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文献检索:
  • 2013,一个临床医生向全球同仁展示自己的优秀窗口 免费阅读 下载全文
  • 展示平台的介绍--①她是美国科学促进会(AAAS)主办的一项全球的封学新闻服务。②她是《科学》杂志及CELL、BMJ、JAMA、LANCET等国际顶级期刊文章的学术新闻发布平台。③她有着强大的学术影响力和传播度,尤其是个人文章和学术成绩新闻,将大幅度提高在Google的被检索率和文章被国际同行引用的机会!④在此平台发布后的文章,均被“生物谷”学术导航平台收录,在中国学术同行间传播。
  • 2013,优秀临床医生和临床科室如何提高临床科研水平? 免费阅读 下载全文
  • ★如何衡量一个临床医七是优秀的? ★如何衡量一个临床科室的治疗技术是先进和规范的? ★如何证实你们所开展的临床治疗项目是创新的? ★面对临床医学高标准要求的形式,您和您的科室做过几种痛例的国际临床科研设计及注册? ★临床试验方案的设计与注册--。是评价临床实践工作的客观标准!
  • 二月花语:光辉的繁丁香
  • 打开电脑搜天下,2月的生日花里竟然有紫丁香?实在难以想出,在北方料峭寒风的2月,谁能够淘到一束紫丁香送给过生日的朋友?实在没有想到,“光辉”是紫丁香的花语?可屏幕上显示的视觉上看到的实实在在就是如此呀!那么,这里呈现的2月的紫丁香,是我心底的那株紫丁香吗?属于我的紫丁香该是啥模样?
  • β射线照射皮肤损伤创面注射骨髓间充质干细胞后的创面愈合
  • 背景:13射线皮肤损伤创面难愈,尚无有效的治疗方法。目的:观察骨髓间充质干细胞对13射线皮肤损伤创面愈合的影响。方法:①选用SD雌性大鼠3只分离培养骨髓间充质干细胞,传代细胞生长至第5代,DAPI标记细胞,制备骨髓间充质干细胞悬液。②选3月龄清洁级SD雌性大鼠47只,随机分为3组:治疗组应用直线加速器产生的β射线(45Gy)单次照射大鼠臀部皮肤40rnm×30mm,建立急性深Ⅱ度β射线皮肤损伤动物模型,创面出现后将骨髓间充质干细胞悬液注入大鼠创面皮下及真皮层;对照组13射线照射同治疗组,创面出现后注射安慰剂,用法同治疗组。正常组为正常大鼠。光镜下观察治疗后1,2,3,4周各组大鼠创面组织病理学变化,免疫组织化学方法检测CD31、CK4、成纤维细胞生长因子含量的动态变化。结果与结论:治疗组创面愈合时间比对照组明显加快(P〈0.05)。治疗组注射骨髓间充质干细胞细胞悬液后1-4周CD31、CK4、成纤维细胞生长因子阳性细胞值明显高于对照组(P〈0.05)。证实骨髓间充质干细胞能促进β射线皮肤损伤创面的愈合,缩短创面愈合的时间。
  • 利用人骨髓基质干细胞构建组织工程心脏瓣膜的体外实验
  • 背景:目前临床应用的人工瓣膜,无论机械瓣还是生物瓣都存在着诸如易感染、出血和血栓形成并发症,因瓣口狭窄需再手术等自身难以克服的缺陷。理论上具有生物活性的组织工程心脏瓣膜可克服上述缺点,但种子细胞和瓣膜支架的选取尚存在争议。目的:探讨应用人骨髓基质干细胞及脱细胞猪主动脉瓣支架体外构建组织工程瓣膜的可行性。方法:采用去垢剂一核酸酶消化法处理,去除猪主动脉瓣叶细胞成分,获取施行简单先心病修补患者胸骨来源的骨髓基质干细胞,将其种植于脱细胞猪主动脉瓣支架共培养5d。结果与结论:流式细胞技术证实接种的种子细胞的表面抗原符合人骨髓基质干细胞的特征;光镜及电镜检查证实,猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全去除,获得完整无细胞的纤维网状支架;瓣叶去细胞前后的生物力学性能无明显变化;种植的人骨髓基质干细胞可在脱细胞猪主动脉瓣支架表面形成一层连续的细胞层;接种的人骨髓基质干细胞有向成纤维细胞分化的趋势。以上结果提示种植人骨髓基质干细胞于脱细胞猪主动脉瓣支架上,可构建出组织工程心脏瓣膜。
  • 骨髓间充质干细胞分泌基质细胞衍生因子1保护心肌细胞
  • 背景:有研究显示表达CXCR4的干细胞能够沿着基质细胞衍生因子1的浓度梯度迁移到心肌梗死部位再生心肌和血管而改善心脏的功能。目的:探索间充质干细胞通过其分泌的基质细胞衍生因子1对心肌细胞的保护作用。方法:收集培养2d的间充质干细胞条件培养基。在缺氧条件,利用基质细胞衍生因子1受体CXCR4阻断剂AMD3100或P13.K/Akt途径阻断剂LY294002预处理H9C2细胞后,利用AnnexinV/PI双标法流式细胞术分析间充质干细胞条件培养基作用下H9C2细胞凋亡的变化;Western blotting分析H9C2细胞磷酸化Akt蛋白的表达;RT-PCR分析间充质干细胞基质细胞衍生因子1的表达。结果与结论:RT-PCR结果显示间充质干细胞表达基质细胞衍生因子1,Westernblotting结果显示间充质干细胞条件培养基增加了H9C2细胞磷酸化Akl蛋白的水平。AnnexinV/P1分析发现间充质干细胞条件培养基明显降低了H9C2细胞缺氧复氧后的凋亡,且这种抗凋亡作用能被CXCR4阻断剂AMD3100或P13-K/Akt途径阻断剂LY294002所阻断。说明间充质干细胞通过其分泌的基质细胞衍生因子1通过激活P13-K/Akt途径保护H9C2细胞,增加H9C2细胞的幸存能力。
  • 自体骨髓间充质干细胞移植梗死心肌猪的心功能变化
