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  • 芒果苷的药理作用研究进展 免费阅读 下载全文
  • 芒果苷又称知母宁、芒果素,主要存在于漆树科和龙胆科植物中.因其是多酚酸类化合物,具有较强的抗氧化活性和多种药理作用.近年来,国内外大量研究报道芒果苷的各种药理学活性,包括抗糖尿病及其并发症、调节脂代谢异常、抗肿瘤、心血管保护、抗高尿酸血症、神经保护、抗氧化、抗炎、解热和镇痛、抗菌、抗病毒、抗辐射、保肝、促进骨骼发育、抗过敏和免疫调节等广泛的药理作用,具有进一步研究和开发的可能性.该文对近年来国内外芒果苷药理学作用的研究进展归纳、分析和总结,为进一步的药物研究和开发提供参考.
  • 肥胖与脂肪组织重构 免费阅读 下载全文
  • 肥胖是糖尿病、动脉粥样硬化、高脂血症和癌症发生发展的主要危险因素.肥胖发生时伴随着脂肪组织的重构,主要表现为各种细胞组成和功能的改变、血管新生、细胞外基质重构和炎症细胞浸润.深入研究脂肪组织重构对肥胖的防治具有重要意义.该文就肥胖发生时脂肪组织重构的最新研究进展进行综述.
  • 非编码RNA在血管损伤、重塑和老化中的作用 免费阅读 下载全文
  • 非编码RNA是一类具有多种功能而不翻译蛋白质的RNA.它除了rRNA、tRNA外,还包括MicroRNA、lncRNA、snoRNA等.MicroRNA和lncRNA在血管损伤、重塑和老化中的调控机制越来越受到人们重视.MicroRNA和lncRNA不仅参与氧化应激、炎症、细胞增殖、迁移、表型转换等方面的调控,也参与基因表达各方面的调控,包括转录、加工、转录后修饰和染色质重塑.这些调控与动脉粥样硬化、高血压、心肌梗死、脑卒中、肺动脉高压和糖尿病血管病变等血管系统疾病密切相关,为血管系统疾病的基因诊断与治疗提供新靶点、新思路、新方法.
  • 莪术提取物调控支架后再狭窄血管平滑肌细胞增殖的研究进展 免费阅读 下载全文
  • 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)异常增殖是支架后再狭窄(in-stent restenosis,ISR)的主要病理过程.近年来研究表明,莪术提取物具有抑制VSMCs增殖,进而抑制支架后再狭窄的作用,其发挥作用的有效成分主要有姜黄素和β-榄香烯,其可能的机制与抑制血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)表达、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)MAPK、Akt信号通路,阻滞细胞周期进程相关.该文就近年来莪术提取物调控支架后再狭窄VSMCs增殖的研究进展作一综述.
  • DJ-1蛋白对线粒体的功能调节在帕金森病中的作用 免费阅读 下载全文
  • 线粒体功能障碍在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发生过程中非常重要,DJ-1蛋白可以参与线粒体的功能调节,从而维持线粒体的正常功能.DJ-1基因突变及功能丧失时,则会导致线粒体复合物I活性和线粒体膜电位降低、线粒体断裂以及线粒体自噬等状况的出现,进而损伤神经元,引发PD.该文针对DJ-1蛋白对线粒体的功能调节在PD中的作用进行简要综述.
  • 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究 免费阅读 下载全文
  • 目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病K562细胞分化作用的蛋白质组学机制.方法1×10^-6mol·L^-1的ATPR及ATRA分别作用于人白血病K562细胞48h后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用Proteome Discoverer1-2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学DAVID数据库、KEGG数据库、STRING数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息.结果ATPR组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个.DAVID分析显示ATPR特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等.KEGG分析发现,ATPR组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3KAkt信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路.STRING蛋白相互作用网络分析显示ATPR特异性蛋白质,如EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系.结论ATPR组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是ATPR诱导K562细胞分化作用的可能机制.
  • 胆汁酸膜受体TGR5对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN、TGF-β1的调控作用 免费阅读 下载全文
  • 目的探究G蛋白偶联受体TGR5在大鼠肾小球系膜细胞中的表达以及高糖条件下对纤维连接蛋白(fibronectin,FN)以及转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白水平的影响,探索其在糖尿病肾病中可能发挥的作用.方法高糖(30mmol·L^-1 glucose,HG)条件下,用特异性激动剂INT-777激活TGR5,或者对TGR5进行过表达、干扰处理,通过Westernblot来检测大鼠肾小球系膜细胞中TGR5的表达情况以及FN、TGF-β1蛋白水平的变化.结果在大鼠肾小球系膜细胞中存在TGR5的表达;与对照组相比,激活TGR5后,由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的上升受到抑制(P〈0.01,P〈0.05);另一方面,干扰TGR5后,FN、TGF-β1的蛋白水平与对照组相比异常升高,差异有统计学意义(P〈0.01,P〈0.05).结论在大鼠肾小球系膜细胞中,TGR5可以抑制由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的升高,在糖尿病肾病的发生发展中可能发挥保护作用.
