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  • 磷酸化Akt1(Thr308)位点突变真核表达载体的构建及其生物学功能研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建磷酸化Akt1(Thr308)位点突变真核表达载体,并瞬时转染胃癌耐药细胞,对其生物学功能进行初步检测。方法:以带有pc DNA3.0-Flag标签的Akt1质粒为模板,采用重组PCR技术扩增得到Akt1(T308A)(苏氨酸突变成丙氨酸)、Akt1(T308E)(苏氨酸突变成谷氨酸)位点突变编码区序列,将其插入pc DNA3.0-Flag载体,双酶切和测序验证后瞬时转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其表达情况;将突变质粒与空载体分别转染人胃癌耐药细胞BGC-823/c DDP,通过Western印迹和实时定量PCR检测Notch1蛋白和m RNA水平的变化,通过CCK-8法检测对耐药细胞生长曲线的影响。结果:双酶切和测序结果表明Akt1(T308A)、Akt1(T308E)的真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达;转染人胃癌耐药细胞BGC-823/c DDP后,利用实时定量PCR和Western印迹证明去磷酸化Akt1(T308A)可抑制Notch1的转录和蛋白水平,模拟持续磷酸化Akt1(T308E)升高Notch1的转录和蛋白表达;细胞生长曲线结果显示,转染Akt1(T308A)较空载体耐药细胞生长慢,而Akt1(T308E)促进耐药细胞生长。结论:PI3K/Akt与Notch1信号通路的激活在胃癌耐药的发生、发展过程中发挥重要作用。
  • 利用CRISPR/Cas系统构建在XRCC6内源基因插入Flag标签序列的HeLa细胞系 免费阅读 下载全文
  • 目的:利用CRISPR/Cas系统在XRCC6基因5′端插入Flag标签序列,筛选XRCC6-Flag稳定表达的宫颈癌细胞(He La)株。方法:根据Gen Bank中XRCC6基因序列,设计XRCC6基因敲入的g RNA序列,构建入p Cas-Guide载体中,获得p Cas-XRCC6载体;设计XRCC6基因的同源臂序列,利用搭桥PCR方法将同源臂和Flag标签序列作为模板进行扩增,得到供体DNA片段,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p XRCC6-Donor载体;将上述2个载体共转染He La细胞,采用PCR、Western印迹等方法检测和筛选Flag标签序列插入XRCC6基因5′端的细胞株。结果:构建了p Cas-XRCC6和p XRCC6-Donor载体,筛选获得3株XRCC6-Flag稳定表达细胞株。结论:构建了XRCC6-Flag稳定细胞株,为研究XRCC6基因及其蛋白产物的生物学功能奠定了基础。
  • 人乳头瘤病毒6/11型L2片段的高效表达及免疫效果评价 免费阅读 下载全文
  • 目的:原核表达人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型L2 N端融合蛋白,并初步评价其免疫效果。方法:用重叠PCR将HPV6和HPV11次要衣壳蛋白L2基因5'端片段融合,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化后与Al(OH)3佐剂配伍肌肉注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测血清抗体,以基于假病毒的体外中和试验评价中和抗体水平。结果:ELISA结果显示,3种融合蛋白均能产生针对同型别L2蛋白的高滴度特异性Ig G抗体,滴度为1∶10 000~1∶200 000;体外中和试验显示,3种融合蛋白均能诱发中和抗体和交叉中和抗体,针对同型别的滴度最高可达1∶3200,对于高危型能产生一定水平的交叉中和抗体,滴度为1∶50~1∶800。结论:HPV6/11 L2融合蛋白能够诱发较强的体液免疫反应,产生较高的中和抗体及交叉中和抗体,为HPV L2新型预防性疫苗的研究提供了初步的实验基础。
  • 鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码包涵体膜蛋白 免费阅读 下载全文
