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文献检索:
  • 女人的春天 免费阅读 收费下载
  • 北方的3月依旧寒风料峭。但商家们盛夏般火爆热烈的“女人春天”“三八”节日的产品策划,使早春的北方涌动着一股股浓郁的春之味道。映入人们眼帘的女人,已经脱去臃肿的冬装换上了飘逸潇洒妩媚动人的多彩春衣。于是,在人们的眼中,在女人的心里,3月里的每一天都盛满了春天的气息。
  • 绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后在多脏器的分布 免费阅读 收费下载
  • 背景:利用绿色荧光蛋白转基因小鼠间充质干细胞自身携带荧光性的特点,干预重症急性胰腺炎大鼠后,便于动物体内跟踪观察。目的:观察绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞在重症胰腺炎大鼠体内各脏器的分布情况。方法:直接贴壁法分离培养绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,90%融合后消化传代扩增。传至第3代后行CD29+、CD90+、CD34-、CD45-细胞免疫表型鉴定。显微镜下逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠制造SD大鼠重症急性胰腺炎模型。1h后,按2×106/只尾静脉注入重症急性胰腺炎SD大鼠体内。分别于6,12,24h取肝、肾、脑、肺、胰、肠脏器送普通病理检查,观察胰腺病理变化及骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎SD大鼠后在各脏器干细胞分布情况及灰度值测定。结果与结论:胰腺破坏随时间延长而加强,24h破坏最严重;GFP小鼠CD29阳性细胞91.1%,CD90阳性细胞93.5%,CD34阳性细胞0.82%,CD45阳性细胞2.22%;注射干细胞SD大鼠各脏器均有绿色荧光出现,并随时间增长而增强;在肾脏组织中灰度值最高,脑组织最少。提示骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后能在各脏器稳定分布。
  • 氯甲基苯甲酰氨标记骨髓间充质干细胞在免疫介导骨髓衰竭小鼠模型体内的归巢 免费阅读 收费下载
  • 背景:再生障碍性贫血是T淋巴细胞免疫亢进破坏造血干祖细胞的一种异常免疫反应性疾病。骨髓间充质干细胞具有支持造血功能同时具有免疫调控作用。目的:观察骨髓间充质干细胞移植骨髓衰竭模型小鼠体内的归巢情况。方法:将BALB/c小鼠随机分成正常对照组、骨髓衰竭模型组和骨髓间充质干细胞移植组,于第6天将已标记氯甲基苯甲酰氨的BALB/c小鼠骨髓间充质干细胞经尾静脉注射途径移植给骨髓衰竭模型小鼠,采用流式细胞术和组织学荧光显微镜观察标记细胞在不同组织的动态分布。造模第14天,观察各组小鼠的平均生存时间、外周血血象和骨髓形态学特征。结果与结论:骨髓间充质干细胞经尾静脉输注后24h在受体小鼠骨髓中可发现氯甲基苯甲酰氨阳性标记细胞,72h时阳性标记细胞数量增多(P〈0.05)。骨髓间充质干细胞移植组小鼠濒死或处死前的白细胞、血红蛋白、血小板、骨髓单个核细胞数与模型组小鼠濒死时相比显著升高(P〈0.01)。骨髓衰竭模型组比骨髓间充质干细胞移植组平均生存时间短(P〈0.05)。结果证实,骨髓间充质干细胞输入骨髓衰竭模型体内能归巢至骨髓,促进造血恢复,减轻骨髓衰竭程度,显著延长生存时间。
  • 17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导调控 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究发现骨髓间充质干细胞上存在雌激素受体,雌激素通过调节骨髓间充质干细胞的增殖、分化特性发挥促成骨作用。目的:观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用,并探讨其作用机制。方法:在基础成骨诱导培养基培养的第3代大鼠骨髓间充质干细胞中分别加入0(对照组),0.001,0.01,0.1nmol/L17β-雌二醇干预。Elisa法检测培养的骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RT-PCR及Western blotting法分别检测Runx2因子mRNA及蛋白水平。结果与结论:与对照组比较,在给予0.001,0.01,0.1nmol/L17β-雌二醇干预后第5天,骨髓间充质干细胞Ⅰ型胶原表达显著升高(P〈0.05),第7天仍旧呈高表达(P〈0.05)。同时,在17β-雌二醇干预的第5,7天,Runx2因子mRNA及蛋白表达水平随17β-雌二醇浓度的增加而升高(P〈0.05),并呈剂量依赖性。表明17β-雌二醇可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化,其可能通过上调Runx2因子表达发挥促成骨作用。
  • 低频振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损核因子受体激活剂/核因子受体激活剂配体/骨保护素通路变化的体内实验 免费阅读 收费下载
  • 背景:关于低频振动对体内骨髓基质干细胞成骨分化的实验缺乏报道。目的:通过体内实验研究不同频率振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损过程中核因子受体激活剂/核因子受体激活剂配体/骨保护素调节通路的变化,并初步探讨其机制。方法:取新西兰兔骨髓基质干细胞和脱钙骨基质制备复合物,80只新西兰兔制作骨缺损模型,骨缺损区植入复合物后随机数字表法均分组对照组、12.5,25,50,100Hz振动组,振动组于第7天开始接受不同频率振动干预5周,振动结束后分别对骨保护素mRNA、核激活因子受体配体mRNA进行检测。结果与结论:与对照组比较,各振动组骨髓基质干细胞骨保护素、核激活因子受体配体基因表达明显上调(P〈0.05),以25,50Hz显著(P〈0.01);但100Hz振动时表达则下调(P〈0.05)。说明给予一定频率振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损,可能与其促进骨保护素基因表达上调有关,理想的振动频率为25,50Hz。
  • 心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞向心肌组织样结构的分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:体内实验提示骨髓间充质干细胞所处的微环境对其分化的方向有着重要的影响。目的:体外诱导骨髓间充质干细胞分化形成心肌组织样结构。方法:选用生长良好的第3代骨髓间充质干细胞,以心肌组织裂解液连续培养4周,倒置显微镜下连续观察细胞形态特征的变化规律,收集诱导后的组织行苏木精-伊红染色,电镜观察其超微结构。采用波形蛋白、Ⅷ因子相关抗原进行免疫组织化学染色。结果与结论:以心肌组织裂解液连续诱导培养4周。第12天部分"竹节样"细胞融合形成多核肌管样结构,第14天肌管样结构出现有节律性的收缩,搏动频率为90~110次/min;透射电镜下细胞内可见肌节样结构,部分肌细胞具自律性搏动的功能特点;苏木精-伊红染色可见大量肌束样结构。提示心肌组织裂解液可模拟心肌组织微环境,有效促使骨髓间充质干细胞分化为具有典型形态结构特征和相应功能活动的心肌细胞,同时诱导部分骨髓间充质干细胞分化为结缔组织细胞、内皮样细胞,与心肌细胞共同形成心肌组织样结构。显示在特定微环境的适宜条件下,骨髓间充质干细胞具有多向分化、发育形成多种功能上密切相关的细胞,形成组织样结构的趋势。
  • 大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养与鉴定 免费阅读 收费下载