  • 背景:干细胞移植可改善缺血性心肌血供并改善心功能。目的:进一步验证自体骨髓间充质干细胞在心肌梗死后的应用及效果评价。方法:15只健康太湖梅山猪通过冠脉栓塞建立心肌梗死模型。随机分为3组,每组5只,其中2组分别在心肌梗死后3h,2周行自体骨髓干细胞移植,模型组不移植细胞。行心脏超声观察心脏功能各指标的改变;并在不同时间点检测血清血管内皮生长因子值;在实验终点取大体标本并通过免疫组织化学检测移植细胞在心肌内定植及分化情况,检测心肌血管密度。结果与结论:心肌梗死3h组与模型组比较,射血分数、左室舒张期内径、左室收缩期内径各项心功能指标及心肌血管密度、不同时间点血清血管内皮生长因子水平差异无显著性意义。心肌梗死后2周移植组与模型组相比,心功能指标均有改善,心肌血管密度大于模型组,血清血管内皮生长因子水平明显高于较移植前(P〈0.05)。提示不同时间点心肌微环境对于骨髓来源的间充质干细胞分化及定植的影响,心肌梗死后急性期内局部微环境不利于移植细胞的存活,在瘢痕修复早期行骨髓干细胞移植对骨髓干细胞的分化和定植以及对心功能的改善有较好的效果。
  • 兔骨髓间充质干细胞的分离培养及成骨诱导
  • 背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,且可大量体外扩增培养,是重要的组织工程种子细胞。但尚无统一的体外培养及定向诱导方法。目的:探讨体外定向诱导兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的可行性。方法:应用密度梯度离心法从兔四肢骨中分离纯化间充质干细胞,应用密度为1.073g/mL的Percoll分离液,3000r/minx30min离心,区别于相关报道的Ficoll分离液,2000—2500r/min×(20—30)min离心以及全骨髓培养法体外扩增至第3代,分别在普通培养基(对照组)和成骨诱导培养基(实验组)中培养。结果与结论:成功获得大量高纯度骨髓间充质干细胞。经成骨诱导后,实验组骨钙素含量明显高于对照组(P〈0.05)。实验组碱性磷酸酶和钙结节染色阳性,对照组均阴性。结果表明使用密度梯度离心法可成功建立兔骨髓间充质干细胞的分离培养体系,骨髓间充质干细胞可定向诱导为成骨细胞。
  • 骨髓基质细胞-成骨细胞复合培养体系的建立
  • 背景:在骨修复和重建过程中,成骨细胞和骨髓基质细胞是主要功能细胞,二者存在着密切的功能联系。目的:通过骨髓基质细胞一成骨细胞共育体系的建立,观察共育体系中两种细胞之间的功能影响及生物学特点。方法:原代分离人骨髓基质细胞和人成骨细胞,将2种细胞置于Transwell共育环境中共同培养,建立人骨髓基质细胞一成骨细胞共育体系。分别采用MTT、丫啶橙染色、碱性磷酸酶活性检测等方法初步评价共育体系中两种细胞增殖、凋亡及功能改变情况。结果与结论:在复合培养体系中,骨髓基质细胞一成骨细胞共育体系能够促进成骨细胞的增殖与碱性磷酸酶的活性,同时抑制骨髓基质细胞的凋亡,促进骨髓基质细胞的趋化聚集。结果提示在复合培养体系中,骨髓基质细胞能够加速成骨细胞的增殖及成骨活性,另外成骨细胞也可减少骨髓基质细胞的凋亡,并加强其成骨性分化的作用。两者之间具有较为紧密的影响和功能联系。
  • 热休克汗腺细胞诱导人骨髓间充质干细胞的表型转化
  • 背景:未休克汗腺细胞与骨髓间充质干细胞的共培养和休克汗腺细胞与骨髓间充质干细胞的直接共培养均对骨髓间充质干细胞的表型改变无影响。目的:在体外建立热休克汗腺细胞模型和骨髓间充质干细胞与汗腺细胞间接共培养体系;分析共培养前后骨髓间充质干细胞的形态学、细胞表型的变化情况,探讨骨髓间充质干细胞向汗腺细胞分化的可行性。方法:体外分别分离培养、扩增并鉴定骨髓间充质干细胞和汗腺细胞,建立汗腺细胞体外热休克模型,继续孵育3-5d,收集上清液作为条件培养基对骨髓间充质干细胞分化诱导,对比共培养5,10d骨髓间充质干细胞形态学变化;应用免疫组织化学和流式细胞仪法检测对比共培养10d后骨髓间充质干细胞细胞表型的改变。结果与结论:①骨髓间充质干细胞表面标志CD29、CD44、CD105阳性,汗腺细胞表面标志CK7、CK8、CK18、CK19、CEA阳性。②骨髓间充质干细胞诱导分化后细胞表型的改变:被诱导的细胞中CEA、CK7、CK8和CKl9染色阳性,而对照组没有检测到CEA、CK7、CK8和CK19染色阳性的细胞;流式细胞仪检测CEA、CK7、CK8和CK19的阳性率分别是60.67%,53.34%,54.11%和58.62%。说明实验成功诱导骨髓间充质干细胞,并获得汗腺细胞表型;通过建立适当的体外汗腺诱导培养体系,中胚层的骨髓间充质干细胞可以通过跨胚层分化途径转变为汗腺细胞。
  • 髓核细胞诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向的分化
  • 背景:国内外已有很多文献相继报道了用骨髓间充质干细胞-藻酸盐复合植入材料来修复大鼠退变的腰椎间盘,但尚缺少对此复合物与正常髓核细胞之间的各项生物学指标的比较。目的:在Transwell非接触共培养条件下,研究髓核细胞对骨髓间充质干细胞的诱导作用。方法:全骨髓法培养大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定,取第3代骨髓间充质干细胞及髓核细胞复合藻酸盐接种于Transwell共培养系统中,上室接种骨髓间充质干细胞藻酸盐复合物,下室接种髓核细胞藻酸盐复合物,共培养7d后回收上层骨髓间充质干细胞。结果与结论:RT-PCR方法检测共培养组Ⅱ型胶原、Sox-9和多功能蛋白聚糖的mRNA表达均接近正常髓核细胞。说明共培养条件下髓核细胞能诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向分化。
  • 携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞及其成脂分化
