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文献检索:
  • 非洲猪瘟病毒p54抗原蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测
  • 为研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54抗原蛋白及其相应卵黄抗体的生物学特性,特制备ASFV p54蛋白及相应鸡卵黄抗体。可溶性表达制备高纯度ASFVp54抗原蛋白,并制定合理的免疫程序,免疫产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋。卵黄液经粗提取后二次盐析,制备特异性卵黄抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,在首次免疫后7d后的血清中即可检测出相应抗体,14d后在卵黄中提取到相应抗体,35d后IgY效价达到峰值。经SDS-PAGE检测,制备所得纯度达到90%,得率在8.8g/L以上。Western-blot检测结果显示,纯化的IgY具有高度的特异性。
  • 猪繁殖障碍性疫病常见病毒多重PCR诊断方法的建立及初步应用
  • 根据GenBank登录的猪细小病毒病(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒病2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲分离株LV(PRRSLV)和美洲分离株VR(PRRSVR)等5种病毒基因序列设计合成5对特异性引物。通过优化反应条件,建立了同时检测5种病毒混合感染的多重PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行检测;并将其应用于临床病料检验。结果显示:多重PCR方法中,当PPV、PRV、PCV2、PRRSVR和PRRSLV引物浓度为1.0、0.5、0.5、1.5、1.5μmol/L、退火温度为60℃时,扩增效果最佳,其扩增出特异性目的片段分别为142、331、547、705、1 367bp,最低检测量分别为155、45.2、17.2、14.2、43.6pg,在不同时间对相同样本重复检验6次,结果一致;对临床收集的125份疑似猪病料样品进行多重PCR技术和单一PCR技术进行对比检测,总符合率在97.9%以上,PPV、PRV、PCV2、PRRSLV和PRRSVR的阳性率分别为31.20%、36.8%、34.4%、1.6%和40.8%,混合感染率分别为16.8%、28.8%、23.2%、1.6%和30.4%。结果表明:本试验建立的多重PCR方法具有敏感性高、特异性强、稳定性好,可检测PPV、PRV、PCV2、PRRSVR和PRRSLV的混合感染。
  • 禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的筛选及活性检测
  • 禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus,AEV)VP1蛋白作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交技术对非免疫双峰驼纳米抗体酵母文库进行筛选。随机选择15个用QDO/X/A平板筛选到的纳米抗体(Nanobody or VHH)阳性克隆,经过酵母共转验证、序列测定分析,最终选择在QDO/X/A平板显强阳性且序列正确的8株VHHs在E.coli BL21(DE3)中进行表达、纯化;间接ELISA结果表明,筛选出的8株纳米抗体均与AEV标准抗原具有反应原性,其中2株纳米抗体VHH4、VHH9的活性高于阳性对照。这一结果为AEV的检测与病原研究奠定了一定的基础。
  • 基因Ⅶ型新城疫病毒样颗粒的制备与鉴定
  • 利用Bac-to-Bac昆虫-杆状病毒表达系统分别构建了含有新城疫强毒株M、F、NP和HN等4个结构基因的单顺反子重组杆粒,经转染后,观察Sf9细胞病变以及PCR鉴定结果表明成功构建了4种重组杆状病毒;收集重组杆状病毒采用共感染策略,Sf9细胞上清经超速离心,蔗糖密度梯度纯化与浓缩后,利用Western blotting方法和透射电子显微镜技术检测,结果表明目的蛋白均正确表达且组装成具有完整囊膜形态的病毒粒子。
  • 副猪嗜血杆菌分型血清制备及其四川地区流行病学
  • 从澳大利亚昆士兰州动物研究所购买副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)15个血清型的标准菌株制备免疫原,采用皮下注射与耳缘静脉注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔,免疫结束后采集心血并分离血清,对血清进行特异性与抗体效价检测,结果显示血清特异性良好,抗体效价均达到1∶8以上,用于田间分离株的血清型鉴定有良好效果。本实验室于2014年从四川22个市区80个猪场中共采集498份病料,498份病料中共检出80株HPs。采用琼扩试验对80株HPS进行血清型鉴定,所分离的80株HPs中血清4型占28.75%、5型占35.00%、12型占6.25%、13型占7.50%、15型占1.25%、不能分型的菌株占21.25%,结果表明:血清型4、5、12、13为四川地区主要流行的血清型。
