、CD133+细胞形态变化。变性琼脂糖凝胶电泳测定RNA浓度和纯度。基因芯片检测结果。结果与结论:①对20份脐血分别进行CD34+和CD133+细胞分选,分选CD34+细胞纯度为(77.52±5.06)%,回收率为(2.74±1.59)%;CD133+细胞纯度为(79.16±3.37)%,回收率为(1.12±0.94)%。②新分选出的CD34+细胞呈球形,经碱性成纤维细胞生长因子培养15d后,多数细胞形态未发现显著变化,部分细胞出现贴壁生长,可见突起和梭形细胞。CD133+细胞呈球形,经碱性成纤维细胞生长因子培养15d后,细胞明显扩增,由圆球形变为不规则形,部分细胞出现贴壁生长。③CD34+干细胞培养前后总RNA提取质量分别为2236ng和1796ng;CD133+干细胞培养前后总RNA提取质量分别为2518ng和2191ng。④在所检测的263个干细胞相关基因中,脐血CD133+细胞与CD34+细胞基因表达差异2倍以上的基因有10种,其中5种基因表达前者高于后者,5种基因表达前者低于后者;碱性成纤维细胞生长因子诱导培养后,CD133+细胞有32种基因表达显著高于CD34+细胞,在检测的263个基因中,未见低于CD34+细胞的基因。证实脐血中新分离的CD133+细胞和CD34+细胞基因表达仅有少数基因存在差异;CD133+细胞对碱性成纤维细胞生长因子的反应性显著强于CD34+细胞,表现为细胞周期调节、信号转导和分化等基因表达增强。
  • β-arrestin 2抗基因RNA对小鼠C17.2神经干细胞μ阿片受体脱敏感化的影响 免费阅读 下载全文
  • 背景:前期实验中采用新型基因沉默方法——抗基因RNA下调了细胞内β-arrestin 2基因的表达,实现细胞水平的基因敲除效应。目的:在前期实验基础上,观察抗基因RNA下调小鼠C17.2神经干细胞β-arrestin 2基因表达后其对DAMGO诱导μ阿片受体脱敏感化的影响。方法:小鼠C17.2神经干细胞应用含体积分数为10%胎牛血清、10mg/L青霉素和10mg/L氨苄青霉素的DMEM培养基,置于37℃,体积分数为5%CO2培养箱进行培养。待细胞长至80%汇合,用0.25%胰蛋白酶消化传代,每五六天传代1次。通过RT-PCR和免疫细胞化学法检测C17.2细胞μ阿片受体的表达。在脂质体介导下,将已被证实具有基因沉默效应的抗基因RNA片段转染C17.2细胞,荧光显微镜下观察转染24h后绿色荧光蛋白的表达。应用μ阿片受体选择性激动剂DAMGO和[35S]GTPγS结合实验检测C17.2细胞μ阿片受体与G蛋白的耦联能力。结果与结论:RT-PCR结果证实C17.2细胞内有μ阿片受体存在,而免疫细胞化学结果显示μ阿片受体主要在细胞膜和细胞浆中表达。荧光显微镜下观察可见转染质粒pGPU6/GFP/Arrb9的C17.2细胞中有绿色荧光蛋白的表达。[35S]GTPγS结合实验结果显示:未应用DAMGO进行处理的细胞中,[35S]GTPγS结合的刺激比率为(253±17)%;应用DAMGO预先对细胞进行处理后,刺激比率降为(113±14)%(P〈0.05);而转染β-arrestin 2抗基因RNA的细胞在DAMGO刺激下,[35S]GTPγS结合的刺激比率则仍维持在(239±15)%,表明抗基因RNA下调β-arrestin 2的表达,可抑制μ阿片受体脱敏感的产生。
  • 大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌HCN2及HCN4基因的表达 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究表明在多种心脏疾病后的心室肌中HCN2和HCN4表达异常,且与室性心律失常密切相关。骨髓间充质干细胞移植可修复受损心肌,但对梗死后心室离子通道重构的影响仍不清楚。目的:检测大鼠骨髓间充质干细胞移植入梗死心肌后左心室HCN2和HCN4的表达变化。方法:取3周龄SD大鼠5只,Percoll法分离培养骨髓间充质干细胞。成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为4组:DMEM组、细胞移植组大鼠建立急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎,正常对照组不进行任何干预。造模后4周,DMEM组在梗死边缘区和中心区分5点注入DMEM培养液,细胞移植组同法注入第3代骨髓间充质干细胞悬液200μL,细胞数5×106个。采用RT-PCR及Western-blot法检测左心室HCN2,HCN4在mRNA及蛋白水平的表达。结果与结论:正常心肌区:各组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达基本相似(P〉0.05)。梗死边缘区:DMEM组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显多于正常对照组、假手术组(P〈0.05);细胞移植组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显少于DMEM组(P〈0.05)。梗死中心区:DMEM组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达明显少于正常对照组、假手术组(P〈0.05);细胞移植组HCN2,HCN4 mRNA及蛋白的表达与DMEM组基本相似(P〉0.05)。提示急性心肌梗死后梗死边缘区HCN2,HCN4基因在mRNA和蛋白水平的表达升高,骨髓间充质干细胞移植可能通过下调梗死边缘区HCN2,HCN4的表达来降低心律失常。