  • 背景:胰岛素是成脂诱导剂的重要组成成分。然而胰岛素存在半衰期,会随着体内代谢不断灭活及降解,植入体内的细胞或材料无法像体外那样以更换培养液来达到目的。实验拟通过转染胰岛素基因,使转染后的干细胞稳定分泌胰岛素,促进其成脂分化。目的:探讨携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质=F细胞后对其成脂分化能力的影响。方法:取第3代人脐带间充质干细胞,以感染复数为20转染腺病毒载体。实验分为4组:对照组为第4代人脐带间充质干细胞;实验组1为腺病毒转染的第4代人脐带间充质干细胞;实验组2为第4代人脐带间充质干细胞+成脂诱导液;实验组3为腺病毒转染的第4代人脐带间充质干细胞+成脂诱导液。结果与结论:转染48h后实验组1和实验组3的人脐带间充质干细胞在荧光显微镜下显现弱荧光,72h后荧光较强。经脂肪诱导培养液培养14d后,实验组1,2,3油红O染色后显微镜下呈红色,对照组未见脂滴形成,实验组1可见一些细小脂滴形成;实验组3与实验组2相比,脂滴大且多,定量分析显示,实验组3油红0染色阳性的面积和吸光度大于实验组2(P〈0.05)。由此说明携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞后可促进其成脂能力。
  • 人脐带间充质干细胞半连续灌注培养:灌注启动时间及灌注频率和灌注体积
  • 背景:人脐带间充质干细胞作为新的种子细胞来源,如何迅速提高其增殖以满足临床所需的数量和质量,是迫切需要解决的现实问题。目的:探讨不同的灌注启动时间、灌注频率和灌注体积对人脐带间充质干细胞扩增和代谢的影响,建立高密度培养的半连续灌注培养工艺。方法:培养传代人脐带间充质干细胞,以批培养方式为参照,半连续灌注培养分成3组。①灌注启动时间组:批培养24h和48h,分别开始换液,每2d更换75%。②灌注频率组:批培养48h开始换液,频率分别为每1,2,3d,换液体积比为75%。⑧灌注体积组:批培养48h开始换液,频率为每2d,换液体积比分别为25%,50%,75%,100%。结果与结论:相对于其他培养条件,灌注启动时间为48h、频率为每天、体积比为75%的静态培养条件下,稀释率较大,细胞密度较大,葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率较高,谷氨酰胺比消耗速率较低,氨比生成速率较高,乳酸对葡萄糖的代谢系数较低,谷氨酰胺的代谢系数较高。这表明稀释率大,不仅葡萄糖和谷氨酰胺充足,而且细胞所需的微量元素和未知的因子也充足,满足了细胞生长的要求;同时排除乳酸和氨等对细胞的影响,去除条件培养基中某些因子对细胞的交互影响,提高了细胞的增殖。
  • 体外定向诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞
  • 背景:人脐带间充质干细胞具有获取容易、免疫原性低等优点,目前尚缺乏体外诱导其分化为胰岛样细胞的成熟方案。目的:探讨人脐带间充质干细胞在体外一定条件下分化为胰岛样细胞的可能性。方法:无菌条件下分离培养人脐带间充质干细胞,细胞传3代后,采用两步法诱导其向胰岛样细胞分化:第1步,加入含100pg/L13-神经生长因子,4nmol/LActivinA,10mmol/L尼克酰胺,25pg/L表皮生长因子,体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养7d;第2步,将诱导液换为含10mmoI/L尼克酰胺,10pg/L碱性成纤维细胞生长因子,1%胰岛素一转铁蛋白一硒的DMEM/F12培养基,诱导时间为14d。对照组单纯加入DMEM/F12培养基进行培养。结果与结论:诱导2周后脐带间充质干细胞开始聚集成团,诱导3周后,葡萄糖刺激试验阳性、PDX-1和Insulin基因表达。而对照组细胞无胰岛素分泌,胰岛细胞相关基因表达阴性。实验成功地将脐带间充质干细胞诱导成了胰岛样细胞。
  • 人胰岛素样生长因子1基因转染脂肪源性干细胞的效应
  • 背景:人胰岛素样生长因子1基因对脂肪源性干细胞的增殖和分化也可能会产生有效作用。目的:验证人胰岛素样生长因子1基因转染对体外培养的脂肪源性干细胞的效应。方法:构建含人胰岛素样生长因子1基因的双顺反子真核表达载体plRES2-EGFP-hlGF-1,利用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导转染体外培养的人脂肪源性干细胞。观察基因转染后细胞增殖及形态的变化,倒置荧光显微镜观测标记基因增强绿色荧光蛋白的表达并计算转染效率,酶联免疫吸附试验检测培养上清中人胰岛素样生长因子1的浓度,免疫组织化学染色及RT-PCR检测人胰岛素样生长因子1的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果与结论:测序及酶切证实真核表达载体plRES2-EGFP-hlGF-1构建正确。体外培养的脂肪源性干细胞为多种形态并存,转染后6h检测到有EGFP的表达,至60h达到高峰,转染效率为(16±3)%。细胞上清中人胰岛素样生长因子1的浓度在60h达到22.65υg/L。免疫组织化学染色及RT-PCR均检测到人胰岛素样生长因子1的表达。转染后的细胞分裂增殖加快,细胞群体倍增时间缩短,S期细胞比例增多。证实人胰岛素样生长因子1基因可有效转染脂肪源性干细胞并表达人胰岛素样生长因子1蛋白质,同时可促进细胞增殖。
  • Conophylline与尼克酰胺联合诱导脂肪源干细胞为功能性类胰岛细胞
