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文献检索:
  • 口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗的制备及检定
  • 目的 制备口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,并进行全面检定。方法 制备O1、O139群霍乱弧菌灭活菌体原液及重组霍乱毒素B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,r CTB)原液,按比例混合制成口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,为保护r CTB免受胃酸的破坏,制备了碳酸氢钠抗酸泡腾颗粒,并按照制定的新制品原液及成品的质控标准,对原液及成品进行全面检定。结果 制备的口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗工艺稳定,各项指标均达到质控标准。结论 口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗安全、有效,且制备工艺可行,符合规模化生产的要求。
  • 靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白shRNA慢病毒干扰质粒的构建及鉴定
  • 目的构建靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract-binding protein,PTB)的shRNA慢病毒干扰质粒,并对其进行鉴定。方法根据Gen Bank中登录的PTB的基因序列设计并合成2条靶向MA104细胞PTB基因的shRNA干扰序列(shPTB1、shPTB2)和1条阴性对照序列(shControl),分别插入载体p LVshRNA-EGFP(2A)Puro后,构建慢病毒重组质粒;利用HEK293Ta细胞包装针对PTB基因的shRNA的重组慢病毒颗粒;感染MA104细胞后,经Resl-time PCR、免疫荧光和Western blot法分别检测MA104细胞中PTB基因的转录和蛋白表达水平。结果 PCR及测序鉴定证明3种重组慢病毒质粒构建正确。3种重组慢病毒质粒转染HEK293Ta细胞48 h后,均可见绿色荧光表达,3组细胞的病毒滴度均为2×106 TU/ml。3种重组慢病毒感染MA104细胞48 h后均可见绿色荧光表达。经嘌呤霉素加压筛选后,p LVshPTB1-EGFP-2A和p LVshPTB2-EGFP-2A组MA104细胞仅有少量细胞于细胞核中表达,p LVshPTB1-EGFP-2A组MA104细胞中PTB基因转录及蛋白表达的水平均低于p LVshPTB2-EGFP-2A组。结论成功构建了靶向MA104细胞PTB蛋白的shRNA重组慢病毒,shRNA序列可成功下调PTB在MA104细胞中的表达,为PTB在RV增殖过程中调控作用的研究奠定了基础。
  • C-GPC3蛋白的表达及人源GPC3抗体的筛选
  • 目的 构建C-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)基因真核表达质粒,表达C-GPC3蛋白,并通过哺乳动物展示型全人源sc Fv抗体库筛选GPC3抗体。方法 通过PCR从含有全长GPC3的质粒中扩增C-GPC3基因,将其克隆至p3457-his载体中,构建重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,转染293T细胞,对C-GPC3蛋白的表达进行Western blot鉴定。将质粒p3457-C-GPC3瞬时转染293E细胞,获得C-GPC3蛋白,采用Ni亲和柱纯化后,进行FITC标记。以本课题组构建的哺乳动物展示型全人源sc Fv抗体库为起始文库,FITC-C-GPC3抗原按照10、2和0.8 nmol/L的浓度梯度,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例约为0.1%的阳性细胞。结果 重组表达质粒p3457-C-GPC3经菌液PCR和测序鉴定证明构建正确;瞬时转染293T和293E细胞均可表达相对分子质量约为25 000的C-GPC3蛋白;获得了可与C-GPC3结合的阳性率约为0.1%的阳性细胞。结论 成功构建了重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,并从哺乳动物展示型全人源sc Fv抗体库中筛选出了阳性细胞,为后期全人源GPC3抗体的构建和表达奠定了基础。
  • 一株柯萨奇病毒A9分离株的VP1基因遗传特征分析