  • 大鼠骨髓间质干细胞可以成为PEX基因稳定转染的载体细胞吗? 免费阅读 下载全文
  • 背景:PEX基因能够干预恶性胶质瘤的侵袭行为,而骨髓间质干细胞是一种靶向肿瘤治疗的新型细胞载体。目的:建立稳定表达PEX基因的大鼠骨髓间质干细胞。方法:采用分子克隆技术构建PEX基因真核表达载体,酶切测序鉴定重组质粒pcDNA3.1(+)-PEX,并转染大鼠骨髓间质干细胞,免疫细胞化学法验证真核表达载体在骨髓间质干细胞中的表达。通过G418筛选建立稳定表达PEX基因的骨髓间质干细胞,并用RT-PCR法检测PEX基因的表达。结果与结论:实验成功构建稳定表达PEX基因的大鼠骨髓间质干细胞,基因水平和蛋白水平检测结果表明,PEX在转染的骨髓间质干细胞中呈高表达。
  • 建立人急性粒细胞白血病M_2裸鼠模型 免费阅读 下载全文
  • 背景:人实体瘤细胞容易在小鼠体内成瘤,但人荷瘤白血病模型很难构建。通过放射线或环磷酰胺抑制裸鼠免疫系统预处理,可构建低成本、高稳定性的裸鼠模型。目的:探讨融合基因AML/ETO阳性的人急性粒细胞白血病M2白血病细胞Kasumi-1在BALB/c裸鼠体内建立白血病模型的方法。方法:将BALB/c裸鼠以抽签法随机分3组:环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺连续2d后,尾静脉注射Kasumi-1细胞8×105只;照射组给予X射线全身照射,照射当天尾静脉注射Kasumi-1细胞;无预处理组未作任何处理,尾静脉注射Kasumi-1白血病细胞。另取3只正常BALB/c裸鼠作为正常对照。检测外周血涂片、骨髓涂片,流式细胞仪检测骨髓细胞免疫分型,RT-PCR检测白血病细胞瘤负荷,FISH检测骨髓细胞AML/ETO融合基因阳性细胞百分比。结果与结论:未经任何预处理裸鼠建模14d血涂片中白血病细胞达3.5%,骨髓中肿瘤细胞百分比可达40%以上,与FISH和流式细胞仪检测白血病细胞比例一致,且随着接种时间延长,瘤负荷不断增加。全身照射和环磷酰胺注射后的裸鼠瘤负荷高于无预处理组,但仍可带瘤生存60d。正常裸鼠外周血单个核细胞RT-PCR未发现有融和基因AML/ETO,其他3组均可见融和基因AML/ETO的mRNA表达。提示给予环磷酰胺组和X线照射预处理或单纯尾静脉接种Kasimi-1细胞均可建立急性粒细胞白血病M2裸鼠模型。
  • 体外联合应用CD80和CD28/CpG ODN共刺激活化人外周血单个核细胞——对胃癌细胞株MKN45有靶向杀伤作用吗? 免费阅读 下载全文
  • 背景:启动维持并调节活化级联反应,决定了T细胞是活化增殖或转变为无反应状态甚至凋亡。B7分子与CD28的结合能有效协同T细胞受体途径活化T细胞,增强T细胞的增殖活性。目的:初步分析CD80和CD28/含CpG的寡脱氧核苷酸(CpG containing oligodeoxynucleotides,CpG ODN)共刺激活化的人外周血单个核细胞对胃癌细胞株MKN45的杀伤作用。方法:Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入白细胞介素2及CD28,CpG ODN共刺激活化培养1~5d。取MKN45细胞,设立4组:CD28/CpG ODN共刺激组、CD80联合CD28/CpG ODN共刺激组、单纯CD80组、空白对照组。以MTT法检测细胞杀伤率,电镜观察凋亡的MKN45细胞超微结构,流式细胞仪检测MKN45细胞凋亡率。结果与结论:单纯CD80组对MKN45细胞无明显杀伤作用;与CD28/CpG ODN共刺激组比较,CD80联合CD28/CpG ODN共刺激组对MKN45细胞的杀伤作用显著增强(P〈0.05),效应细胞与靶细胞之比达15︰1时即可达到半数杀伤率。电镜下效应细胞作用24h,MKN45细胞就部分发生坏死,部分细胞可见凋亡。与空白对照组比较,单纯CD80组MKN45细胞凋亡率显著升高(P〈0.01)。提示CD80与共刺激活化的外周血单个核细胞合用,可提高活化的外周血单个核细胞对MKN45细胞的靶向性杀伤作用。
  • 黄芪注射液促进脐血干细胞向肝细胞分化 具有增强移植干细胞治疗大鼠肝衰竭的效果 免费阅读 下载全文
  • 背景:在脐血干细胞移植治疗肝功能衰竭研究中,文献报道黄芪制剂可刺激造血干/祖细胞的增殖。目的:观察黄芪注射液在体内外促进脐血干细胞向肝细胞的分化,以及增强脐血干细胞移植治疗大鼠肝衰竭的效果。方法:取传至三四代的人脐血干细胞,药物筛选实验设立4组,分别加入0,40,200,400mg/L黄芪,筛选适宜脐血干细胞生长的黄芪浓度;干细胞分化实验设立2组,分别加入肝细胞生长因子10μg/L、肝细胞生长因子10μg/L+黄芪200mg/L。采用腹腔内注射D-氨基半乳糖法制备大鼠肝衰竭模型,建模48h后仍存活的大鼠随机分为6组:模型对照组、黄芪组、鼠外周血单个核细胞组、联合组、联合+环磷酰胺组、联合+地塞米松组。RT-PCR法检测大鼠肝脏组织甲胎蛋白及白蛋白mRNA的表达,观察相关肝功能指标的变化。结果与结论:不同质量浓度的黄芪制剂对人脐血干细胞生长影响不同,200mg/L黄芪最适宜细胞生长和增殖。与单纯加入肝细胞生长因子的人脐血干细胞比较,另加入200mg/L黄芪的人脐血干细胞白蛋白免疫组化染色阳性细胞数明显增加(P〈0.05)。随干预时间的延长,联合组、联合+环磷酰胺组、联合+地塞米松组肝脏组织白蛋白mRNA的表达均强于鼠外周血单个核细胞组;而甲胎蛋白mRNA的表达在早期均强于鼠外周血单个核细胞组,在后期则表达消失。干预7d后,联合组、联合+环磷酰胺组、联合+地塞米松组的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶及总胆红素下降幅度均明显大于模型对照组、黄芪组、鼠外周血单个核细胞组(P〈0.05),而此3组间各项指标的变化无明显差异(P〉0.05)。提示200mg/L黄芪在体内及体外均可以促进人脐血干细胞生长并分化为肝细胞,减轻肝脏损害,增强脐血干细胞移植治疗肝衰竭的效果。
