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文献检索:
  • 立体选择性脂肪酶的筛选及其在薄荷醇拆分中的应用 免费阅读 收费下载
  • 采用双平板透明圈方法,筛选得到1株能够选择性水解L-薄荷醇丙酸酯的微生物。通过16sDNA测序,鉴定为产碱假单胞菌Pseudomonas alcaligenes。该菌所产脂肪酶可水解4对薄荷醇丙酸酯,在35℃时绝对转化率达到50%时,表现出较高的对映体过量值(e.e.p〉99%)与非对映体过量值(d.e.p〉90%)。这一结果表明,产碱假单胞菌脂肪酶是具有工业应用前景的生物催化剂。
  • 重组青霉素G酰化酶拆分制备(S)-邻氯苯甘氨酸 免费阅读 收费下载
  • 对产青霉素G酰化酶的重组枯草芽胞杆菌发酵产酶条件进行优化,确定优化后的发酵条件:可溶性淀粉10g/L、蛋白胨12g/L、酵母粉3g/L、NaCl10g,/L;pH7.5、培养温度37℃、装液量80mL(500mL三角瓶)、培养28h,青霉素G酰化酶的表达水平由最初的7.34U/mL提高至18.23U/mL。以表达青霉素G酰化酶的枯草芽胞杆菌发酵液为酶源,在水相中对映选择性催化N-苯乙酰-(R,S)-邻氯苯甘氨酸制备(S)-邻氯苯甘氨酸,当底物浓度为100mol/L时转化4h,转化率达44.2%。对底物浓度为80mmoL/L反应液中的(S)-邻氯苯甘氨酸进行分离,达到理论收率的94.29%(以N-苯乙酰-(R,S)-邻氯苯甘氨酸的0.5倍摩尔量为理论产率),e.e.值大于99.9%。170℃条件下,N-苯乙酰-(R)-邻氯苯甘氨酸与苯乙酸共熔消旋为N-苯乙酰-(R,S)-邻氯苯甘氨酸可用于循环拆分。
  • 酰基供体结构对褶皱念珠茵脂肪酶(CRL)催化芳香仲醇动力学拆分立体选择性的影响 免费阅读 收费下载
  • 研究仲醇的酶催化动力学拆分机制,发现酰基供体的结构是影响酶催化动力学拆分选择性的一个重要因素。通过实验发现了一类用于仲醇动力学拆分(KR)的优秀酰基供体——长链有机酸的对氯苯酚酯,并将这种酰基供体成功用于褶皱念珠菌脂肪酶(CRL)催化的仲醇动力学拆分过程。在1-苯乙醇的动力学拆分(KR)过程中,随着对氯苯酚有机酸酯供体中酰基部分碳原子数的增加,产物的对映体过量值(e.e.p值)也在不断地提高。当碳原子数≥5,转化率达到50%时,产物的叫.。值仍能保持大于99%。这样的规律也适用于其他的仲醇拆分过程,当选择对氯苯酚戊酸酯作为酰基供体用于其他仲醇的动力学拆分过程时,可以实现仲醇的高效拆分,反应6h转化率达到50%,产物的对映体过量值e.e.p为100%。
  • 羰基还原酶不对称还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯 免费阅读 收费下载
  • 选择R-羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶双酶,协同催化(R)-6-氰基5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原制备阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基已酸叔丁酯。转化条件优化结果显示:在不添加外源性辅酶NADP(H)、菌体用量15.0g/L、147.0g/L(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯、128.2g/L葡萄糖,30℃、pH6.5条件下反应6h后,底物转化率达到100%,产物d.e.值大于99.5%。
  • 973项目组织参加国际学术会议IBS2012 免费阅读 免费下载
