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文献检索:
  • 利用高灵敏的TSA—FISH在玉米中定位bz1、bz2基因 收费下载
  • 植物中,程序性细胞死亡(PCD)发生在植物生殖和发育的许多方面,已有的研究表明,在玉米种子的发育过程中,胚肥组织经历了程序性细胞死亡的过程。bz1(bronze)和bz2是与种子的糊粉层发育相关的花青素生物合成基础,在玉米基因组中,bz1基因所在区域是重组热点,bz2与类黄酮的酰化、糖基化、转运、沉积等有关,基因的物理定位有利于基因的分离和克隆。TSA-FISH(Tyramide signal amplification fluorescence in situ hybridization)是一种新颖的高灵敏度的荧光原位杂交技术,它的主要反应原理是辣根过氧化物酶催化过氧化氢和标记的酪胺分子(tyramide)的苯环部分反应,使荧光标记的酪胺分子在直接带有或间接带有HRP报告分子的探针周围沉积,信号因此得以极大的放大,从而大大提高了荧光原位杂交技术的灵敏度,90年代中期开始引入动物和人类组织化学和细胞遗传学研究中,2001年才应用于植物细胞遗传学的研究。利用这一技术,我们将bz1基因定位于玉米的第9染色体的短臂和第1染色体的长臂上,其信号点距着丝粒的百分距离分别为40.2,75.4;bz2基因定位于玉米的第1染色体的长臂和第5染色体的短臂上,其信号点距着丝粒的百分距离分别为21.6,15.3。本文讨论了TSA-FISH技术在植物中小的、低拷贝的DNA序列定位上的应用。
  • 西藏牦牛血液酶活性与生产性能的相关性研究 收费下载
  • 测定了28头西藏牦牛血液中6种酶的活性,探讨了6种酶活性与生产性能的关系。相关分析表明,LDH活性与产奶量、CAT活性与腹毛长呈极显著的正相关(P<0.01),AKP活性与体重、Amy活性与体重呈显著正相关(P<0.05),SOD活性与体重呈显著负相关(P<0.05)。逐步回归分析表明,可以用LDH活性预测牦牛产奶量,用AKP、CAT、Amy 3种酶活性预测牦牛体重,用CAT、Amy活性预测牦牛腹毛长。因此,有望将LDH、AKP、CAT和Amy等酶活性作为生化遗传标记应用于牦牛产奶量、体重、腹毛长的选择中。
  • 猪体细胞核移植重构胚的体外发育 收费下载
  • 以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚,卵裂率达到56.7%,发育至桑椹胚率达到11.7%,囊胚率为6.7%,显著高于成纤维细胞重构胚(P<0.05)。本文还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响。以血清饥饿法将卵丘细胞诱导G0/G1期,抽吸法/解剖法采集卵母细胞,体外培养33-44h,将卵丘细胞放至去核卵母细胞的卵周隙中,重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6-DMAP激活处理,体外培养6d。研究表明,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松驰素(CB)、激活程度并不影响重构胚的发育(以卵龄44h的卵母细胞为受体);而以电脉冲结合6-DMAP激活处理能提高重构胚发育能力(以卵龄33h的卵母细胞为受体)(P<0.05)。本研究显示,以电脉冲结合6-DMAP激活卵丘细胞重构胚,体外能发育至囊胚。
  • 中国对虾精子顶体反应的超微结构和蛋白成分变化的研究 收费下载