  • 动脉平滑肌细胞STIM1过表达上调Akt/mTOR通路并促进细胞增殖 免费阅读 下载全文
  • 目的观察基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在肺动脉高压组织中的表达,并探讨STIM1对动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制.方法-次性腹腔注射野百合碱(MCT)建立肺动脉高压大鼠模型;实时定量PCR和蛋白印迹分别测定肺动脉高压大鼠肺组织STIM1mRNA和蛋白的表达;采用基因转染技术建立STIM1瞬时高表达的动脉平滑肌A7R5细胞模型;用CCK-8法测定细胞增殖能力;用蛋白印迹测定Akt/mTOR通路分子的表达.结果与对照组相比,MCT组的右心室收缩压(RVSP)和右心重量指数(RVMI)均明显增高(P〈0.01),形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚,管腔减小;MCT组大鼠STIM1mRNA和蛋白表达量分别是对照大鼠的2.19和1.66倍;STIM1瞬时过表达的动脉平滑肌细胞与对照组相比,生长速度加快;STIM1过表达可明显增加Akt、mTOR、p70-S6K和4E-BP1的磷酸化水平,而对它们的蛋白水平没有影响.结论肺动脉高压发病中存在STIM1的过表达,STIM1可促进动脉平滑肌细胞增殖,其机制与上调Akt/mTOR信号转导通路相关.
  • 灰毡毛忍冬花蕾提取物及其两种主要皂苷的溶血性研究 免费阅读 下载全文
  • 目的评价灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的体内外溶血作用.方法采用肉眼观察法和紫外分光光度法,观察灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙浓度梯度为5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100mg·L^-1的溶液在体外对2%兔红细胞悬浮液的溶血反应;采用血液生化指标测定方法,分别检测灰毡毛忍冬花蕾提取物2.275g·kg^-1(生药)和1.137g·kg^-1(生药)组、灰毡毛忍冬皂苷乙0.110g·kg^-1和0.055g·kg^-1组、川续断皂苷乙0.020g·kg^-1和0.010g·kg^-1组以及生理盐水组,在小鼠尾静脉给药前及连续给药7d后,血液中红细胞数、网织红细胞数、血红蛋白含量.结果在体外溶血试验中,各给药组溶血率均〈5%,与对照组相比均未见明显的溶血现象(P〉0.05);在体内溶血试验中,各组小鼠用药前后,血液红细胞数、网织红细胞数、血红蛋白含量均处于正常范围内,且其数值在给药前后无差异(P〉0.05).结论在本试验条件下,灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙,在体外和体内试验均未导致溶血.
  • 紫草素对脑胶质瘤干细胞干性维持的相关研究 免费阅读 下载全文
  • 目的研究紫草素对脑胶质瘤干细胞(GSCs)干性维持的影响及相关分子机制.方法应用免疫荧光方法对分离提取的细胞球进行干细胞表面标志性分子CD133和nes-tin的检测;紫草素(2μmol·L-1)处理GSCs12、24和48h后,光镜下观察紫草素对GSCs悬浮细胞球形态的影响;采用亚球形成实验评估紫草素对GSCs自我更新能力的影响;应用Westernblot方法检测紫草素作用下GSCs干细胞标志分子CD133的表达变化,同时检测紫草素作用下,GSCs中PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt的表达变化;联合应用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)后检测紫草素作用下,GSCs干性维持的改变.结果分离提取的细胞球表面CD133和nestin呈阳性表达;紫草素能够明显抑制GSCs悬浮细胞球的形态和二代细胞球的形成,同时能够降低CD133的表达;与对照组相比,紫草素作用下,GSCs中PI3K和Akt的表达无变化,p-PI3K和p-Akt的表达呈现药物时间依赖性明显下降;此外,IGF-1能够明显改善紫草素对GSCs干性维持的抑制作用.结论紫草素能够明显抑制GSCs的干性维持,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关.
  • 二甲双胍抑制SREBP-1c改善高脂诱导的骨骼肌胰岛素抵抗 免费阅读 下载全文
  • 目的二甲双胍已成为治疗2型糖尿病的一线药物,前期研究结果提示固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regula-tory element binding protein-1c,SREBP-1c)抑制胰岛素受体底物-1(insulinreceptorsubstrate-1,IRS-1)基因转录表达,在高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中起关键作用.该研究探讨SREBP-1c在二甲双胍改善高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用及机制.方法经500μmol·L^-1 PA处理的L6细胞被二甲双胍(1、10mmol·L^-1)干预24h后,采用2-NBDG方法检测其葡萄糖摄取水平,Westernblot检测SREBP-1c、FAS、p-IRS-1(Tyr608/612)、IRS-1、p-AKT(Ser473)、AKT的蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验检测二甲双胍对SREBP-1c和IRS-1基因转录的调控.CHIP定量分析二甲双胍处理后SREPB-1c蛋白与IRS-1启动子区域的相互作用.结果L6肌管细胞经PA处理后,糖摄取下降,SREBP-1c及其下游分子FAS表达升高,胰岛素信号通路相关分子p-IRS-1(Tyr608/612)、IRS-1、p-AKT(Ser473)/AKT表达下降;不同浓度二甲双胍干预后,L6肌管细胞糖摄取呈剂量依赖性增加,SREBP-1c、FAS表达下降,而p-IRS-1(Tyr608/612)、IRS-1、p-AKT(Ser473)/AKT表达升高.双荧光素酶报告基因实验结果显示二甲双胍抑制SREBP-1c启动子活性,增加IRS-1启动子活性.CHIP结果显示二甲双胍使SREBP-1c蛋白结合到IRS-1启动子区域的量下降约30%.结论二甲双胍通过抑制SREBP-1c改善高脂诱导的骨骼肌胰岛素抵抗.