  • 目的 分析引起病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)的一株柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CV)A9分离株(CVA9)的VP1基因遗传特征。方法 采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采用Mega 6.1和Geneious 5.6.5等软件分析其序列,并构建系统进化树。结果 从5份VE患儿粪便中分离到一株人CVA9,命名为A108/YN/CHN/2009,其全长VP1基因的核苷酸长度与其他CVA9一致,均为906 bp。与中国其他分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4%~98.2%和96.4%~99.3%,而与国外分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.0%~96.0%和92.7%~99.0%。在进化树上与其他中国分离株属同一分支中不同两个亚分支,与JB141230009亲缘关系较近。结论 A108/YN/CHN/2009分离株为肠道病毒CVA9血清型,与其他中国分离株同属一个基因簇。
  • 锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性
  • 目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14(positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14)5忆非翻译区(5忆untranslated region,5忆UTR)内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5忆UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RL-PRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5忆UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5忆UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5忆UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5忆UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。
  • 吉林省首次分离的2B基因型风疹病毒株的基因特征分析
  • 目的分析吉林省首次分离的2B基因型风疹病毒株的基因特征。方法采集病例咽拭子标本,提取核酸,通过Real-time PCR进行风疹初筛,阳性标本接种于淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞(Vero cell transfected to express the human singaling lymphacyte actiration molecule,Vero/SLAM),进行病毒分离,采用RT-PCR法扩增病毒分离物的E1基因目的片段,并对扩增产物进行序列测定及分析。结果 4份咽拭子标本经Real-time PCR鉴定均为阳性,病毒分离获得2株风疹病毒株,序列测定分析结果均为2B基因型,氨基酸和核苷酸序列同源性均为100%。与全国近年流行的2B基因型比较,处于一个相对独立的分支。结论吉林省自2008年开展风疹病毒病原学监测以来,首次监测到2B基因型风疹野病毒,丰富了吉林省风疹病毒基因库。
  • LHRH受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力
  • 目的探讨人促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力。方法取外科手术收集的50份喉鳞癌及20份癌旁组织标本,采用Western blot法检测LHRH受体的表达,免疫荧光分析法检测LHRH受体的亚细胞定位,ELISA法检测HEp-2细胞膜表面LHRH受体与LHRH-PE40的亲和力。结果 LHRH受体在喉癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P〈0.001);LHRH受体在喉癌组织中定位于细胞膜和细胞质,而在癌旁组织中定位于整个腺体周边;LHRH受体在HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的结合显示出线性和饱和性,且可被LHRH直接特异性抑制。结论 LHRH受体在喉癌组织中的过度表达及其在喉癌细胞表面与LHRH-PE40的高亲和力表明,其可能是LHRH-PE40的一个潜在的治疗靶点。
  • AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒对HepG2细胞迁移、侵袭的影响
  • 目的探讨甲胎蛋白单抗修饰的荷载人重组核心蛋白聚糖质粒的聚乳酸-羟基乙酸[alpha-fetoprotein monoclonal antibody-poly(lactic-co-glycolic acid)-recombinant human decorin,AFPm Ab-PLGA-rhDCN]纳米粒对肝癌细胞株HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响。方法将HepG2细胞分为未处理组、用含空质粒的PLGA纳米粒处理的空白组及低、中、高浓度AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒处理的实验组,采用划痕试验和Transwell小室试验检测纳米粒对细胞迁移和侵袭的影响,RT-PCR法检测RhoC基因mRNA转录水平,ELISA和Western blot法检测RhoC蛋白的表达水平。结果低、中、高浓度实验组细胞划痕宽度值及穿透膜的细胞数与未处理组及空白组相比,差异均有统计学意义(P均〈0.05);低、中、高浓度实验组细胞RhoC基因mRNA灰度值及蛋白浓度均低于未处理组及空白组,差异均有统计学意义(P均〈0.05)。结论 AFPm Ab-PLGA-rhDCN纳米粒对HepG2细胞的迁移和侵袭能力具有抑制作用,该抑制作用与下调RhoC分子的表达有关。
