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文献检索:
  • 人耳聋相关基因GJB3的结构特征及生物信息学分析 免费阅读 收费下载
  • 目的:对问隙连接蛋白Cx31编码基因GJB3的编码区进行生物信息学预测和分析。方法:利用C1ustalW2、MEGA5.05和VMDl.9等生物信息学软件对GJB3的保守性、系统进化、三维空间结构和错义突变角度进行分子结构预测和功能分析。结果:系统进化树的构建验证了脊椎动物各纲亲缘关系远近;保守性分析为GJB3致病性突变少于GJB2提供了可能的原因;三维结构预测和错义突变分析解释了GJB3突变的致病性机制。结论:对GJB3基因及其蛋白结构和功能的分析将为后续实验研究奠定基础。
  • 表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能。方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-miR-192;线性化后,在QBI-293A细胞中进行病毒包装;用包装成功的重组腺病毒感染HepG2细胞,72h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后进行定量PCR,检测miR-192和潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因1(RBl)mRNA的变化。结果:获得670bp的miR-192前体基因,经过穿梭载体后重组构建表达miR-192的腺病毒载体pAd-miR-192;将pAd-miR-192转染QBI-293A细胞,第8d细胞病变及荧光的表达结果表明重组腺病毒成功包装;感染HepG2细胞后,定量PCR检测表明miR-192的表达较对照增加了835.87倍,同时检测到细胞中RBlmRNA的表达显著降低。结论:构建了高效表达miR-192的腺病毒,建立了miR-192高表达的肝细胞模型,证明在肝细胞中抑制的RBl是miR-192靶分子,为后续miR-192在肝细胞中功能的研究奠定了基础。
  • 抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:检测制备的7株抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)蛋白C端单克隆抗体是否具有辅助杀伤肝癌细胞的活性,并研究其识别的抗原表位。方法:用细胞增殖法检测制备的抗体是否具有抗体依赖细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性;用生物信息软件分析GPC3蛋白C端(359~580残基)的结构及抗原特征,并据此将其分为4个截短片段,将克隆的各基因片段分别连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,进行蛋白表达和纯化,用间接ELISA和Western印迹分析GPC3C端单克隆抗体的表位识别情况。结果与结论:制备的7株单克隆抗体对肝癌细胞HepG2均具有不同程度的辅助杀伤作用,其中5号单克隆抗体的辅助杀伤效果最好;表达并纯化了GPC3C端4个截短片段的重组蛋白;间接ELISA和Western印迹检测结果表明,7株抗体均特异性结合GPC3蛋白的473~525残基区段。
  • 分子伴侣及信号肽对毕赤酵母中分泌蛋白表达水平的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:探索定位于细胞质、内质网膜及内质网腔中的分子伴侣及其组合对于带有不同信号肽的胞外β-1,3-葡聚糖酶(EXGl)在巴斯德毕赤酵母GS200中表达水平的影响。方法:通过融合PCR技术分别构建带有酵母a交配因子引导肽序列(仅MF)、酵母仅交配因子信号肽序列(ccPre)和重链结合蛋白(Bip)信号肽序列的报告蛋白EXGl的表达质粒pPIC9-EXG1,同时构建分子伴侣基因及其组合的表达质粒pBLArg-IV,然后将2种重组质粒共转化至毕赤酵母宿主菌GS200,转化子经筛选获得共表达菌株,通过测定EXG1酶活来评价分子伴侣与信号肽对其表达水平的影响。结果:细胞质及内质网膜上的分子伴侣Sec61a、Sec61B及胞质中的分子伴侣Ydjl、Ssal、Hsp104及其组合对各种信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平没有显著影响。然而,内质网腔中的分子伴侣Bip、EroI、PDI与HacI组合能显著提高报告蛋白EXG1的表达水平,其中,以aMF或ctPre作为信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平分别提高了2.6倍和3.8倍,以Bip信号肽引导的报告蛋白EXGl的表达水平提高了20%~45%,而对于以EXG1自身信号肽引导的报告蛋白EXG1的表达水平没有显著影响。结论:在酵母表达体系中,内质网腔中的分子伴侣是报告蛋白EXG1表达水平的重要影响因素.但分子伴侣对于信号肽的选择性还须进一步证明。