  • 青蒿琥酯对人大肠癌Lovo细胞侵袭影响的初步研究 免费阅读 下载全文
  • 目的观察青蒿琥酯对大肠癌细胞的侵袭作用,并探讨其作用机制.方法采用不同浓度的青蒿琥酯(20、80、160μmol·L^-1)作用于人大肠癌Lovo细胞,软琼脂集落形成实验检测青蒿琥酯对Lovo细胞锚着不依赖性增殖的影响;Transwell侵袭实验检测其对Lovo细胞侵袭的影响;Westernblot方法分别检测Lovo细胞内HMGB1和MMP-2蛋白质水平的表达情况.结果青蒿琥酯能有效抑制Lovo细胞的增殖和侵袭能力,且呈剂量依赖性(P〈0.01).与对照组相比,不同浓度青蒿琥酯处理组HMGB1和MMP-2蛋白表达逐渐减少,差异有统计学意义(P〈0.05).结论青蒿琥酯可明显抑制大肠癌Lovo细胞侵袭,其机制可能与抑制HMGB1蛋白,下调MMP-2表达有关.
  • 沉默DNMT1基因对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的探讨siRNA沉默DNMT1基因对人急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响.方法将DNMT1特异性siRNA经LipofectamineTM2000转染Molt-4细胞后,应用RT-PCR检测Molt-4细胞DNMT1mRNA表达,MTT法绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞凋亡.Westernblot检测Bcl-2、procaspase-3、P15蛋白表达以及组蛋白甲基化、乙酰化状态的改变.结果DNMT1siRNA可沉默DNMT1基因的表达,并呈现浓度依赖性;抑制Molt-4细胞增殖,诱导细胞凋亡.经0、30、60、120nmol·L^-1 DN-MT1siRNA 作用24h后,细胞凋亡率分别为(4.27±1.42)%,(15.25±1.54)%,(35.63±2.54)%,(66.27±3.02)%,差异具有统计学意义(P〈0.05).DNMT1siRNA可上调P15的表达;下调Bcl-2、procaspase-3的表达,下调组蛋白H3K9甲基化水平,上调组蛋白H3K4的甲基化水平,而组蛋白H3乙酰化水平无明显变化.结论DNMT1siR-NA可以有效地抑制Molt-4细胞中DNMT1的表达,下调组蛋白H3K9甲基化水平,上调组蛋白H3K4的甲基化水平,从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡.
  • 依普利酮下调SGK1表达抑制梗阻性肾病细胞增殖的研究 免费阅读 下载全文
  • 目的观察盐皮质激素受体阻断剂依普利酮抑制梗阻性实验动物肾脏细胞增殖的作用及机制.方法结扎大鼠 单侧输尿管(UUO)制备肾间质纤维化动物模型,给予依普利酮100mg·kg^-1·d^-1治疗,10d后摘取肾脏,观察大鼠肾脏组织病理改变.采用免疫组化、Westernblot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、血清糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达.结果肾脏病理显示,UUO组大鼠肾脏有明显的细胞外基质(ECM)积聚,有大量炎性细胞浸润,肾小管扩张明显,上皮细胞脱落,依普利酮可明显减轻其细胞增殖及ECM的沉积;免疫组化和Westernblot结果显示,UUO组大鼠肾脏PCNA、SGK-1、TGF-β1表达明显增强;依普利酮可下调其表达.结论依普利酮可通过下调SGK1的表达,抑制梗阻性肾病细胞增殖,减少ECM的沉积,减缓肾脏纤维化的进程,减轻肾脏损伤.
  • 斑马鱼胚胎评价5种药物的发育毒性与模型验证 免费阅读 下载全文
  • 目的用斑马鱼胚胎探究环磷酰胺、乙酰水杨酸、盐酸四环素、乙酸地塞米松、阿扎胞苷5种已知对人类胚胎致畸药物的毒性和安全性.方法挑选4hpf发育正常的受精卵,采用水浴染毒法,将药物添加到人工海水中,每种药物分别设置5个浓度组,另设空白对照组和溶剂对照组,观察给药120hpf后斑马鱼的死亡情况,统计各实验组斑马鱼胚胎的死亡数、畸形数,并求出120hpf时斑马鱼胚胎的死亡率、畸形率、半数致死浓度(LC50)、半数致畸浓度(EC50)、致畸指数(TI).并利用公式:TI=LC50/EC50计算出阳性药物的致畸指数.根据已经测得的LC50,求出各药物的最大非致死浓度(MNLC),分别设置1/10MNLC、1/3MNLC,MNLC和LC104个浓度,以沙利度胺为阳性对照,维生素C为阴性对照,人工海水为空白对照,05%DMSO为溶剂对照,285℃下作用至120h,每天观察胚胎的发育情况,统计胚胎死亡及畸形状态.结果5种药物的LC50从大到小依次为:环磷酰胺〉阿扎胞苷〉盐酸四环素〉乙酰水杨酸〉乙酸地塞米松.EC50从大到小依次为:环磷酰胺〉盐酸四环素〉阿扎胞苷〉乙酰水杨酸〉乙酸地塞米松.环磷酰胺、乙酰水杨酸、盐酸四环素、乙酸地塞米松、阿扎胞苷TI值分别为1.92,1.11,1.05,1.44,2.99.结论斑马鱼胚胎模型可用于初步评价药物的发育毒性和安全性.