  • 白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制
  • 目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P〈0.05),S期细胞比例显著降低(P〈0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P〈0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P〈0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。
  • 2013年我国乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒专项抽验调查
  • 目的对2013年我国乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)诊断试剂盒进行专项抽验调查,以了解目前市场上HBs Ag诊断试剂盒的整体质量水平,加强产品的质量监管。方法依据《中国药典》三部(2010版)HBs Ag诊断试剂(ELISA法)质量标准,应用相应的国家参考品,对全国17个药品生产企业生产的HBs Ag诊断试剂盒(ELISA法)抽验试剂共117批(19个生产文号,涉及全国25个行政区域)进行检测,抽验范围包括生产企业的成品库房、流通领域、基层应用单位(含医院、中心血站等)。结果 117批抽验的样品合格率为100%。从批签发出厂,经流通环节,再到基层应用单位,产品质量基本稳定,未出现质量下降等问题,试剂盒稳定性较好。各国产企业生产的试剂盒间差异较小;adr、adw两个亚型最低检出量之间差异无统计学意义(P〉0.05),而ay亚型与adr、adw两个亚型最低检出量差异有统计学意义(P〈0.05),ay亚型的最低检出量有待提高。与进口试剂盒相比较,国产试剂的灵敏度尤其是ay亚型的灵敏度低于进口试剂。各试剂间、同一试剂批间精密性差异较小。与2009年抽验相比较,试剂盒质量明显提高。结论我国HBs Ag诊断试剂盒(ELISA法)现行检验标准可行,产品质量状况稳定,HBV ay亚型最低检出量有待提高。
  • 上海市松江区健康人群麻疹、风疹、流行性腮腺炎抗体水平的监测
  • 目的对上海市松江区健康人群麻疹、风疹、流行性腮腺炎抗体水平进行监测,为控制相应疾病,完善免疫策略提供依据。方法采用多阶段抽样法,在松江区15个镇/街道中随机抽取泗泾镇和新浜镇2个镇作为监测现场,采用分层随机抽样法,在被抽中的泗泾镇及新浜镇的本市和外来户籍人群中随机抽取8月龄~40岁共9个年龄组的健康人群作为免疫水平监测对象,依据知情同意的原则,共抽取360人静脉血各3 ml,采用ELISA试剂盒定量检测麻疹、风疹和腮腺炎Ig G抗体水平,同时开展含麻疹成份疫苗(measles-containing vaccine,MCV)免疫史的调查。结果 360名监测对象中,不同户籍、男女构成及各年龄组的人数差异均无统计学意义(P〉0.05)。麻疹、腮腺炎、风疹抗体阳性率分别为96.94%、86.39%和93.61%,抗体几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC)分别为1 152.23 m IU/ml及375.36和157.23 IU/ml。本市及外来户籍人群的麻疹、腮腺炎、风疹疫苗免疫史及抗体水平间差异均无统计学意义(P均〉0.05)。各年龄组的麻疹保护性抗体阳性率及腮腺炎和风疹的抗体阳性率差异均有统计学意义(P均〈0.05)。结论上海现行的麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗(MMR)免疫程序有效、合理,既有助于消除麻疹,又有利于控制腮腺炎、风疹发病;拟对成年人群的不同对象开展MMR的补充免疫活动,以提高人群免疫力,减少相关疾病的发病。
  • 第六届疫苗中国发展国际峰会将在上海召开
  • 第六届疫苗中国发展国际峰会将于2016年4月12~13日在上海隆重召开。作为2016年中国最大的疫苗行业国际年会,这次会议几乎涵盖了整个疫苗产业链上的所有行业。会上将通过人用疫苗及兽用疫苗两个论坛,分别探讨中国及新兴市场疫苗行业的最新发展趋势、研发战略、合作机遇、生产技术等热点话题,同时将与政府权威机构共同探讨国家免疫规划、疫苗审批注册等方面的最新政策动向,旨在通过本次大会,促进国内外疫苗企业及其他相关机构在市场拓展、研发及生产等方面的区域性合作,从而推动全球疫苗产业的健康、快速发展。
  • 山东地区女性人乳头瘤病毒感染亚型、多重感染情况及年龄分布差异