  • 背景:内皮祖细胞参与血管新生,但其分离、培养、鉴定方法目前并不统一。目的:探索大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养及鉴定方法。方法:使用密度梯度离心法及差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化,使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133表达情况。结果与结论:培养前4d细胞增殖不明显,第5~10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成。培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能。流式细胞仪检测体外培养第10天的细胞,CD133+细胞占19.2%,CD34+细胞占28.7%,CD34+/CD133+细胞占19.1%。说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞。
  • 体外诱导人骨髓间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:Ⅱ型肺泡上皮细胞被证明在大鼠肺纤维化模型中直接参与肺的修复并可以减轻肺纤维化的程度。胚胎干细胞可以在体外诱导分化Ⅱ型肺泡上皮细胞,但是其应用受到多方面的限制。目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞为Ⅱ型肺泡上皮细胞的方法及转化率。方法:取人胸骨骨髓细胞,体外分离培养骨髓间充质干细胞。采用无血清小气道生长液和改良无血清小气道生长液作为培养液,将骨髓间充质干细胞与人胚肺间质细胞共培养。观察骨髓间充质干细胞形态并用反转录PCR检测表面活性蛋白C的mRNA以及免疫荧光检测表面活性蛋白C表达。结果与结论:骨髓间充质干细胞与人胚肺间质细胞共培养10d后开始出现部分骨髓间充质干细胞由原先的长梭形变成和上皮细胞相似的形态。15d后开始检测到表面活性蛋白CmRNA,但未随共培养时间延长而有所增加。改良无血清小气道生长液与无血清小气道生长液相比能增加表面活性蛋白CmRNA表达(P〈0.05)。说明采用无血清小气道生长液或改良无血清小气道生长液,并与胚肺间质细胞共培养可以将骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞,但其转化率较低,表面活性蛋白C的阳性率仅为(3.15±0.69)%。
  • 人骨髓基质干细胞的单细胞克隆培养与鉴定 免费阅读 收费下载
  • 背景:骨髓基质干细胞缺乏特异的表面识别分子,其鉴定一直是研究中的难题。目的:探索人骨髓基质干细胞培养条件,获得体外克隆化培养的成人骨髓基质干细胞,并对其进行表型分析及分化潜能鉴定。方法:外科手术取髂骨术中抽取骨髓,采用密度梯度离心法初步分离骨髓基质干细胞,用极限稀释法进行克隆化培养;流式细胞仪对克隆化培养的骨髓基质干细胞进行细胞表面标志检测,并进行体外成软骨、成骨及心肌细胞诱导,免疫组织化学及RT-PCR检测成软骨、成骨及心肌细胞表达,确定其表型及分化潜能。结果与结论:单个细胞来源骨髓基质干细胞在体外1:3传代一般可以传28代左右,24代以前生长状态良好;经流式细胞仪检测,骨髓基质干细胞表达CD29,CD44,CD106,不表达CD14,CD34,CD45,HLA-DR;骨髓基质干细胞体外可向成骨、成软骨及心肌细胞分化,提示体外克隆化培养的骨髓基质干细胞能维持良好的成体干细胞生物学特性。
  • 骨髓间充质干细胞在急性心肌梗死后心室重构中的应用 免费阅读 收费下载
  • 背景:动物实验和初期的临床研究表明,干细胞移植可以取代坏死心肌细胞、增加有功能心肌细胞的数量,改善心功能,从而为心肌梗死的治疗开辟了一条崭新的途径。目的:观察心肌梗死后自体骨髓间充质干细胞移植及骨髓动员对心功能的影响。方法:经猪髂前上棘抽取骨髓30mL,培养得到骨髓间充质干细胞。15只猪分为3组,模型组仅建立心肌梗死模型,干细胞移植组在造模3h后经冠状动脉注射骨髓间充质干细胞,干细胞动员组在造模3h后连续5d注射粒细胞集落刺激因子150μg/(kgd)。结果与结论:心肌梗死后8周,干细胞动员组、干细胞移植组左心室收缩、舒张末期内径都明显减小,射血分数较心肌梗死前提高,但差异无显著性意义(P〉0.05);干细胞动员组及干细胞移植组血清血管内皮生长因子水平较心肌梗死前有上升趋势(P〈0.05);干细胞动员组和干细胞移植组梗死交界区的毛细血管密度均大于模型组(P〈0.05)。提示心肌梗死后行自体骨髓间充质干细胞移植及骨髓动员均能明显改善心功能,但具体效果仍需进一步大样本实验研究。
  • 富集骨髓间充质干细胞用于兔腰椎横突间的融合 免费阅读 收费下载
  • 背景:纳米羟基磷灰石/胶原具有良好的细胞相容性,其纳米级多孔结构可为细胞生长创造适合的三维环境,可作为理想的骨载体材料。目的:探讨富集骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/胶原用于兔腰椎横突间融合的可行性。方法:20只新西兰大白兔根据双侧L5~L6横突间植入物不同分为富集细胞组和自体髂骨组,每组10只。植入后8周取材,行X射线、手触检测和组织学观察,评估腰椎融合情况。结果与结论:植入后8周富集细胞组和自体髂骨组融合率分别为70%(7/10)和80%(8/10),两组融合率差异无显著性意义(P〉0.05)。组织学观察富集细胞组见较多新生骨小梁长入纳米羟基磷灰石/胶原内部;自体髂骨组横突间有大量新生骨组织,骨小梁连续。结果表明富集骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/胶原是一种较好的植骨替代材料,用于脊柱融合可获得近似自体骨移植的融合效果。
  • 本期专题:干细胞增殖及分化调控 免费阅读 免费下载
  • 1 Notch信号系统调控骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化,见2011年15卷36期6665页。2 人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控,见2009年13卷10期1853页。3 Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达,见2008年12卷25期4967页。
  • 体外模拟干细胞微环境培养扩增脐血及脐带基质源性间充质干细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:建立稳健的扩增体系,在体外扩增时最大限度地获得治疗剂量的干细胞数,同时保存干细胞的特性是临床实验室亟待解决的问题。目的:建立体外模拟干细胞微环境细胞外基质扩增脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞的方法,并与传统的2-D培养体系比较。方法:建立体外模拟干细胞微环境细胞外基质,体外分离脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞后分别接种到细胞外基质及传统的2-D塑料培养体系,分别从细胞计数及细胞表面标志物的变化,评估两种扩增体系对脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞体外扩增的优劣。结果与结论:使用骨髓源性的细胞外基质培养体系单位时间脐血间充质干细胞及脐带间充质干细胞产量是2-D体系的4~6倍,并且流式细胞仪检测显示细胞外基质体系能更好地保持干细胞的表面标记。因此,3-D较2-D培养系更接近生理环境,已建立的骨髓源性细胞外基质培养体系能保持间充质干细胞的特性,为短时间内快速获取更大数目同质、高活性的间充质干细胞提供了可能。