  • 2012年9月16~21日,“第十五届国际生物技术大会暨展览会(IBS2012)”在韩国大邱市展览会议中心(EXCO)隆重召开。会议由韩国生物工程学会主办,世界各地的同行专家积极参与。“生物制造手性化学品的科学基础”973项目组在杨立荣教授、徐岩教授、许建和教授、李霜教授等的带领下,组织项目成员师生共20余人共同参加了此次会议。
  • 重组固氮菌腈水合酶催化3-(4-氯苯基)戊二腈的选择性水解 免费阅读 收费下载
  • 通过基因数据挖掘方法(genome mining)获得了来源于固氮菌Herbaspirillum seropedicae SmR1中的腈水合酶基因hsn1。构建了hsn1/pETDuet-1/BL21的大肠杆菌共表达重组菌,经IPTG诱导获得了具有良好催化能力的Co^2+依赖型腈水合酶HSN1。利用全细胞反应研究了HSN1的底物谱,发现HSN1对底物3-(4-氯苯基)戊二腈有良好的区域选择性及一定的对映选择性,它可以选择性地水解1个腈基得到3-(4-氯苯基)-4-氰基丁酰胺,该化合物可通过一步化学反应合成巴氯芬。
  • 生物催化法合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯 免费阅读 收费下载
  • 利用E.coli BL21/pCDFDuet-gdh—cr-X共表达全细胞催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基已酸叔丁酯。结果表明:在菌体用量4.85g/L、葡萄糖与底物质量浓度比为1:1、温度28℃、pH7.0条件下,80.0g/L6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯生物还原2h后,底物转化率可达99.0%,产物d.e.值大于99.5%。在考察范围内,NADP^+用量对催化效率无显著作用。
  • 973项目“生物制造手性化学品的科学基础”取得突出进展 免费阅读 免费下载
  • “生物制造手性化学品的科学基础”项目围绕手性生物制造的关键科学问题,在手性识别规律解析、生物催化剂理性设计、反应调控、典型生物制造过程重构等方面取得了较大进展。
  • 一株高产木聚糖酶真菌的筛选及酶学性质分析 免费阅读 收费下载
  • 从近百份土样中,首先筛选得到具有明显半纤维素水解活性透明圈的菌株564株,其中202株的木聚糖酶活力用96孔板筛选方法进行了验证。结果显示:基于96孔深孔板测定的酶活力与初筛测得的透明圈活力趋势一致。最终筛选得到一株高产木聚糖酶的菌株ECU2023,经核糖体rDNA内部转录间隔区的序列对比,鉴定为泡盛曲霉(Aspergillus awamori)。研究获得了其最佳培养条件:pH6.0,培养时间4d,C源为30~40g/L玉米芯粉。经过(NH4)2SO4沉淀和Superdex G-75凝胶过滤层析后,其中主要木聚糖酶成分的最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃。
  • 米曲霉( Aspergillus oryzae )RIB40中烯酮/烯酯还原酶的异源表达及性质分析 免费阅读 收费下载
  • 以米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组DNA为模版,通过PCR扩增其烯酮烯酯还原酶(AspER)基因(asper)后连接到表达载体pET32a(+)上,在大肠杆菌B121(DE3)中以可溶形式表达。通过Ni-NTA亲和色谱层析纯化后,蛋白纯度提高1.9倍,回收率为60.62%。根据分子筛凝胶层析结果推算,AspER以二聚体形式存在。性质分析表明此酶为依赖于NADPH的氧化还原酶,最适pH为7.0~8.0,最适温度为40℃。对2-环己烯酮Km和后。值分别为(2.45±0.36)mmol/L和(4.4±0.4)×10^3s^-1。底物谱分析发现AspER对马来酰亚胺及其衍生物有较高的活性,其中对2-甲基马来酰亚胺的转化率和e.e.值均高于99%。