  • 目的了解山东地区女性人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染状况以及23种亚型分布特征、多重感染情况、在不同年龄组的分布差异。方法利用反向点杂交技术,对2013年1月至2014年11月山东省内13 973份门诊女性宫颈脱落细胞样本进行HPV分型检测,分析HPV感染亚型、多重感染情况及年龄分布差异。结果13 973份样本中,共检测出阳性样本4 105份,总检出率29.38%,23种亚型型别均有感染。单一型别感染2 513份,占阳性样本的61.25%,其中高危型感染1 815份,占阳性样本的44.21%,低危型感染698份,占阳性样本的17.00%;高危型感染最常见型别依次为16、52、58、56、53、66、18、68,低危型感染最常见型别依次为6、11、81、43、42。多重感染为1 592份,占阳性样本的38.75%,高低危混合感染占55.84%,纯高危型感染占39.20%;随着合并感染的型别数增加,比例逐渐下降。小于30岁人群有较高感染率,之后随年龄增长感染率呈下降趋势,而大于50岁年龄组,感染率又有所增加。结论山东地区女性HPV感染以单重感染为主,且高危型感染占优势;高危型感染以16型为主,低危型感染以6型为主。
  • 四价流感病毒裂解疫苗血凝素含量检测方法的验证
  • 目的 验证四价流感病毒裂解疫苗[quadrivalent influenza vaccines(split virion)inactivated,QIV]血凝素含量检测方法的可行性。方法 采用传统的单向免疫扩散法(single-radial immunodiffusion,SRID)检测QIVH1N1和H3N2型的血凝素含量,双价抗原参考品SRID法检测两种月型(包括B/Yam和B/Vic)血凝素含量,并对该检测方法进行准确度、精密度、专属性及线性验证。结果 QIV各型的血凝素含量总体回收率为97.8%~107.6%,相对标准偏差(relative standard deviation,R SD)为0.59%~1.83%;试验间和试验内RSD均约5.0%;4个型别血凝素含量在10~50μg/ml范围时,标准曲线呈良好的线性,R 2均大于0.980 0,定量限分别为:H1N1:4.53μg/ml,H3N2:3.83μg/ml,B/Yam:2.89μg/ml,B/Vic:5.60μg/ml;各型别流感裂解疫苗供试品和抗原参考品与对应抗血清参考品出现沉淀环,与非对应抗血清参考品不出现沉淀环。结论 QIV血凝素含量检测法是可行的。
  • 人气管上皮细胞的原代分离及气液界面培养
  • 目的分离人气管上皮细胞,并进行气液界面(air-liquid interface,ALI)培养,为呼吸道病毒研究提供良好的细胞模型。方法采用低温消化法分离人气管上皮细胞,用预包被胶原的0.4μm Transwell培养皿对传代后的气管上皮细胞进行ALI培养。利用倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学染色和免疫组化鉴定培养细胞的生长和分化情况,同时测定细胞分化过程中的跨上皮电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)。结果分离培养的气管上皮细胞光镜下细胞形态及免疫荧光角蛋白染色阳性,证实培养细胞为气管上皮细胞。ALI培养后的人气管上皮细胞的形态学、MUC5AC蛋白、Ⅳ型β-微管蛋白(β-tubulinⅣ)的表达及紧密连接和假复层的形成情况均与人气管组织结构类似。结论低温消化法可成功分离到活性高的上皮细胞。ALI培养的上皮细胞形态和功能与体内接近,且能较长时间维持其正常形态及功能,为呼吸道相关疾病的研究提供了理想的平台。
  • 西尼罗病毒抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及其应用
  • 目的建立及验证西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)抗体间接ELISA检测方法,并用于评价疫苗的免疫效果。方法以纯化后的WNV E蛋白第三结构域(EDⅢ)蛋白作为包被抗原,建立WNV抗体间接ELISA检测方法,对抗原包被浓度(2.5、5、10、20、40、80μg/ml)、血清稀释度(1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320)、抗原封闭时间(0.5、1、1.5、2 h)、血清孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)、HRP标记的山羊抗马Ig G稀释倍数(1:5 000、1:10 000、1:20 000、1:40 000、1:80 000稀释)及其孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)进行优化,并验证该方法的特异性、敏感性及精密性。采用建立的方法检测WNV阴性马血清和病毒样颗粒(WNV-VLPs)疫苗免疫的马血清,与ALPHA公司试剂盒的检测结果进行比较。结果间接ELISA法最佳检测条件为:抗原包被浓度为20μg/ml,4℃包被过夜;Blocking ACE封闭液于37℃封闭1.5 h;加入血清(1:80稀释),37℃孵育1.5 h;加入HRP标记的山羊抗马Ig G(1:20 000稀释),37℃孵育1 h。该方法可特异性检测WNV阳性血清中的WNVE-Ig G抗体;阳性血清稀释至1:2 560时,检测结果仍为阳性;批内和批间的变异系数(CV)均小于7%。25份WNV阴性马血清检测结果均为WNVE-Ig G抗体阴性,经WNV-VLPs疫苗免疫的马血清中的WNVE-Ig G抗体效价水平随免疫次数的增加呈递增趋势,间接ELISA法与ALPHA公司试剂盒的检测结果完全一致。结论成功建立了WNV抗体间接ELISA检测方法,可用于疫苗免疫效果的评价,为开展WNV流行病学调查、诊断及新型疫苗的研发奠定了基础。