  • 牛源多杀性巴氏杆菌pm0979-ompH融合表达及免疫效果
  • 分析获得pm0979、ompH基因的主要抗原表位,并将2种基因以3种不同长度的疏水性linker进行拼接融合(标记为pm0979-L6-ompH、pm0979-L10-ompH、pm0979-L15-ompH),分别克隆于pet-30a中构建原核表达载体,并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行表达获得融合蛋白。以融合蛋白免疫小鼠后进行牛源多杀性巴氏杆菌(Pm)CQ2株、Pm B型攻毒试验,分别测定小鼠体内抗体产生情况以及对小鼠的交叉保护效果。结果显示:3种融合蛋白在小鼠体内都能诱导较高的抗体水平,但不同长度的linker对小鼠保护性不同,其中融合蛋白rPM0979-L10-OMPH、rPM0979-L15-OMPH对Pm CQ2株攻毒的小鼠保护率达70%,对Pm B型攻毒小鼠保护率为30%。结果表明:重组的pm0979-ompH融合基因疫苗具有良好的交叉免疫保护力;同时,不同长度linker的基因疫苗对小鼠的保护率有一定影响。
  • 利用PCR-DGGE技术分析肉牛阴道菌群结构
  • 利用PCR-DGGE技术明确肉牛阴道菌群结构并比较黄体期和卵泡期肉牛阴道菌群结构差异。选择7头肉牛,分别采集黄体期和卵泡期阴道分泌物,提取细菌总DNA,采用巢式PCR分别对细菌16SrDNA的V3区进行扩增,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)。对DNA指纹图谱特异性条带切胶回收并进行克隆测序,通过BLAST与已知序列对比,鉴定细菌菌种,分析比较黄体期和卵泡期肉牛阴道菌群结构。结果显示:健康肉牛阴道内存在阴道气球菌(Aerococcus vaginalis str.)、绿色气球菌(Aerococcusviridans str.)、睡眠嗜血杆菌(Haemophilussomnus str.)、多动物链球菌(Streptococcus pluranimalium str.)、嗜冷杆菌(Psychrobactermarincolastr.)、大肠杆菌(Escherichia coli O157:H7str.)和鞘氨醇单胞菌(Sphingomonasroseiflavastr.)等。
  • 番鸭肠道乳酸菌的分离鉴定及抑菌性能
  • 通过革兰染色、菌落形态观察、生化分析鉴定、牛津杯抑菌试验、Caco-2细胞黏附试验对分离到的6株乳酸产生菌进行研究。结果显示:经16SrDNA序列测定,比对分析6株乳酸产生菌与鼠李糖乳杆菌、乳酸乳球菌乳亚种、唾液乳杆菌、乳链球菌、哥伦比亚肠球菌和鼠乳杆菌高度同源。6株乳酸菌抑菌试验检测显示:对大肠杆菌、沙门菌、蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑菌效应,以CM3菌株的抑菌效果最强。同时,这6株乳酸菌对Caco-2细胞均有一定的黏附能力。结果表明:6株番鸭肠道乳酸产生菌能够黏附于肠道模型Caco-2细胞上并具有较强的抑菌活性,但其黏附性能及保护机制还有待进一步研究。
  • 加州鲈源维氏气单胞菌的分离、鉴定及致病性
  • 对引起四川省某水库网箱养殖的加州鲈发生以体表出血、皮肤溃疡、肝肾出血和肿大为典型症状的疾病进行病原菌的分离、鉴定和致病性研究。从患病加州鲈病变组织分离纯化得到1株病原菌(LB140811),对其进行了形态特征、理化特性等表型生物学检验和回归试验,并通过16SrDNA和gyrB基因测序与系统发育分析,以及毒力基因act和aerA的PCR扩增进行分离株的分子生物学鉴定,同时开展了病原菌的致病性和药物敏感性研究。根据该病原菌的表型、分子生物学特性和进化关系,判定其为气单胞菌属的维氏气单胞菌,且回归试验证实该菌株LB140811为此次加州鲈发病的病原菌。组织病理学观察发现,该病原菌对加州鲈的多个组织器官都造成了明显的病理损伤,尤其是肝、肾、肌肉的损伤较为严重,表现为明显的变性、坏死以及炎性细胞浸润。药敏试验结果表明,18种抗菌药物中,该病原菌仅对阿奇霉素敏感,对氨苄西林、氧氟沙星等14种药物耐药。
  • 鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因的克隆表达、分子特性与免疫原性分析