  • 目的:鹦鹉热衣原体的B598_0590基因与沙眼衣原体的毒力基因CT135同源,本研究旨在分析该基因的表达和定位。方法:生物信息学方法分析B598_0590基因的进化地位,比较B598_0590蛋白和沙眼衣原体毒力蛋白CT135的氨基酸疏水特征;重组表达、纯化鹦鹉热衣原体的B598_0590蛋白,免疫小鼠制备抗血清;共聚焦免疫荧光观察鹦鹉衣原体在正常培养条件和使用Lpx C抑制剂时B598_0590基因的表达和定位。结果:衣原体属内12个种的基因组均含有CT135同源基因,它们编码的蛋白质有相似的疏水特征;B598_0590与CT135的氨基酸同源性为21%;B598_0590的免疫荧光染色特征与包涵体膜蛋白Inc A相似,浓染包涵体膜;Lpx C抑制剂可抑制网状体的分裂、包涵体的生长及网状体向原体转化,包涵体膜蛋白的染色呈现典型的空泡结构。结论:Lpx C抑制剂可用于鉴定未知的鹦鹉热衣原体包涵体膜蛋白;鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码此前尚未鉴定的包涵体膜蛋白。
  • 钠碘同向转运体上游增强子序列的特异性结合蛋白文库的构建及初步筛选 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建酵母单杂交文库,筛选出与钠碘同向转运体上游增强子(NUE)特异性结合的蛋白质分子,进一步研究其与NUE相互作用的分子机制。方法:应用酵母单杂交系统,以NUE为酵母单杂交的“诱饵”,对甲状腺癌K1细胞的c DNA文库进行初步筛选,采用DNA测序技术及生物信息学技术对筛选的克隆进行进一步功能分析。结果:对文库中的阳性克隆测序,获得53条可读序列,Blast X比对分析及基因功能注释发现其中11条具有DNA结合功能,包括Rho GTP酶激活蛋白35(ARHGAP35)、锌指蛋白394(ZNF394)、上游刺激因子2(USF2)、SOX9等。结论:应用酵母单杂交技术初步筛选出与甲状腺癌K1细胞NUE相互作用的候选蛋白,并对这些蛋白质进行了初步的功能分析。
  • 过表达SGK3肝癌细胞BEL-7402在去甾体激素血清中的抗凋亡研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建过表达血清与糖皮质激素调节激酶3(SGK3)的质粒以及稳定表达SGK3的肝癌细胞系BEL-7402,研究其在去甾体激素胎牛血清(FBS)中的抗凋亡能力。方法:PCR扩增SGK3基因,将扩增产物连接到p CDH载体,构建出p CDH-SGK3的慢病毒载体质粒,将其同空白对照p CDH-NC分别与慢病毒包装载体共转入293T细胞,包装成慢病毒p CHD-SGK3和p CDH-NC;将构建的慢病毒感染肝癌细胞BEL-7402并用嘌呤霉素筛选,Western印迹检测SGK3的表达;观察细胞在FBS及去甾体激素FBS中的生长情况。结果:包装出p CDH-SGK3重组慢病毒,此慢病毒感染肝癌细胞系BEL-7402后获得表达;CCK8实验表明过表达SGK3可促进肝癌细胞的生长,BEL-7042细胞中有雄激素的表达,去甾体激素FBS中细胞生长受到抑制,过表达SGK3可增强肝癌细胞在去甾体激素血清中的抗凋亡能力。结论:在肝癌细胞BEL-7402中过表达SGK3可促进细胞生长,可增强细胞在去甾体激素FBS中的抗凋亡能力。
  • 运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建SGK3激酶PX结构域突变体载体,观察其在人肾胚细胞293T中的表达与定位。方法:利用重叠延伸PCR原则设计引物,合成具有点突变的SGK3突变体,将其连接到p EGFP载体上,测序验证;将所获突变载体瞬时转染人肾胚细胞293T,利用荧光倒置显微镜检验突变体在细胞中的表达及功能实现。结果:测序结果表明合成了具有点突变的SGK3序列;荧光倒置显微镜下SGK3突变体相较野生型SGK3在293T细胞内的不均匀分布表明转染成功,突变体载体在人肾胚细胞293T中获得表达且有所定位。结论:通过改变PX结构域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,从而为研究SGK3在细胞中的功能提供基础。
  • Twist1稳定表达细胞株的建立及对乳腺癌细胞上皮-间充质转变的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建Twist1的慢病毒真核表达载体,并建立稳定表达Twist1的乳腺癌细胞株,研究Twist1在乳腺癌中对上皮-间充质转变(EMT)的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Twist1编码序列,克隆到慢病毒p CDH载体,构建成p CDH-Twist1,转染293T细胞,Western印迹鉴定p CDH载体介导的Twist1的表达;包装病毒载体,感染ZR75-1细胞,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响。结果:经Bam HⅠ、Eco RⅠ双酶切及测序证实得到p CDH-Twist1表达载体,Western印迹实验发现Twist1在293T细胞内表达;嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的ZR75-1细胞株。结论:构建了p CDH-Twist1的真核表达载体并建立了稳定表达Twist1的ZR75-1细胞,为进一步研究Twist1在EMT过程中的机制奠定了基础。