  • 冠状动脉搭桥与骨髓CD34~+细胞移植后心肌血流灌注及细胞代谢 双核素显像评价 免费阅读 下载全文
  • 背景:对于没有心肌存活的梗死区域或心肌梗死区域占心脏很大部分的患者,冠状动脉搭桥的疗效并不明显;当前利用各种干细胞实现心肌和血管的再生已成为缺血性心血管疾病研究热点,移植后心肌的存活与血流灌注的改善有直接关系。目的:应用18F-FDG和99Tcm-MIBI双核素显像评价陈旧性心肌梗死患者经冠状动脉搭桥的同时,选择性行自体骨髓CD34+细胞移植后的心肌血流灌注及细胞代谢情况。方法:术前1d于患者髂前上嵴抽取骨髓,Ficoll法密度梯度离心骨髓单个核细胞,应用磁珠分离系统分离纯化CD34+细胞。全麻下检查患者冠状动脉病变情况,行移植物血管和冠状动脉的端侧吻合,然后抽取浓度为1×1011L-1的骨髓CD34+细胞悬浊液,在梗死灶(血流/代谢匹配性缺失处)周边及中心6点分别注射,每点注射0.2mL。根据术前灌注/代谢显像结果,将心肌节段分为匹配和不匹配两类:①匹配类型:血流灌注和代谢显像均稀疏缺损或均正常,即梗死心肌或正常心肌。②不匹配类型:血流灌注显像稀疏缺损,而代谢显像正常或有放射性分布,即存活心肌。移植前后行18F-FDG及99Tcm-MIBI双核素显像,通过圆周剖面半定量分析,评价冠状动脉搭桥和干细胞移植对心肌灌注及代谢的影响。结果与结论:31例患者共分为279个节段。不匹配组145个节段,与术前比较,术后4个月99Tcm-MIBI及18F-FDG摄取分数均显著增加(P〈0.01);匹配非移植组81个节段,与术前比较,术后4个月99Tcm-MIBI及18F-FDG摄取分数均无明显变化(P〉0.05);匹配移植组54个节段,与术前比较,术后4个月99Tcm-MIBI及18F-FDG摄取分数均显著增加(P〈0.01)。冠状动脉搭桥只能改善有存活心肌细胞梗死心肌的血流灌注及细胞代谢,而自体骨髓CD34+干细胞移植能够改善无存活心肌细胞梗死心肌的血流灌注及细胞代谢。
  • 接受嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠电生理及后肢功能变化 免费阅读 下载全文
  • 背景:研究证实嗅鞘细胞有利于神经元存活,并可促进轴突再生。目的:探讨嗅鞘细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的效果。方法:健康成年雌性SD大鼠40只,随机分为盐水对照组、细胞移植组,20只/组。另取10只SD大鼠用于嗅鞘细胞的分离培养。盐水对照组、细胞移植组大鼠均建立脊髓损伤模型,取双侧第8~10对肋间神经各2cm,交叉植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),细胞移植组局部注射嗅鞘细胞2×106个,盐水对照组局部注射等量无菌生理盐水。通过体感诱发电位和运动诱发电位的检测,观察神经电生理恢复情况;BBB后肢运动功能评分结果;通过BDA顺行神经示踪,观察运动传导束恢复情况。结果与结论:细胞移植组大鼠体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期、波幅明显优于盐水对照组(P〈0.01);细胞移植组大鼠BBB后肢运动功能评分较生理盐水组明显提高(P〈0.01);细胞移植组脊髓损伤区有较多BDA标记阳性神经纤维通过,其数量明显多于盐水对照组(P〈0.01)。证实局部注射嗅鞘细胞可以较好地恢复大鼠脊髓损伤后的神经电生理及后肢运动功能。
  • 自体骨髓单个核细胞移植起搏器诱导心力衰竭犬心功能变化 病理图像分析心脏切片胶原纤维定量的客观价值 免费阅读 下载全文
  • 背景:干细胞再生可修复受损心肌,但目前利用骨髓单个核细胞移植治疗非缺血性心力衰竭的研究相对甚少。目的:探讨自体骨髓单个核细胞心肌移植后,对起搏器诱导的心力衰竭模型犬心功能的影响。方法:细胞移植组、模型对照组犬均通过快速右室心尖部起搏建立心力衰竭模型。造模后,细胞移植组通过心肌直接注射法分多点注入CM-DiI标记的骨髓单个核细胞悬液,模型对照组同法注入等量生理盐水。4周后取材,取心尖、前壁和室间隔心肌,FITC标记心肌肌钙蛋白,观察心肌纤维化程度,测定心肌胶原容积分数,并进行血流动力学检查。结果与结论:细胞移植组可见CM-DiI和FITC双重染色的双阳性的细胞,呈黄色荧光;模型对照组仅可见FITC染色的绿色荧光图像。苏木精-伊红及Masson染色结果示,模型对照组间质中可见炎性细胞浸润,呈显著间质纤维化和心肌细胞纤维化;而细胞移植组未见明显间质炎性细胞浸润,间质无心肌细胞纤维化,提示快速右室心尖部起搏可成功建立犬心力衰竭模型。与模型对照组比较,移植后4周细胞移植组心尖、前壁、室间隔的胶原容积分数均明显降低(P〈0.05),射血分数明显升高(P〈0.05),左室舒张末期内径及左室收缩末内径均无明显变化(P〉0.05)。说明自体骨髓单个核细胞在心力衰竭犬心肌中可增殖分化为心肌样细胞,并改善心功能,其机制可能与抑制心力衰竭心肌纤维化进程有关。
