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  • 中国汉族人群中组胺N-甲基转移酶的遗传药理学研究 免费阅读 收费下载
  • 多药耐药逆转剂与血脑屏障上P-糖蛋白ATPase活性间的相互作用 免费阅读 收费下载
  • 托吡酯对Lewis肺癌转移的抑制作用及其与水孔蛋白1的关系 免费阅读 收费下载
  • 用PCR定点突变方法研究人抗菌肽FALL-39功能与结构的关系 免费阅读 收费下载
  • 目的:构建人抗菌肽FALL-39的原核表达系统,解决抗菌肽获取困难的难题;用:PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体,并比较研究FALL-39及其突变肽的功能:方法:应用RT-PCR从人肺腺上皮细胞株SPC-A-1总RNA中扩增FALL-39成熟肽cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建抗菌肽FALL-39基因大肠杆菌表达载体;采用一步法和两步法PCR体外定点突变技术,用赖氨酸替代第24位的谷氨酰胺和/或第32位的天门冬氨酸,构建FALL-39突变体大肠杆菌表达载体;该载体表达的融合蛋白经亲合层析、凝血酶酶切、胶回收和高效液相色谱分离纯化,获得高度纯化的重组FALL-39以及突变肽;对纯化产物进行的:MEC、MIC、MBC和溶血性实验等比较抗菌作用以及对红细胞膜的溶解性,用RT-PCR测定人单核巨噬细胞株THP-1:iNOS的表达,研究FALL-39及其突变肽的抗内毒作用。结果:重组质粒pGEX-1λT-FALL-39测序结果说明其插入片段序列与GenBank登录的FALL-39基因的cDNA序列相符,且插入方向正确;DNA测序结果表明在预期位点发生突变,用一步法得到突变体质粒pGEX-λT-FALL-39-Lys32,用两步法得到pGEX-1λT-FALL-39-Lvs24以及pGEX-λT-FALL-39-Lys24’32;重组原核表达质粒pGEX-λT-FALL-39及其突变体融合蛋白有高效表达,经提取纯化可得到高纯度的活性蛋白FALL-39,FALL-39-Lys24,FALL-39-Lys32和FALL-39-Lys24’32(约4Kd):突变后的FALL-39蛋白对大肠杆菌ATCC25922和耐氨苄青霉素ML-35p的抗菌活性明显增强,最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)值FALL-39-Lys24’32最小,其次是FALL-39-Lys32和FALL-39-Lys24,均小于FALL-39-FALL-39Lys32和FALL-39两种蛋白均在含:Medium E的LB培养基中表现出较高活性,在LB培养基中抗菌活性最低,但在同一种培养基中FALL-39-Lys32蛋白抗菌活性要高于FALL-39蛋白。突变后FALL-39蛋白在抗菌剂量时对红细胞的溶解作用未见明显增加,较大剂量时对红细胞的溶解作用略有增加。突变后FALL-39-Lys32蛋白对LPS引起的iNOS mRNA的表达量增强抑制作用明显。结论:用FALL-39基因大肠杆菌表达载体可得到高效表达的蛋白;用高保真的Polybest DNA多聚酶进行一步法PCR定点突变技术简单、有效;突变质粒表达分子的抗菌活性和抗内毒素明显增强,对红细胞的溶解作用在抗菌剂量时未见明显增加,较大剂量时略有增加,提示在FALL-39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性。
  • 重组水蛭素对大鼠大脑中动脉血栓形成的抑制作用 免费阅读 收费下载
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  • The quantative pharmacology study of seratrodast、salbutamol and ipratropium bromide on relaxing guinea- pig tracheal strips in vitro 免费阅读 收费下载
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    林志彬理事长在第七届中国药理学会Servier青年药理学工作者奖颁奖会上的讲话(2003年10月23日 青岛)
    细胞凋亡参与去心肌窦弓神经大鼠的心肌损伤(陶霞 张树辉 楚正绪 苏定冯)
    阿尔茨海默病转线粒体DNA细胞模型建立及在药理学研究中的应用(张兰 刘芳 贾建平 李林)
    辣椒素受体介导吴茱萸次碱的降压和心脏保护作用(胡长平 李元建)
    中国汉族人群中组胺N-甲基转移酶的遗传药理学研究(陈国林)
    多药耐药逆转剂与血脑屏障上P-糖蛋白ATPase活性间的相互作用(何玲 刘国卿)
    托吡酯对Lewis肺癌转移的抑制作用及其与水孔蛋白1的关系(马兵 项阳 李涛 于和鸣 李学军)
    用PCR定点突变方法研究人抗菌肽FALL-39功能与结构的关系(杨云霞)
    重组水蛭素对大鼠大脑中动脉血栓形成的抑制作用(任开环 周琴 李卫平 韩国柱)
    降脂片对实验性高脂血症大鼠的调脂作用(张莉 蒋渝 钟代华 蒲小蓉)
    The quantative pharmacology study of seratrodast、salbutamol and ipratropium bromide on relaxing guinea- pig tracheal strips in vitro(WuGanTong LiHuiPin BaiChunXue)
    动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的方法(孙晓芳 王巍 赵德忠 王丹巧)
    Peter Agre教授因发现水通道蛋白获得2003年诺贝尔化学奖(李学军)
    芒果苷对小鼠抗应激作用的实验研究(郑子敏 韦健全 潘勇 许小林 薛强 黄斌学 赖术 黄增琼)
    我院“双语”教学的现状与思索(彭芳)
    药理教学中实施创新教育(罗丹云)
    理论联系实际,搞好药理教学(郭淑芳)
    《中国药理学会通讯》封面
      2003年
    • 04

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