  • 背景:1型糖尿病的胰岛移植治疗一直面临供体来源不足与免疫排斥两大关键问题,寻找一种自体来源的种子细胞通过组织工程方法制备类胰岛组织可以提供充足新型供体、降低异基因供体移植的不良反应。目的:分析成人脂肪干细胞体外分化为对葡萄糖敏感、可分泌胰岛素的功能性胰岛样细胞团的能力,探索体外制备类胰岛组织的技术路线。‘方法:首先分离纯化人体脂肪干细胞,采用新型植物诱导剂Conophylline与其他诱导因子的不同组合将脂肪干细胞诱导分化为胰岛样细胞团,观察不同组合的诱导分化效率,并利用特异性染色、RT-PCR,免疫细胞化学等方法对诱导分化后的细胞团在基因水平与蛋白水平上进行鉴定,最后用ELISA法检测细胞团在不同浓度葡萄糖刺激下胰岛素的分泌情况。结果与结论:脂肪干细胞具有多能干细胞特性,可诱导分化为具有胰岛素分泌和葡萄糖浓度反应性类胰岛细胞团;Conophylline与尼克酰胺联合诱导可大幅度提高诱导分化效率。
  • 人脐血间充质干细胞尾静脉移植治疗扩张型心肌病
  • 背景:体外研究表明人脐血间充质干细胞可分化为自律性跳动的心肌细胞,而经静脉移植人脐血间充质干细胞治疗扩张型心肌病心力衰竭的报道较少。目的:探讨经尾静脉移植人脐血间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠心肌结构、心功能的影响。方法:Wistar大鼠通过腹腔注射阿霉素诱导扩张型心肌病模型,扩张型心肌病实验组于造模后8周经尾静脉移植人脐血间充质干细胞,扩张型心肌病对照组注射等量DMEM培养基。健康对照组不造模,于相同时间点注射等体积的生理盐水。结果与结论:与健康对照组相比,扩张型心肌病组心功能明显受损,且扩张型心肌病实验组受损较扩张型心肌病对照组轻;移植的细胞有肌钙蛋白T的表达。结果提示人脐血间充质干细胞移植能促进扩张型心肌病大鼠心功能恢复,使心肌组织病变减轻。
  • 非清髓性异基因造血干细胞移植预处理方案的毒性比较
  • 背景:选择高效低毒的预处理方案是提高造血干细胞移植成功率的关键。氟达拉滨和抗胸腺细胞球蛋白,均属于强效免疫抑制剂,常用于非清髓性造血干细胞移植预处理中。目的:对采用氟达拉滨或抗胸腺细胞球蛋白为基础的非清髓性异基因造血干细胞移植预处理方案患者,在预处理中及移植后早期毒性进行比较。方法:32例血液系统恶性肿瘤患者中,按照非清髓性预处理方案中的免疫抑制剂分成两组即氟达拉滨组和抗胸腺细胞球蛋白组,预处理方案均为氟达拉滨或抗胸腺细胞球蛋白联合减低化疗强度的白消安,环磷酰胺,或者马法兰。抗胸腺细胞球蛋白组在形成混合性嵌合体后进行供者淋巴细胞输注。对两组患者预处理中出现的器官毒性进行统计学分析,毒性分级参照Bearman等制订的预处理相关毒性(RRT)分级标准。结果与结论:两组无因预处理相关毒性而死亡。氟达拉滨组转氨酶发生率、腹泻发生率与和抗胸腺细胞球蛋白组比较差异均无显著性意义(P〉0.05);氟达拉滨组肝脏毒性发生率、黏膜炎发生率均显著低于抗胸腺细胞球蛋白组(P〈0.05);血液学毒性方面,氟达拉滨组白细胞达最低值、血小板≥50×10^9L^-1的时间、输注红细胞量、输注血小板的量均低于抗胸腺细胞球蛋白组(P〈0.05)。
  • 糖尿病对内皮祖细胞移植促血管新生作用的影响
  • 背景:内皮祖细胞为血管新生的前体细胞,通过促血管新生作用治疗糖尿病血管病变有着良好的前景。目的:探讨糖尿病对内皮祖细胞移植治疗缺血性疾病过程中促血管新生作用的影响。方法:制备糖尿病大鼠模型,提取糖尿病和正常大鼠供体骨髓单个核细胞体外定向培养为内皮祖细胞。同时建立糖尿病及正常大鼠下肢缺血模型,并于缺血病变部位局部移植糖尿病或正常大鼠内皮祖细胞或PBS进行对照。移植后定期应用ELISA方法检测病变部位血管内皮生长因子含量,应用免疫组化方法计数病变部位微血管密度。结果与结论:①受体相同,移植物不同时:移植糖尿病大鼠来源或正常大鼠来源内皮组细胞后,下肢缺血组织中血管内皮生长因子水平及微血管密度比较,差异无显著性意义(P〉0.05)。②移植物相同,受体不同时:正常大鼠移植内皮祖细胞后下肢缺血组织中血管内皮细胞生长因子含量和微血管密度均高于糖尿病组。说明在体外定向培养和病变部位局部注射条件下,糖尿病对骨髓来源内皮祖细胞移植促血管新生作用无明显影响,而对血管新生所处的病变部位微环境有明显影响。
  • 骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺小鼠肺炎及肺纤维化
  • 背景:矽肺对职业人群健康的影响日益严峻,目前没有有效治疗的方法。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对矽肺的治疗作用。方法:36只C57BL/6小鼠随机摸球法均分为3组。对照组小鼠气管内注入生理盐水;矽肺模型组和骨髓问充质干细胞移植组小鼠气管内注入二氧化硅混悬液建立矽肺模型;骨髓间充质干细胞移植组于造模后6h尾静脉输注骨髓间充质干细胞。结果与结论:肺组织羟脯氨酸的含量矽肺模型组和骨髓间充质干细胞移植组高于对照组,差异均有显著性意义(P〈0.01);骨髓间充质干细胞移植组含量明显低于矽肺模型组,差异有显著性意义(P〈0.01)。矽肺模型组和骨髓间充质干细胞移植组小鼠的肺系数均高于对照组(P〈0.01),其中骨髓间充质干细胞移植组低于矽肺模型组,差异有显著性意义(P〈0.01)。白细胞介素1β的表达矽肺模型组和骨髓问充质干细胞移植组高于对照组(P〈0.01);骨髓间充质干细胞移植组低于矽肺模型组,差异均有显著性意义(P〈0.01)。转化生长因子β1在肺组织中的表达同样为矽肺模型组(P〈0.01)和骨髓间充质干细胞移植组(P〈0.05)高于对照组;骨髓间充质干细胞移植组低于矽肺模型组,差异有显著性意义(P〈0.01)。说明骨髓间充质干细胞移植可以减轻肺部炎症反应和纤维化程度。