  • 显脉旋覆花不同部位体内外抗氧化作用比较 免费阅读 下载全文
  • 目的为合理利用显脉旋覆花资源,研究了显脉旋覆花体内外抗氧化作用。方法通过水煎法、索氏醇提法及超声醇提法对显脉旋覆花地上及地下部分药用成分进行提取,并通过体内外实验比较了不同部位超声醇提物的抗氧化效果。结果超声醇提所得总酚及总黄酮含量最高,提取物中总酚含量明显高于总黄酮含量;显脉旋覆花超声醇提物对DPPH、ABTS及超氧阴离子自由基都有很好的清除效果,地下部分提取物的清除效果明显优于地上部分;提取物灌药可明显提高D-半乳糖致衰小鼠肝脏、肾脏及血清的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活性,并降低丙二醛(MDA)含量,地上部分高浓度抗氧化效果相当于地下部分低浓度的效果。结论显脉旋覆花醇提物对自由基有良好的清除作用,具有较好的抗氧化能力,地下部分抗氧化的效果明显高于地上部分。
  • Sorting nexin10缺失对小鼠巨噬细胞功能的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的内涵体/溶酶体转运对巨噬细胞处理病原体和炎症应答等功能至关重要.该研究探讨了内涵体/溶酶体转运调节蛋白SNX10对巨噬细胞功能的影响,为治疗多种巨噬细胞相关免疫疾病提供新的潜在靶点.方法PCR反应鉴定小鼠基因型;激光共聚焦检测巨噬细胞吞噬功能;庆大霉素保护实验检测巨噬细胞的杀菌功能;RT-q-PCR法检测TNF-α、IL-12/23p40、IL-6的表达水平;ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、IL-12/23p40、IL-6的表达;Westernblot和免疫荧光染色检测NF-κB通路;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激巨噬细胞炎症化.结果SNX10敲除后对其吞噬功能没有影响,但能够增强巨噬细胞的杀菌能力;同时SNX10缺失还可以抑制巨噬细胞分泌促炎因子TNF-α、IL-12/23p40和IL-6,抑制NF-κB信号通路.结论SNX10敲除增强了巨噬细胞的杀菌能力,同时可以抑制巨噬细胞的炎症应答,其作用机制可能是通过NF-κB信号途径而实现的.
  • 白藜芦醇通过降低NF-κBp65乙酰化缓解大鼠神经病理性疼痛 免费阅读 下载全文
  • 目的观察白藜芦醇对腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)大鼠的镇痛作用及其相关机制.方法90只♂ SD大鼠随机分为6组(n=15).正常组;假手术组;疼痛组;高、中和低剂量白藜芦醇组.正常组不做处理,假手术组仅暴露腰5脊神经,其余各组行SNL.高、中、低剂量组分别将300、30、3μg白藜芦醇溶于10μL的100%二甲基亚砜溶剂中,于SNL术后d4经鞘内导管给药,每天1次,连续给药4d.术后1、3、5、7、9、11、14d测定各组大鼠热缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL).行为学测试结束后处死大鼠,取腰段脊髓.Westernblot检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)和乙酰化p65蛋白的表达水平,采用免疫荧光法测定脊髓背角活化的核因子κB(NFκB)表达.结果与假手术组比较,疼痛组大鼠术后PWL明显降低(P〈0.05),SIRT1蛋白含量明显减少(P〈0.05),乙酰化p65蛋白含量和活化的NF-κB表达明显增多(P〈0.05).与疼痛组比较,高、中剂量组大鼠给药后PWL和SIRT1蛋白含量明显升高(P〈0.05),乙酰化p65蛋白含量和活化的NF-κB表达明显减少(P〈0.05).结论鞘内注射白藜芦醇可缓解神经病理性疼痛,其机制可能与激活SIRT1,促进p65去乙酰化,从而抑制NF-κB活化有关。
  • 白介素-1β增加血脑肿瘤屏障通透性的作用机制 免费阅读 下载全文
  • 目的研究白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对胶质瘤细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、脑血管内皮细胞内质膜微囊结构蛋白caveolin-1表达和质膜微囊小凹的影响,初步探讨IL-1β开放血肿瘤屏障的可能机制.方法利用Transwell制备体外血肿瘤屏障模型.Westernblot法动态监测IL-1β对胶质瘤细胞内VEGF、脑血管内皮细胞内caveolin-1蛋白表达水平的影响.透射电镜观察脑血管内皮细胞内质膜微囊小凹的数量,荧光素钠渗出实验评估IL-1β对血肿瘤屏障通透性的影响.结果成功建立了体外血肿瘤屏障模型.当IL-1β作用于体外血肿瘤屏障模型后,VEGF蛋白的表达量增加,于60min时达到峰值,至120min时恢复到初始状态.体外血肿瘤屏障通透性亦于IL-1β作用60min时最大.另外,我们的研究结果还发现,IL-1β作用于血肿瘤屏障模型60min时,脑微血管内皮细胞中质膜微囊结构蛋白caveolin-1的蛋白表达水平及质膜微囊小凹的数量达到峰值,其后减少,并于120min时恢复到未给药状态.结论IL-1β增加了血肿瘤屏障的通透性,此作用可能与IL-1β通过VEGF/caveolin-1途径增加了质膜微囊小凹数量有关.