  • 构建稳定过表达转录辅助因子LBH的人间充质干细胞株 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建转录辅助因子LBH(limb-bud and heart)过表达的人间充质干细胞(MSC)株,研究Lbh基因对人MSC功能的调控。方法:通过分子克隆的方法构建人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,经限制性内切酶酶切和核酸测序鉴定,利用293T细胞包装表达Lbh基因的慢病毒及对照;将包装的病毒感染人MSC,利用表达载体携带的GFP报告基因,采用流式细胞术分选GFP阳性目的细胞;通过油红O染色鉴定阳性细胞的成脂分化能力,通过茜素红和硝酸银染色鉴定阳性细胞的成骨分化能力。结果:双酶切和测序结果表明正确克隆了人Lbh基因的全长CDS序列,定量PCR和Western印迹结果表明构建的p CDHP-Lbh重组质粒能够表达Lbh基因;流式分选获得LBH稳定表达的人MSC细胞株,该细胞株经成骨和成脂诱导分化培养后,油红O染色、茜素红染色和硝酸银染色结果均呈阳性。结论:构建了人Lbh基因的慢病毒表达质粒p CDHP-Lbh,并获得稳定表达Lbh基因的人MSC细胞株,该细胞株保留了向脂肪细胞和成骨细胞定向分化的能力。本研究为进一步探讨Lbh基因对人MSC功能的调控提供了重要的实验基础。
  • 微管结合蛋白Tau磷酸化位点突变体的构建及鉴定 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建带有Myc标签的Thr-213、Thr-235、Ser-404磷酸化位点突变为Ala的Tau蛋白真核表达质粒,并在真核细胞中表达Myc-Tau3m蛋白。方法:利用重组PCR方法得到Thr-213、Thr-235、Ser-404磷酸化位点突变为Ala的编码序列,将其插入经Bam HⅠ和KpnⅠ酶切的p XJ40-Myc表达载体,在人293T细胞中转入空载体和重组质粒,利用Western印迹检测其表达及功能。结果:测序和酶切结果证实Myc-Tau3m真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达,表达产物可促进微管的乙酰化。结论:构建了Thr-213、Thr-235、Ser-404磷酸化位点突变的Myc-Tau3m真核表达载体,为进一步研究Tau蛋白磷酸化的生理机能奠定了基础。
  • 腺病毒55型在A549细胞中的增殖动力学特征 免费阅读 下载全文
  • 目的:利用噬斑法研究人呼吸道腺病毒55型(HAd V-B55)在A549细胞中的增殖动力学特征。方法:以正交法得出HAd V-B55的最佳噬斑条件;HAd V-B55以感染复数(MOI)为10感染A549细胞,噬斑法测定接种后3、6、9、12、15、18、21、24、36、48、60和72 h培养液上清中的病毒滴度,绘制log2(病毒滴度)-时间图,分析HAd V-B55在A549细胞中的增殖动力学特征。结果:终浓度含0.5%琼脂糖、2%胎牛血清和1640(2×)细胞培养液为HAd V-B55噬斑形成的最佳条件;MOI=10时,HAd V-B55感染A549细胞后12~15 h培养液中开始出现病毒,接种后15~36 h培养液中病毒量呈指数大量增加,接种后48~60 h病毒量出现小幅上升,接种后60 h细胞完全病变,病毒量增加达到平台期,最终病毒量增加约225 000倍。结论:A549细胞能有效地扩增HAd V-B55,其增殖周期为12~15 h;为研究HAd V-B55的感染致病机制,以及指导后期抗HAd V-B55的药物研发奠定了基础。
  • 埃可病毒25型新型中和实验方法的建立与应用 免费阅读 下载全文
  • 目的:建立一种新型的快速、高通量的埃可病毒25型(ECHO25)中和抗体检测方法,并初步评价其在ECHO25中和抗体筛选和血清流行病学调查中的应用价值。方法:应用免疫荧光方法筛选ECHO25高亲和性抗体并将其作为检测单抗,结合酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立ECHO25中和抗体检测方法;使用不同效价的血清评价该方法的准确性;采用所建立的中和方法对ECHO25单克隆抗体、临床血清样品进行检测。结果:建立了快速检测ECHO25中和抗体的Nt-ELISPOT方法,以ECHO25单克隆抗体5B9作为检测抗体;相比经典的中和实验方法 Nt-CPE,该方法可显著缩短检测时间(从5~7 d缩短至1 d以内),检测结果具有较好的一致性;采用所建立的Nt-ELISPOT方法首次筛选获得3株对ECHO25具有较好中和能力的单克隆抗体;临床血清样品检测结果显示厦门地区可能存在ECHO25的流行。结论:该方法可以应用于中和抗体筛选和血清学的临床辅助诊断,为ECHO25的防治研究提供支持。