  • 自体外周血干细胞移植治疗扩张型心肌病:38例24个月随访 免费阅读 下载全文
  • 目的:评价动员后自体外周血干细胞经冠状动脉移植治疗扩张型心肌病的远期临床疗效和安全性。方法:选择2004-03/2006-10武警广东省总队医院心内科收治的扩张型心肌病患者38例,男26例,女12例,年龄42~72岁,平均56岁。随机分为移植组(n=20)和对照组(n=18),两组均予常规药物治疗,其中移植组患者予重组人粒细胞集落刺激因子300μg皮下注射,1次/d,进行自体外周血干细胞动员,第6天用血细胞分离机分离自体外周血干细胞,进行经皮经腔冠状动脉内移植;对照组:仅行常规药物治疗,未进行细胞移植。两组患者于移植前和移植后6,12个月分别检测血常规及生化指标(肝功能、肾功能、血糖、血脂、血尿酸、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和高敏C-反应蛋白)的变化;移植前和移植后12,24个月分别行超声心动图、动态心电图、6min步行试验。比较两组生存率及心脏事件发生率,以患者死亡作为试验终点。结果:两组患者均获得随访,平均随访(18±6)个月,在随访12~24个月时移植组患者1例行二尖瓣置换,1例死亡,对照组2例死亡,均死于顽固性心衰。移植组患者移植后6,12个月血常规及生化各指标与移植前及对照组相比,差异均无显著性意义(P〉0.05)。移植后12个月,移植组6min步行路程较移植前明显增加,与对照组和自身移植前相比,差异均具有显著性意义(P〈0.05);超声检查显示左心室射血分数较移植前及对照组明显增加(P〈0.01)。左心室舒张末内径也较移植前及对照组明显降低(P〈0.01)。对照组的左心室射血分数及左心室舒张末内径虽然较12个月前有所改善,但差异无显著性意义(P〉0.05)。随访至24个月,上述指标未见进一步改善,且有转差趋势。围移植期及移植后24个月随访中未见任何严重心律失常等不良反应发生。随访期间两组患者生存率无显著性意义。结论:采用动员后的自体外周血干细胞移植治疗扩张型心肌病安全、有效,近期可显著改善左心室收缩功能,但远期临床效果尚不肯定。
  • 自体骨髓干细胞移植及自体髂骨植骨治疗骨不愈合的比较(英文) 免费阅读 下载全文
  • 背景:骨髓干细胞移植治疗骨不愈合较传统植骨治疗有明显的优势,但是如何获得浓缩、高效的骨髓基质干细胞及其与骨折愈合的量效关系还需进一步探讨。目的:观察自体骨髓干细胞移植治疗骨不愈合的效果,并与自体髂骨植骨相比较。设计、时间及单位:随机对照分析,1999-01/2005-06河北北方学院附属第二医院。参试者:收治的140例肱骨及胫骨骨折患者,随机数字表法分为自体髂骨植骨组、自体骨髓干细胞移植组,70例/组。方法:自体骨髓干细胞移植组患者在无菌条件下,从髂后上棘进行穿刺,分不同部位抽取骨髓10~20mL,密度梯度离心法分离骨髓干细胞,镜下计数为4×109个有核细胞/mL时待用。自体髂骨植骨组骨折端周围植入适量髂骨,自体骨髓干细胞移植组骨折端周围植入脱钙骨基质与骨髓干细胞的混合物,缝合切口。移植后根据内固定的坚固程度,可辅助使用外固定4~6周。主要观察指标:①移植后不同时间点两组骨痂形成及疼痛情况。②两组骨愈合时间的比较。③不良事件和副反应。结果:按意向处理分析,实验选用140例肱骨及胫骨骨折患者全部进入结果分析。①术后不同时间点两组骨痂形成及疼痛情况:移植后1个月,自体髂骨植骨组骨折端骨痂形成不明显,自体骨髓干细胞移植组骨折端有骨痂形成,两组骨折处皆有压痛。移植后2个月,自体髂骨植骨组骨折端有骨痂形成,骨折处压痛较前减轻;自体骨髓干细胞移植组骨折端有大量骨痂形成,骨折处压痛不明显。移植后3个月,自体髂骨植骨组骨折端有大量骨痂形成,骨折处有轻微压痛;自体骨髓干细胞移植组骨折端有连续骨痂形成,骨折处无压痛。②两组骨愈合时间的比较:自体骨髓干细胞移植组平均愈合时间明显短于自体髂骨植骨组[(5.5±1.5),(8.0±2.0)个月,P〈0.05]。③不良事件和副反应:所有病例在治疗期间,除有4例出现髂骨疼痛外,无感染等其他并发症,随访8个月均未发生再骨折。结论:自体骨髓干细胞移植治疗骨不愈合疗程短、效果好,较传统植骨具有明显优势。
  • 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对髓系白血病骨髓细胞黏附功能的影响及其机制(英文) 免费阅读 下载全文
  • 背景:据作者查新检索medline,cnki等数据库,鲜见国内外有关体外研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipaseD,GPI-PLD)对白血病细胞黏附功能影响方面的报道。目的:观察GPI-PLD对髓系白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2004-01/06在湘雅医院血液实验室完成。对象:骨髓标本来自于髓系白血病患者,由湘雅医院血液科提供。方法:利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶做底物,通过TX-114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPI-PLD活性,利用1,10-二氮杂菲抑制GPI-PLD的活性,实验分2组:处理组加二氮杂菲,使其终浓度为1mmol/L,对照组加入等量的PBS。用MTT方法检测处理组和对照组骨髓细胞对纤维连接蛋白的黏附率、免疫组织化学方法检测GPI-锚定蛋白CD24的表达。主要观察指标:髓系白血病细胞GPI-PLD活性,细胞黏附率及CD24的表达。结果:1mmol/L1,10-二氮杂菲作用髓系白血病骨髓单个核细胞5h细胞的GPI-PLD活性较对照组降低[(5.40±2.96)%,(42.08±7.21)%,P〈0.01];GPI-PLD的活性被抑制后处理组细胞的黏附率较对照组增加[(61.19±29.14)%,(49.78±26.73)%,P〈0.01],同时CD24的表达率上调[(18.5±11.14)%,(16.02±9.68),P〈0.01]。结论:降低GPI-PLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤维连接蛋白的黏附率,同时骨髓单个核细胞上GPI-锚定蛋白CD24表达增强。