  • N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用 免费阅读 下载全文
  • 目的构建携带N末端Strep(NS)蛋白标签的表达载体;在表达载体中构建衣原体RNA聚合酶亚基重组蛋白并表达.方法采用PCR的方法,通过引物引入NS蛋白标签和新的多克隆位点替代pET215-DH质粒中原有的T7蛋白标签和多克隆位点,选择新引入的NotI酶切位点进行PCR产物的环化自连,转化DH-5α细菌后筛选阳性菌株,PCR法和基因测序法鉴定新构建的表达载体;在新构建表达载体的BamHI和SalI位点之间分别插入衣原体RNA聚合酶核心酶的α、β、β′亚基,获得表达NS-α、NS-β、NS-β′融合蛋白的表达载体,转化表达菌株ArcticExpress,筛选阳性表达菌株,并用考马斯亮蓝染色、Westernblot等法鉴定融合蛋白的表达情况.结果成功构建了携带NS蛋白标签的pET21c-NS-MCS载体,并成功将其应用于衣原体RNA聚合酶核心酶亚基融合蛋白的构建及表达.结论获得稳定表达NS-α、NS-β、NS-β′融合蛋白的表达载体,为研究衣原体基因转录调控奠定了良好的基础.
  • 左旋金黄紫堇碱抗精神分裂症作用研究 免费阅读 下载全文
  • 目的研究左旋金黄紫堇碱(l-SLR)的抗精神分裂症作用.方法采用NMDA受体拮抗剂MK-801在动物模型上诱发精神分裂症的阳性症状、阴性症状及认知损伤;评价了化合物l-SLR对MK-801诱发的精神分裂症的作用;并评价了l-SLR对小鼠锥体外系功能的影响.结果MK-801(0.3mg·kg^-1,ip)引起大鼠前脉冲抑制损伤,l-SLR(10、15mg·kg^-1,ip)能抑制MK-801引起的大鼠前脉冲抑制损伤;l-SLR(30mg·kg^-1,ip)能抑制多巴胺受体激动剂阿扑吗啡(2mg·kg^-1,sc)引起小鼠的攀爬行为,说明l-LSR对MK-801及阿扑吗啡诱发的精神分裂症阳性症状有抑制作用.l-SLR(30mg·kg^-1,ip)能抑制MK-801(0.2mg·kg^-1,ip)引起的小鼠群居接触抑制及MK-801诱发的小鼠认知损伤,说明l-SLR能改善MK-801诱发的精神分裂症阴性症状和认知障碍.经典抗精神分裂药氟哌啶醇在治疗剂量下(0.8mg·kg^-1,ip)诱发小鼠木僵行为,l-SLR在抗精神分裂的剂量下(30mg·kg^-1,ip)不会诱发木僵行为.结论化合物l-SLR对精神分裂症的阳性症状、阴性症状以及认知障碍均有效,而且其在有效剂量时对锥体外系的影响明显小于氟哌啶醇和l-SPD.
  • HPLC测定大鼠血浆中1,8-二川芎嗪基大黄酸及其药代动力学研究 免费阅读 下载全文
  • 目的建立测定大鼠血浆中1,8-二川芎嗪基大黄酸浓度的HPLC方法,并对大鼠尾静脉注射给药1,8-二川芎嗪基大黄酸后,研究其在大鼠体内的药代动力学.方法采用大黄素为内标,血浆样品用甲醇沉淀蛋白后进行HPLC分析,流动相为甲醇-0.1%甲酸水(78∶22,V/V),流速为1.0mL·min^-1,检测波长为275nm.大鼠单剂量静脉注射2、4、8mg·kg^-11,8-二川芎嗪基大黄酸后,测定给药后不同时间点大鼠血浆中1,8-二川芎嗪基大黄酸的浓度,并对其血药浓度一时间曲线采用DAS2-1软件拟合,计算药动学参数.结果1,8-二川芎嗪基大黄酸在0.05-10.00mg·L^-1血浆浓度范围内线性关系良好(r=0.9962),定量下限为0.05mg·L^-1,提取回收率均大于88%,日内和日间差异RSD均小于6%,方法学考察均符合要求.1,8-二川芎嗪基大黄酸按2、4和8mg·kg-1静脉注射给药后,在大鼠体内的T1/2分别为(68.35±1.36)、(69.32±2.21)、(69.32±2.03)min,AUC0-t分别为(101.03±24.9),(144.79±3.29),(231.92±1930)min·mg·L^-1.结论本实验所建立的HPLC方法操作简便、快速、专属性强,可用于1,8-二川芎嗪基大黄酸血药浓度分析及其药代动力学研究.
  • 高糖对肾小管细胞胆固醇转运的影响及花青素的干预研究 免费阅读 下载全文
  • 目的观察高糖环境中肾小管上皮细胞胆固醇代谢变化以及花青素对其干预作用.方法体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),随机分为正常糖组、高糖组、甘露醇组、花青素1(C3G)干预组及花青素2(Cy)干预组.采用MTT法观察花青素对细胞活力的影响;AmplexRed荧光法和Filipin染色检测细胞内外胆固醇水平;RT-qPCR和Westernblot检测三磷酸腺苷结合区转运蛋白A1(ABCA1)的表达.结果与正常糖组比较,高糖培养的肾小管上皮细胞内出现胆固醇蓄积,细胞上清中的胆固醇含量明显下降;RT-qPCR 和Westernblot检测发现三磷酸腺苷结合区转运蛋白A1(AB-CA1)的表达高糖组均低于正常对照组,差异有统计学意义(P〈0.05).花青素1(C3G)干预组及花青素2(Cy)干预组相比较高糖组,ABCA1的蛋白和RNA表达均明显提高,胆固醇胞内蓄积明显减少.结论高糖可诱导的肾小管上皮细胞三磷酸腺苷结合区转运蛋白A1表达降低,导致胆固醇外流减少,从而造成胆固醇胞内蓄积;花青素减少胆固醇胞内蓄积部分可能是通过上调ABCA1的表达实现的.
