悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达 免费阅读 下载全文 目的将贴壁状态的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞（CHO-S）,并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性。方法将贴壁状态的CHO-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞。根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原（PSMA）单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆入真核表达载体pc DNA3.1中,所得载体命名为pc DNA3.1-HC和pc DNA3.1-LC。将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用Free Style MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7 d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性。结果成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞。结论成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具。
缬沙坦抑制高糖刺激下系膜细胞血管紧张素Ⅱ-Notch通路 免费阅读 下载全文 目的探讨血管紧张素Ⅱ-Notch通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（RMC）基质分泌的影响以及缬沙坦的保护作用。方法将传代培养的RMC同步化后分为正常糖对照组（含5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（含30.0 mmol/L葡萄糖）、高渗对照组（含5.5 mmol/L葡萄糖联合24.5 mmol/L甘露醇）、正常糖联合1μmol/L N-N-（3,5-氟苯乙酰基）-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）组、正常糖联合（1、5、10）μmol/L缬沙坦组、高糖联合1μmol/L DAPT组、高糖联合（1、5、10）μmol/L缬沙坦组。培养12、24、48 h后,收集细胞及上清液,Western blot法检测Notch1蛋白表达情况,ELISA检测上清液转化生长因子β（TGF-β）、纤维连接蛋白（FN）的水平。结果与正常糖组相比,高糖刺激RMC 12 h,可检测到Notch1表达升高,峰值出现在24 h;与正常糖组相比,高糖状态下RMC上清液中TGF-β、FN含量随时间明显升高;高糖状态下缬沙坦或DAPT预处理组与未处理组相比,培养24 h左右,Notch1表达明显减少;与未处理组相比,随缬沙坦浓度增加,Notch1表达逐渐降低。高糖状态下,与未处理组相比,缬沙坦或DAPT预处理组TGF-β、FN水平均明显下降。结论高糖可活化培养的RMC中Notch通路,TGF-β以及FN分泌增加;缬沙坦可通过浓度依赖性的方式抑制血管紧张素Ⅱ-Notch通路,减少下游FN的分泌。
β葡聚糖促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟并增强其迁移能力 免费阅读 下载全文 目的研究β葡聚糖对体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞（BMDC）成熟及迁移能力的影响。方法β葡聚糖体外处理小鼠BMDC,应用流式细胞术检测BMDC表面分子的表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测对照组和β葡聚糖组BMDC中CC趋化因子受体1（CCR1）、CCR2、CCR5、CCR7 mRNA的表达;ELISA检测BMDC上清中白细胞介素6（IL-6）、IL-12p40、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-10的水平;TranswellTM迁移实验检测BMDC对CC趋化因子配体19（CCL19）和CCL21的趋化反应性;体内迁移实验检测从皮下迁移至引流淋巴结的DC数目。结果与对照组相比,β葡聚糖能上调BMDC表面分子MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD80、CD40的表达,同时促进BMDC分泌IL-6、TNF-α和IL-12p40,CCR7 mRNA水平增加,增强BMDC对CCL19/CCL21的趋化反应性,并且显著增加从皮下注射部位迁移至引流淋巴结中BMDC数目。结论β葡聚糖不仅能促进BMDC分化成熟,还能增强其体内外迁移能力。