  • 敲低SOX2基因抑制乳腺癌干细胞的含量 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建敲低SOX2基因的慢病毒表达载体,研究敲低SOX2基因对乳腺癌干细胞含量的影响。方法:将SOX2基因短发夹RNA(sh RNA)序列构建到慢病毒表达载体,利用293T细胞包装并获得敲低SOX2基因的病毒,后在MCF-7、T47D细胞系中构建敲低SOX2基因的稳定克隆,Western印迹检测SOX2蛋白的表达水平,q RT-PCR检测SOX2 m RNA水平的变化,利用流式细胞术检测敲低SOX2基因后乳腺癌干细胞含量的变化。结果:构建了表达SOX2基因sh RNA的慢病毒表达载体,在乳腺癌细胞中敲低SOX2基因后,CD44+/CD24-/low及乙醛脱氢酶阳性(ALDH+)细胞的比例明显降低。结论:敲低SOX2基因抑制了乳腺癌干细胞的含量。
  • 多西他赛诱导乳腺癌MCF-7耐药细胞株的建立及耐药机制分析 免费阅读 下载全文
  • 目的:建立人乳腺癌MCF-7多西他赛(DTX)耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法:采用逐步提高多西他赛浓度、间歇诱导的方法,建立人乳腺癌MCF-7/DTX体外耐药细胞模型;耐药曲线检测MCF-7/DTX的耐药特性;流式细胞术比较耐药细胞株MCF-7/DTX及亲本细胞株MCF-7肿瘤干细胞含量的差异。结果:耐药曲线显示MCF-7/DTX比亲本细胞株MCF-7耐药;流式细胞分析显示MCF-7/DTX的细胞干细胞含量为2.59%,MCF-7细胞的干细胞含量为1.28%。结论:采用逐步提高浓度、间歇诱导的方法,建立了稳定、耐药性较高的MCF-7/DTX细胞株;干细胞含量升高是MCF-7/DTX的可能耐药机制之一。
  • 促吞噬肽衍生物TP对树突状细胞功能的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:探讨促吞噬肽衍生物TP对树突状细胞(DC)功能的影响。方法:分离、提纯小鼠骨髓来源DC,培养至第3 d弃上清,去除悬浮细胞,加入新鲜培养液,补充细胞因子,之后隔天半量换液,至第7 d获得DC;分别用TP和LPS刺激DC,Wright-Gimsa染色,用倒置显微镜观察细胞生长情况;流式细胞分析细胞表面分子CD80、CD83、CD86及CD11c的表达,鉴定细胞成熟度;q RT-PCR分析TP对DC分泌白细胞介素12b(IL-12b)的影响。结果:光镜及Wright-Gimsa染色的细胞形态学结果都显示TP可促进DC增殖及成熟,流式分析证明了这一结果,同时TP还促进DC大量分泌IL-12b。结论:TP不仅能促进DC增殖及成熟,还能影响DC的IL-12b表达;DC有可能是TP发挥抗癌作用的靶细胞之一。
  • 人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定 免费阅读 下载全文
  • 目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)得到重组质粒,经Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化融合蛋白His-ATG7,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约2031 bp的目的片段,插入载体p ET-28a(+)后构建出His-ATG7重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;转化大肠杆菌Rossate并进行小量诱导,纯化后SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为78×10^3的融合蛋白。结论:纯化得到原核系统表达的His-ATG7融合蛋白,为后续研究ATG7在自噬中的作用机制奠定了实验基础。