  • 越鞠甘麦大枣汤对产后抑郁小鼠海马AKT/mTOR信号通路的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的以慢性孕前应激诱导建立产后抑郁症小鼠模型,研究越鞠甘麦大枣汤(越甘)对产后抑郁母鼠的快速抗抑郁作用,并从海马AKT/mTOR信号通路角度探讨产后抑郁的发病机制以及中药越甘快速治疗产后抑郁症的作用机制.方法将32只Balb/c母鼠随机分为2组,空白对照组,不给予任何刺激;孕前应激组,小鼠给予慢性束缚刺激.3周后慢性孕前应激组小鼠♀♂合笼交配怀孕,于分娩后3周检测母鼠悬尾测试(tailsuspensiontest,TST).将产后抑郁模型组母鼠随机分为3组:模型组、越甘组(YG)、氯胺酮组.检测药物对产后抑郁母鼠的干预作用,并取母鼠海马检测AKT、mTOR磷酸化蛋白(phosphorylation protein)以及总蛋白的表达.结果产后3周,与对照组比较,PPD模型组在悬尾测试中的绝望状态不动时间明显增加(P〈0.01).与对照组相比,PPD模型组母鼠海马AKT、mTOR磷酸化蛋白表达均下调,且差异具有显著性(P〈0.01,P〈0.01).单次给予越甘或氯胺酮24h之后,PPD模型母鼠悬尾测试的绝望不动时间明显降低(P〈0.01,P〈0.01),并且海马AKT、mTOR磷酸化蛋白表达均明显上调(P〈0.01,P〈0.01),(P〈0.01,P〈0.01).结论慢性孕前应激可诱导Balb/c母鼠表现出产后抑郁样症状,其发病机制可能与下调海马AKT/mTOR信号通路的蛋白表达有关.在此产后抑郁模型上,中药越甘具有与西药氯胺酮一致的快速抗抑郁作用,其作用机制可能与上调AKT/mTOR信号通路有关.
  • 补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及Nrf2/HO-1信号途径的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的观察补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号途径的影响.方法120只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组.采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,各组给予相应处理.在d1、3、7三个时间点取脑组织进行检测,免疫组织化学法检测血浆Ⅷ因子相关抗原(vWF),测定微血管密度(MVD).采用Real-timePCR和Westernblot法检测大鼠脑组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达.结果① 与假手术组比,模型组vWF阳性表达微血管在d3时表达明显升高(P〈0.05),给药组d7与模型组比较差异有显著性(P〈0.05);② 假手术组Nrf2、HO-1mRNA及蛋白呈少量表达,模型组Nrf2蛋白表达水平d3与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P〈0.01),各给药组能上调Nrf2mRNA及蛋白表达,其中Nrf2mRNA在d7,Nrf2蛋白表达在d1及d7上调最明显,与同时间点模型组比较差异具有统计学意义(P〈0.01).模型组HO-1mRNA及蛋白在d7与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P〈0.05),各给药组HO-1mRNA在d3,HO-1蛋白在d3及d7上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01).结论补阳还五汤精简方促进脑缺血后血管新生,这一作用可能与调控Nrf2/HO-1信号途径的表达有关.
  • 人乳腺癌斑马鱼移植瘤模型建立 免费阅读 下载全文
  • 目的研究人乳腺癌斑马鱼移植瘤模型的建立方法及其相关的蛋白表达.方法分别选用MCF-7、T-47D、MDA-MB-231细胞系显微注射至斑马鱼幼鱼体内,考察不同乳腺癌细胞系在斑马鱼体内的定植迁移、细胞数量变化、细胞分布以及对斑马鱼肠下静脉丛(subintestinal veins,SIVs)的影响,建立乳腺癌斑马鱼移植瘤模型;并考察JAK抑制剂对斑马鱼移植肿瘤的影响,并对相关蛋白表达的情况进行蛋白印迹分析.结果在接种细胞数大于每只200时,斑马鱼的肿瘤模型成功率大于比例0.90;MB-231移植瘤在斑马鱼体内具有明显的迁移特征,这种特征可被JAK抑制剂tofac-itinib抑制(P〈0.01);同时tofacitinib可明显减少移植瘤模型体内MB-231的数量(P〈0.01);移植瘤可促进SIVs增生,酪氨酸抑制剂PTK787可明显地抑制移植瘤引起的SIVs的生长(P〈0.01);蛋白印迹结果显示,4d斑马鱼胚胎自身HER2有表达,T-47D斑马鱼模型组组织中HER2表达增加;MB-231斑马鱼模型组组织中VEGFa高表达;tofacitinib处理后的移植瘤其p53表达增强.结论人源肿瘤通过微量显微注射方法可成功建立斑马鱼乳腺癌移植瘤模型,该模型可用于抗肿瘤药物的初步筛选研究.