  • 来自Staphylococcus aureus N315的2-脱氧-D-核糖5-磷酸醛缩酶的工程菌构建、表达纯化与性质鉴定 免费阅读 收费下载
  • 利用基因挖掘在数据库中发现一种来自Staphylococcus aureusN315的潜在DERA(SaDERA),将其基因密码子优化后实现了在大肠杆菌中的表达,重组酶经纯化后研究了其催化性质。结果表明:构建的工程菌具有较高的可溶表达量(占总蛋白的70%),通过简单的一步纯化即可得到电泳纯的酶;SaDERA是一种同源二聚体的酶(5.7×10^4),其最适反应条件是pH7.7和45℃;SaDERA具有良好的碱耐受性,在pH11.0、25℃的条件下温浴24h后仍有93%的残余活力;SaDERA具有良好的乙醛耐受性,在0.3mol/L乙醛浓度、25℃下,30min内保持了70%以上的残余活力:乙醛连续自缩合产物被纯化并鉴定,所得产品为两次缩合产物。
  • 具有差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株筛选和鉴定 免费阅读 收费下载
  • 从土样中分离得到一株具有差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株ZJB-09225,经生理生化特征鉴定和18S rDNA测序后鉴定为卡里比克毕赤酵母(Pichia caribbic ZJB-09225)。研究结果发现,在最适发酵条件下培养32h,生物量为8.8g/L,体积酶活达7.2U/L;P.caribbic ZJB~09225最适作用温度、最适作用pH值分别为35℃和7.5。在最适的催化条件下,P.caribbic ZJB-09225细胞催化50.0g/L(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯3h后,产物6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯得率3.4%,产物d.e.值99.5%以上。
  • 枯草芽胞杆菌乙酰木聚糖酯酶的鉴定及诱导剂对酯酶活力的影响 免费阅读 收费下载
  • 以枯草芽胞杆菌CICC 20034为研究对象,对其分泌的高相对分子质量酯酶进行鉴定,并考察诱导剂对其活力的影响。结果表明:枯草芽胞杆菌CICC 20034可分泌一种相对分子质量为1.07×10^5的酯酶,经蛋白质质谱鉴定为乙酰木聚糖酯酶,单体分相对子质量为3.56×10^4。在发酵培养基中添加乙酸乙酯和木糖可以显著的促进乙酰木聚糖酯酶的活力,而三丁酸甘油酯和大分子诱导剂——木聚糖、玉米芯粉和壳聚糖对酯酶的活力几乎无促进作用。枯草芽胞杆菌CICC 20034以乙酸乙酯为诱导剂时最高比酶活为0.62U/mL,为已知报道的野生细菌乙酰木聚糖酯酶的最高酯酶活力。
  • R-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化 免费阅读 收费下载
  • 通过易错PCR手段将R-2-氯丙酸脱卤酶定向进化,并使用基于Cl^-浓度显色反应的高通量筛选得到有效突变子库,发现突变子DehDIV—G2和DehDIV—E7的酶比活力分别提高25.2%和38.7%。通过SYBYL对酶与底物进行分子对接显示,DehDIV—G2的活化能下降0.9614kJ/mol,DehDIV—E7的活化能下降2.5498kJ/mol。由于酶和底物R-2-氯丙酸的活化能下降,亲和能力提高,从而提高酶的比活力。
  • 《973项目“生物制造手性化学品的科学基础”——“蛋白结构解析”讲座及学术研讨会》简报 免费阅读 免费下载