  • 大鼠骨髓和外周血早晚期内皮祖细胞的分离培养和鉴定
  • 背景:旨在从大鼠外周血及骨髓中提取内皮祖细胞,培养晚期内皮祖细胞,为干细胞移植治疗或通过内皮祖细胞联合基因治疗使内皮祖细胞高表达血管新生诱导因子,达到促进缺血性脑血管病血管新生的目的。目的:从大鼠骨髓及外周血中分离出内皮祖细胞并对其进行鉴定。方法:使用密度梯度离心及贴壁筛选法从大鼠骨髓和外周血中分离获得单个核细胞,进行诱导培养,观察并记录贴壁细胞的生物学特征;选取内皮祖细胞特异性表面标志CDl33、CD34、KDR对原代细胞进行免疫荧光检测,利用流式细胞学技术检测KDR、CD34表达,并通过吞噬功能实验进~步鉴定培养细胞。结果与结论:大鼠骨髓和外周血能够分离获得早晚期内皮祖细胞;贴壁细胞免疫荧光检测CD34、CDl33、KDR表达阳性;流式细胞学检测CD34、KDR表达阳性;贴壁细胞能够吞噬ac—LDL,结合UEA-1。实验成功从大鼠骨髓及外周血中分离出内皮祖细胞;并获得了增殖活性强的晚期内皮祖细胞,找到了更好的成血管干细胞的种子来源。
  • 大鼠骨髓与外周血来源内皮祖细胞生物学特性比较
  • 背景:内皮祖细胞不仅参与胚胎血管生成,也参与出生后血管发生和血管内膜损伤后修复,对治疗缺血性疾病意义重大,但目前对内皮祖细胞的分离、培养、鉴定还存在争议。目的:体外分离、培养大鼠骨髓与外周血来源的内皮祖细胞,并比较其生物学特性。方法:密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓和外周血单个核细胞,接种于纤维连接蛋白铺被的培养瓶中贴壁培养,用加入血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子的完全培养基诱导培养,对获得的贴壁细胞进行细胞形态学,免疫细胞化学染色,流式细胞仪,透射电镜,以及Dil-acLDL、FITC-UEA-1双荧光染色法检测。结果与结论:骨髓来源的内皮祖细胞数量多,集落状生长,增殖能力强;外周血来源的内皮祖细胞数量较少,散在生长,消化后能贴壁但不能传代。两种不同来源的内皮祖细胞免疫细胞化学检测贴壁细胞CDl33、CD34、FIk-1、Ⅷ因子在不同时段呈阳性表达;激光共聚焦显微镜观察,Dil-acLDL、FITC-UEA-1均为双染。透射电镜检查外周血来源的内皮祖细胞发现W-P小体。提示大鼠骨髓和外周血均能分离培养出内皮祖细胞,但前者是早期内皮祖细胞,后者为晚期内皮祖细胞,两者生物学特性各不相同。
  • 全骨髓贴壁法培养兔骨髓间充质干细胞体外定向成骨诱导分化及鉴定
  • 背景:流式细胞仪分离法和免疫磁珠分离法对细胞活性影响较大,密度梯度离心法虽然能够获得纯度高的单核细胞,但由于多次离心可造成细胞的大量流失且对细胞活性有一定的影响使其应用值得商榷。目的:采用全骨髓贴壁法分离兔骨髓间充质干细胞进行成骨诱导分化及鉴定。方法:采用全骨髓贴壁法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学特征。在成骨诱导剂作用下,通过碱性磷酸酶染色试剂盒行碱性磷酸酶染色,I型胶原免疫细胞化学染色,VonKossa法及茜素红进行矿化结节染色以及电镜下检测兔骨髓间充质干细胞成骨诱导后的形态结构。结果与结论:经诱导后细胞出现与成骨细胞相似的形态学特征,碱性磷酸酶染色阳性,I型胶原免疫细胞化学染色,Von-Kossa法及茜素红矿化结节染色阳性。表明经成骨诱导剂诱导后全骨髓贴壁法体外分离纯化培养的兔骨髓间充质干细胞能向成骨细胞方向分化增殖。
  • 点阵CO2激光作用皮肤光老化模型后表皮干细胞的分布特征
  • 背景:临床应用点阵C02激光治疗面部光老化已取得显著疗效,但点阵C02激光作用于皮肤光老化模型创面修复过程中表皮干细胞的变化规律尚无研究。目的:观察点阵C02激光作用小鼠皮肤光老化模型后创面愈合过程中表皮干细胞数量及其在表皮中的分布变化规律。方法:将10只昆明小鼠以UVB紫外线照射,制备成皮肤光老化模型,行点阵C02激光(DeepF×)干预,观察激光创面愈合情况,并且于干预前、干预后第1,3,7,15天取材,行免疫组织化学染色观察角蛋白19和基因物质P63阳性表达。结果与结论:干预后第15天,点阵C02激光创面基本愈合。激光干预后第3天角蛋白19和基因物质P63阳性细胞率高于干预前及干预第1天,并出现阳性细胞分布范围扩大。第7天阳性细胞率明显高于第1,3天,为最高值,排列结构紊乱,分布到表皮各层。第15天阳性细胞率下降,仅集中于表皮的基底层和毛囊隆突,阳性表达与干预前及干预后第1天无明显差别。结果可见表皮干细胞参与了点阵C02激光干预小鼠光老化皮肤的修复过程,可能在该过程中发挥重要作用。
  • 脑蛋白水解物注射液对培养神经胶质抗原2阳性神经祖细胞的影响
  • 背景:脑蛋白水解物注射液能缓解多种神经系统疾病的症状,但其作用机制并不明确。研究显示,脑蛋白水解物注射液在体内和体外实验中有促进神经发生的潜能。目的:观察脑蛋白水解物注射液对培养的神经胶质抗原2阳性神经祖细胞增殖和分化的影响。方法:取成年大鼠海马原代及传代培养神经胶质抗原2细胞,以免疫荧光染色法鉴定细胞性质,以乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,以原位缺口末端标记技术(即TUNEL法)观察细胞凋亡,BrdU掺入法鉴定新生细胞。结果与结论:脑蛋白水解物注射液干预显著减少TUNEL阳性细胞数,并明显增加神经胶质抗原2细胞数和神经胶质抗原2细胞中微管相关蛋白2a+2b、突触蛋白I、y-氨基丁酸和囊泡 y-氨基丁酸转运体表达水平。说明脑蛋白水解物注射液能抑制神经胶质抗原2细胞凋亡,促进神经胶质抗原2细胞增殖,并能促进神经胶质抗原2细胞向神经元(特别是y-氨基丁酸能抑制性中间神经元)分化。