  • 重组人促红细胞生成素干预人源羊水干细胞向心肌前体细胞的分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究发现人源羊水干细胞可向心肌前体细胞分化。目的:观察不同浓度重组人促红细胞生成素对人源羊水干细胞向心肌前体细胞分化的影响。方法:用含0,1.0,5.0,10.0,20.0U/mL重组人促红细胞生成素的诱导培养基诱导鉴定后的人源羊水干细胞向心肌前体细胞分化,诱导24h后换为完全培养基继续培养。结果与结论:诱导分化14d,倒置显微镜下可见细胞由长梭形逐渐变短增宽,相邻的细胞间有融合现象,似类肌管样结构,以5.0U/mL重组人促红细胞生成素的诱导分化率最高;RT-PCR检测显示重组人促红细胞生成素可促进细胞Nkx-2.5和GATA-4mRNA的表达,以5.0U/mL重组人促红细胞生成素的作用最强。说明外源性重组人促红细胞生成素能剂量依赖性促进人源羊水干细胞向心肌前体细胞分化。
  • 人脐带间充质干细胞影响子宫内膜异位症细胞的增殖及凋亡 免费阅读 收费下载
  • 背景:人脐带间充质干细胞可通过旁分泌机制调控细胞的生物学活性。目的:观察人脐带间充质干细胞对子宫内膜异位症细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外原代培养人异位子宫内膜细胞与人脐带间充质干细胞,实验组将脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞按1×105/1×105比例接种于Transwell共培养板上下室,建立上下双层细胞非接触共培养体系,设1×105单独培养异位子宫内膜细胞为对照组。结果与结论:①MTT法检测异位子宫内膜细胞增殖:与对照组比较,实验组细胞增殖明显受到抑制(P〈0.05),且具有时间依赖性(P〈0.05)。②流式细胞仪检测异位子宫内膜细胞增殖凋亡:实验组凋亡细胞明显多于对照组(P〈0.05),异位子宫内膜细胞由G1期进入S期细胞减少。③RT-PCR法检测异位子宫内膜细胞张力蛋白同源物基因mRNA的表达:实验组明显高于对照组。表明人脐带间充质干细胞可以通过旁分泌机制抑制人异位子宫内膜细胞的体外增殖并促进其凋亡,且可能是通过提高张力蛋白同源物基因基因表达来达到的。
  • 人脐带间质干细胞培养上清液可下调肝星状细胞转化生长因子β的表达 免费阅读 收费下载
  • 背景:人脐带间质干细胞有望成为治疗肝纤维化新的种子细胞,但目前相关的体外实验报道较少。目的:探讨人脐带间质干细胞培养液上清对大鼠肝星状细胞纤维化形成生物学活性的影响及可能的作用靶点。方法:将肝星状细胞以1.0×108L-1接种于六孔板内,无血清培养24h后,加入2mL脐带间质干细胞培养液上清处理肝星状细胞,设为实验组;对照组为加入等量完全培养基处理肝星状细胞;RT-PCR法检测肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA表达;Western blot法检测肝星状细胞内转化生长因子β1蛋白表达。结果与结论:实验组中肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA表达较对照组明显下调,且随处理时间的延长,mRNA表达的下调程度亦随之增强(实验组72h〉实验组48h〉对照组);实验组肝星状细胞内转化生长因子β1蛋白表达较对照组下调,同时具有时间依赖性(对照组〉实验组48h〉实验组72h,P〈0.05)。提示脐带间质干细胞可抑制肝星状细胞纤维化形成的生物学活性,并可能是通过针对转化生长因子β靶点及其下游基因产物起作用。
  • 人脐血间充质干细胞的生物学特性及其成骨成脂肪分化(英文) 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前有关脐血间充质干细胞的生物学特性及分化能力的研究较少。目的:观察人脐血间充质干细胞的生物学特性,及其向成骨、成脂肪细胞分化的能力。方法:从不同胎龄脐血中分离间充质干细胞,对其进行原代和传代培养,并诱导其向成骨及成脂肪细胞分化。结果与结论:倒置相差显微镜下见分离培养的脐血间充质干细胞贴壁生长,呈成纤维细胞样外观,细胞呈螺旋状排列;透射电镜下可见脐血间充质干细胞胞核比例大,细胞器少,为低分化细胞;原代及传代培养的脐血间充质干细胞生长曲线均呈S型,第3,5代细胞增殖能力最强,低胎龄的脐血间充质干细胞集落形成能力最强。流式细胞仪检测结果显示,脐血间充质干细胞稳定表达间充质干细胞相关抗原CD29,CD44和CD90,不表达造血细胞标志CD34和CD45。成骨诱导后3周,碱性磷酸酶染色为强阳性,茜素红染色可见大量钙化基质的形成;成脂诱导3周,油红O染色可检测到胞质中脂滴的形成。提示脐血间充质干细胞具有间充质干细胞的形态特征、生长增殖特点及细胞表面标志物等生物学特性,可向成骨细胞及脂肪细胞分化。
  • 羊水间充质干细胞体外培养方案的优化及生物学特性 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前干细胞工程种子来源多样化,羊水中存在胎儿脱落细胞,可分离培养出间充质来源干细胞。目的:探索不同成分培养基对人羊水间充质干细胞(human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells,h-AFMSCs)体外培养的影响,并分析最适培养基体外培养的h-AFMSCs的生物学特性,建立优化的h-AFMSCs培养方案。方法:孕16~24周的孕妇产前检查中获得羊水进行原代及传代培养并采用6种不同的培养基成分对h-AFMSC进行培养。结果与结论:从孕中期羊水中可分离出h-AFMSCs,体外使用低糖DMEM培养基(L-DMEM)+体积分数10%胎牛血清与合成培养基MESEN PRO体积比1:1配制的培养基对其扩增促进作用最强。h-AFMSCs高表达CD29、CD73、CD90、CD105、CD166,低表达CD14、CD34、CD45及HLA-DR;分离培养的h-AFMSCs高表达的干细胞基因为OCT-4和Nanog;h-AFMSCs体外具有向成骨、成脂细胞分化的潜能且具有抑制淋巴细胞增殖的作用。提示孕中期羊水是低免疫原性的h-AFMSCs的良好细胞来源。
  • CF-1小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备 免费阅读 收费下载
  • 背景:小鼠胚胎成纤维细胞作为干细胞生长用饲养层,优于无饲养层,它能够分泌一些既促进干细胞生长又能抑制干细胞分化的因子。目的:建立CF-1小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳的分离培养方法,分析丝裂霉素C抑制成纤维细胞增殖的最佳浓度与时间,用于培养诱导多能性干细胞。方法:取孕10~15dCF-1小鼠,分离胎鼠原代成纤维细胞,经不同质量浓度(5,10,15,20mg/L)丝裂霉素C处理不同时间(1,1.5,2,2.5,3h)制备饲养层,并观察其增殖情况。将人诱导多潜能干细胞或胚胎干细胞在丝裂霉素C处理过的饲养层上培养,观察细胞集落生长情况。结果与结论:制备CF-1小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.0~14.0d。丝裂霉素C抑制CF-1小鼠胚胎成纤维细胞增殖的最佳浓度及作用时间为10mg/L,2.5h,成纤维细胞饲养层可以维持5~7d。诱导多能性干细胞与胚胎干细胞在经10mg/L丝裂霉素C处理2.5h后饲养层上能发育成典型的"鸟巢"状干细胞集落。
  • 人外周血单个核细胞向肝样细胞转化的体外诱导培养方法 免费阅读 收费下载
  • 背景:外周血单个核细胞在体外条件下可向肝样细胞转化。目的:探索体外诱导外周血单个核细胞向肝样细胞分化的培养方法。方法:采用密度梯度离心法联合贴壁法纯化肝硬化患者外周血单个核细胞,以含巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素3及β-巯基乙醇培养基培养6d后,诱导组用含肝细胞生长因子,成纤维细胞生长因子4的培养基培养14d;以未诱导培养的单个核细胞及L02肝脏细胞系为对照。结果与结论:外周血单个核细胞呈透明圆形、类圆形,用巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素3及β-巯基乙醇培养基培养6d后,部分细胞向成纤维样细胞生长,诱导后部分细胞呈多边形,多角形,14d后细胞形态逐渐接近肝细胞,并表达白蛋白、甲胎蛋白、角蛋白18。说明在一定的诱导条件下,外周血单个核细胞在体外可以向肝样细胞分化。