  • 高架〇迷宫实验:昆明小鼠状态焦虑动物模型的重测信度研究 免费阅读 下载全文
  • 目的探讨高架〇迷宫实验(elevated zero maze,EZM)作为昆明小鼠状态焦虑动物模型的重测信度.方法昆明小鼠(4周龄,♂/♀)进行EZM实验,实验间隔1周进行2次,采用摄像系统记录5min行为变化,包括两臂区进入时间及进入次数;纳入实验参数有:开臂区进入时间百分率(Otime%)、开臂区进入时间(Otime)、闭臂区进入时间(Ctime)、开臂区进入次数百分率(Oentries%)、开臂区进入次数(Oentries)、闭臂区进入次数(Centries)及两臂区进入总次数(Entries);通过组内相关系数(intraclass correlation coef-ficient,ICC)和kappa一致性系数(kappa agreement index,κ)对EZM进行重测信度检验,并分析性别、重复测量等因素对EZM行为模式的影响.结果ICC结果显示,Otime%(♂ICC=0.753,P〈0.01;♂ +♀ ICC=0.535,P〈0.05)、Otime(♂ ICC=0.753,P〈0.01;♂ +♀ ICC=0.535,P〈0.05)、Ctime(♂ ICC=0.753,P〈0.01;♂ +♀ ICC=0.535,P〈0.05)、Oentries(♂ ICC=0.719,P〈0.01;♀ ICC=0.494,P〈0.05;♂ +♀ ICC=0.583,P〈0.01)、Centries(♀ ICC=0.658,P〈0.01;♀ ICC=0.508,P〈0.05;♂ +♀ ICC=0.562,P〈0.01)、Entries(♂ ICC=0.691,P〈0.01;♀ ICC=0.502,P〈0.05;♂ +♀ ICC=0.574,P〈0.01)初测重测信度相对较好,且有统计学意义;κ结果显示,Otime%(♂ κ=0.393,P〈0.05)、Ctime(♂ κ=0.393,P〈0.05)、Oentries(♂ κ=0.308,P〈0.05;♂ +♀ κ=0.256,P〈0.05)、Cen-tries(♂ κ=0.427,P〈0.01;♂ +♀ κ=0.238,P〈0.05)、Entries(♂ κ=0.469,P〈0.01)有统计学意义,但初测重测信度相对较差.结论Otime%、Entries作为EZM评价状态焦虑动物模型的稳定参数,具有尚可接受的重测信度;尤其应注意♂/♀(强烈推荐♂)对EZM重测信度影响效应相对较大,而重复测量影响效应相对较小.
  • 基于人胚胎干细胞的实时细胞系统评价心脏毒性方法的建立 免费阅读 下载全文
  • 目的采用人胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞(hu-man embryonic stem cells derived cardiomyocytes,hESC-CM)联合实时细胞分析系统(real-time cell analysis Cardio,RTCACardio),建立-种体外药物心脏毒性早期筛选方法.方法将hESC-CM接种到RTCACardioE-Plate96孔板,分析心肌细胞的搏动频率、幅度和搏动节律不规则性指数确定细胞最佳接种密度及检测时间,建立体外药物心脏毒性早期筛选方法.在此基础上,分别采用0.1%DMSO作为溶剂对照及具有抗心律失常作用的药物奎尼丁(0.2、0.78、3.13、12.5、50和100μmol·L^-1)作为阳性对照进行了验证.结果0.1%DMSO对hESC-CM的生长指数(cellindex,CI值)、搏动特征图谱及搏动频率和幅度均无影响.而与溶剂对照组相比,奎尼丁浓度≥3.13μmol·L^-1时影响细胞CI值和特征性搏动图谱,抑制细胞搏动频率和幅度,且具有浓度依赖性,浓度越高细胞搏动信号恢复所需时间越长,对搏动频率和幅度的抑制作用越明显.结论采用hESC-CM联合RT-CACardio系统建立的体外药物心脏毒性早期筛选方法可以检测出奎尼丁对心肌细胞搏动状况的影响,该方法可作为一种高通量筛选工具用于临床前药物心脏毒性早期筛选.
  • 多靶点鬼臼毒素新衍生物CCP-1抗肿瘤多药耐药作用机制研究 免费阅读 下载全文
  • 以往单一靶点的抗肿瘤药物极易产生耐药.多靶点的化疗药物具有其独特优势,如多靶点的化疗药物是单分子化合物,不存在多药物联合应用中的药物相互作用问题,也可避免药物联合应用中药物配伍、剂量、给药方式等问题.本课题组以天然产物中鬼臼毒素为母核,整合了具有抗肿瘤耐药的小分子片段,将鬼臼毒素新衍生物设计为同时作用于多个耐药靶点的化合物,以更好的克服传统单靶点化疗药物易产生多药耐药的缺陷.前期筛选发现衍生物CCP-1具有良好的抗肿瘤多药耐药的作用.本文将对CCP-1的体内和体外抗肿瘤作用及其可能作用机制作初步探讨.
  • 柴胡提取物对PMS肝气郁证模型大鼠额叶5-HT3A/3BR分布与蛋白表达的影响 免费阅读 下载全文
  • 经前期综合征肝气郁证(premenstru alsyndrome,PMS)症状表现类似于现代医学中的抑郁样情绪改变,前期研究证明PMS肝气郁证的发生与脑内5-HT系统及其受体密切相关[1],柴胡提取物通过不同分子机制干预PMS肝气郁证的抑郁情绪[2-3].但是柴胡提取物在5-HT3R水平对PMS肝气郁证经前抑郁情绪的干预机制尚未见报道,因此,本实验选取PMS肝气郁证为动物模型初步探讨柴胡提取物调控抑郁情绪的微观作用机制.
  • 靶向哺乳动物细胞线粒体的核酸转运 免费阅读 下载全文
  • 线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的遗传性突变和缺陷是多种线粒体功能失调相关疾病的根本原因.靶向线粒体递送核酸,可从根本上纠正mtDNA突变、挽救mtDNA损伤、阻断疾病进程.哺乳细胞内线粒体的核酸转运途径与细胞核的基因转染大不相同.该文综述了向哺乳动物细胞线粒体递送DNA和RNA(tRNA、rRNA、mRNA和反义RNA)的有效策略,并对其存在问题和发展趋势做一阐述.