香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4~＋T细胞分化为CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋调节性T细胞 免费阅读 下载全文 目的探讨香烟烟雾提取物（CSE）暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞（BMDC）诱导CD4~＋T细胞分化为CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋调节性T细胞（Treg）的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rm GM-CSF）和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4（rm IL-4）联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞（DC）,流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4~＋T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4~＋T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10（IL-10）、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4~＋T淋巴细胞共培养可以促进CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4~＋T细胞共培养后分化的CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4~＋T细胞分化为CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋Treg。
外周血内皮祖细胞可增强骨髓间充质干细胞SDF-1和MCP-1的分泌并促进其归巢 免费阅读 下载全文 目的本研究旨在探讨兔外周血内皮祖细胞（PB-EPC）对骨髓间充质干细胞（BMSC）体内归巢的影响及其作用机制。方法应用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）慢病毒表达载体感染BMSC,构建生物骨移植修复兔桡骨缺损模型,实验组采用BMSC和PB-EPC（1∶1）联合培养细胞生物骨;对照组采用BMSC生物骨;空白组仅制作骨缺损不进行任何修复处理。三组均在2、4、8周,实时定量PCR检测骨缺损组织基质细胞衍生因子1（SDF-1）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA的表达,ELISA检测血清SDF-1、MCP-1的蛋白水平;免疫组织化学染色检测骨缺损部位2、4、8周EGFP染色阳性率。结果在2、4、8周,实验组SDF-1、MCP-1的表达高于对照组和空白组;4周后实验组骨缺损部位EGFP表达阳性率高于对照组和空白组。结论PB-EPC可促进骨缺损部位BMSC SDF-1、MCP-1的表达且骨缺损部位EGFP表达阳性率增高。
重组人平足蛋白基因在中国仓鼠卵巢细胞的稳定表达 免费阅读 下载全文 目的构建平足蛋白（PDPN）真核表达质粒PDPN-pEGFP-N1,建立稳定高表达重组人PDPN的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株并对其进行生物学活性研究。方法通过反转录PCR和DNA重组技术从HEK293细胞中克隆PDPN cDNA,插入带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的真核表达载体pEGFP-N1中。通过PCR、酶切及测序等方法鉴定重组载体;进而将该重组载体转染至CHO细胞中,通过荧光显微镜检测EGFP的表达,Western blot法检测PDPN在CHO细胞中的表达,流式细胞术分选高表达PDPN的CHO细胞,运用血小板聚集实验检测分选后细胞株的生物学活性。结果 DNA测序和酶切鉴定证明PDPN基因正确克隆至pEGFP-N1载体中,重组载体稳定转染CHO细胞后,在荧光显微镜下观察到绿色荧光,流式细胞术分选后的细胞高表达PDPN;Western blot结果显示转染后CHO细胞膜表面表达PDPN蛋白;过表达PDPN的CHO细胞可以诱导人血小板聚集。结论成功构建了稳定高表达PDPN蛋白的CHO细胞株,该细胞株可表达PDPN,并诱导血小板聚集。
隐丹参酮下调U2OS骨肉瘤细胞血管内皮生长因子表达并抑制血管生成 免费阅读 下载全文 目的探究隐丹参酮（CTS）对U2OS骨肉瘤细胞株血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用以及对血管生成的影响。方法体外培养的U2OS骨肉瘤细胞分为CTS处理组和对照组,处理组给予（20、40、80、160）μmol/L CTS,对照组给予等体积培养液。实时荧光定量PCR检测U2OS细胞VEGF mRNA的变化,Western blot法和免疫荧光细胞化学染色技术检测VEGF蛋白表达,CCK-8法检测CTS对细胞生长的影响,体外成管实验观察血管形成情况。结果 CTS可明显抑制U2OS细胞内VEGF mRNA和蛋白的表达,且该抑制效应具有剂量依赖性。CCK-8法实验结果显示CTS能抑制U2OS细胞的生长。体外成管实验结果证明CTS对新生血管的形成有抑制作用。结论 CTS可下调U2OS骨肉瘤细胞VEGF的水平,并能抑制血管的生成。