  • 为了加强与促进“生物制造手性化学品的科学基础”973项目组成员之间的学术交流,973项目组于2012年4月18~19日在江南大学隆重召开“蛋白结构解析”讲座及学术研讨会。
  • 利用结构多样性的对硝基苯酚羧酸酯和脂肪醇乙酸酯评估7个枯草芽胞杆菌酯水解酶的指纹图谱 免费阅读 收费下载
  • 基于GenBank公布的枯草芽胞杆菌168基因组序列,克隆表达了30个预测的酯水解酶基因。结果发现:其中7个酶对对硝基苯酚酯表现出明显的酯水解活力。它们在邮水解酶家族中分属5个不同的亚家族。通过显色底物和pH指示剂进行的高通量筛选,分别绘制了这7个酶的底物指纹谱。考察了酶催化手性酯水解反应的对映选择性,结果表明:对硝基苄基酯酶PnbA和S^-脱乙酰化酶Cah对手性醇的乙酸酯具有较广的底物谱,而PnbA和羧酸酯酶Nap分别对DL-薄荷醇乙酸酯和2-氯-1-苯乙醇乙酸酯/2-萘乙醇乙酸酯有极好的对映选择性(E〉200)。此外,发现酯酶YitV催化2-氯-1-苯乙醇乙酸酯水解的反应遵循反-Kazlauskas规则。
  • 环氧水解酶的结构基础及新酶开发 免费阅读 收费下载
  • 环氧水解酶能应用于外消旋环氧化物的动力学拆分或对映归一性水解制备光学纯的环氧或邻位二醇,具有广阔的应用前景。近年来,多个环氧水解酶晶体结构的报道使人们对它的结构基础有了更深入的理解。随着基因信息的增长,分子生物学和蛋白质工程技术的发展大大简化了大量克隆表达多样性环氧水解酶的过程,降低了环氧水解酶分子改造的难度,为新型具有工业应用潜力的环氧水解酶的开发提供了技术支持。本文综述了环氧水解酶的结构与机制以及近年来环氧水解酶重组表达及分子改造的研究进展。
  • “生物制造手性化学品的科学基础”举办“长三角”博士生论坛专场报告会 免费阅读 免费下载
  • 2012年11月8~10日,“长三角”先进生物制造博士生论坛在南京工业大学举行。本次大会为973计划“生物制造手性化学品的科学基础”项目举办了专场报告会,项目首席科学家杨立荣教授。
  • 不同微生物来源的加氧酶及其催化反应特征的研究进展 免费阅读 收费下载
  • 加氧酶作为一种氧化还原酶,可催化分子氧的氧原子与一大类有机化合物反应,被广泛应用于环保行业、美容保健行业、移植免疫过程、医药中间体的生产、资源开发利用、生态环境的生物修复、病虫害的防治等。本文综述了来源于真菌、细菌以及放线菌的加氧酶的研究进展,包括酶的性质、结构特点、催化机理及催化反应途径、应用等,并对微生物中加氧酶的研究前景进行了展望。
  • 碳酸酐酶的生理功能、多样性及其在CO2捕集中的应用 免费阅读 收费下载
  • 碳酸酐酶(carbonic anhydrase)作为一种活性中心含有锌离子的金属酶,能够可逆催化CO2生成碳酸氢盐的水合反应,该反应在生物体内承担着多样的生理学功能,具有高度的生物学意义。除广泛存在于真核生物以外,该酶在淡水、海水、嗜常温、嗜热、厌氧、好氧、致病、产酸、自养、异养等多种原核微生物中也有广泛的分布,并参与光合作用、呼吸作用和以CO2作为底物的反应,维持生理pH以及离子转运等生理过程。近年来,随着温室效应的日益加剧.生物固定CO2作为该酶的一种全新应用引起了研究者的广泛关注。回顾了碳酸酐酶作为催化剂参与CO2固定过程的历史、现状和最新发现,同时展望了未来应用的趋势。
  • 工业属性普鲁兰酶的开发及其催化性能改善的研究进展 免费阅读 收费下载
  • 摘要:普鲁兰酶是能够水解支链淀粉α-1,6-糖苷键的脱支酶,主要应用于食品加工工业,但目前能够满足工业过程要求的普鲁兰酶仍较为有限。利用现代生物技术的新型普鲁兰酶产生菌种的选育、普鲁兰酶的异源表达、基于蛋白结构特征的酶分子改造为具有工业属性普鲁兰酶的开发提供了新的手段。此外,通过底物修饰和固定化也能在一定程度上改善普鲁兰酶的催化特性与功能。主要综述了普鲁兰酶的发现、表达与改造及性能改善方法等方面的研究进展。