  • 《中国药理学通报》投稿与阅读须知 免费阅读 下载全文
  • 本须知刊登在本刊每卷卷首,主要参照国际医学期刊编辑委员会制订的《生物医学期刊投稿的统一要求》[Uniform Re quirements of Manuscripts Submit-tedto Biomedical Journal:Writing and Editingfor Bio-medical Publication(Updated April 2010)http://www.icmje.org].
  • [讲座与综述]
    芒果苷的药理作用研究进展(杨海光;方莲花;杜冠华)
    肥胖与脂肪组织重构(杨永玉[1,2];胡长平)
    非编码RNA在血管损伤、重塑和老化中的作用(马婧;凌霜;党延启;倪荣镇;郭慧宁;李玉凤;王淑荣;许锦文)
    莪术提取物调控支架后再狭窄血管平滑肌细胞增殖的研究进展(冒慧敏[1,2];刘剑刚;赵福海;史大卓;刘秀华)
    DJ-1蛋白对线粒体的功能调节在帕金森病中的作用(郭涌斐;孙懿;赵欣;蒲小平)
    [论 著]
    4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究(孟遥;张冬玲;夏泉[1,2];葛金芳;陈飞虎)
    胆汁酸膜受体TGR5对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN、TGF-β1的调控作用(熊凤霄;杨志英;王少贵;陈诚;黄河清)
    动脉平滑肌细胞STIM1过表达上调Akt/mTOR通路并促进细胞增殖(张明芳;齐元麟;王丹;王情;陈富华;林默君)
    灰毡毛忍冬花蕾提取物及其两种主要皂苷的溶血性研究(汪宏锦;王红玉;何然;吴俊杰;徐晓玉)
    紫草素对脑胶质瘤干细胞干性维持的相关研究(刘静;笪祖科;李振;薛一雪;刘丽波;王萍;刘云会)
    二甲双胍抑制SREBP-1c改善高脂诱导的骨骼肌胰岛素抵抗(吴文君[1,2];汤孙寅炎;时俊锋;尹雯雯;曹殊;朱大龙;毕艳)
    青蒿琥酯对人大肠癌Lovo细胞侵袭影响的初步研究(郭颖;郭建华;符航;田芝瑜;罗强;刘芳;张林西)
    沉默DNMT1基因对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响(陈淑瑜;黄轶群;游育红;马旭东)
    依普利酮下调SGK1表达抑制梗阻性肾病细胞增殖的研究(吴丽敏[1,2];陈立祥;梁丽娟;王筝;王淼;刘少伟;熊云昭;王萱;许庆友[1,2])
    斑马鱼胚胎评价5种药物的发育毒性与模型验证(许冰洁;张立将;李春启;宣尧仙)
    显脉旋覆花不同部位体内外抗氧化作用比较(贺安娜[1,2,3];佘朝文[2,3];曾军英[1,2,3];彭圣贤)
    Sorting nexin10缺失对小鼠巨噬细胞功能的影响(李婉贞;游艳;彭锦;周春;李东;沈晓燕[1,2])
    白藜芦醇通过降低NF-κBp65乙酰化缓解大鼠神经病理性疼痛(王依慰[1,2];刘清珍;陈春龙;支亦博;章洁[1,2];李伟彦)
    白介素-1β增加血脑肿瘤屏障通透性的作用机制(王健;孙月明;秦丽娟)
    N末端Strep蛋白标签表达载体的构建和应用(石禹[1,2];吉宏张;包小峰)
    左旋金黄紫堇碱抗精神分裂症作用研究(高赟赟;米桂芸[1,2];刘帅;杨征)
    HPLC测定大鼠血浆中1,8-二川芎嗪基大黄酸及其药代动力学研究(彭兆亮;李洁;樊玲;王雪琦;黄鹏;栗进才;汪电雷[1,2];陈亚军;王淑君;汪珊珊;张悦)
    高糖对肾小管细胞胆固醇转运的影响及花青素的干预研究(杜春阳;史永红;朱艳;任韫卓;吴海江;韦金英;吴明;肖夏;段惠军)
    [复方药物药理学]
    越鞠甘麦大枣汤对产后抑郁小鼠海马AKT/mTOR信号通路的影响(夏宝妹;陈畅;张海楼;薛文达;吴如燕;任荔;陶伟伟;陈刚)
    补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及Nrf2/HO-1信号途径的影响(佘颜;王宇红;邵乐;夏相宜;刘芳;蔡光先)
    [实验方法学]
    人乳腺癌斑马鱼移植瘤模型建立(陈锡强;韩利文;王希敏;王荣春;侯海荣;刘可春;彭维兵;孙晨;韩建)
    高架〇迷宫实验:昆明小鼠状态焦虑动物模型的重测信度研究(孙世光[1,2,3])
    基于人胚胎干细胞的实时细胞系统评价心脏毒性方法的建立(赵琪;汪溪洁;王淑颜;马璟)
    [研究简报]
    多靶点鬼臼毒素新衍生物CCP-1抗肿瘤多药耐药作用机制研究(张元;王火;牛聪;曹波;陈虹)
    柴胡提取物对PMS肝气郁证模型大鼠额叶5-HT3A/3BR分布与蛋白表达的影响(李芳;王杰琼;宋春红;魏盛;张惠云;乔明琦)
    靶向哺乳动物细胞线粒体的核酸转运(付爱玲)
    《中国药理学通报》投稿与阅读须知
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