  • 携带Flag标签的人自噬相关蛋白4B的真核表达及功能鉴定 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B(ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pc DNA3.0-Flag载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用Western印迹检测融合蛋白的表达,用免疫共沉淀检测ATG4B与LC3的相互作用。结果:菌液PCR和重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,免疫共沉淀结果表明表达的ATG4B能与LC3结合。结论:构建了pc DNA3.0-Flag-ATG4B真核表达质粒,表达的ATG4B蛋白对LC3的切割至关重要,这为进一步研究ATG4B在自噬过程中的作用奠定了基础
  • STAT3对PTEN缺失的HGC27细胞增殖的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:初步探索STAT3与HGC27胃癌细胞增殖的关系。方法:用T4 DNA连接酶将外源片段与酶切后的p LKO.1载体连接,将构建的重组质粒转染293T细胞,48 h后收集上清用于感染HGC27细胞,Western印迹检测蛋白的表达,生长实验检测其对肿瘤细胞增殖的影响。结果:基因测序和双酶切鉴定表明敲低STAT3质粒构建成功;慢病毒质粒有效抑制HGC27细胞中STAT3蛋白水平,抑制STAT3对HGC27细胞的增殖有明显抑制作用。结论:在PTEN缺失的HGC27胃癌细胞中STAT3促进肿瘤增殖,但STAT3并不是在所有PTEN缺失的肿瘤细胞中都发挥抑制肿瘤形成的作用。
  • 人KAT7基因促进雌激素受体α表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建带有Myc标签的赖氨酸乙酰基转移酶(KAT7)的真核表达载体,获得Myc-KAT7融合蛋白,并检测其对雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术从中扩增出人KAT7基因的编码序列,插入p XJ-40-Myc载体;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测转染细胞的表达情况,并提取总RNA采用q RT-PCR检测ERα的表达。结果:双酶切和测序结果表明Myc-KAT7真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后Western印迹鉴定表明融合蛋白得到表达,q RT-PCR表明KAT7在转录水平能够促进ERα表达。结论:构建了带Myc标签的人KAT7真核表达载体,并发现KAT7对ERα的表达具有促进作用。
  • 肠出血性大肠杆菌O157:H7 z1445基因缺失株的构建 免费阅读 下载全文
  • 目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7的z1445基因,构建大肠杆菌z1445基因缺失突变株。方法:以O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列,分别经酶切后连接到p UC19-kan质粒的卡那霉素抗性基因kan两侧,PCR获得中间嵌合kan基因(带有FRT位点)的同源线性片段,利用质粒p KD46敲除z1445基因,利用质粒p CP20去除抗性标记基因;PCR鉴定及测序验证目的基因缺失后,测定缺失株及野生株的生长曲线。结果:敲除了z1445基因,突变株与野生株的生长曲线接近。结论:构建了z1445基因缺陷型菌株,为进一步分析z1445基因在O157∶H7与宿主的相互作用中发挥的作用提供了材料。
  • 金黄色葡萄球菌毒性休克综合征毒素1核酸适配体的筛选和鉴定 免费阅读 下载全文
  • 目的:筛选能特异性识别毒性休克综合征毒素1(TSST-1)的DNA适配体,为金黄色葡萄球菌感染的治疗奠定实验基础。方法:体外合成含有25个随机序列全长为63个碱基的单链DNA(ss DNA)文库,以TSST-1为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从ss DNA文库中筛选TSST-1适配体,利用生物信息学方法对适配体进行序列分析和结构预测,荧光定量法分析适配体的亲和力及特异性。结果:经过8轮筛选,文库的亲和力不断升高,获得了能识别TSST-1的DNA适配体T-7,它可选择性地与TSST-1结合,并测定其Kd值为103.8 nmol/L。结论:新型适配体T-7能选择性识别TSST-1,在金黄色葡萄球菌感染的治疗和诊断方面具有应用前景。
  • 拟南芥SHORT-ROOT基因稀有密码子分析及其在原核细胞中的表达和纯化 免费阅读 下载全文