  • 利用特异性引物扩增了分离自斑点叉尾鮰的鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因并进行分子克隆,应用生物信息学工具对ompN2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分子特性分析,并进行了目的蛋白的原核表达和免疫原性检测。结果显示:ompN2基因全长1 122bp(GenBank登录号为KP159419),包含1个完整的开放阅读框,编码373个氨基酸,其序列具有极高的保守性,与鮰爱德华菌外膜穿孔蛋白ompC同源性最高,序列一致性为100%,进化树聚为一支;具有1个革兰阴性菌穿孔蛋白(Gram-neg-porins)保守结构域,存在1个信号肽,不含跨膜区,是一种膜外蛋白;具有与蛋白翻译后修饰功能相关的磷酸化位点20个和N-糖基化位点4个;具有9个与免疫相关的抗原决定簇区域,表明可以作为潜在的候选疫苗。此外,SDS-PAGE检测发现,该蛋白主要以包涵体形式表达在沉淀中,Western-bolt结果显示重组蛋白表达成功,且具有较好的免疫原性。以上结果为筛选ompN2作为斑点叉尾鮰抵抗鮰爱德华氏菌感染的疫苗候选基因并进行相应蛋白的表达提供了理论依据,同时为研究ompN2蛋白的生物学功能,了解ompN2基因结构与功能的关系奠定了基础。
  • 牛源犬新孢子虫NcAMA1基因酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定
  • 为筛选牛源犬新孢子虫AMA1与虫体互作的靶蛋白,构建NcAMA1基因酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-AMA1。本试验应用RT-PCR技术从虫体总RNA中扩增了去除跨膜螺旋的AMA1基因,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酵母Y2H,并验证其在酵母细胞中毒性作用和有无自激活现象。结果显示:本试验成功构建了诱饵载体pGBKT7-AMA1,并证明其对酵母细胞无毒性,且对报告基因无自激活。结果表明:诱饵载体pGBKT7-AMA1可用于酵母双杂交系统筛选与虫体互作的宿主蛋白。
  • 西尼罗病毒糖蛋白第三结构域的原核表达及鉴定
  • 根据西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)序列设计1对特异性引物,用PCR反应扩增糖蛋白第三结构域(WNVEDⅢ)基因,将PCR产物克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,获得重组表达质粒,将该质粒转化入E.coli DH5α,命名为pG-EDⅢ,鉴定正确后转入transetta表达菌中,经IPTG诱导后纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot方法证实WNV-EDⅢ基因可在大肠杆菌中高效表达,小鼠免疫试验证明该原核表达蛋白有良好的免疫原性。
  • H10亚型禽流感病毒RT—LAMP可视化检测方法的建立
  • 根据GenBank中H10亚型AIV的HA基因序列,选取特异性序列,设计了6条LAMP引物,用于H10亚型AIV的检测,优化反应条件,建立了H10亚型AIV RT-LAMP可视化检测方法,对该法进行特异性和敏感性验证。结果显示:该法特异性强,只与H10亚型AIV反应,与其他亚型AIV和常见的禽类疾病无交叉反应;灵敏度高,检测下限为100拷贝/μL模板;仪器简单,只需一个可控温的水浴锅在1h内即可完成全部扩增反应;结果可视化,肉眼直接观察结果。结果表明:本试验建立的H10亚型AIV检测方法简便、快速,尤其适合于养殖场和基层工作站的检测,为该病的诊断和防控提供一种有效的方法。
  • 基于重组蛋白TPx的羊肝片吸虫感染Dot—ELISA检测方法的建立
  • 利用大肠杆菌原核表达系统表达的羊肝片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)为诊断抗原,建立羊肝片吸虫感染Dot-ELISA检测方法。结果显示:重组蛋白约为30 000;各组分的最适反应条件为:抗原最适包被量为0.28μg/片,血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶400和30min,酶标二抗最佳工作浓度和工作时间分别为1∶800和45 min,血清和酶标二抗最佳反应温度均为37℃,最适封闭液和封闭条件分别为2%BSA-TBS和37℃2h,最佳显色时间30min。该方法特异性较强、灵敏度高、重复性好。运用该方法对浙江海宁和桐乡共200份羊血清样本进行检测,阳性率为1.5%。结果表明:本试验应用重组蛋白TPx通过PVDF(聚偏氟乙烯微孔)膜固相载体建立了羊肝片吸虫Dot-ELISA检测方法。
  • 奶牛源微小隐孢子虫的分子鉴定及动物感染试验