角蛋白18磷酸化增加结肠癌HCT116细胞自噬并提高其对奥沙利铂的敏感性 免费阅读 下载全文 目的研究奥沙利铂（OXA）作用下角蛋白18（K18）磷酸化与结肠癌HCT116细胞自噬和凋亡的关系并分析其可能机制。方法 HCT116细胞分别转染空载质粒、野生型K18和33、52磷酸化位点突变的K18质粒（Ser33/52A）,用60μmol/L的OXA处理细胞,加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）或细胞自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞。异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶（annexinⅤ-FITC/PI）双标记结合流式细胞术以及钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶（calcein-AM/PI）染色法分析K18及其突变体对细胞凋亡的影响;Western blot法检测K18的磷酸化水平、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、beclin-1的表达。结果 Ser33/52A质粒的转染可以明显降低K18的磷酸化水平,经过OXA处理后,转染K18质粒组的HCT116细胞的凋亡率显著高于空载质粒转染对照组,而Ser33/52A质粒转染的HCT116细胞的凋亡率明显低于空载体和K18质粒转染的细胞凋亡率,K18质粒转染组细胞自噬明显高于空载转染对照组,而Ser33/52A质粒转染组自噬水平明显降低。结论 K18过表达促进HCT116细胞自噬及其对OXA的敏感性,而K18 Ser33和Ser52磷酸化水平的降低则抑制自噬并降低HCT116细胞的凋亡率。
脂肪干细胞移植抑制脑缺血大鼠梗死灶周围组织Nogo-A的表达 免费阅读 下载全文 目的探讨脂肪干细胞（ADSC）对脑缺血大鼠梗死灶周围组织轴索生长抑制因子A（Nogo-A）表达的影响。方法分离培养大鼠ADSC,线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型。大鼠分为假手术组、模型组和ADSC组。ADSC组于造模成功1 d后侧脑室注射ADSC悬液,模型组注射PBS。各组分别于术后4 d、7 d和14 d分批处死,采用反转录PCR检测梗死灶周围组织Nogo-A mRNA水平、免疫组织化学染色法和Western blot法检测梗死灶周围组织Nogo-A蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组和ADSC组各个时间点梗死灶周围组织Nogo-A表达水平明显增加;ADSC组各个时间点梗死灶周围组织Nogo-A表达水平较模型组明显降低。结论 ADSC移植可有效抑制脑缺血后大鼠梗死灶周围组织Nogo-A的表达从而促进神经功能的恢复。
miR-365抑制骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡 免费阅读 下载全文 目的检测microRNA-365（miR-365）对SOSP-9607骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法利用人工合成的miR-365模拟物以及miR-365抑制物,瞬时转染SOSP-9607骨肉瘤细胞。实时定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中miR-365的水平;流式细胞术检测SOSP-9607骨肉瘤细胞的细胞周期与凋亡;MTT法检测细胞增殖能力的变化;qRT-PCR检测细胞中KRAS的水平。结果 miR-365模拟物上调骨肉瘤细胞miR-365表达水平,抑制细胞增殖,细胞G1期增加、S/G2期减少,同时凋亡增加,KRAS基因的表达下降;miR-365抑制物下调SOSP-9607骨肉瘤细胞miR-365的表达水平,促进骨肉瘤细胞增殖,同时抑制凋亡,上调KRAS基因的表达。结论 miR-365抑制SOSP9607骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡,可能通过调节KRAS来发挥抑癌作用。
甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19（MAp19）在HeLa细胞的表达 免费阅读 下载全文 目的构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19（MAp19）真核表达载体并表达MAp19。方法应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染He La细胞,并采用G418筛选已获得整合有pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察MAp19融合蛋白在He La细胞的定位;Western blot法检测MAp19融合蛋白的水平。结果构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pc DNA3.1/Myc-His A-MAp19重组质粒,测序结果与NCBI数据库比对完全一致;采用G418筛选后获得表达外源性MAp19蛋白的He La细胞,该蛋白定位于细胞质中;Western blot结果确定MAp19为分泌性蛋白。结论 MAp19真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白。
黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用 免费阅读 下载全文 目的探讨黄芪糖蛋白（HQGP）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠的治疗效果及可能机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导C57BL/6雌性小鼠建立EAE模型。分为黄芪糖蛋白治疗组和EAE对照组,隔天记录小鼠临床评分和体质量变化。HE染色和免疫荧光技术检测脊髓组织炎细胞浸润;MTT法检测细胞活性;Griess法检测一氧化氮（NO）释放;ELISA测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）分泌,γ干扰素（IFN-γ）释放;流式细胞术检测CD4＋T细胞亚群变化。结果 HQGP处理可减轻EAE症状,抑制中枢神经系统炎细胞浸润。抑制脾淋巴单核细胞活性、NO和TNF-α、IL-6分泌,促进IFN-γ的分泌。增加CD4＋CD25＋、CD4＋IL-10＋、CD4＋IFN-γ＋T细胞亚群的比例。结论 HQGP通过调节T细胞亚群比例,抑制炎症细胞因子释放,减轻EAE炎症反应。
二苯基碘和夹竹桃麻素通过降低早产儿外周血单个核细胞p47phox位移与水平减少活性氧的产生 免费阅读 下载全文 目的观察NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘（DPI）和夹竹桃麻素（apocynin）对NADPH氧化酶亚基p47phox介导的活性氧（ROS）产生的影响,探讨细胞在高氧条件下,p47phox介导ROS产生的机制。方法 32周以下早产儿,尚未吸氧前取外周血2 m L,分离纯化外周血单个核细胞（PBMC）将所得细胞分为对照组、高氧组、高氧联合DPI处理组、高氧联合apocynin处理组进行培养。对照组置于37℃、50 m L/L的CO2培养箱中,高氧及相应处理组置于950 m L/L的O2与50 m L/L的CO2混合气体中培养48 h。采用Mitosox Red标记结合激光共聚焦显微镜检测PBMC内ROS的生成量、硫代巴比妥酸比色法检测培养液丙二醛含量、免疫荧光检测p47phox在细胞内的定位及移位率、Western blot法检测p47phox的蛋白水平。结果与高氧组相比,其余三组ROS和丙二醛明显减少,p47phox移位率与含量也显著降低;与对照组相比,高氧联合DPI处理组及高氧联合apocynin处理组ROS、丙二醛、p47phox移位率与含量并无显著差异。结论 DPI和apocynin能通过降低p47phox移位与含量来减少高氧诱导的ROS升高。
调衡方多糖增强体外培养巨噬细胞的吞噬能力 免费阅读 下载全文 目的研究调衡方多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨其多糖对巨噬细胞吞噬作用的免疫调节机制。方法依照中药多糖的制备方法从调衡方中提取粗多糖;从小鼠腹腔分离提取并培养巨噬细胞;（500、200、10）μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞48 h,光学显微镜下观察活细胞的形态,墨汁吞噬实验以及金黄色葡萄球菌吞噬实验观察巨噬细胞的吞噬能力,酶细胞化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化。结果与对照组比较,（500、200、10）μg/m L调衡方多糖处理巨噬细胞后,巨噬细胞体积显著增大,对墨汁和金黄色葡萄球菌的吞噬能力均显著提高,酸性磷酸酶的活性也明显增强,并与多糖浓度呈正相关。结论调衡方多糖能增强巨噬细胞的吞噬功能,并提高细胞内酸性磷酸酶的活性。
鸡伤寒沙门菌减毒株1009ΔspiCΔcrp的保护效力评价 免费阅读 下载全文 目的为研制安全有效的鸡伤寒沙门菌减毒活疫苗,该实验对鸡伤寒沙门菌减毒株1009ΔspiCΔcrp的安全性及保护力进行观察。方法以1×108集落形成单位的1009ΔspiCΔcrp对3日龄雏鸡口服免疫,在7 d后进行再次免疫,测定雏鸡的体质量变化、血清抗体水平和细胞因子水平,并对SG9强毒株攻毒后的保护力进行评价。结果免疫组鸡的体质量增长与对照组无明显差异,血清IgG水平持续上升并显著高于对照组,白细胞介素4（IL-4）、IL-6和IL-1β的水平也升高。以SG9强毒株攻击后,免疫组的保护率为100%,而对照组为20%。HE染色结果显示,免疫组鸡无病变,而对照组鸡脏器病变明显。结论1009ΔspiCΔcrp具有良好的安全性和免疫原性,是防治鸡伤寒理想的疫苗候选株。