  • RBPMS不同剪接体的真核表达和亚细胞定位 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达,确定不同形式的RBPMS在细胞中的定位。方法:采用PCR技术从人卵巢cDNA文库中扩增RBPMS基因的几种完整编码序列(命名为RBPl~RBP4),克隆到带绿色荧光蛋白标签的pEGFP-C1表达载体上,转染人胚肾细胞293T,Western印迹鉴定RBPMS的表达,并利用激光共聚焦显微镜观察RBPMS不同剪接体在细胞中的定位。结果:限制性内切酶分析和DNA序列测定表明构建的重组表达载体正确,Western印迹实验证明RBP1~RBP4表达成功。通过激光共聚焦显微镜观察,RBP1/4围绕胞核在核膜的周围呈聚集状分布;RBP2则在细胞质和细胞核中均有分布,但会出现斑点状聚集;RBP3呈半月状紧密分布在细胞核周围;RBPMS中的RNA识别基序缺失后,这种现象消失,与空载体对照类似,在细胞核和细胞质中均有分布。结论:构建并表达了RBPMS基因的真核表达载体,RBPMS不同剪接体及RNA识别基序缺失后具有不同的亚细胞分布模式,提示具有不同的功能。
  • c-Fos不同结构域的真核表达及功能鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:克隆c-Fos蛋白不同结构域基因片段,构建其含FLAG标签的真核表达载体,并鉴定其功能。方法:用PCR方法扩增获得c-Fos不同结构域片段基因,定向克隆至本实验室保存的FLAG-peDNA3.0载体中,瞬时转染293T细胞进行表达,并以本实验室保存的HA-e-Jun与FLAG-c-Fos不同结构域片段免疫共沉淀鉴定其相互作用区域,以佐证所构建的c-Fos结构域克隆的正确性。结果:测序结果表明c-Fos不同结构域序列正确,Western印迹显示可以在真核细胞中获得表达,并且免疫共沉淀结果显示c-Jun可以与c-Fos的bZIP区域特异性结合。结论:构建并表达了c-F0s不同结构域片段,为进一步研究与c-Fos相互作用的蛋白及其区域定位奠定了基础。
  • DEK真核表达载体的构建及其对p53启动子活性的影响 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建DEK的pcDNA3-Flag表达载体,研究其对抑癌基因p53启动子活性的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增DEK编码序列,克隆到pcDNA3-Flag载体,构建成pcDNA3-Flag-DEK,转染293T细胞,Western印迹鉴定peDNA3-Flag载体介导的DEK的表达,萤光素酶报告基因活性实验研究DEK对p53启动子活性的影响。结果:双酶切实验证实得到pcDNA3-Flag-DEK阳性克隆;Western印迹实验发现DEK在293T细胞内表达;转录活性实验表明在ZR75-1乳腺癌细胞中,DEK呈剂量依赖性抑制p53启动子的活性。结论:构建了DEK的真核表达载体,并发现此表达载体能在ZR75-1乳腺癌细胞中抑制p53启动子活性。
  • 血管内皮细胞生长因子启动子突变体萤光素酶报告基因载体的构建 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建含有不同片段血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的启动子的萤光素酶报告基因载体,并定位缺氧诱导因子1a(HIF-1d)结合VEGF启动子的区域。方法:以VEGF全长启动子为模板,PCR扩增VEGF启动子的不同片段,插入萤光素酶报告基因载体pGL4-basic,确定所扩增的DNA序列后,将其与HIF-1a表达载体共转染293T细胞,定位HIF-1a结合VEGF启动子的区域。结果:测序结果表明扩增的不同片段的VEGF启动子序列正确;萤光素酶活性实验表明,-1128~-728bp片段是HIF-1a与VEGF相互作用激活VEGF启动子转录活性的区域。结论:克隆了VEGF启动子5’端缺失突变体报告基因表达载体,为调控VEGF表达的转录因子的筛选及功能研究打下了良好基础。