  • 采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查商丘市某奶牛场牛新鲜粪便样本的隐孢子虫卵囊,用18SrRNA基因对隐孢子虫进行PCR扩增和限制性片段长度多态性分析;基于GP60基因位点对微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定。结果显示:103份样本中有50份为隐孢子虫阳性,42份经形态学鉴定为安氏隐孢子虫,8份形态学未能鉴定到种。经限制性片段长度多态性分析,7个分离株为微小隐孢子虫,1个分离株为牛隐孢子虫;序列比对分析,7个微小隐孢子虫均为人兽共患基因亚型IIdA19G1。接种1头3日龄犊牛1×106个卵囊,潜隐期为3d,显露期为14d,于感染后第7天和第10天出现2个排卵囊高峰期,收集到大量纯卵囊。
  • 实时荧光定量PCR法检测转基因猪外源基因整合拷贝数
  • 以GFP转基因猪为研究对象,以转铁蛋白受体基因为内参基因,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR建立针对外源基因GFP和内参基因的双标准曲线和方程。对转基因猪基因组DNA中外源基因和内参基因的拷贝数同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在转基因猪中的整合拷贝数。同时,利用Southern-blot进行验证分析。结果显示:实时荧光定量PCR法检测2头转基因阳性猪外源基因拷贝数分别为3和2,2头转基因阴性猪外源基因拷贝数均为0,结果同Southern-blot检测一致。结果表明:实时荧光定量PCR法高通量、灵敏、方便,可以更好的用于转基因猪外源基因整合拷贝数的检测。
  • 猪干扰素调节因子1在细胞抗病毒天然免疫应答中的作用
  • 从猪肺泡巨噬细胞中克隆了猪干扰素调节因子1(interferon regulatory factors 1,IRF1)基因,并构建了真核表达载体pCAGGS-HA-IRF1。将该质粒转染PK-15后通过Western-blot确定IRF1蛋白在细胞内能够高效表达。通过体外抗病毒试验发现,过表达IRF-1能够显著抑制H1N1流感病毒和猪水泡性口炎病毒的复制。进一步通过双荧光报告系统发现,IRF1显著促进polyI:C诱导的猪IFN-β、ISRE和NF-κB启动子的活性,说明IRF1可能通过增强细胞的天然免疫应答进而发挥抗病毒功能。
  • 牛PPARγ基因对脂肪细胞增殖分化的影响
  • 取郏县红牛第6和第7肋骨间肌间脂肪组织为试验材料,分离并培养原代前体脂肪细胞。在诱导分化牛前体脂肪细胞过程中,添加终浓度为1μmol/L的吡格列酮对脂肪细胞进行药物干预,上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferations actirated receptorγ,PPARγ)基因的表达后,通过MTT检测牛前体脂肪的增殖;油红O提取比色法检测牛前体脂肪细胞分化过程中脂滴的分泌;利用real-time PCR技术检测PPARγ基因表达上调后其他参与脂肪分化相关基因的表达情况。结果显示:吡格列酮药物干预后,PPARγ基因表达明显上调(P〈0.01);PPARγ基因的表达上调后,牛脂肪细胞的增殖能力下降,分化能力增强;脂肪分化相关基因C/EBPA、SREBP11、FABPA、PLIN1、LPL和IGFBP2的表达量明显上调(P〈0.05),GATA2和FAS基因的表达量没有发生明显变化。结果表明:PPARγ基因的表达可显著影响脂肪细胞的增殖与分化,可能与肉牛脂肪沉积有一定的关系。
  • 牛磺鹅去氧胆酸对TGR5介导的NR8383细胞TNF-α的影响
  • 采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative,qPCR)法检测牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对TGR5介导的NR8383细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因水平的影响,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)检测NR8383细胞中TNF-ɑ蛋白活性的变化情况。结果显示:高表达TGR5的NR8383细胞中TNF-α的mRNA表达量和蛋白活性均显著低于正常细胞组;另外,TCDCA能极显著降低LPS诱导的TNF-α基因表达量和蛋白活性(P〈0.01)。结果表明:TCDCA通过TGR5受体调控LPS对TNF-α基因表达及蛋白活性的诱导作用。
  • 牛PSMA5基因RNA干扰载体的构建与筛选及在奶牛乳腺上皮细胞中的表达
  • 设计4条待选的shRNA序列以及1条阴性对照序列,构建RNA干扰载体,然后转染到奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中,最后利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测蛋白酶体α5亚基(PSMA5)在奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中mRNA和蛋白水平的表达。结果显示:转染shRNA-1组,shRNA-3组和shRNA-4组的PSMA5基因相对表达量显著低于阴性对照组(P〈0.05),且shRNA-4组的PSMA5基因相对表达量最低。结果表明:本试验成功构建并筛选出了PSMA5基因RNA干扰载体,并在奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)中成功表达。