米诺环素抑制蛛网膜下腔出血大鼠脑组织小胶质细胞/巨噬细胞活化改善血管病变 免费阅读 下载全文 目的研究米诺环素对实验性大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）所致神经炎症及脑血管病变的影响。方法单线穿刺法制备大鼠SAH模型;用神经功能评分检测各组大鼠的神经损害程度;ELISA检测大鼠皮层细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的水平;Western blot法检测脑组织小胶质细胞/巨噬细胞标志物离子钙结合接头蛋白分子1（Iba-1）的水平;HE染色检测脑血管壁的形态学变化。结果成功制备实验性SAH大鼠模型;米诺环素治疗后SAH大鼠神经功能得到明显改善、脑组织中TNF-α和IL-1β水平下降、小胶质细胞/巨噬细胞活化受到抑制、血管痉挛和血管壁损伤得到明显缓解。结论米诺环素抑制SAH大鼠脑组织小胶质细胞/巨噬细胞活化改善血管病变。
下调含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1（UHRF1）的水平可抑制肾癌769-P细胞增殖并促进其凋亡 免费阅读 下载全文 目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1（UHRF1）的小干扰RNA（siRNA）在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时转染入769-P细胞。利用实时定量PCR检测UHRF1 mRNA的水平,Western blot法检测UHRF1的蛋白水平;利用MTT法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶（annexinⅤ-FITC/PI）染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 UHRF1 siRNA可显著抑制UHRF1的mRNA和蛋白水平,下调769-P细胞UHRF1水平后,细胞增殖显著减弱,细胞凋亡显著增加。结论下调UHRF1的表达可抑制肾癌细胞的增殖并促进其凋亡。
慢性间歇低氧大鼠肺泡上皮细胞CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）表达增强 免费阅读 下载全文 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）是呼吸科的一种常见慢性病,其对人体的多个系统都可能造成损害,如认知功能障碍、心脑血管疾病、糖尿病等,其特点为睡眠时反复发生的上气道部分或全部塌陷,导致呼吸暂停和（或）气流受限[1-4],使人体处于慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）状态。
可诱导细胞凋亡的FKBP12/caspase-9慢病毒载体的构建与应用 免费阅读 下载全文 虽然基因修饰T细胞免疫治疗在癌症治疗中起到积极作用[1-3]。然而,基因修饰T细胞的安全调控是临床治疗需要解决的关键问题,利用自杀基因系统调控基因修饰的细胞是基因治疗的安全措施之一[4-5]。Caspase-9作为凋亡的起始因子,通过化学诱导二聚化将其激活[6],
细胞周期蛋白D1的高表达与雌激素受体表达及乳腺癌患者良好预后相关 免费阅读 下载全文 目的探讨细胞周期蛋白D1（cyclin D1）与雌激素受体（ER）在乳腺癌中的表达和临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测102例乳腺癌组织和60例正常乳腺组织标本中cyclin D1及ER蛋白表达,结合临床病理及术后5年随访资料,分析cyclin D1与ER相关性及与预后之间的关系。结果与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中cyclin D1和ER表达显著性增加,且cyclin D1表达与肿瘤组织学分级、TNM分期、ER蛋白表达相关。Spearman相关性分析显示,cyclin D1与ER表达水平呈正相关。Kaplan-Meier生存分析发现,cyclin D1高表达组乳腺癌患者生存期明显高于低表达组。Cox多因素分析表明cyclin D1、ER及TNM分期是影响患者预后的独立因素。结论 Cyclin D1在乳腺癌组织高表达,与ER表达正相关,且指示良好的预后。