  • 两种方法分离子宫内膜干细胞的比较
  • 背景:目前国内外尚无统一方法分离培养子宫内膜干细胞,实验重复性较差。目的:寻找一种方便、高效、科学的体外分离子宫内膜干细胞的方法。方法:采用混合法(机械和酶消化相结合)及胶原酶Ⅰ法分离子宫内膜干细胞,比较两种方法分离所得活细胞数及细胞生长周期的差异;并采用免疫细胞化学法和RT-PCR法检测CD90和CD117的表达情况。结果与结论:经过15d的原代培养后,子宫内膜干细胞形态呈圆梭形,细胞贴壁平铺生长,具有成纤维细胞形态,细胞排列无极性;细胞化学染色及RT-PCR法均检测到干细胞标志物CD90和CD117表达,证明培养的细胞具有干细胞特性。混合法获得的活细胞数多于胶原酶I法,其差异有显著性意义(P〈0.01),两种方法分离所得的细胞具有相同的生长周期。结果说明混合法是一种方便、高效、科学的体外分离子宫内膜干细胞的方法。
  • 益气活血类药物血清对嗅鞘细胞增殖及相关因子分泌的影响
  • 背景:益气化瘀是中医药对脊髓损伤的主要治则,但疗效不确切。那么,益气活血类中医药治法能否结合现代科技共同治疗脊髓损伤从而提高疗效呢?目的:观察益气活血类汤剂促进嗅鞘细胞增殖及分泌神经生长因子、脑源性神经营养因子的作用。方法:组织块培养法体外培养新生大鼠嗅鞘细胞;采用MTT法检测补阳还五汤和痿症方含药血清对嗅鞘细胞增殖的影响;采用Western-Blot法测定培养上清中神经生长因子、脑源性神经营养因子水平。结果与结论:MTT结果显示补阳还五汤药物血清及痿证方药物血清均能促进嗅鞘细胞增殖,且两者促增殖作用无差异;Western—Blot结果显示补阳还五汤药物血清及痿证方药物血清均能促进嗅鞘细胞分泌神经生长因子、脑源性神经营养因子,两组间细胞因子分泌水平也无明显差异。
  • 骨髓间充质干细胞诱导分化成骨方法的研究与进展
  • 背景:骨髓间充质干细胞具有良好的成骨分化潜能,移植入体内后可分化为骨、软骨、肌肉、脂肪、肝脏和神经等多种细胞。目的:综述大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成骨最新方法进展。方法:分别以“骨髓间充质干细胞,成骨细胞,诱导分化”、“bone mesenchymal stem cells,osteoblast cells,osteogenic differentiation”为检索词,应用计算机检索CHKD期刊全文数据库,PubMed数据库和万方数据库1995至2011年有关文章。纳入有关骨髓间充质干细胞的文献。排除内容重复和缺乏原创性文献。保留34篇文献做进一步分析。结果与结论:骨髓间充质干细胞在适当的生长因子诱导下可以快速地向成骨细胞分化和增殖。在体外诱导骨髓问充质干细胞向成骨细胞分化需要特定的诱导条件、优良的诱导剂以及合适的剂量。骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化受许多自身调控因素(控制基因表达的转录因子)和环境调控因素(分泌因素、细胞外基质,化学因素、细胞与细胞间的相互作用)的影响,这些调控因素并不是孤立存在的,而是相互联系、相互作用,共同调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。,
  • 骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺小鼠肺炎及肺纤维化
  • 对矽肺的治疗现有的方法只对病毒感染和粉尘有效。间充质干细胞可以跨胚层分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞、肝细胞,胰腺细胞、支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞,甚至可以重建组织结构,给矽肺的治疗带来了新的思路和希望。目前的研究显示,干细胞移植治疗矽肺在纤维化形成以后,就没有更好的效果了。所以,如何逆转肺纤维化和修复肺组织一直是研究中比较棘手的问题。
  • 基因修饰骨髓间充质干细胞修复关节软骨损伤
  • 背景:随着生物技术的发展,通过转基因技术修饰细胞,从而获得长期稳定表达的生物活性因子以治疗关节软骨损伤逐渐引起重视。目的:就基因修饰的骨髓间充质干细胞在修复关节软骨损伤中的应用作一综述。方法:由第一作者检索1990至2011年PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)有关基因修饰骨髓间充质干细胞修复关节软骨损伤的文献,英文检索词为“cartilage,genetherapy,mesenchymalstemcells,tissueengineering,bioactivefactor,vector”。共纳入15篇文献归纳总结。结果与结论:骨髓间充质干细胞已被广泛应用于修复关节软骨损伤。通过转基因技术将特定外源基因导入骨髓间充质干细胞,联合细胞治疗和基因治疗可达到更好的治疗效果,在关节软骨损伤的治疗中有广阔的应用前景。
  • 脂肪干细胞与Bio-oss支架构建组织工程骨治疗种植体周围骨缺损