  • 转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控
  • 目的分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法。方法将MDCKsiat7e细胞接种无血清培养基BD001,37℃,130 r/min振摇培养11 d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况。提取MDCK-siat7e细胞的m RNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序。通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量。结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98%,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降。原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达。结论本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据。
  • 征稿
  • 《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。
  • H5N1禽流感病毒感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法的建立及应用
  • 目的建立H5N1禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并检测H5N1 AIV感染前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。方法提取豚鼠肺脏组织RNA,反转录合成cDNA,将cDNA模板按10倍系列稀释为9个浓度(1.00 E+10~1.00 E+02 copies/μl),进行PCR扩增。以β-actin为内参,建立标准曲线,比较两基因的扩增效率,验证该方法的引物特异性、重复性及灵敏度。同时用该方法检测H5N1 AIV攻毒前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平。结果 c DNA模板最佳稀释度范围为1.00 E+09~1.00 E+04。豚鼠MAVS和β-actin基因的标准曲线斜率差值〈0.1,R~2=0.999,扩增效率分别为100.2%和100.3%;两基因扩增溶解曲线峰单一,可扩增出清晰的目的条带,且无非特异性扩增;两基因Ct值的变异系数(CV)均〈10%;灵敏度为1.00 E+03 copies/μl。感染H5N1 AIV的豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平下调。结论成功建立了H5N1 AIV感染豚鼠体内MAVS的SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并发现H5N1 AIV感染可导致豚鼠体内MAVS表达水平下调。
  • 顶空气相色谱法测定血液制品中乙醇残留量
  • 目的建立顶空气相色谱法测定血液制品中乙醇残留量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:Rtx-1301(30 m×0.53 mm×3μm);气化室温度:220℃;柱温:90℃;检测器温度:250℃;载气为氮气,柱流速:2.5 ml/min;氢气流速:40 ml/min;分流比:2∶1;顶空85℃平衡30 min,运行时间:5 min。确定标准曲线的线性范围,并对方法进行重复性、稳定性、准确性、检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantitation,LOQ)验证。应用建立的方法测定14批人血白蛋白、静注人免疫球蛋白(p H 4)样品的乙醇残留量。结果该方法色谱峰形良好,峰单一且无其他干扰。标准曲线的线性范围为1.064~21.280μg/ml;同一人血白蛋白样品重复检测6次乙醇残留量的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.34%;人血白蛋白样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,乙醇残留量检测结果的RSD为2.64%;样品的平均加标回收率及RSD分别为(99.58±1.19)%和1.40%;LOD和LOQ分别为0.266和0.532μg/ml。14批样品的乙醇残留量最高为3号人血白蛋白半成品(0.004 4%),均远低于《中国药典》三部(2010版)的半成品限量要求(0.025%)。结论顶空气相色谱法操作简便,重复性、稳定性、准确性良好,可用于血液制品中乙醇残留量的检测。