  • 人p53启动子萤光素酶报告基因的构建及其活性测定 免费阅读 收费下载
  • 目的:克隆p53基因的启动子,插入萤光素酶报告基因载体,并检测启动子活性。方法:采用PCR技术从人肝癌细胞系HepG2基因组中扩增人p53启动子,插入萤光素酶报告基因载体pGL4.0-empty,将重组质粒转染293T、ZR75-1、HepG2、A549细胞,测定p53启动子的转录活性。结果:构建了p53启动子的萤光素酶报告基因;通过测序及质粒酶切鉴定,所构建的p53启动子正确;活性实验表明,报告基因在多种细胞中显示构建的p53启动子活性,并呈现一定的剂量效应;转录因子USF能以剂量效应方式提高p53报告基因的转录活性。结论:克隆了人p53启动子,为进一步研究调控p53的转录因子奠定了基础。
  • 基于Te-OnAdvanced的肺癌细胞15-脂氧化酶-2基因表达载体的构建与表达 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建肺癌细胞15-脂氧化酶-2(15-Lox-2)的可诱导性真核表达载体pTRE-Tight-15-Lox-2,并在肺癌细胞中检测其是否可受强力霉素(DOX)诱导表达。方法:pcDNA3-15-LOX-2载体经&0RI和XbaI双酶切线性化,回收15-LOX-2cDNA片段,将其克隆入pTRE-Tight载体的EcoRI和XbaI位点;采用脂质体法将pTet-0n-Ad-vanced与构建的pTRE-Tight-15-Lox-2共转染肺腺癌A549细胞,DOX诱导表达后,Western印迹检测15-Lox-2的表达水平。结果:构建了pTRE-Tight-15-Lox-2诱导表达载体;Western印迹检测表明,该载体能在肺癌细胞内表达,且其表达受DOX调控。结论:Tet-OnAdvanced系统能严密高效地调控15-LOX-2在肺癌细胞中的表达,为进一步研究15-LOX-2在肺癌中的作用奠定了基础。
  • miR-455慢病毒表达载体的构建与鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建人源microRNA-455(miR-455)慢病毒载体,并鉴定成熟has-miR-455在细胞内的表达水平。方法:提取siHa细胞中的人基因组DNA,设计并合成人miR-455的上下游引物,PCR扩增目的基因,将其中表达miR-455的结构经酶切后插入慢病毒转移质粒pWPT-GFP,构建成pWPT-GFP-pri-miR-455,在293T细胞中与pMD2G、pSPAX2包装产生慢病毒,并用含慢病毒的上清感染SiHa细胞。结果:测序结果证明插入质粒载体中的miR-455前体序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒;重组慢病毒质粒pWPT-GFP-pri-miR-455感染SiHa细胞后上调miR-455的表达近40倍。结论:构建了miR-455的慢病毒载体,并能在293T细胞中表达,产生的慢病毒能成功感染SiHa细胞。为进一步研究miR-455的功能,以及利用慢病毒进行基因治疗奠定了基础。
  • CARP1基因克隆、表达及其泛素连接酶活性的鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a(TNFa)引起的NF-kB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。
  • 结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建能介导结缔组织生长因子(CTGF)基因RNA干扰的复制缺陷型腺病毒表达载体。方法:以大鼠CTGF基因为靶序列,设计并合成含编码短发夹RNA序列的寡核苷酸,构建腺病毒穿梭质粒P-shuttle-CTGF,酶切及测序分析正确后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染AD-293细胞,进行病毒包装,得到腺病毒载体Ad.H1-CTGF,用该载体感染HSC-T6细胞,观察其对CTGF基因表达抑制的效果。结果:构建的腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF经酶切、测序分析证实正确;包装的病毒载体滴度为4×1010PFU/mL,感染HSC-T6细胞后,Western印迹证实CTGF表达显著减少。结论:构建的腺病毒载体Ad.H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达,为抗纤维化研究提供了有力的工具。