  • 用卵水(egg water)对中国对虾纳精囊内精子进行人工诱导顶体反应,并分别用透射电镜和SDS-PAGE及复性单向电泳对顶体反应的超微结构变化和蛋白成分的变化进行了研究。结果表明,中国对虾精子在人工诱导条件下30min内有50%以上完成反应。电镜观察证明,中国对虾精子的顶体反应可分为两个阶段;(1)棘突的收缩;(2)顶体颗粒的释放和顶体帽的消失。在反应过程中许多蛋白被降解,且反应开始后精子本身释放出一些水解酶类,主要有200kDa、130kDa、66kDa、53kDa、48kDa和41kDa 6种。在对卵水成分的初步分析中发现两种分子量约200kDa的蛋白。
  • 泥螺卵子发生的超微结构研究 收费下载
  • 利用透射电镜观察了泥螺卵子发生过程。结果表明,泥螺的卵子发生可划分为卵原细胞、卵黄发生早期、卵黄发生中期及卵黄发生后期卵母细胞4个时期。卵原细胞核大而圆,胞质内分布有少量的线粒体和高尔基囊泡,细胞表面具微绒毛。卵黄发生早期的卵母细胞,胞质中各类细胞器发达,并出现数量较多的类朦子。卵黄发生中期的卵母细胞胞体迅速增大,核伸出伪足状突出,卵质中各种细胞器活动活跃,并参与形成卵黄粒和脂滴。此期还可观察到卵母细胞与滤泡细胞间的物质交换现象。卵黄发生后期的卵母细胞体积增至最大,细胞器数量减少。本文就卵黄发生前后卵母细胞内部构造的变化、意义及滤泡细胞与卵母细胞蛋白来源间的关系作了探讨。
  • 通过诱导剂作用于启动子的条件性基因表达 收费下载
  • 通过遗传工程技术获得的转基因动植物对分析某些生化过程和发育途径极为有用。通过化学诱导剂作用于启动子的条件性基因表达是分子生物学和生物技术应用研究中的强有力的手段。建立于目标基因激活和失活基础之上的几个究子诱导基因表达系统已有报道。将来自于原核生物、昆虫和其它动物的调节因子应用于新的物种有利于促进转基因技术的应用和有关基因的时空表达研究。本文综述了有关的基因表达调节系统,启动子激活的基因表达系统,启动子失活的基因表达系统,以及可诱导的基因过度表达和反义抑制系数。
  • ADAMs与生长发育 收费下载
  • ADAMs是近几年发现和鉴定的一类具有多个结构域和广泛生物学功能的细胞表面糖蛋白,由信号肽区、前调控区、金属蛋白水解酶区、去整合蛋白区、富半胱氨酸区、表皮生长因子区、跨膜区和细胞质区组成,已发现30多种成员。它们在性细胞发生、受精、胚胎发育、细胞融合、器官形成、细胞分化等方面起重要作用。本文重点介绍了ADAM10/Kuz在神经发育过程中的信号传导和蛋白水解酶作用及ADAM17/TACE、ADAMTS在小鼠胚胎发育过程中对眼、肾、肾上腺、生殖等器官结构、功能的作用;另外,还对ADAM12/meltrin α促进肥细胞融合、分化、MIG-17介导细胞迁移等多种ADAMs在生长发育方面的研究作了简要介绍。
  • 利用果蝇模型研究人类心脏早期发育的分子机理 收费下载
  • 近年来,果蝇心脏转化的遗传机制已初步研究清楚,但控制人类心脏早期发育的基因尚待鉴定。因为调控果蝇和脊椎动物早期心脏细胞命运定型的途径具有保守性,果蝇是一种探讨人类心脏早期发育的分子机理的理想动物模型。为此目的,我们采用P转座子和EMS诱变技术建立了约3000个隐性致死基因平衡系。通过心脏前体细胞特异性抗体免疫组化筛选,我们选出200余个表现心脏突变表型的平衡致死系。我们进一步利用RNAi技术对一些基因的功能进行了初步的研究,证明这些基因表现RNAi的突变表型,该类突变表型与基因突变时表现的表型相似,即心管呈缺陷型或无心脏前体细胞形成。利用果蝇和人类基因组计划获得的成果,我们从果蝇心脏侯选基因中初步克隆和鉴定了50个人类同源基因,其中20个是新基因。Northen印迹分析表明,一部分人类基因在心脏组织中有表达,从而为研究这些基因在人类心脏早期发育中的作用提供了信息。目前,我们正在建立转基因果蝇,以此为模型研究这些基因是否对心肌细胞发生或心肌功能起调控作用。产生心肌细胞突变类型的基因如果类似于人类心脏病综合症,则可以作为人类心脏疾病侯选基因作进一步的分析。