  • 脂肪干细胞的分离培养及其成骨分化:本刊中文部 免费阅读 下载全文
  • 1 兔脂肪干细胞的体外分离培养特性 推荐理由:目前在国内外文献报道中,原代脂肪干细胞的分离培养方法并不一致。由于成熟脂肪基质中含有大量Ⅰ型胶原,为使基质细胞和脂肪基质纤维成分分离,大多数文献选用Ⅰ型胶原酶消化分离原代细胞,但也有使用Ⅱ型胶原酶或联合应用胰酶,甚至仅用胰酶进行消化分离的报道。
  • 《中国组织工程研究与临床康复》杂志2010年编辑工作目标——精致出版,优质服务,加倍努力,稳步前进! 免费阅读 下载全文
  • 0引言 艰辛的努力的走过2009年 轻松的愉悦的迈进2010年。 翻动着2010年的新刊目次,油墨清晰的记载了《中国组织工程研究与临床康复》(CRTER)杂志的成长历程。这一年,她已经是14周岁了,该是婷婷玉立的美少女或是帅小伙啦!如果按年满16周岁可以办理公民身份证的规定,再过2个年头,
  • 《中国组织工程研究与临床康复》杂志2010年稿件规范细则 稿件体例,英文表述,投稿须知 免费阅读 下载全文
  • 0 文章导语 告别忙碌的2009年,在雪花纷飞中迎来了崭新的2010年。按照惯例,每年的第1期杂志都要介绍期刊的稿件规范要求和投稿指南,下面分3部分具体介绍。
  • 造血干细胞移植的临床应用:现状与概况及未来 免费阅读 下载全文
  • ○自体骨髓造血干细胞移植适用于哪些疾病的治疗?○自体外周血造血干细胞移植缺点在哪?○异体骨髓造血干细胞移植为何受到医学界的重视?○脐带血造血干细胞移植治疗手段为何得到普便适用?○外周血CD34细胞移植中,自体移植和异体移植都有哪些优势?○混合造血干细胞移植为造血干细胞移植开辟新途径?○非清髓性造血干细胞移植为何有广阔的发展空间?
  • 医学英文句型正误辨析:本刊英文部 免费阅读 下载全文
  • 少年有梦 免费阅读 下载全文
  • 曾经有过多少个这样的时刻? 新年第一天的清晨,就想用尽全身的力气,大声地呼喊着“过年哆!过年哆!过年哆!……”这是我少年时代囤积在心底许久许久的一个梦想!
  • 外周血干细胞移植治疗神经系统疾病:可能,可行与可信 免费阅读 下载全文
  • 背景:外周血干细胞可转分化成各种神经细胞,产生多种神经营养因子,而且已经在一些神经系统疾病的试验治疗中取得了可喜效果,如何优化其培养条件,使其扩增并定向分化成为研究热点。目的:就近年来外周血干细胞在脑损伤、遗传缺陷性或退行性疾病的研究和应用进行综述。方法:应用计算机以peripheral blood stem cell,neural,repair为检索词,检索Pubmed数据库(1999-01/2009-09);应用计算机以外周血干细胞、神经、修复为检索词,检索中国期刊网全文数据库(1999-01/2009-09)。结果与结论:共收集221篇关于外周血干细胞方面的文献,中文41篇,英文180篇,排除发表时间较早、重复及类似研究,纳入27篇符合标准的文献。外周血干细胞能在体外扩增,转分化成各种神经细胞,可以到达中枢神经系统的神经受损处,分化成类神经元,并改善受损区域的相关功能。关于外周血干细胞的分化机制目前了解不是很充分,但是大量研究表明外周血干细胞具有的表面标记抗原与其生物学特征密切相关。虽然关于外周血干细胞表面标记物的研究有许多,但是研究人员一直无法确定一个可靠的可以直接标记外周血干细胞的标志。由于CD34功能尚未明确,一直被公认为参与早期造血CD34是造血干细胞的标志物的理论近年受到挑战。如何提高外周血干细胞在体内的成活率,以及提高其向神经元样细胞定向分化等问题还需进一步分析。
  • 成人骨髓间充质干细胞对实体器官移植之影响——在诱导耐受中已成为有意义的候选细胞 免费阅读 下载全文
  • 背景:来源于成人骨髓的间充质干细胞在体内外能够改变同种异体免疫反应,在实体器官移植中具有很大的应用潜力。目的:发展间充质干细胞的抗排斥治疗,进一步明确间充质干细胞免疫调节能力的机制。方法:应用计算机检索Pubmed数据库(1994/2009-03),以Mesenchymal stem cells,Solid organ transplantation,Tolerance,Immunosuppression,Animal model为检索词。结果与结论:共收集262篇关于成人骨髓间充质干细胞对实体器官移植的影响及作用机制的文献,全部为英文。排除发表时间较早、重复及类似研究,纳入49篇符合标准的文献。人间充质干细胞不表达MHC2Ⅱ类抗原和T细胞共刺激分子B7,与同种异体T淋巴细胞共培养不引起T细胞增殖,此外还抑制混合淋巴细胞反应及丝裂原刺激的T细胞增殖。间充质干细胞对T细胞增殖的抑制作用不受主要组织相容性复合物的限制,无论是来自供者、受者的间充质干细胞均具有相似的免疫调节作用。异基因间充质干细胞在体内能够引起免疫反应,不是完全免疫豁免的。间充质干细胞在注射后,在体内的效应强烈依靠其位置和迁移模式。在诱导耐受的临床器官移植研究中,间充质干细胞是有意义的候选细胞。