IL-1和IL-6的表达增强且与盘源性下腰痛改良日本骨科学会（mJOA）评分负相关 免费阅读 下载全文 目的检测白细胞介素1（IL-1）和IL-6在椎间盘源性下腰痛（DLBP）患者退变椎间盘中的表达,评估、记录其腰痛改良日本骨科学会（m JOA）评分,分析其相关性。方法选取同种族同地区30例45~65岁DLBP患者,另取10例以1年内无腰腿痛病史,因外伤导致腰椎骨折需行手术治疗,影像学资料未提示腰椎间盘退变作为对照。以腰痛m JOA评分评估DLBP的程度。免疫组织化学技术检测DLBP组与对照组椎间盘组织中IL-1和IL-6的表达,Western blot法检测椎间盘组织中IL-1和IL-6的含量,采用Pearson直线相关分析探讨IL-1、IL-6与m JOA评分之间的相关性。结果与对照组相比,DLBP组椎间盘组织IL-1、IL-6表达明显增强。Western blot实验证实DLBP组椎间盘组织IL-1、IL-6水平明显升高。DLBP组术前m JOA评分最低分7分,最高分16分。DLBP组IL-1、IL-6含量与m JOA评分显著负相关。结论 IL-1和IL-6在DLBP退变椎间盘含量增加,且与下腰痛m JOA评分呈负相关。
结节性硬化症TSC1/TSC2基因突变的高通量测序快速诊断 免费阅读 下载全文 目的建立结节性硬化症TSC1/TSC2基因高通量测序技术以快速准确检测结节性硬化的TSC基因突变。方法对10例结节性硬化症患者及10例正常对照进行研究,利用长链PCR方法扩增TSC1及TSC2基因所有外显子区域,运用Ion PGMTM平台进行二代测序并运用常规测序验证。结果设计引物对TSC1及TSC2基因特异性扩增出7个长片段产物,产物长度介于13 kb~15 kb间;运用二代测序技术快速鉴定出10个致病突变,其中,7个突变位于TSC2基因,3个突变位于TSC1基因;所有突变经常规Sanger测序验证,结果一致。结论高通量二代测序技术可快速可靠诊断结节性硬化症TSC1、TSC2基因突变。
人子宫内膜和子宫内膜异位症患者在位内膜细胞培养及形态 免费阅读 下载全文 子宫内膜异位症是指有生长增殖能力的内膜组织或细胞出现在子宫腔以外种植生长而引起的临床症状,其病理形态多样,侵袭广泛,具有类似恶性肿瘤样的生物学特性,严重影响患者的生活质量。子宫内膜异位症病因复杂,发病机制尚不完全清楚。子宫内膜异位症的发生与在位内膜的生理特性密切相关[1],
急性白血病患者血清Th1细胞和Th2细胞部分相关细胞因子水平变化 免费阅读 下载全文 白血病是一种造血干/祖细胞增殖并伴有分化受阻的恶性疾病[1]。虽然联合开展化疗、造血干细胞移植及靶向治疗使白血病的缓解率已明显提高,但治疗后如何清除残留白血病细胞、防止复发的策略至目前仍无显著的进展。免疫治疗是目前已知的有望消灭恶性肿瘤细胞的有效手段。细胞因子介导的细胞免疫是机体抗肿瘤的重要方式,研究显示,
C反应蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA的建立和应用 免费阅读 下载全文 目的制备和鉴定抗C反应蛋白（CRP）的单克隆抗体（m Ab）并建立双抗体夹心ELISA。方法应用CRP作为免疫原刺激小鼠,获得抗CRP m Ab后,分组进行交叉配对,建立ELISA,并对肾综合征出血热（HFRS）患者血浆CRP含量进行检测。结果获得12株高亲和力抗CRP特异性m Ab（FMMU-CRP1~FMMU-CRP12）。其中FMMU-CRP7和FMMU-CRP1分别作为包被抗体和检测抗体建立双抗体夹心ELISA,其敏感性达1 ng/m L。ELISA检测发现HFRS患者血浆中CRP含量较正常人明显升高。结论成功制备出抗CRP m Ab,并建立高敏感性ELISA用于CRP检测。
人血管内皮钙黏蛋白5单克隆抗体的制备及应用 免费阅读 下载全文 目的制备并鉴定人血管内皮钙黏蛋白5（VECDH5）的单克隆抗体（m Ab）。方法用重组原核人VECDH5蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合;间接ELISA筛选阳性克隆,得到稳定分泌抗VECDH5抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定其效价;Western blot法、流式细胞术、免疫荧光细胞化学染色、免疫组织化学染色鉴定其特异性及抗原表位。结果制备并获得1株可分泌特异性抗VECDH5的杂交瘤细胞株（2C11）。ELISA测定腹水效价高达1∶10 000。多种方法均证实该抗体能特异性识别人VECDH5蛋白,并可在上述不同方法中应用。经抗原表位鉴定,研究制备的2C11识别的氨基酸序列为LDREVVPWYNLTVEA。结论成功制备了亲和力高、特异型好的抗人VECDH5的m Ab。
用酵母双杂交系统筛选抗人p53单链抗体 免费阅读 下载全文 目的采用重叠PCR技术,构建小鼠抗人p53基因的全套单链抗体（sc Fv）文库,利用酵母双杂交系统筛选抗人p53sc Fv。方法构建表达p53诱饵载体p GBKT7-p53,提取P53蛋白免疫的小鼠脾脏组织总RNA,反转录PCR和重叠PCR方法构建VH-linker-VL型sc Fv基因库。将其与载体p GADT7连接,产物转化至含诱饵载体的AH109酵母菌中,于营养缺陷型平板中筛选阳性克隆。采用免疫细胞化学染色方法验证sc Fv与人P53蛋白的亲和力。结果成功构建诱饵质粒p GBKT7-p53并转入酵母AH109细胞,其在酵母细胞中无自激活能力,对宿主菌亦无毒性;成功获取VH-linker-VL型的抗体文库并构建捕获载体,利用酵母双杂交系统成功筛选到抗人P53 sc Fv片段;sc Fv1、sc Fv2和sc Fv3与人P53蛋白间均具有一定亲和力,可用以检测细胞、组织中的P53蛋白。结论利用酵母双杂交系统,获得具有良好的亲和力抗人P53 sc Fv,为筛选sc Fv提供新思路。