  • 尿酸对人胎盘间充质干细胞增殖的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:尿酸对不同细胞具有不同的作用,那么,尿酸对人胎盘源间充质样干细胞是促进还是抑制呢?目的:观察尿酸对人胎盘间充质干细胞增殖的影响及对胎盘间充质干细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。方法:以体外培养人胎盘间充质干细胞为研究对象,分为6组,不加尿酸的对照组,和加入不同浓度的尿酸0.1,0.2,0.4,0.6,0.8mmol/L组。结果与结论:同一时间内,随着尿酸浓度增加,细胞数目逐渐增加,尤其是0.8mmol/L尿酸组;同一浓度尿酸,随着培养时间的延长(时间〈5d),细胞数目也逐渐增加,第5天的时候细胞数目达到高峰。提示尿酸具有呈时间及浓度依赖性的促进胎盘间充质干细胞增殖的作用,尤其是0.8mmol/L尿酸在培养第5天的时候促进作用最明显。
  • 体外诱导胰腺干细胞向胰岛样细胞团的分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前由于胰岛来源匮乏,使得胰岛细胞移植治疗糖尿病无法满足临床需求,故体外将胰腺干细胞诱导分化为胰岛成为研究焦点。目的:于体外将小鼠胰腺干细胞诱导成胰岛样细胞团并对其进行相关检测,探寻一种胰腺干细胞体外诱导分化成胰岛及鉴定的技术和方法。方法:体外获得纯化的小鼠胰腺干细胞,采用联合诱导剂对其进行成胰岛方向的诱导分化,并对诱导形成的胰岛样细胞团进行形态学观察、双硫腙染色、RT-PCR和Western blot检测。结果与结论:实验通过细胞形态学和细胞生长特性的观察以及免疫细胞化学染色证实体外成功获得了小鼠胰腺干细胞,采用联合诱导剂将其诱导成胰岛样结构,呈球形,以较细长的蒂部与瓶底连接,双硫腙染色将其染成铁红色。RT-PCR和Western blot法可分别检测到胰岛样细胞团的胰岛素mRNA和胰岛素蛋白。结果证实小鼠胰腺干细胞可体外诱导分化成含β细胞的胰岛样细胞团。
  • 小分子干扰RNA介导的RhoA沉默优化胎肝干细胞培养 免费阅读 收费下载
  • 背景:细胞移植治疗是目前的研究热点之一,寻找良好的细胞来源并有效扩增,是大量临床应用的基础。目的:通过沉默RhoA基因优化胎肝干细胞培养方法。方法:体外培养胎肝干细胞,经小分子干扰RNA转染以沉默RhoA基因表达,分为3组:A组为干细胞组,B组为经随机打乱顺序的小分子干扰RNA转染干细胞组,C组为经小分子干扰RNA转染的干细胞组。应用反转录-聚合酶链反应、Western blot法检测胎肝干细胞在转染前后RhoA基因和蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝比色法观察细胞生长的优化作用;流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果与结论:转染小分子干扰RNA后C组与A、B组相比,RhoA基因和蛋白表达量明显降低(P〈0.05),细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多,各组间差异有显著性意义(P〈0.05)。提示通过沉默RhoA基因的方法可以促进胎肝干细胞增殖,对其培养有优化作用。
  • Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控 免费阅读 收费下载
  • 背景:Dlx2基因在颅神经嵴细胞迁徙进入第一鳃弓过程和颅颌面骨骼发育中起重要作用,但Dlx2基因对成骨细胞分化过程中细胞凋亡和细胞周期调控的影响尚未见报道。目的:观察Dlx2基因过表达对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中细胞凋亡和细胞周期调控的影响。方法:构建反转录病毒pMSCV-puro-Dlx2并转染矿化诱导液培养下的MC3T3-E1细胞,构建稳定过表达Dlx2基因的细胞系MC3T3-E1-Dlx2。RT-PCR和Western blot验证Dlx2基因过表达细胞系的建立。Annexin V/PI双染色后流式细胞分选检测细胞凋亡,PI/RNase双染色后流式细胞分选检测细胞周期变化。结果与结论:实验成功构建稳定过表达Dlx2基因的细胞系MC3T3-E1-Dlx2。发现Dlx2基因过表达促进细胞凋亡(P〈0.05),同时阻滞细胞周期于G1/G0期(P〈0.05),减低细胞增殖性,促进细胞分化行使功能。
  • 乙醛脱氢酶活性检测子宫内膜干细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:人子宫内膜中存在干细胞特性的细胞,但特异性标志物尚未找到,导致此类细胞很难被分离。目的:分析乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)活性检测能否分选出子宫内膜干细胞。方法:采用机械和酶消化相结合方法分离人子宫内膜细胞,用两次滤网方法分离出基质细胞和上皮细胞,根据乙醛脱氢酶活性采用流式细胞仪分选出ALDHhigh细胞和ALDHlow细胞,用有限稀释法培养细胞,观察细胞形态及生长特性;采用流式细胞仪鉴定细胞c-kit,CD90,CD73及CD29的表达。结果与结论:基质细胞中ALDHhigh细胞占(1.88±0.17)%,经过15d的原代培养后,ALDHlow细胞克隆形成率达(1.06±0.34)%,ALDHhigh细胞克隆形成率达(4.50±0.82)%,ALDHhigh细胞集落形成率较ALDHlow细胞高(P〈0.05),同时ALDHhigh细胞大克隆数较ALDHlow高(P〈0.05);上皮细胞中未发现ALDHhigh细胞及克隆形成。子宫内膜集落形成细胞表现出c-kit、CD29、CD90、CD73阳性。说明ALDH活性检测对子宫内膜干细胞有一定的分选作用。
  • 人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒表达载体转染兔骨髓间充质干细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:采用GatewayTM技术构建腺病毒载体,显著弥补了外源性细胞因子局部应用的缺陷。目的:观察人骨形态发生蛋白2重组腺病毒表达载体(Ad-BMP-2/GFP)转染兔骨髓间充质干细胞后骨形态发生蛋白2的表达情况。方法:密度梯度离心联合贴壁培养法,分离、培养、纯化兔骨髓间充质干细胞;GatewayTM技术构建的Ad-BMP-2/GFP腺病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞。结果与结论:RT-PCR检测转染诱导后的细胞表达成骨细胞特异性产物骨钙素;转染后兔骨髓间充质干细胞在mRNA水平和蛋白水平均有人骨形态发生蛋白2的表达。结果表明构建的Ad-BMP-2/GFP可高效转染兔骨髓间充质干细胞,骨形态发生蛋白2在细胞中能高效表达。
  • 5-氟尿嘧啶对乳腺癌MCF7细胞中干细胞相关基因Oct4、Bmi-1表达的影响 免费阅读 收费下载
  • 背景:国内外研究证明乳腺癌干细胞可能是起始乳腺癌生长及辅助治疗后复发和远处转移的根源。目的:观察5-氟尿嘧啶对人乳腺癌MCF7细胞Oct4、Bmi-1表达的影响。方法:应用0.1mg/L5-氟尿嘧啶处理MCF7,RT-PCR检测处理前G0及处理后6代细胞G1~G6中Oct4、Bmi-1 mRNA的表达,免疫细胞化学检测处理前G0、G1~G5中Oct4的表达。结果与结论:5-氟尿嘧啶处理后,Oct4、Bmi-1 mRNA表达水平在G3和G5均较处理前明显增高,OCT4蛋白表达呈现出降低-升高-更高-降低-升高的趋势。提示MCF7中可能存在肿瘤干细胞样细胞;5-氟尿嘧啶可能诱导MCF7中肿瘤干细胞样细胞的数量或比例增加。