  • 藏绵羊IGHA基因的PCR-SSCP检测及其与胃肠道线虫FEC的关系
  • 利用PCR-SSCP技术分析了352只藏绵羊免疫球蛋白Aα重链恒定区基因(immunoglobulin constant heavyα-chain gene,IGHA)DNA片段的多态性。结果显示:藏绵羊IGHA基因存在多态性,共有6种基因型(分别命名为AA、BB、CC、AB、AC和BC),由3个等位基因控制(分别命名为A、B、C),克隆测序表明它们主要表现在长度(A长度为321bp,B、C长度都为315bp)和多个单核苷酸差异上;藏绵羊以基因型BC为主(基因型频率为0.534);不同基因型与5种可辨析的胃肠道线虫粪便虫卵计数(faecal egg counts,FEC)关联分析表明,CC基因型蔵绵羊对于类圆线虫(Strongyloides sp.)和夏伯特线虫(Chabertia sp.)具有相对较低的每克粪便中的虫卵数(eggs per gram,EPG)(P〈0.05),说明CC基因型具有较高的抗这2种线虫感染的能力,为优势基因型,可以初步将之作为藏绵羊分子标记辅助育种的标记之一。
  • 雷公藤对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良肉鸡肝功能的影响
  • 120只1日龄AA肉鸡随机分为对照组、福美双组(50mg/kg福美双)、雷公藤治疗组(2mg/kg),每组4个重复,每个重复10只,试验进行14d。结果显示:饲料中添加福美双显著升高了血清AST、ALT、ALP活性和肝脏MDA水平(P〈0.05),显著降低了SOD、GSH-Px水平(P〈0.05),而治疗组翅静脉注射雷公藤显著降低了AST、ALT、ALP和肝脏MDA水平(P〈0.05),显著升高了SOD、GSH-Px水平(P〈0.05)。结果表明,雷公藤可以有效的降低福美双对肉鸡肝脏的抗氧化状态改变和减少肉鸡的肝脏功能损害,为肉鸡胫骨软骨发育不良的治疗提供了新的方法。
  • 不同剂量铝对小鼠F9畸胎瘤细胞周期、凋亡和DNA-蛋白质交联的影响
  • 本试验旨在研究不同剂量铝对小鼠F9畸胎瘤细胞周期、凋亡和DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslinks,DPC)的影响。不同水平的氯化铝(0、50、100、200μmol/L,Ⅰ~Ⅳ组)作用F9细胞24h后,采用MTT法观察细胞的增殖毒性,流式细胞术和荧光染色法分别研究细胞周期和凋亡的变化,荧光比色法研究DPC含量的变化。结果显示:与Ⅰ组相比,各剂量组细胞的增殖活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性呈不同水平的降低,S期细胞数量的百分比、细胞凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)释放水平和丙二醛(MDA)含量不同程度的升高,存在剂量-效应相关。结果表明:过量的铝能够打破F9细胞氧化抗氧化的平衡,对细胞DNA产生损伤。
  • CIRP对冷应激小鼠血清生化指标、相关细胞免疫因子及能量代谢的影响
  • 将45只6周龄体质量(18±2)g SPF级雄性SD小鼠随机分为5组(n=5),常温对照组5只(A组);低温对照组冷刺激4、8h各5只(B组);冷诱导RNA结合蛋白(cold-inducible RNA binding protein,CIRP)过表达组冷刺激4、8h各5只(C组),注射CIRP过表达慢病毒液0.1mL;CIRP干扰组冷刺激4、8h各5只(D组),注射CIRP干扰病毒液0.1mL;阴性对照组冷刺激4、8h各5只(E组),注射空载体病毒液0.1mL。A组置于常温(21±0.1)℃条件下饲养,后4组置于低温(4±0.1)℃环境饲养,分别在4h及8h后通过摘除眼球的方法采取血液。采用ELISA法检测血清中IL-1、IL-2、IL-6、GSH-PX、SOD、T-AOC、MDA、丙酮酸、PFK-1、LDH的含量。结果显示:(1)冷应激处理后,小鼠血清中相关细胞因子水平出现明显变化,人为的致使CIRP在小鼠体内出现不同的表达对血清中相关细胞因子的影响差异显著(P〈0.05);(2)冷应激处理后,小鼠血清中氧化还原指标GSH-PX、SOD、T-AOC、MDA变化非常明显,人为的致使CIRP在小鼠体内出现不同的表达对血清中相关氧化还原指标的影响差异极显著(P〈0.01);(3)冷应激处理后,血清当中能量代谢相关指标无明显变化,人为的致使CIRP在小鼠体内出现不同的表达对血清中相关能量代谢指标的影响差异不显著(P〉0.05)。结果表明:在不影响动物机体能量代谢的情况下,CIRP可以有效地抑制细胞内氧自由基的生成,从而提高小鼠抗氧化能力,以及调节动物机体的相关免疫因子,对小鼠抵抗低温应激起到积极地保护作用。