  • 多发性骨髓瘤干细胞——表面标记和信号传导通路的作用与意义 免费阅读 下载全文
  • 背景:多发性骨髓瘤中存在一小部分比例的骨髓瘤干细胞,具有干细胞特性,有自我更新、无限增殖及多向分化的能力,是多发性骨髓瘤形成、进展、复发和耐药的根源。目的:就多发性骨髓瘤干细胞生物学特性、免疫表型、分离与鉴定及针对该类细胞的信号传导通路和靶向治疗进行综述。方法:应用计算机检索Medline数据库(1999-01/2009-04),以mutiple myeloma stem cells,heterogeneity,phenotypic analysis,signaling pathways,target therapy为检索词;应用计算机检索CNKI数据库(1999-01/2009-04)、CBM数据库(1999-01/2009-04),以多发性骨髓瘤干细胞、异质性、干细胞分离与鉴定、信号传导、靶向治疗为检索词。结果与结论:共收集126篇关于多发性骨髓瘤干细胞相关的文献,中文30篇,英文96篇,排除发表较早、重复及类似研究,纳入30篇符合标准的文献。目前普遍认为多发性骨髓瘤干细胞可能源于正常干细胞的积累突变和通过基因突变重新获得自我更新能力的祖细胞或已经完全分化的成熟细胞。循环克隆记忆性B细胞具有自我更新和多向分化的潜能,代表了多发性骨髓瘤干细胞。多发性骨髓瘤干细胞特异标志物正处于研究阶段,目前主要采用SP细胞分选和醛脱氢酶活性检测分离骨髓瘤干细胞。多发性骨髓瘤干细胞通过hedgehog,wnt及notch等信号通路而具有自我更新的特性,当这些信号传导通路出现异常时,就导致了肿瘤的发生及肿瘤细胞的无控制性增长。针对肿瘤干细胞进行选择性靶向治疗是制定肿瘤治疗策略的一个新的重要方向,肿瘤干细胞特有的表面标记和信号传导通路可以作为杀伤肿瘤干细胞而控制肿瘤发展的靶点。
  • 表皮干细胞特性及其应用 走向临床的路程还有多长? 免费阅读 下载全文
  • 背景:表皮干细胞作为皮肤组织的特异性干细胞,不仅是维持皮肤新陈代谢的主要功能细胞,而且与创面修复紧密相关,是皮肤及其附属器发生、修复的基础。目的:对近年来表皮干细胞的特性及临床应用研究现状做一综述。方法:应用计算机以Epidermal stem cell,Basic study,Gene therapy为检索词,检索PubMed数据库(2009/06-08);以表皮干细胞、基础研究、基因治疗为检索词,检索CNKI数据库(2009/06-08)。结果与结论:计算机初检得到532篇文献,中文283篇,英文249篇。阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关的127篇,内容重复性的研究158篇,Meta分析25篇,共保留31篇文献进行综述。表皮干细胞具有体内慢周期性、自我更新能力、对皮肤基底膜的黏附等典型特征,在组织结构中位置相对固定,位于表皮内血供丰富的基底层及毛囊隆突部。表皮干细胞的增殖分化受到外在因素和内在因素的影响,前者指干细胞所处的微环境,即干细胞"壁龛",后者则包括整合素-丝裂原激活蛋白激酶通路、Wnt信号通路、c-Myc原癌基因、Notch信号传导通路。目前常用的表皮干细胞标记物包括整合素、角蛋白以及p63,p75、表皮细胞表面转铁蛋白受体CD71等。在临床应用方面,表皮干细胞可用于组织工程与创伤修复、基因治疗及表皮肿瘤等领域。
  • 干细胞治疗感音神经性聋的研究理论及其临床应用进展 免费阅读 下载全文
  • 背景:内耳毛细胞或螺旋神经元的丢失可引起感音神经性聋。内耳细胞死亡后,利用干细胞研究来恢复听力已成为近年来研究热点。目的:总结近年来干细胞向内耳细胞方向分化的体内外研究进展,对干细胞进行感音神经性聋后内耳细胞替代治疗的研究成果进行综述。方法:应用计算机检索Pubmed数据库(2000-01/2009-08),检索词为"inner ear,Stem cells";应用计算机检索CNKI数据库(2000-01/2009-08),检索词为"内耳、干细胞"。结果与结论:计算机初检得到170篇文献,纳入与干细胞在感音神经性聋的细胞转化有密切关系的实验研究和综述,排除重复研究类文献,对符合条件的32篇文献进行汇总分析。不同类型干细胞具有向内耳细胞分化的能力,能够分化为神经源性细胞类型。干细胞移植到内耳结构中可以发生迁移、分化,并部分分化为损伤区域的细胞类型,为感音神经性聋听力恢复提供了一条治疗途径。如何使分化细胞发挥正常生理功能,移植到内耳后能否建立神经通路,是干细胞治疗感音神经性聋下一步研究方向。
  • 骨组织工程中脂肪间充质干细胞的作用 免费阅读 下载全文
