目的观察NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)对NADPH氧化酶亚基p47phox介导的活性氧(ROS)产生的影响,探讨细胞在高氧条件下,p47phox介导ROS产生的机制。方法 32周以下早产儿,尚未吸氧前取外周血2 m L,分离纯化外周血单个核细胞(PBMC)将所得细胞分为对照组、高氧组、高氧联合DPI处理组、高氧联合apocynin处理组进行培养。对照组置于37℃、50 m L/L的CO2培养箱中,高氧及相应处理组置于950 m L/L的O2与50 m L/L的CO2混合气体中培养48 h。采用Mitosox Red标记结合激光共聚焦显微镜检测PBMC内ROS的生成量、硫代巴比妥酸比色法检测培养液丙二醛含量、免疫荧光检测p47phox在细胞内的定位及移位率、Western blot法检测p47phox的蛋白水平。结果与高氧组相比,其余三组ROS和丙二醛明显减少,p47phox移位率与含量也显著降低;与对照组相比,高氧联合DPI处理组及高氧联合apocynin处理组ROS、丙二醛、p47phox移位率与含量并无显著差异。结论 DPI和apocynin能通过降低p47phox移位与含量来减少高氧诱导的ROS升高。
目的制备和鉴定抗C反应蛋白(CRP)的单克隆抗体(m Ab)并建立双抗体夹心ELISA。方法应用CRP作为免疫原刺激小鼠,获得抗CRP m Ab后,分组进行交叉配对,建立ELISA,并对肾综合征出血热(HFRS)患者血浆CRP含量进行检测。结果获得12株高亲和力抗CRP特异性m Ab(FMMU-CRP1~FMMU-CRP12)。其中FMMU-CRP7和FMMU-CRP1分别作为包被抗体和检测抗体建立双抗体夹心ELISA,其敏感性达1 ng/m L。ELISA检测发现HFRS患者血浆中CRP含量较正常人明显升高。结论成功制备出抗CRP m Ab,并建立高敏感性ELISA用于CRP检测。