  • 囊胚形成的基因表达与调控 收费下载
  • 囊胚形成是胚胎早期发育过程中一个重要阶段,涉及几个重要的生理事件,即细胞融合(compaction,亦称致密化作用)、囊胚腔出现、囊胚腔扩张及滋养层和内细胞团的分化。在细胞间连接蛋白的作用下,各种细胞间连接方式逐步建立起来,在合子型基因组表达调控下,促进了最终囊胚的形成。细胞间连接蛋白和细胞粘附相关蛋白参与组建各种细胞间连接,参与细胞融合、囊胚腔形成、滋养层分化和囊腔扩张等过程。通过顶部的紧密连接、侧部的缝隙连接和桥粒,建立起细胞的连接复合体。在人胚胎8-细胞之前,卵裂球细胞界限明显,可能从中间连接方式相互作用;8-细胞期发生致密化作用,通过紧密连接将细胞分成顶部和基部,使得胚胎处于半封闭状态,促进胚胎内部积液,形成囊胚腔。细胞融合的同时也产生缝隙连接。桥粒最初出现在人胚胎达到32-细胞阶段,桥粒连接参与囊胚腔形成以及在囊胚扩张时维持滋养层的稳定性。桥粒由一些跨膜粒蛋白组成,包括参与细胞内粘附的桥粒子和桥粒球以及一些细胞质内蛋白(如desmoplakins,plakoglobin,plakophilin),由细胞内蛋白质形成空斑结构并介导细胞角蛋白丝固定。对植入前牛胚胎的研究表明,只有DcII,DcIII和plako三种桥粒蛋白参与桥粒组建。在鼠囊胚中DcII的表达部位位于滋养外胚层,对于滋养层的形成具有重要的作用。在牛中,直到桑椹胚期可能才出现紧密连接方式。人胚胎发育至囊胚期时,可检测到角蛋白-18基因的活跃表达,作为细胞骨架蛋白的角蛋白-18参与桥粒位点的细胞与细胞间“识别”的建立。缝隙连接蛋白连接子(Connexin43,Cx43)对于维持细胞融合以及之后囊胚的形成是十分必要的。细胞融合和囊胚腔形成还需要一些介导细胞粘附和滋养层细胞分化的分子表达,如整合素家族中的E-钙调素、链接子(caknin)和ZQ(一种细胞质带状咬合紧密连接相关蛋白)。Na/K-ATP酶基因及细胞因子、生长因子等可促进Na^+浓度梯度变化,使水分进入囊胚内部,形成囊胚腔,并维持囊腔腔扩张状态。调节发育和分化的基因参与胚胎的发育和内细胞团和滋养外胚层细胞的分化,调节胚胎由未分化状态向分化状态过渡。另外,某些细胞因子对内细胞团细胞增殖有影响。在小鼠胚胎培养基中,添加IGF和EGF有利于胚胎从透明带孵出,TGF-α和EGF在小鼠胚胎发育中能分别通过自泌作用和旁分泌作用囊胚腔的扩张膨大。许多基因参与囊胚的发育和分化,如Pem基因调节早期胚胎细胞分化,可调节鼠早期胚胎由未分化状态向分化状态过渡,Oct-4表达与未分化表型有关,在早期胚胎发育中起转录调节作用。植入前胚胎发育基因调节鼠胚植入前卵裂速度的快慢,以及胚胎预后生存能力。植入前因子PIF在受精后妇女的血清中就能检测出来,其特点和功能与囊胚形成的关系仍需进一步研究。Rex-1编码锌指蛋白,可能是一个转录调节因子,它参与滋养层发育以及精子发生,它是研究内细胞团早期细胞命运决定的有用标志物,对于维持胚胎干细胞的未分化状态和全能性有作用,当其表达显著降低时,内细胞团将分化成胚层。总之,多种蛋白、因子参与囊胚形成的表达调控。通过基因调控的研究,将有助于培养液的研制以及通过测定一些标志基因的表达筛选健康的胚胎。
  • 转基因植物转录后基因沉默的特点、机理及应用 收费下载
  • 自在转基因植物中发现转基因沉默现象以来,很多学者对该现象进行了广泛的研究,认为其作用机制有三种:位置依赖性基因沉默、转录水平基因沉默、转录后水平基因沉默。目前主要集中于转录后水平基因沉默的研究,通过研究发现它具有广泛性、可传导性及特异性的特点,并对其机制提出了一些假说。最近,人们还发现转录后水平基因沉默与植物抗病毒能力有联系。本文对转基因植物转录后基因沉默的特点、机理及应用方面的进展作了综述。
  • 《发育与生殖生物学报:英文版》封面