  • 背景:目前常采用在骨缺损处充填自体骨、异体骨、人工合成骨替代品等方法进行骨缺损修复,但临床效果均不理想。研究表明脂肪间充质干细胞具有多种分化能力及很强的增殖潜力,可将其诱导分化成骨。目的:分析脂肪间充质干细胞在骨组织工程中的应用情况,以明确脂肪间充质干细胞是否可以作为骨组织工程中的种子细胞。方法:应用计算机检索Medline数据库(1999-01/2008-12),以adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,adipose mesenchymal stem cells,adipose stem cell;osteogenic induction,osteogenic inducement,bone induction,osteoblastic induced;chondroblast induction,cartilage induction;bone tissue engineering,tissue engineering bone,tissue engineering of bone为检索词;应用计算机检索清华同方数据库(2003-01/2008-12),以脂肪间充质干细胞、成骨诱导、成软骨诱导、骨组织工程为检索词。结果与结论:共收集361篇关于脂肪间充质干细胞与骨组织工程相关的文献,中文246篇,英文115篇。排除发表时间较早、重复及类似研究,纳入29篇符合标准的文献。脂肪间充质干细胞体外扩增和自我更新能力很强,传代培养易于获得大量有分化能力的细胞,是真正意义上的具有多向分化潜能的干细胞,脂肪间充质干细胞在一定的培养条件下,可定向分化为成骨细胞、软骨细胞及骨细胞和肌肉细胞,配合合适的支架后可以应用到骨组织工程中,可以作为骨组织工程中的种子细胞。
  • 骨髓间充质干细胞与运动性心肌细胞凋亡 免费阅读 下载全文
  • 背景:运动性心肌细胞凋亡及其信号转导和调节机制的研究已成为运动医学领域的重要课题,但其研究成果并未能成功的解释此种现象。从现有的研究成果来看,引入骨髓间充质干细胞对运动性心肌细胞凋亡保护作用的研究还较少。目的:通过骨髓间充质干细胞对心肌细胞凋亡的保护作用以及运动引起心肌细胞凋亡现象的分析,探讨运动引起心肌细胞凋亡的病理病因,及骨髓间充质干细胞对保护机体心肌细胞因运动致使缺氧、缺血、氧化应激等诱导细胞凋亡的作用。方法:应用计算机检索Medline数据库(1994-01/2009-09),以Mesenchymal stem cells,Excessive exercise,Cardiomyocyte,Apoptosis为检索词;应用计算机检索重庆维普数据库(1994-01/2009-09)、清华同方数据库(1994-01/2009-06),以骨髓间充质干细胞、过度训练、心肌细胞、细胞凋亡为检索词。结果与结论:共收集365篇关于干细胞和运动性心肌细胞凋亡的文献,中文120篇,英文245篇。排除发表时间较早、重复及类似研究,纳入68篇符合标准的文献。骨髓间充质干细胞对大强度或超负荷的运动训练所6引起的缺氧、缺血、氧化应激等诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,从而促进心脏功能的提高和运动性心肌组织疾病的早期康复。
  • 神经干细胞在神经系统疾病中的应用 免费阅读 下载全文
  • 背景:神经干细胞的临床应用与基因治疗的有机结合可用于治疗多种神经系统遗传性和获得性疾病,但神经系统疾病多种多样,不同疾病神经组织内环境也不同,它们均影响神经干细胞的治疗效果。神经干细胞基因治疗中,如能同时转入多种外源性基因,让其相互作用及调节,就能更有效地促进神经组织不断再生。目的:文章就神经干细胞在神经系统疾病方面的应用进行综述。方法:应用计算机检索Medline数据库(2000-01/2009-08),以"Neural stem cells,Gene,Nervous system diseases"为检索词;应用计算机检索清华同方数据库(2000-01/2009-08),以"神经干细胞、基因、神经系统疾病"为检索词。结果与结论:计算机初检得到88篇英文文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关的20篇,内容重复性的研究28篇,共保留40篇文献进行综述。神经干细胞作为一种新型的治疗手段,已用作供体细胞或转基因载体,对脑血管病、脑损伤性疾病、脊髓损伤、神经变性病、脑肿瘤、遗传代谢性疾病等治疗均取得了一定效果,但神经干细胞增殖、分化、迁移调控机制的基础性研究还有许多关键问题没有解决,不同疾病神经组织内的微环境亦影响着神经干细胞的治疗。
  • 再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞体外生物学特性与其免疫调节缺陷 免费阅读 下载全文
  • 背景:许多报道指出骨髓间充质干细胞具有免疫调节及造血功能作用,而再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞与正常人骨髓间充质干细胞在免疫调节及造血功能都存在显著差异。目的:对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的体外生物学特点及与免疫调节缺陷之间的关系进行综述。方法:由第一作检索Pubmed数据库(1987/2009)和维普数据库(1989/2009),英文检索词为"Mesenchymal stem cell,Bonemarrow";中文检索词为"再生障碍性贫血,间充质干细胞",总计检索到文献55篇。纳入与再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞生物学特性相关及与再生障碍性贫血患者免疫调节相关的文献。排除重复性研究及与主题非密切相关的文献。符合纳入标准的32篇文献中,英文综述3篇,英文研究论文23篇,中文研究论文6篇。结果与结论:骨髓间充质干细胞具有高度增殖、自我更新及多向分化的能力,除支持造血、促进植入及体内造血重建等作用之外,还具有免疫负调节及降低移植物抗宿主病发生率的作用。再生障碍性贫血发病机制与造血干细胞内在增殖或分化缺陷,造血微环境系统异常以及机体免疫功能紊乱等有关,而再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的异常可能在其发病机制中存在重要作用。