  • 刊首语 免费阅读 免费下载
  • 手性生物制造是以生物、化学、工程及信息等多学科的交叉为手段,以手性医药、农药、材料等产品的高质量合成为目标,以绿色高效和高选择性为特征,以结构生物学、合成生物学、反应工程学及系统工程理论等为技术支撑,为手性化学品的高效清洁生产提供创造性设计思想和新型科学方法。手性化学品合成占据整个化学品制造领域的核心地位;手性生物制造是化学品绿色制造的必然趋势。
  • [研究与开发]
    立体选择性脂肪酶的筛选及其在薄荷醇拆分中的应用(徐刚 李牧 孙苗苗 吴坚平 杨立荣)
    重组青霉素G酰化酶拆分制备(S)-邻氯苯甘氨酸(刘学 薛亚平 柳志强 王亚军 郑裕国)
    酰基供体结构对褶皱念珠茵脂肪酶(CRL)催化芳香仲醇动力学拆分立体选择性的影响(戴晓庭 徐刚 陈永军 吴坚平 杨立荣)
    羰基还原酶不对称还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯(曹政 王亚军 肖黎 柳志强 郑裕国)
    [项目动态]
    973项目组织参加国际学术会议IBS2012(陈少云)
    [研究与开发]
    重组固氮菌腈水合酶催化3-(4-氯苯基)戊二腈的选择性水解(李倩 任杰 冯进辉 吴洽庆 朱敦明)
    生物催化法合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯(肖黎 王亚军 曹政 柳志强 郑裕国)
    [项目动态]
    973项目“生物制造手性化学品的科学基础”取得突出进展(李霜)
    [研究与开发]
    一株高产木聚糖酶真菌的筛选及酶学性质分析(孙婕 郁惠蕾 李春秀 寇振福 许建和)
    米曲霉( Aspergillus oryzae )RIB40中烯酮/烯酯还原酶的异源表达及性质分析(张海灵[1,2] 高秀珍[2] 陈曦[2] 任杰[2] 冯进辉[2] 张同存[1] 吴洽庆[2] 朱敦明[2])
    来自Staphylococcus aureus N315的2-脱氧-D-核糖5-磷酸醛缩酶的工程菌构建、表达纯化与性质鉴定(韩磊 陈曦 冯进辉 吴洽庆 朱敦明)
    具有差向选择性还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯活性的微生物菌株筛选和鉴定(盛骏桢 王亚军 罗希 郑裕国)
    枯草芽胞杆菌乙酰木聚糖酯酶的鉴定及诱导剂对酯酶活力的影响(田倩倩 宋萍 陈晨 林明 江凌 李霜)
    R-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化(秦迎春 刘鹏 杨立荣 徐刚 吴坚平)
    [项目动态]
    《973项目“生物制造手性化学品的科学基础”——“蛋白结构解析”讲座及学术研讨会》简报(孟枭)
    [研究与开发]
    利用结构多样性的对硝基苯酚羧酸酯和脂肪醇乙酸酯评估7个枯草芽胞杆菌酯水解酶的指纹图谱(刘佳言 钱乐 郑高伟 许建和)
    [专论与综述]
    环氧水解酶的结构基础及新酶开发(孔旭东[1,2] 郁惠蕾[1] 周佳海[2] 许建和[1])
    [项目动态]
    “生物制造手性化学品的科学基础”举办“长三角”博士生论坛专场报告会(李霜)
    [专论与综述]
    不同微生物来源的加氧酶及其催化反应特征的研究进展(聂尧 付敏杰 徐岩)
    碳酸酐酶的生理功能、多样性及其在CO2捕集中的应用(李春秀 姜笑辰 邱勇隽 许建和)
    工业属性普鲁兰酶的开发及其催化性能改善的研究进展(聂尧 严伟 徐岩)

    刊首语
    《生物加工过程》封面

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