  • 桔梗乙酸乙酯提取段对酒石酸泰乐菌素在小鼠血浆和肺组织中药动学的影响
  • 采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同时间点小鼠血浆和肺组织中酒石酸泰乐菌素的浓度,运用PKsolver程序及SPSS13.0统计软件处理和分析数据,计算相关药代动力学参数。结果显示:与对照组相比,乙酸乙酯组半衰期(t1/2)变短,Cmax增大、,药时曲线下面积(AUC)增加、Tmax与平均滞留时间(MRT0-inf_obs)缩短,而表观分布容积(Vz/F_obs)与消除率(Cl/F_obs)变小;肺组织分布图显示药物浓度高于对照组。结果表明:桔梗乙酸乙酯提取活性段对酒石酸泰乐菌素在小鼠体内的药动学特征有较大影响,表现为加快了酒石酸泰乐菌素的吸收速度,并增加了吸收程度;但药物在体内分布变窄,却增加了其在肺中的药物浓度。
  • 牛磺胆酸对NR8383细胞ERK活性的影响
  • 在采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)法确定牛磺胆酸(taurocholic acid,TCA)、脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)和PKC抑制剂(G6983)对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)mRNA水平影响的基础上,采用Western-blot法测定TCA对LPS介导的NR8383细胞pERK、ERK蛋白水平相对表达量的影响。结果显示:TCA可显著降低LPS介导的pERK、ERK含量(P〈0.05),G6983可显著减低pERK、ERK的表达量,G6983也可降低LPS对ERK的活化作用。TCA通过影响PKC通路,而降低LPS介导的NR8383细胞pERK、ERK含量。
  • 生命早期铅暴露对小鼠海马内IGF1表达的影响
  • 雌性小鼠自妊娠第1天开始经饮水染铅(0.1%、0.5%、1%浓度溶解在去离子水中,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21d断乳为止。在出生后的第21天,分别采用石墨炉原子吸收光谱法测定血铅和海马组织中铅的水平,免疫组织化学和免疫印迹法检测海马组织中胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)的表达。结果显示:与对照组相比,铅暴露组血铅水平和海马组织中铅的水平显著增高(P〈0.05);铅暴露组IGF1的表达比对照组明显下降(P〈0.05)。结果表明:母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,使仔鼠海马组织中IGF1蛋白的表达下调,从而造成海马神经元损伤,引起神经毒性。
  • 联苯双酯对犬急性肝损伤的保护作用
  • 18只健康杂交犬随机平均分为3组(n=6):急性肝损伤对照组(简称对照组)、联苯双脂试验组(简称DDB组)和黄芪多糖试验组(简称黄芪组)。使用50%四氯化碳溶液(CCl4)造成犬急性肝损伤,对照组给予赋形剂(50mg/kg),DDB组给予DDB滴丸(50mg/kg),黄芪组给予黄芪多糖液(1mL/kg),每天1次,给药共7d。测定血清转氨酶和抗氧化能力指标,观察肝脏形态病理学改变。结果显示:DDB组犬血清转氨酶变化明显小于其他组;抗氧化指标变化明显好于对照组;肝组织切片中,肝细胞脂肪变性、炎细胞浸润均较对照组明显减轻,且肝组织中无明显纤维增生。结果表明:联苯双脂对CCl4造成的犬急性肝损伤有保护作用。
  • 中药复方汤剂对犬草酸钙尿结晶形成的影响
  • 12只雄性中华田园犬随机分为对照组、模型组和治疗组。对照组饲喂基础日粮,模型组和治疗组在饲喂基础日粮的基础上,饮食中添加乙二醇、氯化铵、碳酸钙和维生素D。待试验犬尿液中出现大量草酸钙结晶后,对治疗组犬只灌服中药复方汤剂。试验过程中检测试验犬血液生化指标(包括血清中钙、镁、磷含量)和尿液指标(包括尿液晶体数量变化、尿比重、尿蛋白和尿液pH值)。结果显示:试验开始21d后,模型组与治疗组尿沉渣中出现大量草酸钙结晶;经药物治疗后,治疗组尿沉渣晶体数量比模型组逐渐减少;与模型组相比,治疗组能降低血清中钙、磷含量,降低尿液比重,增加尿液pH值。结果表明:对试验犬连续灌服该中药复方汤剂,可以降低尿液饱和度、减少尿液晶体的形成,从而不同程度的抑制犬尿结石的形成。
  • 猪皮炎肾病综合征的病理学观察
  • 对临床表现为猪皮炎肾病综合征的患病猪进行了剖检病变的观察,采用常规石蜡切片法对患病猪的病理组织学变化进行了研究,同时采用PCR方法对PCV2进行了检测。结果显示:剖检病理变化主要变现为皮肤散在分布不规则的圆形暗红色病灶,病灶中央凹陷,黄色结痂;肾表面可见大小不等的灰白色病灶;肺间质明显增宽、水肿,肺组织呈灰红色斑驳状或呈现为虾肉样变。组织病理学变化表现为肾脏呈现肾小球肾炎,真皮及皮下血管表现为坏死性脉管炎,淋巴组织中淋巴滤泡数量减少,淋巴细胞缺失、巨噬细胞浸润,以及典型的间质性肺炎。PCR检测结果为PCV2阳性。结果表明:该猪场发生了PCV2感染并引起了典型的猪皮炎肾病综合征病理变化。