  • 间充质干细胞靶向转运胸苷激酶基因联合更昔洛韦杀伤鼻咽癌细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:研究证实,间充质干细胞能通过基因修饰成为肿瘤治疗的靶向载体。目的:观察转染胸苷激酶基因的胸苷激酶-间充质干细胞联合更昔洛韦对鼻咽癌细胞的靶向杀伤作用。方法:应用LipofectamineTM2000将表达胸苷激酶基因的重组质粒pGL3-EGFP-胸苷激酶转染至SD大鼠间充质干细胞,观察其增殖能力。应用Transwell小室观察胸苷激酶-间充质干细胞的归巢特性;将胸苷激酶-间充质干细胞植入裸鼠,观察其致瘤性;用胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦干预人鼻咽癌细胞5-8F,观察其对细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果与结论:荧光显微镜观察及RT-PCR检测结果提示实验成功将胸苷激酶基因转染至间充质干细胞,CCK-8检测结果显示胸苷激酶-间充质干细胞与间充质干细胞增殖能力差异无显著性意义(P〉0.05)。Transwell小室迁移实验显示胸苷激酶-间充质干细胞具有归巢特性,裸鼠移植瘤实验显示胸苷激酶-间充质干细胞无致瘤性。CCK-8检测检测发现胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦具有旁观者效应,可明显降低5-8F的生存率(P〈0.01)。提示胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦对鼻咽癌细胞具有靶向迁移及杀伤作用,间充质干细胞可作为治疗鼻咽癌的理想靶向转运载体。
  • 骨髓间充质干细胞移植影响慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区Nogo-A、NgR的表达 免费阅读 收费下载
  • 背景:骨髓间充质干细胞移植可降低脊髓损伤及脑梗死大鼠的Nogo-A及NgR的表达。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区Nogo-A及NgR蛋白的表达。方法:将30只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组及骨髓间充质干细胞组,后2组采用双侧颈总动脉永久结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,骨髓间充质干细胞组在建模7d后尾静脉注射移植用ficoll密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞1×107个。结果与结论:与假手术组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P〈0.01),穿过原平台位置次数明显减少(P〈0.01),海马中Nogo-A与NgR蛋白表达明显增加(P〈0.05);而与模型组比较,骨髓间充质干细胞组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P〈0.01),穿过原平台位置次数明显增加(P〈0.05),海马组织中Nogo-A及NgR表达明显减少(P〈0.05)。说明骨髓间充质干细胞移植具有保护慢性脑缺血大鼠空间学习与记忆能力的作用,其作用可能与降低Nogo-A及NgR蛋白表达有关。
  • 人脐带源间充质干细胞移植改善四氯化碳诱导肝硬化大鼠的肝纤维化 免费阅读 收费下载
  • 背景:干细胞移植作为一种全新的肝硬化治疗方法的可行性和有效性,在国内外文献中报道极少。目的:观察人脐带源间充质干细胞移植对四氯化碳诱导肝硬化大鼠肝纤维化的影响。方法:32只Wistar大鼠随机分为2组,对照组经尾静脉内注射生理盐水,肝硬化组采用四氯化碳植物油皮下注射8周制成肝硬化大鼠模型,再随机分为3组,盐水对照组、人脐带源间充质干细胞移植组分别经尾静脉内注射生理盐水和人脐带源间充质干细胞混悬液,8周肝硬化组无其他干预。结果与结论:对照组血清碱性磷酸酶水平明显低于其他3组(P〈0.05);人脐带源间充质干细胞移植组血清白蛋白和胆固醇水平与对照鼠相近(P〉0.05),与8周肝硬化组和盐水对照组相比明显升高(P〈0.05)。血清碱性磷酸酶水平也出现了明显下降(P〈0.05)。肝硬化8周组大鼠肝组织中有大量胶原纤维增生并形成假小叶;盐水对照组与肝硬化8周组相似;仅在人脐带源间充质干细胞移植组大鼠肝中观察到散在的绿色抗人抗核抗体阳性细胞,肝组织中胶原纤维的量明显小于盐水对照组。提示经尾静脉移植人脐带源间充质干细胞,可明显改善四氯化碳诱导肝硬化大鼠的肝纤维化程度。
  • 腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死 免费阅读 收费下载
  • 背景:骨髓间充质干细胞可以分化为心肌细胞,促进血管再生,但在移植早期其自身分泌的细胞因子不足以维持良好的分化和再生。目的:验证腺病毒介导的肝细胞生长因子和血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植对新西兰兔梗死心肌组织的修复重建和血管再生的影响。方法:腺病毒介导肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染BrdU标记的新西兰兔骨髓间充质干细胞。取新西兰兔50只建立急性心肌梗死模型,4周后随机分为5组,分别于梗死心肌内注射:①骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子。②骨髓间充质干细胞/Ad.肝细胞生长因子。③骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子。④骨髓间充质干细胞。⑤对照组注射等量无血清IMDM培养液。移植4周后观察移植细胞的分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。结果与结论:除对照组外,其余4组兔心功能都较移植前有明显改善(P〈0.05),其中移植双基因转染骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组兔的心功能改善程度要明显高于其他3组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗死区域的新生毛细血管。与对照组比较,其余4组都有明显的血管新生(P〈0.05),而以骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组最显著。提示肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植于梗死心肌可以促进心肌再生和新生血管的形成,明显改善心功能。
  • 神经节苷脂联合神经干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用 免费阅读 收费下载
  • 背景:应用神经干细胞移植治疗脑损伤后神经功能障碍的实验研究是目前的热点。目的:观察神经节苷脂联合神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠海马神经元的影响。方法:健康Wistar大鼠66只,采用改进Feeney法制作创伤性脑损伤致海马神经元损伤模型,存活的60只大鼠伤后24h给予相应治疗随机分为3组:创伤性脑损伤组注射1mL DMEM/F12培养液;神经干细胞组注射1×1010L-1神经干细胞悬液;神经干细胞+神经节苷脂组注射1×1010L-1神经干细胞悬液后经腹腔注射30mg/kg神经节苷脂水溶液,1次/d,连续3d。结果与结论:荧光显微镜观察PKH26标记的神经干细胞呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;PKH26标记神经干细胞的阳性率为95%。各组平均潜伏时间均逐渐缩短,神经干细胞+神经节苷脂组3~5d时平均潜伏时间较神经干细胞组缩短(P〈0.05),较创伤性脑损伤组明显缩短(P〈0.01);神经干细胞+神经节苷脂组穿越平台次数及在目标象限游泳距离与总距离百分比均高于其他两组(P〈0.05)。PKH26阳性细胞和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量及脑源性神经营养因子mRNA的表达神经干细胞+神经节苷脂组多于神经干细胞组,神经干细胞组多于创伤性脑损伤组(P〈0.05)。提示神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠海马神经元有保护作用,联合应用神经节苷脂有协同效果。