  • 甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析 免费阅读 收费下载
  • 目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果:巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论:建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。
  • 转基因白桦不同月份叶片基因组DNA甲基化水平的变异 免费阅读 收费下载
  • 目的:以转坛£抗虫基因白桦的不同月份叶片为实验材料,揭示基因组DNA甲基化水平与植物叶片发育及外源基因表达水平之间的相关性。方法:应用DNA-MSAP方法检测叶片基因组DNACCGG位点甲基化状态,利用Northern杂交技术分析其外源基因表达水平。结果:转基因白桦叶片基因组DNA同年5~9月总甲基化水平分别为21.95%、29.62%、25.41%、41.39%和47.24%,除7月份稍有波动外,整体呈现随着叶片的成熟和衰老渐升高趋势;全部扩增位点中,半、全甲基化位点比例分别为17.99%和15.19%,在各月份叶片中变化较大,其中半甲基化位点比例分别为10.37%、19.14%、14.92%、17.2%和28.83%,全甲基化位点比例依次为11.58%、10.49%、10.50%、24.11%和18.40%。同一无性系外源基因在当年5~7月表达量最高,8~9月呈下降趋势,与基因组甲基化状态呈负相关趋势。结论:转基因白桦叶片的成熟和衰老及外源基因表达量降低均可能与基因组DNA甲基化水平的升高相关。
  • 齐口裂腹鱼PGC-1a基因编码区的克隆及其在肌肉组织中的表达 免费阅读 收费下载
  • 目的:获得齐口裂腹鱼过氧化物酶体增殖物激活受体Y辅助活化因子1a(PGC-1a)cDNA序列,探讨其在齐口裂腹鱼肌肉组织中的表达规律。方法:根据斑马鱼基因PGC-1a序列设计引物,提取齐口裂腹鱼肌肉组织总RNA,经RT-PCR扩增PGC-1a仪基因序列;利用半定量RT-PCR分析齐口裂腹鱼PGC-1a基因在红肌和白肌中的mRNA表达特性。结果:获得齐口裂腹鱼PGC-1a基因序列2633bp,GenBank登陆号为JNl95738,其中ORF为2631bp,编码876个氨基酸残基,与同鲤科的斑马鱼、草鱼和金鱼的同源性较高,为88%~93%,但与哺乳动物和禽类如人、小鼠、大鼠、猪、牛和鸡的同源性较低,为49%~50%。在基础状态下,PGC-1a在齐口裂腹鱼红肌中的表达显著高于白肌,禁食可显著诱导PGC-1a在红肌和白肌中的表达水平。结论-首次克隆得到齐口裂腹鱼PGC-1a基因序列,其在红肌中的表达显著高于白肌中,禁食可显著诱导其在红肌和白肌中的表达,为研究PGC-1a在齐口裂腹鱼肌肉中的作用提供了理论依据。
  • 重组SCIRR39多克隆抗体的制备及检测 免费阅读 收费下载
  • 目的:在大肠杆菌中表达大鼠脊髓损伤与修复蛋白39(SCIRR39)的C端抗原表位,并制备其多克隆抗体。方法:从大鼠脊髓全横断损伤脊髓cDNA中扩增1386bp的Scirr39基因编码框,亚克隆该基因编码蛋白C端359~461位氨基酸残基的DNA片段,插入表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况,切胶纯化目的蛋白;利用多克隆抗体制备技术,制备重组SCIRR39蛋白的多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体效价,Western印迹检测抗体的特异性。结果:SCIRR39蛋白C端抗原表位与GST的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式高表达,相对分子质量为37.9×103;获得抗SCIRR39蛋白C端抗原表位的兔抗血清,其效价达到1:104;Western印迹显示多克隆抗体能特异识别重组SCIRR39蛋白的C端抗原表位。结论:在原核系统中表达纯化了重组SCIRR39抗原表位蛋白,制备的重组蛋白多克隆抗体将用于检测SCIRR39在脊髓损伤过程中的表达变化。