CD258（LIGHT）在肿瘤免疫治疗中的研究进展 免费阅读 下载全文 CD258（LIGHT）即肿瘤坏死因子超家族成员14（TNFSF14）,能够与其功能性受体单纯疱疹病毒侵入介体（HVEM）、淋巴毒素β受体（LTβR）结合,在体内、体外均可发挥明显的抗肿瘤效应。CD258介导的信号通路在不同肿瘤细胞系中表现出复杂的促凋亡机制,并且在不同的肿瘤细胞系中表现出促进和抑制肿瘤生长的双重作用。随着免疫学及分子生物学技术的发展,促进了CD258在肿瘤免疫治疗中的研究和应用。现对CD258在肿瘤免疫治疗中的机制和应用的新进展进行综述。
肿瘤微环境中髓系来源抑制细胞对T细胞免疫活性抑制的分子机制 免费阅读 下载全文 髓系来源抑制细胞（MDSC）根据其起源和功能而命名,由巨噬细胞、树突状细胞（DC）及粒细胞等细胞的前体细胞组成。肿瘤免疫逃逸与肿瘤微环境中MDSC介导的抗肿瘤免疫抑制相关,肿瘤微环境中的MDSC主要通过抑制T细胞的免疫活性来发挥免疫抑制作用。根据MDSC与T细胞之间的接触方式,肿瘤微环境中的MDSC抑制T细胞免疫功能的分子机制可分为直接抑制和间接抑制两类,其中MDSC通过产生细胞因子影响T细胞功能和细胞之间膜受体配体相互作用发挥抑制T细胞功能的方式为直接抑制,而MDSC通过影响T细胞代谢从而影响T细胞功能及通过其他细胞发挥抑制T细胞功能的方式为间接抑制。制定针对MDSC的治疗策略时,需综合考虑上述多种分子机制共存的可能性。
microRNA调控CD4~＋T淋巴细胞分化与成熟的机制研究进展 免费阅读 下载全文 小RNA（miRNA）是免疫系统的重要调节物,免疫细胞的谱系发育、增殖、分化、迁移和效应作用均受到miRNA的调控。miRNA主要通过靶作用于转录因子的mRNA形成复杂而精细的调控网络,不同的Th亚群受不同miRNA的调节,同时,某些miRNA如miR-155、miR-146a、miR-17-92簇等也可在多个不同的辅助T（Th）细胞亚群中起特定的调控作用,维持这些Th细胞亚群之间的分化平衡。miRNA的异常表达将导致Th细胞亚群之间的分化平衡被打破或功能失调,从而引发炎症或自身免疫性疾病。本文就免疫应答过程中miRNA对初始CD4＋T细胞的活化及Th细胞亚群分化的重要调节作用进行综述。
体外转录信使RNA免疫疗法的研究进展 免费阅读 下载全文 体外转录信使RNA（IVT mRNA）是在体外条件下以DNA为模板转录得到的一种mRNA,这种mRNA可以指导特定蛋白质的合成,阻止或改变某种特定的疾病。因此,IVT mRNA可以作为一种传递遗传信息的潜在新药。与其他核酸药物相比,基于IVT mRNA的药物具有很多优势。随着mRNA技术发展,基于IVT mRNA的恶性肿瘤免疫疗法和治疗传染性疾病疫苗的研制等已步入临床应用阶段。本文系统地介绍了IVT mRNA的结构、合成方式、投递途径和免疫机制,着重分析了IVT mRNA免疫疗法在不同疾病临床治疗中的应用现状,如恶性肿瘤、传染性疾病和过敏反应等,并探讨了将其开发为新药所遇到的关键性机遇与挑战。
组织定居巨噬细胞起源及稳态维持和功能研究进展 免费阅读 下载全文 组织定居巨噬细胞广泛存在于各种组织器官中,具有高度的异质性。组织定居巨噬细胞参与胚胎及个体的生长发育,并介导炎症反应和组织损伤修复,在维持组织稳态中具有十分重要的作用。近年来借助体内遗传示踪技术,组织定居细胞的来源,维持稳态机制以及组织定居巨噬细胞与疾病关系的研究均有了突破性进展,本文拟从组织定居巨噬细胞的起源,稳态维持及其生理病理功能等最新研究进展进行综述,以丰富我们对组织定居巨噬细胞维持机体稳态机制的理解,并探索以组织定居巨噬细胞为靶点治疗相关疾病的新策略。
Toll样受体4与小肠缺血的研究进展 免费阅读 下载全文 急性小肠缺血是一种非常危重的急症,肠壁缺血、缺氧最终导致大量肠管坏死和炎症因子的释放,甚至休克、多器官功能衰竭等。过度的炎症是造成机体各种损伤的基础,Toll样受体（TLR）是公认的病原体诱导炎症的主要参与者之一。TLR4可识别由病原微生物介导的先天免疫反应,TLR4与小肠缺血的损伤机制有密切关系,炎症免疫反应在小肠缺血的发生、发展中有重要作用,对TLR4进行负调控可能是预防和治疗小肠缺血的重要方法之一。通过重点探讨TLR4信号的激活在小肠缺血中的作用,有助于小肠缺血的靶向治疗。
CXC趋化因子配体10（CXCL10）在狼疮肾炎中作用的研究进展 免费阅读 下载全文 狼疮肾炎（LN）是指系统性红斑狼疮（SLE）合并双肾组织不同程度免疫性损害,同时具有明显肾功能损伤临床表现的一种自身免疫性疾病,是导致慢性肾功能衰竭的一个重要原因。典型的LN诊断并不困难,但早期、不典型或轻型LN,易漏诊或误诊。许多研究表明,CXC趋化因子配体10（CXCL10）在LN病理发展过程中起重要作用,可以作为一个敏感的生物标志物,提高LN诊断的敏感性。本文回顾CXCL10及其受体CXC趋化因子受体3（CXCR3）的结构和生物学功能,阐述其在LN中的作用,以期对LN临床诊断及病理发展的控制有所帮助。