  • 坐骨神经损伤大鼠模型鞘内移植神经干细胞后脊髓背角和背根神经节脑源性神经营养因子的表达 免费阅读 收费下载
  • 背景:坐骨神经损伤模型可测试伤害性的热刺激和机械刺激所引发的痛觉过敏及冷、触觉异常。目的:观察坐骨神经损伤模型大鼠鞘内移植神经干细胞后脊髓背角和背根神经节脑源性神经营养因子的表达。方法:72只SD大鼠随机均分为假手术组、对照组和实验组。对照组和实验组制作坐骨神经损伤模型,假手术组仅暴露坐骨神经,不结扎。分别于造模后第3,10天进行鞘内移植,实验组注入30μL的神经干细胞悬液,空白组和对照组注入30μL的细胞培养液。结果与结论:与假手术组相比,对照组和实验组移植后3d机械痛阈和热痛阈逐渐降低,至移植后7d降低至最低点(P〈0.01),于移植后21d恢复至移植前水平;实验组移植后7,14d机械痛阈和热痛阈较对照组明显上升(P〈0.01)。与对照组相比,假手术组移植后7,14,21d各组大鼠脑源性神经营养因子的表达呈低水平(P〈0.05);移植后14,21d,实验组脑源性神经营养因子的表达量高于对照组(P〈0.05)。提示鞘内移植神经干细胞可提高脊髓背角和背根神经节中脑源性神经营养因子的表达。从而抑制了周围神经损伤产生的神经病理性疼痛。
  • 异种脐血干细胞移植胶原性关节炎小鼠Bcl-2和Bax的表达(英文) 免费阅读 收费下载
  • 背景:类风湿性关节炎的发生发展与滑膜细胞及淋巴细胞的增殖与凋亡不平衡密切相关,其滑膜细胞存在细胞凋亡过程的异常。目的:观察异种、异基因双份脐血干细胞移植对Ⅱ型胶原性关节炎小鼠Bcl-2和Bax表达的影响。方法:弗氏完全佐剂+Ⅱ型胶原诱导C57BL/6(H-2b)小鼠,建立Ⅱ型胶原性关节炎小鼠模型。小鼠二次免疫接种后第2天,模型组、正常对照组尾静脉注射生理盐水,细胞移植组将脐血造血干细胞注入小鼠尾静脉内(其中单份剂量2×106/50g;双份剂量:每份1×106/50g,共2×106/50g)。甲氨喋呤阳性对照组小鼠灌胃甲氨蝶呤,每次0.0175g/kg,每5天1次,共6次。结果与结论:移植后第42天全部处死动物取膝及肘以下关节组织,病理组织学显示正常对照组关节面光滑,滑膜层未见炎性细胞浸润,软骨细胞形态正常;模型组滑膜组织高度增生,大量的炎性细胞浸润,软骨面破坏;甲氨蝶呤阳性对照组、单份脐血造血干细胞移植组滑膜组织可见轻度增生,少量炎性细胞浸润,双份脐血造血干细胞移植组关节软骨表面光滑,未见破坏,有极少量炎性细胞浸润。免疫组织化学检测显示,双份脐血造血干细胞移植组Bax、Bcl-2的表达低于单份脐血造血干细胞移植治疗组(P〈0.05);与正常对照组比较,差异无显著性意义(P〉0.05)。结果说明双份脐血干细胞在一定数量及作用时间内可诱导Ⅱ型胶原性关节炎小鼠滑膜细胞凋亡,对滑膜组织损伤起保护作用。
  • 5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化及黄芪甲苷的协同作用(英文) 免费阅读 收费下载
  • 背景:大多学者使用5-氮胞苷作为诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化。目的:观察联合应用黄芪甲苷及5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化中心肌细胞相关受体的表达。方法:选用生长良好的第3代骨髓间充质干细胞,分为4组。Ⅰ组:仅更换L-DMEM培养液;Ⅱ组:100mg/L黄芪甲苷+5μmol/L5-氮胞苷诱导24h后,更换L-DMEM培养液。Ⅲ组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后,更换L-DMEM培养液;Ⅳ组:5μmol/L5-氮胞苷孵育24h后,更换L-DMEM培养液。各组均每3d换液1次,诱导30d后对分化细胞进行鉴定。结果与结论:①Ⅲ组、Ⅳ组及Ⅱ组诱导后细胞心肌细胞特异性蛋白Nkx2.5、cTnT及Desmin的表达均为阳性,与Ⅰ组比较,差异有非常显著性意义(P〈0.01)。Ⅱ组及Ⅲ组诱导后2周,镜下见cTnT、Desmin表达数量高于Ⅳ组(P〈0.01)。Nkx2.5在两组表达亦高于Ⅳ组,其中Ⅱ组与Ⅳ组比较,差异有极显著性意义(P〈0.01),Ⅲ组与Ⅳ组比较,差异有显著性意义(P〈0.05)。Ⅰ组无上述蛋白的阳性表达。②诱导后2周,镜下可见Ⅱ组、Ⅲ组细胞出现心肌细胞样的节律性跳动,证明部分细胞在诱导因素的作用下,已向心肌细胞分化。结果表明用100mg/L黄芪甲苷+5μmol/L5-氮胞苷联合诱导可产生与10μmol/L5-氮胞苷相似的诱导效果,这可能与黄芪甲苷对细胞具有保护作用,促血管内皮细胞增殖作用,增强细胞对5-氮胞苷细胞毒性的耐受,上调心肌特异性蛋白的表达有关。
  • 微小RNA-155在小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中表达的差异 免费阅读 收费下载
  • 背景:目前对微小RNA-155在巨噬细胞中的表达和功能的研究还集中在总体单核巨噬细胞水平。目的:了解小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中微小RNA-155表达的差异。方法:用100U/mL干扰素γ和5μg/L脂多糖诱导骨髓细胞来源的巨噬细胞向M1分化,用10μg/L白细胞介素4诱导出M2巨噬细胞。结果与结论:流式细胞检测显示实验诱导的M1和M2巨噬细胞纯度分别达91%和95%。RT-PCR检测显示诱导型一氧化氮合酶mRNA在M1巨噬细胞中高表达,在M2中则基本不表达;而Ⅰ型精氨酸酶、发现于炎症区域1mRNA在M2中高表达,在M1中则表达较低;炎症因子肿瘤坏死因子αmRNA在M1中的表达明显高于M2,相反白细胞介素10mRNA在M2中的表达高于M1(P〈0.05)。实时荧光定量PCR检测显示M1巨噬细胞中微小RNA-155的表达量明显高于M2(P〈0.05)。提示微小RNA-155可作为鉴别M1,M2巨噬细胞的标志。
  • 流体切应力与内皮祖细胞铜锌超氧化物歧化酶基因表达及活性 免费阅读 收费下载
  • 背景:流体切应力是调控内皮祖细胞的重要非药理学手段,但目前其对内皮祖细胞抗氧化功能的作用尚不清楚。目的:观察不同切应力对内皮祖细胞铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-superoxide dismutase,Cu/Zn-SOD)基因表达和活性的影响,以探讨流体切应力对内皮祖细胞抗氧化功能的调节作用。方法:健康成人外周血的单个核细胞诱导分化为内皮祖细胞,分为静态组、低切应力组、中切应力组和高切应力组4组进行观察。结果与结论:外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典形的"纺锤样"梭形细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和VWF免疫荧光抗体染色均为阳性。各切应力组内皮祖细胞CuZn-SOD活性均高于静态组,并且切应力越大,内皮祖细胞Cu/Zn-SOD分泌水平越高。荧光定量RT-PCR表明,切应力处理能上调内皮祖细胞CuZn-SOD mRNA表达,并且切应力水平越高,CuZn-SOD mRNA表达越强。说明切应力能上调内皮祖细胞Cu/Zn-SOD基因表达,增强内皮祖细胞Cu/Zn-SOD活性,提高内皮祖细胞的抗氧化活性。因此,在生理范围内增加体外切应力,能上调内皮祖细胞的功能活性。