  • 嗜热芽孢杆菌噬菌体的分离及特征研究 免费阅读 收费下载
  • 目的:从腾冲热海温泉中分离嗜热芽孢杆菌噬菌体,并初步分析其特征。方法:采用双层平板法分离纯化嗜热芽孢杆菌噬菌体,对分离得到的噬菌体进行电镜形态观察,按照感染复数(MOI)分别为0.01、0.1、1.0、10和100加入噬菌体纯培养液和宿主菌,55℃、160r/min培养8h后测定噬菌体滴度,并进行噬菌体的热稳定性和pH稳定性分析。结果:从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体为二十面体型;其感染宿主菌NHH4形成清晰的噬菌斑,最适MOI为1.0,最适感染温度为55℃,最适感染pH值为7.5。将这株噬菌体命名为TBIP1。结论:从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体TBIP1为典型的二十面体型,当MOI为1.0时,TBIP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高。
  • 快速诱导细胞凋亡及检测方法研究 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨Ca2+和Na+诱导细胞凋亡的最佳浓度及时间,并用甲基绿一派诺宁染色法检测凋亡细胞的形态变化。方法:分别用不同浓度梯度及时间梯度的Ca2+和Na+胁迫处理洋葱鳞茎内表皮细胞,得诱导的最佳浓度及时间;用甲基绿一派诺宁染色法检测诱导凋亡的洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞和鸡血红细胞的形态特征变化。结果:诱导处理的最佳Ca2+和Na+浓度为0.4mol/L,最适时间约为8h,且CaCl2的诱导效果较NaCl好;经甲基绿一派诺宁染色,洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞、鸡血红细胞凋亡细胞的细胞核均呈蓝紫色,细胞质呈红色。结论:找出了诱导细胞凋亡的最适Ca2+和Na+浓度和时间,并检测到细胞凋亡。
  • 子宫内膜异位症中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化研究 免费阅读 收费下载
  • 目的:探讨错配修复基因1(hMLH1)、错配修复基因2(hMSH2)启动子区甲基化与子宫内膜异位症的关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法检测23例子宫内膜异位症组织和20例正常子宫内膜中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果:hMLH1基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为39%(9/23),在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5%(1/20),两者比较,差异有统计学意义(P〈0.05);hMSH2基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为8%(2/23),在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5%(1/20),两者比较,无明显差异(P〉0.05)。结论:hMLH1基因启动子区甲基化可能与子宫内膜异位症发病有关;hMSH2基因启动子区甲基化与子宫内膜异位症之间不存在显著联系。
  • IMP-3在不同病变子宫内膜组织中的表达及临床意义 免费阅读 收费下载
  • 目的:研究胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白Ⅲ(IMP-3)在不同病变子宫内膜组织中的表达,探讨其在子宫内膜病变发生过程中的作用机制。方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶连接法(SP法)检测20例正常子宫内膜组织、10例不典型增生内膜组织及40例子宫内样腺癌组织中IMP-3的表达情况,分析其表达量与子宫内膜癌临床病例特征之间的关系。结果:IMP-3在正常子宫内膜组织、不典型增生内膜组织及子宫内样腺癌组织中的相对表达量分别为5.361±1.074、13.587±2.301和19.572±1.936,两两间表达差异有统计学意义(P〈0.05);在不同手术-临床分期和病理组织学分级的子宫内膜癌组织中,IMP-3的表达量有统计学差异(P〈0.05)。结论:IMP-3可能参与调节子宫内膜病变的发生发展过程。