  • 背景:目前治疗种植体周围炎的方法主要有手术治疗、激光治疗、超声洁治加局部用药单独或联合治疗等,但并未完全达到理想的治疗效果。目的:探讨由骨形态发生蛋白修饰的脂肪干细胞与Bio.0ss支架构建组织工程骨治疗种植体周围炎性骨缺损的可行性。方法:应用计算机检索1988年1月至2011年12月Pubmed数据库相关文章,检索词为“adiDose.derivedstemceIls、tissueengineer¨1g”,并限定文章语言种类为英文。同时计算机检索2005年1月至2011年12月CNKI数据库相关文章,检索词为“脂肪干细胞、种植体周围炎”,并限定文章语言种类为中文。共检索到文献56篇。结果与结论:利用组织工程原理与方法再生组织的特点和优势,将脂肪干细胞作为理想的种子细胞,骨形态发生蛋白2作为理想的细胞因子与Bio-oss生物材料混合,构成三维环境,Bio.oss晶体内广泛交织的空隙结构,有利于脂肪干细胞的迁移。骨形态发生蛋白2与脂肪干细胞复合,促进控制其分化向骨形成中心募集,并分化为骨系细胞,通过钙盐沉积形成新骨,达到治疗种植体周围骨缺损的目的。
  • 胎盘间充质干细胞的体外诱导分化
  • 背景:与骨髓、外周血、脂肪及胚胎等来源的间充质干细胞相比,脐带和胎盘组织来源的问充质干细胞具有来源广泛、易于获得、不引起供者不适以及不存在道德伦理争议等优势。目的:探讨胎盘间充质干细胞体外分离、培养、传代的方法及其分化潜能,为胎盘间充质干细胞的临床应用提供基础研究依据。方法:应用计算机检索2000年1月至2011年12月PubMed数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库与胎盘间充质干细胞有关的文章,中文检索词为“胎盘间充质干细胞,体外,诱导分化”,英文检索词为“Placenta-derivedmesenchymal stem cells,Inducton and differentiation in vitro”。共检索到文献98篇,最终纳入符合标准的33篇文献。结果与结论:目前国内胎盘间充质干细胞还处于基础研究阶段,国外胎盘间充质干细胞在实验研究方面已经取得了一定的进展,而且也在临床应用研究方面有了一定的突破。胎盘间充质干细胞具有来源广泛,取材方便,不引起供者不适以及不涉及伦理道德问题,与捐献骨髓或采集动员外周血相比,供者无痛苦,感染机会少,扩增能力强等,在临床治疗方面有待于进一步深入研究。
  • 间充质干细胞与肿瘤
  • 背景:间充质干细胞具有肿瘤靶向的特性,能很容易分离并扩增至需要的数量,间充质干细胞能利用病毒载体进行修饰,提示间充质干细胞在临床肿瘤基因治疗方面的潜力。目的:回顾间充质干细胞的特性、肿瘤趋向性、未修饰的间充质干细胞与肿瘤的关系以及基因修饰的间充质干细胞肿瘤治疗作用。方法:由第一作者通过PubMed数据库检索2002年1月至2012年3月有关间充质干细胞与肿瘤的相关文献。检索词为“Mesenchymalstemcells,tropism,Geneticallymodified,tumor,therapy”。排除重复性研究及无关研究,共保留50篇文章进行综述。结果与结论:间充质干细胞能特异地向多种肿瘤以及它们的转移灶迁移,有研究显示问充质干细胞能促进肿瘤的生长,同时也有研究显示间充质干细胞能抑制肿瘤生长。对间充质干细胞进行修饰进行肿瘤基因治疗的方式主要是携带:自杀基因、凋亡基因、抗血管发生基因、免疫刺激基因或者溶瘤病毒载体,体内外实验证实了这种方法对肿瘤的治疗有效。
  • 干细胞移植与神经修复
  • 背景:随着生命科学发展,利用干细胞来源的组织工程技术,有可能使受损的神经组织恢复再生能力。目的:针对较为重要的几种干细胞在神经系统修复中的临床应用做一综述,以期阐明各自适用范围和临床效度,为临床医师按需选择提供参考。方法:应用计算机检索PubMed数据库中1998至2011年期间的关于干细胞移植在神经修复方面研究的文章,检索词为“Stemcells,Transplantation,Newerepair”,限定语种为“English”。同时,检索万方数据库中2006至2011年期间的相关文章,检索词为“干细胞,移植,神经修复”,限定语种为中文。结果与结论:初次检索得到288篇文章,选择与移植干细胞的来源、分化、特征及其在神经修复方面相关的文章,包括基础研究和临床研究,观察对象无论为人或动物,均进行审校。根据纳入标准,在排除重复和个案报道类文章之后,重点选择32篇文章进行综述。说明干细胞移植为神经系统疾病的治疗提供了一条新途径,使传统认为的不可修复、不可再生的神经组织的结构修复和功能重建成为可能。干细胞移植是一个全新的领域,还有许多问题亟待解决。
  • 脐带间充质干细胞的归巢机制
  • 背景:脐带间充质干细胞因其具有取材方便、无污染、易扩增、无伦理学差异、多向分化等优点被作为用于组织工程学及再生医学的理想种子细胞。目的:对脐带间充质干细胞的归巢机制进行阐述。方法:以“Umbilical cord mesenchymal stem cells,homing mechanism or home,脐带间充质干细胞,归巢机制,归巢特点”为关键词应用计算机检索Pubmed数据库、CNKI数据库2003至2012年,选择内容与脐带间充质干细胞、归巢机制、临床应用相关的文章,这些文献为近期发表或发表在权威杂志,共纳入31篇文献。结果与结论:脐带间充质干细胞的免疫调节、多向分化等优势使其作为一种新的治疗手段应用于临床,使众多疾病的治愈成为可能,其中向缺血或损伤组织炎性归巢的特征是脐带间充质干细胞安全有效的应用于临床的关键。了解脐带间充质干细胞归巢特点,研究其归巢机制,使其高效归巢是脐带间充质干细胞应用于细胞治疗的关键问题。
  • [彩页介绍]
    2013,一个临床医生向全球同仁展示自己的优秀窗口
    2013,优秀临床医生和临床科室如何提高临床科研水平?