  • 免疫荧光动态监测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合蛋白变化 免费阅读 收费下载
  • 背景:实时定量RT-PCR只能间接地反映融合基因表达量的变化,并不能在细胞原位直观反映急性早幼粒细胞白血病患者细胞内PML-RARα融合蛋白在全反式维甲酸治疗前后的相对表达量。目的:探讨免疫荧光技术检测融合蛋白PML-RARα表达的动态变化在判断急性早幼粒细胞白血病的全反式维甲酸早期治疗的效果。方法:应用免疫荧光技术检测全反式维甲酸干预的急性早幼粒细胞白血病经典细胞株NB4细胞或来源于急性早幼粒细胞白血病患者的NB4细胞PML-RARα蛋白的表达,以实时定量RT-PCR检测细胞PML-RARα mRNA的表达作为对照,以评价免疫荧光技术的可靠性。结果与结论:免疫荧光染色显示,无论是体外培养的NB4细胞,还是患者骨髓内的NB4细胞,在全反式维甲酸干预前细胞内均可见大量红色的融合蛋白PML-RARα,大小不均一、形状不规则,全反式维甲酸干预后,NB4细胞内红色的融合蛋白PML-RARα形状逐渐规则,弥散状态变为散在分布,且随着全反式维甲酸干预时间的延长,原有的弥散状态逐渐消失。实时定量RT-PCR测得的PML-RARα mRNA的变化趋势与免疫荧光相一致。说明免疫荧光技术检测PML-RARα能够更为直观地判断全反式维甲酸的治疗效果。
  • 明胶法富集外周血单核细胞并刺激其成熟为树突状细胞 免费阅读 收费下载
  • 背景:如何简易高效分离纯化人外周血单核细胞并刺激成熟为树突状细胞,未见标准化操作流程。目的:观察明胶法分离外周血单核细胞的效率以及将分离出的单核细胞刺激成熟为树突状细胞的表型特征,并与普通塑料黏附法对比。方法:使用人淋巴细胞分离液分离人外周血得到单个核细胞,根据培养瓶是否进行明胶包被分为明胶包被组和普通塑料组。均分单个核细胞,按组别分离获得单核细胞并诱导刺激成熟为树突状细胞。计数各组所得单核细胞数,使用流式细胞仪检测2组单核细胞的CD14阳性率、T、B淋巴细胞污染率、树突状细胞非成熟期和成熟期CD1a,CD83的表达情况,锥虫蓝拒染法计算细胞活率,观察对比2组血小板污染情况。结果与结论:明胶包被组单核细胞数及CD14阳性率显著高于普通塑料组(P〈0.05),普通塑料组淋巴细胞污染率显著高于明胶包被组(P〈0.05)。2组细胞活率及树突状细胞表型差异无显著性意义(P〉0.05)。明胶包被组血小板污染率低于普通塑料组。提示明胶法可以简单高效分离出单核细胞并成功刺激成熟为树突状细胞。
  • 碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA体外定向培养骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化 免费阅读 收费下载
  • 背景:采用中药作为诱导剂对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向诱导分化是否会有效果呢?目的:验证碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入中药丹参酮ⅡA体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的效应。方法:采用Percoll分离液密度梯度离心法获取骨髓间充质干细胞,取第3代细胞利用碱性成纤维细胞生长因子联合丹参酮ⅡA诱导其向神经元样细胞分化,全反式维甲酸无血清培养基诱导液及不进行诱导的细胞做为对照。结果与结论:①骨髓间充质干细胞能稳定表达间质细胞特异性的标记物CD44,表达阳性率为(91.00±1.58)%,但不表达CD34、CD45,流式细胞学检测其纯度高达95.5%。②诱导分化后经扫描电镜检测可观察到典型的神经元样细胞结构;免疫组织化学检测细胞表达神经元特导性烯醇化酶,神经元特导性烯醇化酶阳性率为(75.60±2.31)%,Nestin呈一过性表达增加后随着诱导时间延长逐渐减低至阴性,不表达神经胶质纤维酸性蛋白。说明经碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA能高效地定向诱导神经元样细胞的分化。
  • 间充质干细胞移植治疗多发性硬化的研究进展 免费阅读 收费下载
  • 背景:多发性硬化是中枢神经系统白质脱髓鞘性疾病,其确切的病因和发病机制尚不清楚。其临床表现复杂多变,传统治疗均不能延缓疾病的进程。目的:综述间充质干细胞移植治疗多发性硬化的研究进展,并提出目前间充质干细胞使用方面许多亟待解决的问题。方法:以"mesenchymal stem cells,encephalomyelitis,autoimmune,experimental,multiple sclerosis"为英文检索词,检索Kjmed数据库中2000/2011发表的相关文章。纳入与间充质干细胞治疗多发性硬化研究相关的文献。结果与结论:共检索到104篇文献,排除无关重复的文献,保留33篇进行综述。目前研究证实间充质干细胞是一种具有免疫调节及神经修复功能的多能干细胞,同时间充质干细胞在治疗多发性硬化方面显示了初步的治疗效果。
  • 干细胞:许旺细胞的新来源 免费阅读 收费下载
  • 背景:许旺细胞对神经系统损伤的修复与再生有着重要作用。然而,许旺细胞不易直接获取,使其在临床上的应用受到限制。目的:综述神经损伤及修复过程、许旺细胞的作用以及各种干细胞分化为许旺细胞的潜能。方法:使用计算机检索Pubmed数据库2000/2011有关许旺细胞参与神经损伤的修复、干细胞分化为许旺细胞验证及应用的文献,检索词为"Schwann cells,nervous system,stem cells"。排除重复性研究,对资料进行初审,并查看每篇文献及其引文。根据纳入标准,收集到29篇相关文献。结果与结论:许旺细胞通过分泌各种细胞因子和营养因子为受损的神经营造了适于修复与再生的微环境,从而促进轴突再生;同时通过增殖及分化等机制围绕新生轴突形成髓鞘。神经修复需要大量许旺细胞的参与,而许旺细胞不易直接获取。研究表明,各种干细胞,包括胚胎干细胞、间充质干细胞、神经嵴干细胞和嗅鞘细胞,能在一定诱导条件下分化为许旺细胞样细胞,为神经系统损伤的治疗带来了新的希望。其中,间充质干细胞的研究备受关注。
  • 自体造血干细胞移植联合异体细胞因子诱导的杀伤细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病2例 免费阅读 收费下载
  • 背景:自体造血干细胞移植治疗高危急性髓系白血病的复发率极高,如何降低移植后复发率至今仍是难点。目的:观察自体造血干细胞移植联合异体细胞因子活化杀伤(CIK)细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病的临床效果。方法:2例高危急性髓系白血病患者,经诱导化疗及巩固强化治疗后,在第1次缓解期行自体造血干细胞移植,移植后1个月给予三四疗程异体CIK细胞输注,每隔半年1个疗程,每疗程分5次输注异体CIK细胞,每隔1日输注1次。每次输注CIK细胞前半小时内给予皮下注射白细胞介素2,第1次输注后隔日皮下注射白细胞介素2,半年后减为隔2日1次,1年后减为隔3日1次,1年半后减为1次/周,维持半年后结束,预防白血病复发。结果与结论:2例患者自体造血干细胞移植后输注异体CIK细胞及皮下注射白细胞介素2无发热、寒战、皮疹等不良反应,无骨髓抑制及移植物抗宿主反应,治疗安全。2例患者持续缓解时间分别为20个月及2年,目前仍无复发。首次得出对于无合适供者的高危急性髓系白血病患者,在缓解后可行自体造血干细胞移植联合异体CIK细胞及白细胞介素2治疗,有机会获得长期无病生存。
  • 掌握PRISMA声明写作指南是向SCI期刊投稿的第一步 免费阅读 免费下载
  • 1什么是PRISMA声明?PRISMA(Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analvses,系统综述和Meta分析优先报告的条目)声明由27个条目组成的清单(以及一个四阶段的流程图组成。该声明的目的在于帮助作者改进系统综述