  • 单克隆抗体纯化过程中内毒素去除方法分析 免费阅读 收费下载
  • 目的:分析单克隆抗体纯化过程中,去除内毒素的不同方法的应用效果,并探讨它们应用于中试规模的可行性。方法与结果:比较了多聚赖氨酸型的内毒素去除填料、20nm膜过滤、将单抗附着在蛋白A柱上后使用精氨酸和组氨酸溶液冲洗等3种方法的内毒素去除效果,发现3种方法都可以将内毒素水平大幅降低,可分别将内毒素去除70%、88%和97%。因为单抗分子等电点较高,所获得的最低内毒素含量为0.2~0-3EU/mg。结论:3种方法均具有一定的工艺放大潜力,进一步提高内毒素去除效果将需要综合使用不同机理的去除技术。
  • 一种用于流感病毒亚单位疫苗纯度分析的改进方法 免费阅读 收费下载
  • 目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除了血凝素的糖基化对电泳迁移率的影响,从而实现了血凝素亚基和杂质的电泳分离。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析,较之常规的还原型SDS-PAGE方法具有更高的分辨力。
  • A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留a-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立 免费阅读 收费下载
  • 目的:建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留a-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法:利用a-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量a-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的仅一Ⅳ-乙酰半乳糖胺酶。结果:建立了检测微量a-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1ng/mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论:本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。
  • 垂体瘤转化基因1研究进展 免费阅读 收费下载
  • 垂雄瘤转化基因1(PTTG1),也被称为分离酶抑制蛋白基因,是近几年从大鼠垂体肿瘤中发现的癌基因。它不但可以与分离酶结合,使分离酶失活,从而抑制姐妹染色单体的分离,还具有转录激活活性。已有的染色质免疫共沉淀结合芯片数据显示,PTTG1不仅可以直接调控基因的转录,也可以与其他蛋白,如PTTG1结合因子(PBF)、p53、Spl、上游刺激因子1(USF1)等相互作用来调控下游基因的转录。在NIH3T3细胞中,PTTG1激活c-Mvc的转录,增强NIH3T3细胞在裸鼠体内的成瘤能力。PTTG1也能激活肿瘤细胞中成纤维细胞生长因子2(FGF2)的转录,从而促进肿瘤血管生成。PTTG1结合p53、抑制p21表达、激活周期蛋白D3的能力,提示它在凋亡、细胞周期和衰老方面廿.发挥作用。另外,PTTG1在肿瘤转移和肝癌的发生发展中也发挥着重要作用。我们简要综述了PTTG1的靶基因,及其在肝癌及肿瘤转祷中的研究进展。
  • 毕赤酵母工程菌高密度发酵的研究进展 免费阅读 收费下载
  • 近年来毕赤酵母已成为一种优越的异源蛋白表达系统。而提高目的蛋白的表达水平,高密度发酵已成为关键技术环节之一。我们从毕赤酵母工程菌的选择、培养基的优化设计,以及发酵工程过程控制等方面简要阐述毕赤酵母的高密度发酵,并提出了工程菌在高密度发酵过程中存在的问题。
  • 产气荚膜梭菌a毒素分子生物学研究进展 免费阅读 收费下载
  • a毒素是产气英膜梭菌主要的毒力因子,具有磷脂酶C和鞘磷脂酶等2种酶的活性,能同时水解细胞膜上的磷脂酰胆碱和鞘磷脂,导致细胞裂解,因而具有细胞毒性、溶血活性、致死性和血小板聚集等特性。我们对产气荚膜梭菌a毒素的生物学特性、基因克隆与转录调控、基因表达与基因融合、基因定点突变与结构分析、N端和C端的结构与功能等方面的研究进展进行简要综述。