  • 无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证
  • 目的 建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量,并对该方法进行验证及初步应用。方法 HPLC条件:Agilent SB 300 C18色谱柱(规格:4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:纯化水与甲醇的体积比为20﹕80;检测波长:225 nm;色谱柱温:30℃;流速:0.8 ml/min;进样量:10μl。对方法的系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性及定量限进行验证,并用建立的方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量。结果 该方法检测6份10μg/ml Triton X-100的理论塔板数在1 550~1 580之间,Triton X-100峰面积和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,R SD)分别为2.59%和0.04%;12μg/ml的Triton X-100溶液和无细胞百日咳纯化抗原样品中,Triton X-100能与其他物质完全分离;在2~30μg/ml范围内,Triton X-100浓度与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 01);该方法检测不同浓度Triton X-100样品的加标回收率均在98%~102%之间,R SD均不超过2%;同一实验人员在不同工作日和不同检测人员在同一工作日用该方法检测供试品中Triton X-100含量的R SD均小于4%;改变流动相的甲醇比例和柱温后,6次检测值的RSD分别为0.95%和0.51%;定量限可达0.5μg/ml。该方法检测6批无细胞百日咳纯化抗原中的Triton X-100残留量均较低。结论 建立的HPLC法系统适应性、专属性、线性、准确性、精密性、耐用性良好,可用于无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量的定量检测。
  • 鱼蛋白胨的制备与质量分析
  • 目的 制备鱼蛋白胨,并进行质量分析。方法 将鱼糜加工下脚料原料经绞碎、石油醚脱脂,得到鱼糜浆,用0.1%木瓜蛋白酶酶解,离心收集上清(即鱼水解蛋白胨溶液),经300 Da纳滤膜脱盐和浓缩,喷雾干燥后,获得淡黄色粉末,即鱼蛋白胨样品FZU01。对鱼蛋白胨FZU01和鱼粉蛋白的主要理化指标(澄明度、亚硝酸盐和碱性沉淀、酸碱度、含氮量、氨基氮、干燥失重、炽灼残渣)进行检测;在固定酵母提取物、Na Cl浓度、初始p H和接种量的基础上,分别用两种蛋白胨配制LB培养基,接种大肠埃希菌,检测A600值;采用分子筛高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测两种蛋白胨的相对分子质量。分别将50、150、300、600、900、1 200和1 500 mg/L组胺以及0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0和50.0 mg/L重金属离子(Hg2+、Cd2+、As3+、Cr6+和Pb2+)加至大肠埃希菌中,37℃培养12 h,检测A600值。结果 两种蛋白胨理化指标检测结果均符合《中国生物制品主要原辅材料质控标准》规定,酸碱度、含氮量、氨基氮、干燥失重和炽灼残渣之间差异无统计学意义(P〉0.05),鱼蛋白胨FZU01相对分子质量主要分布在1 000以内,占92.5%,鱼粉蛋白胨相对分子质量主要分布在10 000,小于1 000占56.1%;与鱼粉蛋白胨组相比,鱼蛋白胨FZU01组生长速率明显增加(P〈0.05)。随着组胺浓度的增加,大肠埃希菌的生长抑制率逐渐增加,与组胺浓度呈正相关,IC50为257.3 mg/L,当组胺浓度大于600 mg/L时,完全抑制大肠埃希菌的生长;大肠埃希菌的生长抑制率与重金属离子浓度呈正相关,Hg2+、Cd2+、As3+、Cr6+和Pb2+对大肠埃希菌的IC50分别为1.35、4.67、7.37、11.04和20.19 mg/L。结论 应增加蛋白质相对分子质量、组胺和重金属作为蛋白胨产品重要质量参数,控制一定的浓度限量范围,才能保证蛋白胨产品?
  • 全球带状疱疹疫苗的研究现状及展望
  • 带状疱疹(herpes zoster,HZ)是由潜在的水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)复发感染导致的,其发病率和严重程度与年龄增长以及免疫功能低下有关。默沙东制药公司研发的疫苗ZOSTAVAX是目前用于预防HZ及其并发症最广泛、最有效的疫苗。本文现就HZ的全球流行情况、国内外相关疫苗的研发进展以及疫苗的免疫原性、安全性和成本效℃等方面作一综述,为疫苗的使用及带状疱疹疾病的防治工作提供参考。
  • 重组蛋白质药物相关杂质检测方法的分析与评价