  • 女人的春天(王莉莎)
    [研究与报告]
    绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后在多脏器的分布(金善丰 陈志耀 黄鹤光)
    氯甲基苯甲酰氨标记骨髓间充质干细胞在免疫介导骨髓衰竭小鼠模型体内的归巢(王洋[1,2] 肖扬[2] 李力[2] 蒋祖军[2] 李勇华[2] 庞妍[2] 宋佳音[2])
    17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导调控(韩娜[1] 寇玉辉[2] 王天兵[2] 殷晓峰[2] 何培英[1] 张培训[2])
    低频振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损核因子受体激活剂/核因子受体激活剂配体/骨保护素通路变化的体内实验(杜广宇 赵文志 何盛为 米立东 张路 孙传秀 孙雪刚)
    心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞向心肌组织样结构的分化(赵文婧 李琴 吴卓 陈维平)
    大鼠骨髓内皮祖细胞的分离培养与鉴定(王丽[1] 张会峰[2] 袁慧娟[2] 马跃华[2] 汪艳芳[2] 虎子颖[2] 苏永[2] 赵志刚[3])
    体外诱导人骨髓间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化(陈寅[1,2] 马南[1] 梅举[1] 肖海波[1] 陆善伟[2] 徐怀阳[2] 钟竑[1,2])
    人骨髓基质干细胞的单细胞克隆培养与鉴定(滕勇[1] 徐建丽[2] 李旭升[1] 胡蕴玉[3] 王臻[3])
    骨髓间充质干细胞在急性心肌梗死后心室重构中的应用(虞桂平[1] 沈振亚[2] 余云生[2] 郭世强[2] 陈一欢[2] 胡雁秋[2])
    富集骨髓间充质干细胞用于兔腰椎横突间的融合(孙伟[1] 赵杰[1] 郭开今[2] 袁峰[2])
    本期专题:干细胞增殖及分化调控
    体外模拟干细胞微环境培养扩增脐血及脐带基质源性间充质干细胞(邱云 郑青 萧树东 汪铮)
    重组人促红细胞生成素干预人源羊水干细胞向心肌前体细胞的分化(刘燕[1] 李法琦[1] 张彬[2] 骆建平[3])
    [技术与方法]
    人脐带间充质干细胞影响子宫内膜异位症细胞的增殖及凋亡(徐丽南[1] 徐冰南[2] 陈淑琴[1] 何科[1] 蔡坚[1])
    人脐带间质干细胞培养上清液可下调肝星状细胞转化生长因子β的表达(李明亮 姚志成 钟跃思 林楠 许瑞云 邓美海)
    人脐血间充质干细胞的生物学特性及其成骨成脂肪分化(英文)(张才龙[1] 那娜[2] 张积华[3] 孙康[1] 田少奇[1] 夏长所[1])
    羊水间充质干细胞体外培养方案的优化及生物学特性(王培培[1] 郑玉宝[1] 彭亮[1] 于君[2] 高志良[1])
    CF-1小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备(卢海[1] 张志[2] 赵毅超[1] 饶小惠[1] 江金群[2] 孟镔[3] 艾民[4] 潘明新[1] 高毅[1])
    人外周血单个核细胞向肝样细胞转化的体外诱导培养方法(王凯 朱英 刘晶 赵钢)
    尿酸对人胎盘间充质干细胞增殖的影响(崔晶[1] 杨乃龙[1] 王静怡[2])
    体外诱导胰腺干细胞向胰岛样细胞团的分化(岑妍慧 谢小薰 陈维平 何国珍 黄波 郭文文 肖燕子)
    小分子干扰RNA介导的RhoA沉默优化胎肝干细胞培养(赵戈 刘卫辉 王涛 王兴 夏宁 杨平 寇明文 张宁 陶开山)
    Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控(孙昊 王旭东 代杰文 卢境婷 沈国芳)
    乙醛脱氢酶活性检测子宫内膜干细胞(张晓露 何援利 马颖)
    人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒表达载体转染兔骨髓间充质干细胞(何春耒 姬广林 刘午阳 吴东宝 何澄 王茂源 叶勇军 莫建文 高辉)
    5-氟尿嘧啶对乳腺癌MCF7细胞中干细胞相关基因Oct4、Bmi-1表达的影响(燕丽[1] 史立纲[1] 徐正顺[1] 李惠翔[2])
    间充质干细胞靶向转运胸苷激酶基因联合更昔洛韦杀伤鼻咽癌细胞(钟品能 文忠 申聪香 王海丽 王军旗)
    骨髓间充质干细胞移植影响慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区Nogo-A、NgR的表达(王燕琳 闫禹 宋波 张惠莉 龚光明 陈思 方慧 许予明)
    人脐带源间充质干细胞移植改善四氯化碳诱导肝硬化大鼠的肝纤维化(刘英[1] 施占立[2] 赵宗泽[2] 郭胜男[1] 徐金凯[1] 李东杰[2])
    腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死(陈国祥[1] 华平[2] 熊利华[2] 陈矩[2] 潘德强[1])
    神经节苷脂联合神经干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用(李红星[1] 赵宗茂[2] 金耀东[3] 王静[4] 苑国富[5])
    坐骨神经损伤大鼠模型鞘内移植神经干细胞后脊髓背角和背根神经节脑源性神经营养因子的表达(张民皓[1] 胡益民[1] 张红[2] 胡玉萍[1] 刘清珍[1] 王洪超[2] 李伟彦[1])
    异种脐血干细胞移植胶原性关节炎小鼠Bcl-2和Bax的表达(英文)(牛广华 高玉洁 孙旭 都静 明彩荣 高明利)
    5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化及黄芪甲苷的协同作用(英文)(冼绍祥 杨忠奇 秦佳佳 黄习文 孙静和)
    微小RNA-155在小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中表达的差异(梁艳冰 王中华 唐皓 马中富)
    流体切应力与内皮祖细胞铜锌超氧化物歧化酶基因表达及活性(杨震[1] 赖光华[1] 夏文豪[1] 罗初凡[2] 王洁梅[1] 陈龙[1] 廖新学[1] 靳亚飞[1] 陶军[3])
    免疫荧光动态监测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合蛋白变化(仇飞 张辉 赵旭杰 朱雪花 王侃侃 张济)
    [学术探讨]
    明胶法富集外周血单核细胞并刺激其成熟为树突状细胞(马明瑛[1] 靳志平[2] 王伟[2] 郭智[2] 吴彬[3] 谭晓华[4])
    碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA体外定向培养骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化(李玉美[1] 余德立[2] 刘来兵[3] 余资江[1])
    间充质干细胞移植治疗多发性硬化的研究进展(刘莹 侯宗柳)
    干细胞:许旺细胞的新来源(赵安东[1] 蔡飒[2] 吕艳思[1] 潘宇[3] 林慧婷[1])
    [临床实践]
    自体造血干细胞移植联合异体细胞因子诱导的杀伤细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病2例(涂三芳 宋朝阳 李玉华 郭坤元 黄宇贤)

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    《中国组织工程研究》封面

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