  • 植物转录因子最新研究方法 免费阅读 收费下载
  • 转录因子可以调控众多下游基因的表达,在植物的生长发育、代谢及对外界环境的反应中起着重要作用。我们结合近年来植物转录因子的研究进展,归纳分析了高等植物转录因子研究的主要策略和最新的技术方法,并从生物信息学分析、瞬间转化技术的应用、突变体表型分析及调控网络等几个方面进行了全面阐述,为植物转录因子的预测、功能鉴定及靶基因分析等相关研究提供理论和方法的参考。
  • 二氢乳清酸脱氢酶靶向抗疟药研究进展 免费阅读 收费下载
  • 疟疾是全球危害最严重的传染性疾病之一,尤其是在非洲,发病率与死亡率仍居高不下。抗药性的出现和发展使大多数现有抗疟药在临床上失去了效用,研究和开发新型抗疟药已成为当前疟疾防治研究的迫切需求。随着恶性疟原虫基因组测序的完成和对疟原虫生物学认知的不断深入,寻找抗疟新靶点的研究得以快速发展。嘧啶生物合成途径是经临床确证有效的抗疟靶点的典范。我们简要综述了近年来以恶性疟原虫嘧啶从头合成途径第四步关键酶——二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)为靶点的抗疟新药研究。高通量筛选、药物化学等研究已获得若干对恶性疟原虫DHODH有选择性抑制作用的化合物结构,其中有些在恶性疟原虫体外培养试验中表现出了较强的抗疟作用,且其酶抑制活性与抗疟活性间具有良好的相关性。通过三唑并嘧啶类系列先导化合物的优化研究,已获得了具有良好代谢稳定性、对鼠疟模型有效的类似物。已有大量研究表明DHODH靶向抗疟药的研发具有广阔前景。
  • 甲烷单加氧酶的研究进展 免费阅读 收费下载
  • 甲烷氧化细菌在转化甲烷制造新型燃料、单细胞蛋白和新功能酶生产、污水处理等方面有着潜在的应用前景,因此,甲烷单加氧酶作为其代谢过程中重要的酶系也受到人们的广泛关注。我们简要综述了近年来对甲烷单加氧酶的性质、结构、催化机理等方面的研究,特别是对颗粒性甲皖单加氧酶的相关性质进行了详细的阐述。
  • 蛋白质晶体的物理性质及其鉴别方法研究进展 免费阅读 收费下载
  • 蛋白质晶体由蛋白质分子有序排列的框架组成,其内部富含溶剂(水)分子,外观形貌多种多样,其物理性质与常规固态晶体相比有很大不同。我们针对蛋白质晶体的一些物理性质(包括低密度、机械性能、声学、热学、光学等性质),进行了研究进展评述,并根据蛋白质晶体的特殊物理性质,评述了人们发展出的从蛋白质结晶液中区分蛋白质晶体的方法。
  • Smart Amp快速检测技术及其应用 免费阅读 收费下载
  • SmartAmp是一种新的DNA等温扩增技术,具有操作简单、快速、成本低、灵敏度高、特异性强、背景低等优点。目前已在临床基因多态性检测、感染性疾病诊断等方面初步应用,为临床快速诊断提供了帮助,在食品和环境中病原体检测领域也显示了极大的应用发展潜力。我们简要概述SmartAmp技术原理、特点及其应用前景。
  • 燕窝生物活性及质量标准研究进展 免费阅读 收费下载
  • 燕窝作为一种名贵药材,来自雨燕科若干种金丝燕用唾液筑成的巢穴。随着对燕窝资源需求的持续增长,全面深入地认识燕窝的营养和药用价值十分必要。我们对该领域的相关研究进行了综述,内容涉及燕窝所含的水溶性蛋白、碳水化合物、无机盐、微量元素等化学成分,及它们具有的促有丝分裂、抑制流感病毒、抗凝血、改善骨骼强度等生物活性。目前的研究重点应放在燕窝重要生物活性成分的分离和纯化方面,在深入了解燕窝物质基础的同时通过完善质量标准以保证药材质量安全和可靠。
  • [研究报告]
    人耳聋相关基因GJB3的结构特征及生物信息学分析(孙丹 王帅 魏钦俊 姚俊 曹新)
    表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析(代晓朋[1] 李军锋[1] 张红飞[2] 张伟[1] 赵光宇[1] 于虹[1] 郭彦[1] 周育森[1])
    抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定(张红飞[1] 张慧娜[1] 李军锋[2] 于虹[2] 代晓朋[2] 赵光宇[2] 郭彦[2] 王凯娟[1] 张建营[1] 周育森[2])
    分子伴侣及信号肽对毕赤酵母中分泌蛋白表达水平的影响(杜济良 赵洪亮 薛冲 任敏 刘志敏)
    RBPMS不同剪接体的真核表达和亚细胞定位(付洁[1] 王瑜[2] 程龙[1] 徐小洁[1] 张浩[1] 宋海峰[2] 叶棋浓[1])