  • 随着对重组蛋白质药物质量管理体系的重视,杂质分析作为其重要的一环已得到广泛关注,根据杂质来源不同,又可分为工艺相关杂质(process-related impurities)及产品相关杂质(product-related impurities)。对于不同的杂质,需依照其自身的理化性质或生物活性来选择合适的检测方法,残留量限度也应根据其对药物的安全性、有效性的影响进行规定。杂质的检测分析贯穿药物研发始终,是保障药物质量与安全的重要因素。
  • 重组人血白蛋白在哺乳动物细胞培养中的应用
  • 目前,哺乳动物细胞大规模培养技术已经成为生物制药中不可缺少的一部分,利用动物细胞培养技术生产的生物制品越来越多,而组织工程和干细胞疗法又拓宽了细胞培养技术的应用范围。人血白蛋白(human serum albumin,HSA)作为动物细胞培养基中的重要组分之一,在动物细胞培养中已经应用了很多年。本文就重组人血白蛋白(recombinant HSA,r HSA)在哺乳动物细胞培养中的应用情况作一报道。
  • [疫苗研究]
    口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗的制备及检定(张静飞;陈磊;董思国;曹天成;何金娜;曹欣;胡鹏;郝倩;魏文进;贾丽君;陈翠萍;郑海发;曾明)
    [基础研究]
    靶向MA104细胞多聚嘧啶序列结合蛋白shRNA慢病毒干扰质粒的构建及鉴定(周艳;解裕萍;吴晋元;闫姗姗;张磊;李鸿钧)
    C-GPC3蛋白的表达及人源GPC3抗体的筛选(刘玉杰[1,2];张晶;王芳;高新;刘蕴慧;付洁;宋海峰[1,2])
    一株柯萨奇病毒A9分离株的VP1基因遗传特征分析(王晓辉;张海浩;俞泽煦;杨舜乔;朱艳菊;白巍;邵聪文;马绍辉)
    锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性(丁鹏鹏;马文囡;朱瑞宇;陈蕴;金坚)
    吉林省首次分离的2B基因型风疹病毒株的基因特征分析(王爽;单元春;杨尧;田鑫;魏雷雷;程涛;曹凤瑞;付思美)
    LHRH受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力(邓欣;李森;关超;王洋;刘玲玲;韩颖;李亘松[1,4];曹宇;于秉治;张国利)
    [治疗性制剂]
    AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒对HepG2细胞迁移、侵袭的影响(薛君[1,2];杨乔利;王姝月;米洋;曲延娥;王桂琴)
    白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制(王浩;唐宁曼;张雄;王进)
    [诊断制剂]
    2013年我国乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒专项抽验调查(李克坚;周诚;蓝海云;吴星;辜文杰;梁争论)
    [临床研究]
    上海市松江区健康人群麻疹、风疹、流行性腮腺炎抗体水平的监测(陆红梅;沈金花;陈文花;朱祺;顾士康)
    [消息]
    第六届疫苗中国发展国际峰会将在上海召开
    [临床研究]
    山东地区女性人乳头瘤病毒感染亚型、多重感染情况及年龄分布差异(王睿;卜范峰[1,2];田欣欣;唐鲁豫;李雅文;李娜)
    [技术方法]
    四价流感病毒裂解疫苗血凝素含量检测方法的验证(刘朝阳;周欣;王石磊;吕浩;孟佳帆;马雷钧;程鹏飞)
    人气管上皮细胞的原代分离及气液界面培养(李茂中;庞立丽;王宏;金玉;段招军)
    西尼罗病毒抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及其应用(曹增国;王化磊[1,2];李岭[1,3];金宏丽[1,4];王丽娜[1,5];冯娜[1,2];郑学星[1,3];赵国星[1,3];李倩;闫飞虎;赵永坤[1,2];王铁成[1,2];高玉伟[1,2];杨松涛[1,2];夏咸柱[1,2])
    转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控(王革;马超;刘晓凡;李薇;刘鹏;魏然)
    [消息]
    征稿
    [技术方法]
    H5N1禽流感病毒感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法的建立及应用(孙丽娟[1,2];许微微[2,3];张坤;郭骐源[1,2];刘旭光;杨松涛;王铁成;黄耕;高玉伟;夏咸柱;张雪梅)
    顶空气相色谱法测定血液制品中乙醇残留量(张晓杰;李荣贞[1,2];郑霞[1,3])
    无细胞百日咳纯化抗原中Triton X-100残留量检测方法的建立及验证(唐浩;张飞伟;刘晓凤;胡慧琼;杨国友;秦敏)
    鱼蛋白胨的制备与质量分析(郑允权[1,2];郭养浩[2,3];李红丽;邱明;石贤爱[2,3])
    [综述]
    全球带状疱疹疫苗的研究现状及展望(李慧敏;汤妍;苏家立;张吉凯)
    重组蛋白质药物相关杂质检测方法的分析与评价(任彬;潘勇兵;邹汉武)
    [专题报道]
    重组人血白蛋白在哺乳动物细胞培养中的应用(郄正刚;马海燕;王世聪)
    《中国生物制品学杂志》封面