  • [研究与报告]
    骨髓间充质干细胞旁分泌作用与脑缺血后的细胞凋亡(程峰 李立新 郝怀勇 田和平 代学良 胡卫星)
    血清剥夺法分离U87细胞系中的胶质瘤干细胞(刘于海 牛朝诗 李冬雪)
    表皮生长因子干预小鼠非黏附骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落形成及向神经元样细胞的分化
    脂肪基质细胞诱导分化为神经元细胞的实验
    音猬因子诱导恒河猴骨髓间质干细胞向神经元样细胞的分化与维甲酸方案比较其信号分子表达变化的意义
    人胎脑神经干细胞在发育期脑脊液中的迁移和分化
    离心力对兔骨髓基质细胞成骨分化的影响(徐南伟 张煜 周栋 孙荣彬)
    人脐带间充质干细胞分离培养及成骨分化 原子力显微镜观察细胞膜表面的超微结构变化
    转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化(李丽艳 黄金中 杜江)
    人脐带间充质干细胞在3种不同培养体系中的生长状况及腺病毒感染效率
    人脐血间充质干细胞向类肝细胞分化 人肝细胞共培养诱导法的可行性?
    新式分层共培养环境下人骨髓间充质干细胞诱导髓核细胞的分化
    人乳腺病变组织乳腺癌耐药蛋白及细胞角蛋白8和嗜铬蛋白A的表达 可能与多向分化潜能干细胞相关?(陈颖欣 李连宏 孙杰 王波 王丽霞)
    [延伸阅读]
    SCI收录的干细胞期刊介绍
    SCI期刊投稿要点之一二三:本刊发展部
    2010年CRTER杂志对综述、学术探讨、病例报告及调查分析类文章的体例要求:本刊中文部
    与干细胞研究相关学术会议介绍:本刊学术部
    干细胞研究有价值的近期新闻回顾:本刊学术部
    [技术与方法]
    转化生长因子β1基因转染鼠脂肪间充质干细胞的可行性
    胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子对人类牙乳头间充质细胞增殖和分化的影响
    利用基因芯片分析碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血干细胞CD34~+与CD133~+细胞基因表达的差异
    β-arrestin 2抗基因RNA对小鼠C17.2神经干细胞μ阿片受体脱敏感化的影响
    大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌HCN2及HCN4基因的表达
    大鼠骨髓间质干细胞可以成为PEX基因稳定转染的载体细胞吗?
    建立人急性粒细胞白血病M_2裸鼠模型(刘媛 董瑞红 李玉华 汪涯雅 毋静 黄睿 邓兰 宋朝阳 陆志刚 胡海燕)
    体外联合应用CD80和CD28/CpG ODN共刺激活化人外周血单个核细胞——对胃癌细胞株MKN45有靶向杀伤作用吗?(方军 李永研 郭树军)
    黄芪注射液促进脐血干细胞向肝细胞分化 具有增强移植干细胞治疗大鼠肝衰竭的效果
    冠状动脉搭桥与骨髓CD34~+细胞移植后心肌血流灌注及细胞代谢 双核素显像评价(张国旭 郝珊瑚 王治国 张彤 王辉山 陈宪英)
    接受嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠电生理及后肢功能变化
    自体骨髓单个核细胞移植起搏器诱导心力衰竭犬心功能变化 病理图像分析心脏切片胶原纤维定量的客观价值(李海嵘 徐爱国 张云强 齐向前)
    自体外周血干细胞移植治疗扩张型心肌病:38例24个月随访
    自体骨髓干细胞移植及自体髂骨植骨治疗骨不愈合的比较(英文)
    糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对髓系白血病骨髓细胞黏附功能的影响及其机制(英文)
    [本刊特稿]
    脂肪干细胞的分离培养及其成骨分化:本刊中文部
    《中国组织工程研究与临床康复》杂志2010年编辑工作目标——精致出版,优质服务,加倍努力,稳步前进!(王莉莎 贾红春 罗艳丽 李迎莉 李薇薇 赵萌)
    《中国组织工程研究与临床康复》杂志2010年稿件规范细则 稿件体例,英文表述,投稿须知
    造血干细胞移植的临床应用:现状与概况及未来

    医学英文句型正误辨析:本刊英文部
    少年有梦
    [综述与专论]
    外周血干细胞移植治疗神经系统疾病:可能,可行与可信
    成人骨髓间充质干细胞对实体器官移植之影响——在诱导耐受中已成为有意义的候选细胞(刘奎利 石炳毅)
    多发性骨髓瘤干细胞——表面标记和信号传导通路的作用与意义(鄢艳红 李惠民)
    表皮干细胞特性及其应用 走向临床的路程还有多长?(李俊男 刘流)
    干细胞治疗感音神经性聋的研究理论及其临床应用进展(秦贺 杨仕明 翟所强)
    骨组织工程中脂肪间充质干细胞的作用(贾经汉 张志 王向鹏 邹冬青)
    骨髓间充质干细胞与运动性心肌细胞凋亡
    神经干细胞在神经系统疾病中的应用
    再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞体外生物学特性与其免疫调节缺陷(何丽 肖扬)
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