    [综述]
    c-Fos不同结构域的真核表达及功能鉴定(付洁[1] 王瑜[2] 程龙[1] 徐小洁[1] 张浩[1] 宋海峰[2] 叶棋浓[1])
    [研究报告]
    DEK真核表达载体的构建及其对p53启动子活性的影响(刘婕[1] 闫志风[2] 张亚楠[1] 林娅红[1] 丁丽华[1] 叶棋浓[1])
    血管内皮细胞生长因子启动子突变体萤光素酶报告基因载体的构建(张述[1,2] 刘婕[2] 刘世翠[2] 林娅红[2,3] 张亚楠[2] 丁丽华[2] 叶棋浓[2])
    人p53启动子萤光素酶报告基因的构建及其活性测定(刘家宏[1,3] 徐小洁[3] 符静[2] 范忠义[1] 吕朝晖[2] 陆菊明[2] 肖文华[1] 叶棋浓[3] 朱建华[1])
    基于Te-OnAdvanced的肺癌细胞15-脂氧化酶-2基因表达载体的构建与表达(杨玉花[1,2] 魏晓莉[1] 郑建全[1])
    miR-455慢病毒表达载体的构建与鉴定(张康[1] 梅倩[2] 李祥[2] 赵亚力[2] 韩为东[2] 孟元光[1])
    CARP1基因克隆、表达及其泛素连接酶活性的鉴定(张睿[1,2] 苏文莉[2] 孙走南[2] 杨益[2] 刘京梅[2] 何湘[2])
    结缔组织生长因子基因RNA干扰复制缺陷型腺病毒载体的构建及鉴定(郝春秋 彭梅娟 谢玉梅 周云 魏欣 马力 王素娜 李瑞娟 张岩 白雪帆 贾战生)
    甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析(李慧瑾 李研 孙晶莹 高锦伟 赵向绒 封青 谭天天 胡巧侠 李元 胡军)
    转基因白桦不同月份叶片基因组DNA甲基化水平的变异(刘堃 曾凡锁 李博 詹亚光)
    齐口裂腹鱼PGC-1a基因编码区的克隆及其在肌肉组织中的表达(李瑞文[2] 林亚秋[1] 郑玉才[1] 张润锋[3] 宫佳琦[1] 晁珊珊[1])
    重组SCIRR39多克隆抗体的制备及检测(倪艳丽 李欣 刘少君)
    嗜热芽孢杆菌噬菌体的分离及特征研究(晏爱芬[1] 余丽[1] 林连兵[2])
    快速诱导细胞凋亡及检测方法研究(周良彬 雷航 谭文佳 陈俊鹏 周晓 余晓丽)
    子宫内膜异位症中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化研究(单莉莉 朱婷 王中海)
    IMP-3在不同病变子宫内膜组织中的表达及临床意义(杨清[1] 毕芳芳[1] 刘冬玲[2])
    [技术方法]
    单克隆抗体纯化过程中内毒素去除方法分析(李彦英[1] 王珙[2] 李凌瑞[2] 周振海[2] 李娜[1] 毛赟赟[1] 李凯[1] 王笑非[2] 董晓杰[1])
    一种用于流感病毒亚单位疫苗纯度分析的改进方法(田文莉[1] 邵铭[2] 祁骥[1] 刘淑珍[2] 谷堃[1] 李长贵[2] 杨旭[1] 李小强[1])
    A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留a-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立(高红伟[1] 李素波[1] 鲍国强[1] 张雪[1] 徐丽娟[2] 檀英霞[1] 王颖丽[1] 季守平[1] 宫锋[1])
    [综述]
    垂体瘤转化基因1研究进展(王盛 贺福初 汪海健)
    毕赤酵母工程菌高密度发酵的研究进展(夏姗[1,2] 武福军[2,3] 赵洪亮[2] 薛冲[2] 刘志敏[2])
    产气荚膜梭菌a毒素分子生物学研究进展(张艳平[1] 唐成程[2] 许崇波[3])
    植物转录因子最新研究方法(王传琦 孔稳稳 李晶)
    二氢乳清酸脱氢酶靶向抗疟药研究进展(赵彩亮[1,2,3] 兰晶[2] 贝祝春[2] 杨恒林[1,3])
    甲烷单加氧酶的研究进展(徐宁[1] 辛嘉英[1,2] 王艳[1] 董静[1] 夏春谷[2])
    蛋白质晶体的物理性质及其鉴别方法研究进展(解旭卓 曹慧玲 鹿芹芹 陈瑞卿 郭云珠 周伯儒 尹大川)
    Smart Amp快速检测技术及其应用(戚丽华 张传福 史云 胡晓丰 宋宏彬 刘雪林)
    燕窝生物活性及质量标准研究进展(陈念[1,2] 刘鹏[1] 王羚郦[1] 张威威[1] 赖小平[1])
    《生物技术通讯》封面

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