[基础研究]悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达(吴介恒;韩东晖;魏铭;郑国旭;焦点;席文锦;杨安钢;秦卫军;温伟红)
缬沙坦抑制高糖刺激下系膜细胞血管紧张素Ⅱ-Notch通路(袁琴;吕川;吴灿;雷莎;邵滢;王秋月)
β葡聚糖促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟并增强其迁移能力(徐冬勤;张晓航;王勇;宁永玲;丁骏;钱科卿;戚春建)
香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4~＋T细胞分化为CD4~＋CD25~＋Foxp3~＋调节性T细胞(梁毅;周广;张龙举;刘积锋;钟小宁)
外周血内皮祖细胞可增强骨髓间充质干细胞SDF-1和MCP-1的分泌并促进其归巢(魏韩笑;李彩霞;赵娴;袁瑞红;代晓明;李逸松;刘流)
重组人平足蛋白基因在中国仓鼠卵巢细胞的稳定表达(曲乐;赵星鹏;傅建新;夏利军;戴兰;阮长耿;赵益明)
隐丹参酮下调U2OS骨肉瘤细胞血管内皮生长因子表达并抑制血管生成(徐亚梦;冀全博;张强;王岩)
角蛋白18磷酸化增加结肠癌HCT116细胞自噬并提高其对奥沙利铂的敏感性(闫晓东[1,2];石英;冦卜心;朱振宇;柴杰;陈德喜;郭洪亮)
脂肪干细胞移植抑制脑缺血大鼠梗死灶周围组织Nogo-A的表达(王杰华;李国前)
miR-365抑制骨肉瘤细胞增殖并促进其凋亡(高金鉴;赵品;陈旭;王微;李玉芳;席文锦;张威;胡平平;王涛;单乐群)
甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19（MAp19）在HeLa细胞的表达(李婷;李萍;贾天军;贾晓晖;赵霞;程永婷)
黄芪糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用(章培军;郭敏芳;邢雁霞;杨德兵;张丽红;李艳花;薛慧清;肖保国;马存根[1,2])
二苯基碘和夹竹桃麻素通过降低早产儿外周血单个核细胞p47phox位移与水平减少活性氧的产生(张玲萍;董文斌;李清平;康兰;张莲玉;卢佑英;翟雪松)
调衡方多糖增强体外培养巨噬细胞的吞噬能力(张宏方;于鹏龙;郑玉;于东波;吴芳;王希胜;环诚;张怡敏)
鸡伤寒沙门菌减毒株1009ΔspiCΔcrp的保护效力评价(程瞾[1,2];杨美鑫[1,2];殷俊磊[1,2];康喜龙[1,2];胡茂志;潘志明[1,2];焦新安[1,2])
米诺环素抑制蛛网膜下腔出血大鼠脑组织小胶质细胞/巨噬细胞活化改善血管病变(修彬华;刘璟;邢国祥;郑刚;邹志浩;闫志强)
下调含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1（UHRF1）的水平可抑制肾癌769-P细胞增殖并促进其凋亡(焦点[1,3];郑甲[1,3];魏铭[2,3];郑国旭;席文锦;秦卫军;杨安钢;王禾;温伟红)
慢性间歇低氧大鼠肺泡上皮细胞CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）表达增强(张嘉宾;张盼盼;寇育乐;王红阳;王玲;张敏;禹江涛;王亚囡)
可诱导细胞凋亡的FKBP12/caspase-9慢病毒载体的构建与应用(雷艳杰;孙向东;王春荣;朱武凌;韩双印)
[临床研究]细胞周期蛋白D1的高表达与雌激素受体表达及乳腺癌患者良好预后相关(杨成成;南克俊;张雅敏;陈怡萌;秦思达)
IL-1和IL-6的表达增强且与盘源性下腰痛改良日本骨科学会（mJOA）评分负相关(杨剑;康建平;冯大雄;王松;杨函)
结节性硬化症TSC1/TSC2基因突变的高通量测序快速诊断(黄昌艳)
人子宫内膜和子宫内膜异位症患者在位内膜细胞培养及形态(张天婵;丛慧芳)
急性白血病患者血清Th1细胞和Th2细胞部分相关细胞因子水平变化(董婷;蒋雅先;张芹;甸自金;宋建新;杨曦;欧阳红梅)
C反应蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA的建立和应用(陈雅楠;宋朝君;李琦;李娜;董芸;田莹;金伯泉;马樱)
[抗体工程]人血管内皮钙黏蛋白5单克隆抗体的制备及应用(丁洁;何杨[1,2];杨剑锋;左斌;杨炳华)
用酵母双杂交系统筛选抗人p53单链抗体(郑美云;李妙君;沈国婴;林素颖;李恢波;孟春;王航)
[综述]CD258（LIGHT）在肿瘤免疫治疗中的研究进展(李权;李涛;李瑞鹏;刘建河)
肿瘤微环境中髓系来源抑制细胞对T细胞免疫活性抑制的分子机制(陈洁英;于津浦)
microRNA调控CD4~＋T淋巴细胞分化与成熟的机制研究进展(唐晴琴;秦保东;仲人前)
体外转录信使RNA免疫疗法的研究进展(吕建军[1,2];段大鑫;蒋帅;杨阳)
组织定居巨噬细胞起源及稳态维持和功能研究进展(陶欢;白健;高春辰;韩骅;秦鸿雁)
Toll样受体4与小肠缺血的研究进展(刘盛智;周翔宇)
CXC趋化因子配体10（CXCL10）在狼疮肾炎中作用的研究进展(林秋萍;祝先进;林青)
《细胞与分子免疫学杂志》期刊简介
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