  • 目的:在大肠杆菌中重组表达拟南芥SHORT-ROOT(SHR)蛋白并纯化。方法:将SHR基因编码区克隆至p GEX-4T-2表达载体,构建重组质粒p GEX-4T-2-SHR并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),表达产物经谷胱甘肽亲和层析凝胶4B分离纯化,SDS-PAGE分析和Western印迹鉴定。结果:SHR融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得表达,亲和纯化后,SDS-PAGE显示相对分子质量为预期的86×103,且经Western印迹确证。结论:获得了拟南芥SHR融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
  • 甘草根特异性过表达HMGR基因毛状根的诱导 免费阅读 下载全文
  • 目的:构建甘草根特异性过表达3-羟基-3-甲基戊二酰Co A还原酶(HMGR)基因毛状根培养体系。方法:利用根特异性过表达甘草HMGR基因的植物双元表达载体,通过发根农杆菌ACCC10060介导,转化甘草外植体并诱导毛状根的形成,利用PCR法及测序法对转基因毛状根进行验证。结果:诱导得到大量生长良好的甘草根特异性过表达HMGR基因毛状根。结论:为进一步研究功能基因HMGR与甘草酸次生代谢的相关性,以及提高甘草毛状根中的甘草酸含量奠定了良好的实验基础。
  • 北柴胡与银州柴胡的ITS条形码鉴定研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:建立基于内转录间隔区(ITS)序列的北柴胡与银州柴胡分子鉴定新方法。方法:以来自北京、宁夏、山西、甘肃、河北的10个居群共125份北柴胡及银州柴胡样品为实验材料,提取其总DNA,并PCR扩增其ITS序列,对序列进行双向测序,应用Clustal X及BLAST查错,用MAGA 5.0进行序列分析,计算种内、种间遗传距离,构建邻接树,并统计不同单倍型的分布情况。结果:北柴胡与银州柴胡的ITS序列全长为604 bp,有7个变异位点,共计6种单倍型,其中单倍型1为银州柴胡所特有,单倍型2~6为北柴胡所特有;ITS序列种内最大遗传距离0.005,种间最小遗传距离0.007。结论:利用ITS序列可快速准确地鉴定北柴胡与银州柴胡。
  • 深港两地工程土壤细菌多样性的T-RFLP分析 免费阅读 下载全文
  • 目的:建立一种高效的末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)方法,检测工程土壤细菌。方法:以深圳和香港两地不同土层(0.5,10,20和30 m)的工程土壤为研究对象,提取并纯化总DNA,利用细菌16S r DNA基因通用引物8f-FAM/1492r进行PCR扩增,扩增产物分别用HhaⅠ、HaeⅢ和MspⅠ限制性内切酶酶切,酶切产物经毛细管电泳测序,序列上传至数据库进行分析。结果:经过比对分析,香港段土壤中大约存在细菌141属,235种;深圳段大约存在132属,206种;32个细菌种属只在香港土壤中有分布,3个细菌种属只在深圳土壤中有分布;植物病原细菌有14个种属。结论:建立的T-RFLP方法能够高效、快速地分析工程土壤细菌。
  • 寨卡疫情危害及其防控应对 免费阅读 下载全文
  • 2015年5月以来,在巴西等美洲中部和南部发生了寨卡病毒暴发流行,并且疫情仍在不断升级。针对寨卡病毒所带来的全球健康风险和生物防御要求,本文在简述当前寨卡疫情态势的基础上,概析了寨卡疫情全球应对主要策略,并就我国做好应对工作提出建议。
  • 3种检测分枝杆菌方法的比较及应用价值分析 免费阅读 下载全文
  • 目的:比较并评价涂片抗酸染色法(涂片法)、L-J培养法和基因芯片法在分枝杆菌检测中的应用价值。方法:对241例需查抗酸杆菌的临床标本,采用涂片法、L-J培养法和基因芯片法检测分枝杆菌,3种方法检测结果存在分歧的标本再进行DNA测序,以培养鉴定结果阳性或DNA测序得到分枝杆菌序列为确诊标准。结果:241例标本,涂片法、L-J培养法和基因芯片法的检测阳性率依次为18.7%、12.0%、15.8%,经卡方检验三者阳性率的差异没有统计学意义(P〉0.05);检测灵敏度依次为85.4%、70.7%、93.0%,经卡方检验三种方法的灵敏度总体来说有差别(χ2=7.24,P〈0.05),涂片法与L-J培养法以及涂片法与基因芯片法的灵敏度差异没有统计学差异,基因芯片法的灵敏度高于涂片法(χ2=6.61,P〈0.05);检测特异性依次为95.6%、100.0%、100.0%。38例基因芯片检测阳性患者中有28例为结核分枝杆菌,10例为非结核分枝杆菌。结论:与涂片法及培养法相比较,基因芯片法能够鉴别分枝杆菌菌种,同时具有快速、可靠、准确度高的特点,在分枝杆菌感染的早期诊断和抗菌治疗上具有重要的临床价值。
  • 联合检测HE4、CA125和CA199对绝经后卵巢可及综合征的诊断价值 免费阅读 下载全文