    [观点]
    二月花语:光辉的繁丁香(王莉莎)
    [研究与报告]
    β射线照射皮肤损伤创面注射骨髓间充质干细胞后的创面愈合(沈国良 苏本玄 林伟 祁强 赵小瑜 陆兴安)
    利用人骨髓基质干细胞构建组织工程心脏瓣膜的体外实验(康凯[1] 曲辉[2] 汤继权[3] 贾智博[1] 张宇南[1] 张春风[1] 吴华[1] 李仁科[1] 蒋树林[1])
    骨髓间充质干细胞分泌基质细胞衍生因子1保护心肌细胞(毛洪波[1] 邹赛[1] 唐俊明[2,3] 杨建业[2] 王家宁[2] 孔霞[2] 郭凌郧[2] 郑飞[2] 张蕾[2] 黄永章[2])
    自体骨髓间充质干细胞移植梗死心肌猪的心功能变化(虞桂平[1] 沈振亚[1] 郭世强[1] 余云生[1] 陈国强[2])
    兔骨髓间充质干细胞的分离培养及成骨诱导(庾佳佳[1] 汪新柱[2] 赵琳[1] 孙瑞[1] 闰雪萍[3] 张苍宇[1] 任广铁[1] 拓振合[1])
    骨髓基质细胞-成骨细胞复合培养体系的建立(杨春露[1] 赵勇[2] 陈建庭[2])
    热休克汗腺细胞诱导人骨髓间充质干细胞的表型转化(艾丽[1] 翁立新[1] 孙同柱[2])
    髓核细胞诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向的分化(陈亮[1,2] 李大鹏[1] 黄永辉[1,2] 刘侃[2])
    携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞及其成脂分化(李世龙[1] 刘毅[2] 惠玲[3])
    人脐带间充质干细胞半连续灌注培养:灌注启动时间及灌注频率和灌注体积(张淑香 陈彦田 齐念民)
    体外定向诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞(禹亚彬 陈维 卞建民)
    人胰岛素样生长因子1基因转染脂肪源性干细胞的效应(张海宁[1] 丁昌荣[2] 吕成昱[1] 王英振[1] 周峰[1] 续宗耀[1])
    Conophylline与尼克酰胺联合诱导脂肪源干细胞为功能性类胰岛细胞(杨萍[1] 郑勤龙[2] 王劲峰[1] 黄家学[1,3,4])
    [技术与方法]
    人脐血间充质干细胞尾静脉移植治疗扩张型心肌病(罗建红 何学华 廖金卯 袁勇华 胡沙雅)
    非清髓性异基因造血干细胞移植预处理方案的毒性比较(庄小银 李庆山 王顺清 周铭)
    糖尿病对内皮祖细胞移植促血管新生作用的影响(周晨光[1] 宫经新[2] 马跃[2] 周亚茹[3] 栾锋[4] 杨彦[2] 孟建波[2])
    骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺小鼠肺炎及肺纤维化(潘雍 杨昆 刘永哲)
    大鼠骨髓和外周血早晚期内皮祖细胞的分离培养和鉴定(王红娟[1] 王娟[1] 李楠[2] 高航[3] 刘亢丁[1])
    大鼠骨髓与外周血来源内皮祖细胞生物学特性比较(曹广煜 陈庆伟 李兴升 杨彦 李桂琼)
    全骨髓贴壁法培养兔骨髓间充质干细胞体外定向成骨诱导分化及鉴定(肖仕辉 韦庆军 赵劲民 薄占东 韦积华 李伟岸)
    点阵CO2激光作用皮肤光老化模型后表皮干细胞的分布特征(谭军 丁卫 李高峰 李波 秦晓东)
    脑蛋白水解物注射液对培养神经胶质抗原2阳性神经祖细胞的影响(于秀军 李奕 温迪)
    两种方法分离子宫内膜干细胞的比较(马颖 何援利)
    益气活血类药物血清对嗅鞘细胞增殖及相关因子分泌的影响(饶耀剑[1] 朱文潇[1] 马文虎[1] 王拥军[2])
    [学术探讨]
    骨髓间充质干细胞诱导分化成骨方法的研究与进展(雷栓虎[1,2] 岳海源[1] 汪静[2] 汪玉良[1])
    [观点]
    骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺小鼠肺炎及肺纤维化(潘雍 杨昆 刘永哲)
    [学术探讨]
    基因修饰骨髓间充质干细胞修复关节软骨损伤(赖建明 林建华)
    脂肪干细胞与Bio-oss支架构建组织工程骨治疗种植体周围骨缺损(姜全春 赵秀兰)
    胎盘间充质干细胞的体外诱导分化(李丽春[1] 何治[2] 李剑平[1])
    间充质干细胞与肿瘤(董会月 王瑾 黄梁浒 谭建明)
    干细胞移植与神经修复(孟祥鹏 孙宝红 陈立杰)
    脐带间充质干细胞的归巢机制(顾蔚[2] 顾健[1])
    《中国组织工程研究》封面

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