  • 细胞松弛素B对猪孤雌囊胚DNA甲基化和组蛋白乙酰化的影响
  • 以猪电激活孤雌胚胎为研究对象,通过添加细胞松弛素B(CB)对胚胎发育过程中DNA甲基化和组蛋白乙酰化的变化进行了研究。利用荧光定量PCR检测了囊胚中DNA甲基转移酶(Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b)、组蛋白乙酰转移酶(Hat1)、组蛋白去乙酰化酶(Hdac1)以及凋亡相关基因(Bax,Casp3)mRNA水平的表达,并通过免疫荧光染色检测了囊胚中5hmc/5mc,AcH3K9,H3K9me3的表达水平。结果显示:5mg/L CB处理4h能够显著提高猪孤雌囊胚的卵裂率和囊胚率(P〈0.05),减少囊胚细胞凋亡数量;DNA甲基转移酶(Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b)、组蛋白乙酰转移酶(Hat1)、组蛋白去乙酰化酶(Hdac1)以及凋亡相关基因(Bax,Casp3)mRNA水平均明显下降;AcH3K9的表达无明显变化;而5hmc/5mc和H3K9me3的表达明显升高。该结果为进一步研究猪胚胎发育过程中的表观遗传变化提供了试验依据。
  • 塞北兔群体遗传变异的微卫星标记
  • 检测了125只塞北兔在6个微卫星座位的基因型,分析了等位基因数、基因频率、杂合度和多态信息含量等参数值,并对塞北兔在6个微卫星座位Hardy-Weinberg平衡检验。结果显示:塞北兔在6个微卫星座位共检测到的等位基因30个,每个基因座位为4~6个,等位基因大小在129~244bp之间,塞北兔除了在SOL03基因座位呈中度多态性变异以外,在SOL33、SOL44、7L1B10、L7C11和SAT12等5个微卫星座位呈高度多态性变异;除了在基因座位SOL33和SAT12以外,塞北兔在其他4个基因座位SOL03、SOL44、7L1B10、L7C11均处于Hardy-Weinberg平衡状态。
  • 大通牦牛骨骼肌低氧适应的组织学特点
  • 选取2个海拔高度(3200、3700m)大通牦牛作为研究对象,以乐都地区(3200m)牦牛为对照,利用光镜和计算机图像分析系统测定骨骼肌肌纤维直径、表面积密度;通过透射电镜比较骨骼肌线粒体的面数密度、体积质量、平均体积等结构参数。利用免疫组织化学技术测定骨骼肌组织血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowth{actor,VEGF)和微血管密度(Microvesseldensity,MVD)。结果显示:(1)2个海拔高度的大通牦牛骨骼肌肌纤维直径均细于乐都牦牛骨骼肌肌纤维直径,差异显著(P〈O.05),肌纤维表面积密度,大通牦牛均大于乐都牦牛,差异显著(P〈O.05);(2)2个海拔高度的大通牦牛VEGF和MVD均高于乐都牦牛的VEGF和MVD,差异显著(P〈0.05);(3)海拔3700m的大通牦牛骨骼肌线粒体平均体积、体积质量和面数密度均大于海拔3200rrl的大通牦牛和乐都牦牛的平均体积、体积质量和面数密度,差异显著(P〈O.05)。结果表明:大通牦牛骨骼肌组织有良好的组织遗传学特性,表现出其育种父本的特征及对高原低氧环境的良好适应性,主要表现为肌纤维直径细、表面积密度大、骨骼肌组织VEGF表达量大和MVD大的特点。而骨骼肌线粒体的超微结构,更多的受环境因素的影响,主要表现为高海拔大通牦牛通过增加骨骼肌线粒体平均截面积、平均体积、体积密度和面数密度来提高其在低氧环境中对氧的利用。
  • Hmgn3和Hoxa10对小鼠子宫基质细胞蜕膜化过程中Foxo1表达的调控
  • 利用小鼠子宫基质细胞体外诱导蜕膜化模型转染Hmgn3或Hoxal0过表达载体及siRNA片段,通过荧光定量PCR方法检测Hmgn3和Hoxal0对Foxol表达的调控。结果显示:转染Hmgn3或Hoxal0过表达载体可促进Foxol在子宫基质细胞蜕膜化过程中的表达,而转染Hmgn3或Hoxal0siRNA则可抑帝jFoxol的表达。在小鼠子宫基质细胞中转染Hmgn3或Hoxal0siRNA后再添加孕酮,Foxol的表达显著下降。同样,干扰Hmgn3或Hoxal0也可减低cAMP对Foxol表达的调控。结果表明:Hmgn3和Hoxal0可通过Foxol来影响小鼠子宫基质细胞的蜕膜化,孕酮和cAMP可通过Hmgn3和Hoxa10来调控Foxol在子宫基质细胞中的表达。
  • [预防兽医学]
    非洲猪瘟病毒p54抗原蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测(高又文;刘建利;张彩虹;吕建强;樊惠英)
    猪繁殖障碍性疫病常见病毒多重PCR诊断方法的建立及初步应用(关男;卢赫;费东亮;王书全)
    禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的筛选及活性检测(范文涛;杜恩岐;高小龙;萧飒;李志军;范莉莉;郝华芳;王兴龙;党如意;张淑霞;杨增岐)
    基因Ⅶ型新城疫病毒样颗粒的制备与鉴定(袁乾亮;钱晶;薛聪;穆昱;丁壮)
    副猪嗜血杆菌分型血清制备及其四川地区流行病学(代军;刘君;黄倩;柳瑶;周鹏;黄毅;谭晓婷;文心田[1,2];文翼平[1,2];曹三杰[1,2];黄小波[1,2];伍锐[1,2])
    牛源多杀性巴氏杆菌pm0979-ompH融合表达及免疫效果(马建伟;杜慧慧;吉佳乐;李春明;冯思源;彭远义)
    利用PCR-DGGE技术分析肉牛阴道菌群结构(刘畅;王军;杨雨江;吕文)
    番鸭肠道乳酸菌的分离鉴定及抑菌性能(谢璐娜;白丁平;谢正露[1,2];黄小红;黄一帆)
    加州鲈源维氏气单胞菌的分离、鉴定及致病性(龙波;王均;贺扬;赵敏;王二龙;崔静雯;邓绿洲;刘韬;曾宇鲲;汪开毓[1,2];陈德芳[1,2])
    鮰爱德华菌外膜蛋白ompN2基因的克隆表达、分子特性与免疫原性分析(王二龙;王兴丽;杨帆;秦振阳;汪开毓[1,2];陈德芳;耿毅[1,2])
    牛源犬新孢子虫NcAMA1基因酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定(李积旭;张守发;李男礼;贾立军)
    [人兽共患病]
    西尼罗病毒糖蛋白第三结构域的原核表达及鉴定(曹增国;李岭[1,2];王化磊;金宏丽;郑学星;冯娜;李倩;赵国星[1,2];闫飞虎;赵永坤;王铁成;高玉伟;杨松涛;夏成柱)
    H10亚型禽流感病毒RT—LAMP可视化检测方法的建立(罗思思;谢芝勋;刘加波;耀珊;显文;谢志勤;谢丽基;范晴)
    基于重组蛋白TPx的羊肝片吸虫感染Dot—ELISA检测方法的建立(李闵薇;陈学秋;杨怡;杜爱芳)
    奶牛源微小隐孢子虫的分子鉴定及动物感染试验(齐萌;黄建营;王臣荣;余复昌;李俊强;张龙现)
    [基础兽医学]
    实时荧光定量PCR法检测转基因猪外源基因整合拷贝数(房国锋[1,2];王守栋[1,2];曾勇庆[1,2];陈伟[1,2];王延东[1,2];李川皓[1,2])
    猪干扰素调节因子1在细胞抗病毒天然免疫应答中的作用(李永涛;常洪涛;赵永祥;赵军;陈陆;王新卫;杨霞;刘红英;王川庆)
    牛PPARγ基因对脂肪细胞增殖分化的影响(陈晓佩;于文浩;蒋金航;王亚丹;刘远哲;张宁;王新庄)
    牛磺鹅去氧胆酸对TGR5介导的NR8383细胞TNF-α的影响(王旭[1,2];张子英[1,2,3];李培锋[1,2])
    牛PSMA5基因RNA干扰载体的构建与筛选及在奶牛乳腺上皮细胞中的表达(迟玉杨;张晶;徐子娴;高安崇;王秀娜;周长海;牛淑玲;金永成;沈景林)
    藏绵羊IGHA基因的PCR-SSCP检测及其与胃肠道线虫FEC的关系(徐业芬;索朗斯珠;杨相前;吴超;周杰;索朗曲扎;牛家强)
    雷公藤对福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良肉鸡肝功能的影响(李坤;刘晶英;王智;韩照清;李家奎)
    不同剂量铝对小鼠F9畸胎瘤细胞周期、凋亡和DNA-蛋白质交联的影响(彭巍;张君;徐尚荣)
    CIRP对冷应激小鼠血清生化指标、相关细胞免疫因子及能量代谢的影响(李静辉;张雪;孟宇;李昌盛;计红;杨焕民;李士泽[1,2])
    桔梗乙酸乙酯提取段对酒石酸泰乐菌素在小鼠血浆和肺组织中药动学的影响(陈雯;李英伦;叶刚;施飞;靳茹文)
    牛磺胆酸对NR8383细胞ERK活性的影响(张子英[1,2,3];王旭[1,2];关红[1,2];王旭东[1,2];周蕾[1,2];李培锋[1,2];王彩云[1,2])
    生命早期铅暴露对小鼠海马内IGF1表达的影响(李宁;乔明武;吕丰收;张平安;赵秋艳;宋莲军;李浩哲)
    [临床兽医学]
    联苯双酯对犬急性肝损伤的保护作用(姜斌;任逸懿;吴文达;张海彬)
    中药复方汤剂对犬草酸钙尿结晶形成的影响(何钉玲;胡芳芳;苏永康;潘欢;李英;潘家强)
    猪皮炎肾病综合征的病理学观察(王小波;周金柱;俞天奇;吴力力;高崧)
    [动物科学]
    细胞松弛素B对猪孤雌囊胚DNA甲基化和组蛋白乙酰化的影响(侯螨逍;王雨田;唐博;张学明;李子义[1,2])
    塞北兔群体遗传变异的微卫星标记(杨国忠;刘芳;杨翠军;郝荣超;葛剑;章月萍)
    大通牦牛骨骼肌低氧适应的组织学特点(张勤文;李莉;俞红贤;荆海霞;魏青;牛亮;王志强;张晶晶)
    Hmgn3和Hoxa10对小鼠子宫基质细胞蜕膜化过程中Foxo1表达的调控(郭传辉;李当当;于海帆;成文革;杨占清;郭斌;岳占碰)
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