  • 目的:探讨联合检测人附睾蛋白4(HE4)、血清糖类抗原125(CA125)和199(CA199)在绝经后卵巢可及综合征(PMPOS)中的应用价值。方法:采用化学发光法(CLIA)检测125例PMPOS患者及60例健康志愿者(对照组)血清HE4、CA125和CA199的水平,其中PMPOS患者分为良性肿瘤组(良性组,n=50)和恶性肿瘤组(恶性组,n=75)。结果:PMPOS恶性组患者血清HE4、CA125和CA199水平均显著高于良性组,有统计学差异(P〈0.05);也显著高于对照组,有统计学差异(P〈0.05)。良性组的CA125水平略高于对照组,有统计学差异(P〈0.05);但CA199和HE4水平与对照组比较无明显差异,无统计学差异(P〉0.05)。三者联合检测用于诊断PMPOS恶性肿瘤的敏感度达到81.2%,而特异度也保持在90.0%。结论:联合检测HE4、CA199和CA125可有效提高对PMPOS恶性卵巢肿瘤的诊断效率,具有较大的临床意义。
  • 医学类专业学生生物化学教学的体会 免费阅读 下载全文
  • 针对生物化学的课程特点,采用激发学生兴趣、构建整体框架、反复比较、巧做习题等方法,使学生牢固地掌握生物化学理论知识。同时,在教学过程中结合具体实验案例,全面提高医学类学生的实验创新素养。
  • ERAP1基因多态性和HLA-B27相互作用与强直性脊柱炎关联的研究进展 免费阅读 下载全文
  • HLA-B27阳性患者人群中,内质网氨基肽酶1(ERAP1)基因多态性与强直性脊柱炎(AS)密切相关。内质网中,ERAP1可有效剪切抗原肽,使其成为适合HLA-Ⅰ类分子提呈的寡肽。ERAP1基因多态性决定N端抗原肽修剪功能的正常与否以及HLA-B27分子的稳定表达。细胞水平的研究表明,不同ERAP1等位基因组合对于抗原肽底物的修剪能力决定了B27分子能否在细胞表面稳定表达。但是,功能型与功能异常型ERAP1如何影响HLA-B27抗原肽加工、B27稳定表达,以及如何影响AS疾病进程和免疫病理学改变等均未得到阐明。
  • MELK的功能及其在肿瘤研究中的进展 免费阅读 下载全文
  • 母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)是蔗糖非发酵1/AMP活化蛋白激酶(Snfl/AMPK)家族中一个独特成员,是一种周期依赖性激酶。与家族其他成员不同,MELK并不参与代谢应激状态下细胞的生存调控,而更多参与细胞周期、细胞增殖、肿瘤生成和细胞凋亡等过程。MELK在人体多种肿瘤中表达升高,与肿瘤的预后密切相关。MELK在肿瘤干细胞中被异常激活,使肿瘤细胞获得生长、侵袭、迁移等能力,因此,MELK可以作为肿瘤治疗的重要靶点。我们就MELK基因的生物学功能、作用机制及其在肿瘤研究中的进展做简要综述。
  • 植物增殖细胞核抗原的结构与功能 免费阅读 下载全文
  • 增殖细胞核抗原(PCNA)是真核生物细胞中一类保守蛋白,在DNA复制、DNA修复及细胞周期调控过程中具有非常重要的作用。我们简要介绍植物PCNA的结构、表达调控及其功能的研究进展。
  • 流式微珠阵列术在医学中的研究进展 免费阅读 下载全文
  • 随着高分子微球技术的日益创新,流式细胞术与高分子微球技术相结合的流式细胞微球芯片捕获技术也随之产生,流式细胞微球芯片捕获技术又称为流式微球分析技术、流式微球技术、流式微珠阵列术,具有检测灵敏度高、特异性强、分析速度快等优点,应用前景广阔。我们就流式细胞微球捕获芯片技术在医学中的研究进展做简要综述。
  • HISCL-5000高敏发光全自动免疫分析仪检测感染性指标的临床性能评价研究进展 免费阅读 下载全文
  • HISCL-5000高敏发光全自动免疫分析仪以化学发光酶免疫测定法为工作原理,用碱性磷酸酶标记检测化学发光,采用目前最快速、最灵敏的化学发光底物CDP-Star,曝光时间只需15~60 s。反应在液体中进行,实现了短时间内的高效率反应,反应时间可短至17 min。我们根据美国临床和实验室标准化协会颁布的EP系列文件,对HISCL-5000分析仪的分析性能进行评价,对相关研究进展做一综述。
  • 《生物技术通讯》征稿简则 免费阅读 下载全文
  • 《生物技术通讯》由军事医学科学院主管,军事医学科学院生物工程研究所主办,是中国科技论文统计源期刊(中国科技核心期刊)。本刊刊载生物技术相关各学科的研究报告、技术方法、综述等文稿。 1文稿写作要求 文稿请用中文撰写,应具有科学性、创新性、实用性,论点明确,资料可靠,数据真实,文字精炼,层次清楚。文稿必须是没有在国内外公开出版物上发表过的原始著作,或只在学术会议上报告过而未全文发表过的著作。
  • [研究报告]
    磷酸化Akt1(Thr308)位点突变真核表达载体的构建及其生物学功能研究(熊加秀;丁丽华;刘文忠;张亚楠;陈志达;罗晓丽;贾小萌;陈滢洁;叶棋浓;卫勃)
    利用CRISPR/Cas系统构建在XRCC6内源基因插入Flag标签序列的HeLa细胞系(李瑞花[1,2];付汉江;沈远;钟一然;朱捷;郑晓飞[1,2])
    人乳头瘤病毒6/11型L2片段的高效表达及免疫效果评价(任皎;张忠献[1,2];赵莉;郝明强;田厚文;谭文杰;阮力)
    鹦鹉热衣原体的B598_0590基因编码包涵体膜蛋白(李鹏[1,2];何君;朱虹;李岩伟;于永慧;端青;宋立华)
    钠碘同向转运体上游增强子序列的特异性结合蛋白文库的构建及初步筛选(邱立红[1,2];靳彦文;方毅;付洋波;白圆圆;颜芳;朱贵明;曹诚)
    过表达SGK3肝癌细胞BEL-7402在去甾体激素血清中的抗凋亡研究(吕文杰[1,2];王洪涛;黄芳;王健;王芃;洪鎏;周建光;潘耀振;李山虎)
    运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体(吕文杰[1,2];王洪涛;黄芳;王健;王芃;洪鎏;周建光;潘耀振;李山虎)
    Twist1稳定表达细胞株的建立及对乳腺癌细胞上皮-间充质转变的影响(宋玉华;陈滢洁[1,2];张亚楠;刘婕;罗晓丽;贾晓蒙;李欣;姜潇;丁丽华;叶棋浓)
    构建稳定过表达转录辅助因子LBH的人间充质干细胞株(牛琳;段永娟;王文天;杨洋;赵慧娟;胡晓)
    微管结合蛋白Tau磷酸化位点突变体的构建及鉴定(贾晓蒙;张亚楠;罗晓丽;陈滢洁;丁丽华;叶棋浓;吕朝晖)
    腺病毒55型在A549细胞中的增殖动力学特征(张绮玲[1,2];李庆军;王鑫;曲新艳;杨全;杨静[2,3])
    埃可病毒25型新型中和实验方法的建立与应用(李姝璇;杨立生;侯汪衡;赵欢;万俊凯;陈梦媛;何水珍;程通;夏宁邵)
    敲低SOX2基因抑制乳腺癌干细胞的含量(姜丽娜;程龙;叶棋浓;吕朝晖)
    多西他赛诱导乳腺癌MCF-7耐药细胞株的建立及耐药机制分析(姜丽娜;杜佩云;营孙阳;麦宏旭;程龙;叶棋浓;吕朝辉)
    促吞噬肽衍生物TP对树突状细胞功能的影响(安映红;宣自学;韩苏;杨德宣;徐城望;袁守军)
    人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定(晋帅[1,2];洪甜;张珂;马永富;徐小洁;褚健[1,2];易绍琼;叶棋浓;刘阳)
    携带Flag标签的人自噬相关蛋白4B的真核表达及功能鉴定(洪甜;晋帅;张立;李玲;梁迎春;宋烨琼;董倩;刘阳;徐小洁;叶棋浓)
    STAT3对PTEN缺失的HGC27细胞增殖的影响(田秉昌[1,3];卫勃;乔振宇;吕晓业;黄芳;王芃;李山虎;周建光;王健;刘文忠)
    人KAT7基因促进雌激素受体α表达(董倩;李玲;宋烨琼;范忠义;张珂;徐小洁;叶棋浓;胡毅)
    肠出血性大肠杆菌O157:H7 z1445基因缺失株的构建(刘雪超;黄洁;李涛;刘坤;王慧)
    金黄色葡萄球菌毒性休克综合征毒素1核酸适配体的筛选和鉴定(陈弘炜;王开宇[1,2];兰小鹏[1,2])
    拟南芥SHORT-ROOT基因稀有密码子分析及其在原核细胞中的表达和纯化(孙验玲;郑玲;于倩倩;何春梅;耿骁渝;郑红霞;刘霞[1,3])
    甘草根特异性过表达HMGR基因毛状根的诱导(王礼强;袁伯川;马永生;杨瑞;周姗;刘颖)
    北柴胡与银州柴胡的ITS条形码鉴定研究(袁伯川;马永生;杨瑞;周姗;林瑞超;刘颖)
    深港两地工程土壤细菌多样性的T-RFLP分析(龙海[1,2];章桂明;冯建军;李芳荣;程颖慧;焦懿[1,2];王颖;李一农)
    寨卡疫情危害及其防控应对(程瑾;叶玲玲;郝继英;田德桥;陈锐;韩铁;李芳薇;郑涛)
    [技术方法]
    3种检测分枝杆菌方法的比较及应用价值分析(陈建芸;石玉玲;李林海;苏威)
    联合检测HE4、CA125和CA199对绝经后卵巢可及综合征的诊断价值(黄西元;石玉玲;张速林)
    [教学园地]
    医学类专业学生生物化学教学的体会(向穷;李先辉;李春艳;田荣波)
    [综述]
    ERAP1基因多态性和HLA-B27相互作用与强直性脊柱炎关联的研究进展(王玲;奚永志;孙玉英)
    MELK的功能及其在肿瘤研究中的进展(庞立;刘炳亚)
    植物增殖细胞核抗原的结构与功能(李治龙;李晗;李晓屿;李玉花;蓝兴国)
    流式微珠阵列术在医学中的研究进展(马锡慧[1,2];肖漓;石炳毅)
    HISCL-5000高敏发光全自动免疫分析仪检测感染性指标的临床性能评价研究进展(谢思[1,2];张卫云;陈建芸;石玉玲)
    [其他]
    《生物技术通讯》征稿简则
    《生物技术通讯》封面

    主管单位:军事医学科学院

    主办单位:军事医学科学院生物工程研究所

    主  编:黄培堂

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