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文献检索:
  • 最美之冰凌花
  • 世间有许多美丽的花儿令人欣赏,令人陶醉,这其中是否包含来自严寒世界的霜花雪花冰花和冰凌花呐?我喜欢她们,缘于我青春时代的很多岁月和很多可以记忆的故事都与她们相关。在代表着寒冷的4大名花中,我最钟情的是冰凌花了。你知道冰凌花吗?同名的她们可有2种呐116岁时在内蒙古的一个青年点插队当知青。重负荷的体力劳动让当时还是孩子的我们天天腰酸背痛,总是祈盼着冬天的快快到来。尽管我们非常不喜欢那时的气候,数九寒天室外会是将人冻成冰棒的零下三四十度,但到那时我们就可以不出工了,可以躺在被窝里惬意地读上半天的小说,可以三五相拥围被对坐天南地北无目的半日闲聊,相比在烈日酷暑下的大地中劳作,我们还是愿意将青春的热情燃烧在这样的室内喽。
  • 《中国组织工程研究》杂志作者首次修稿自查表
  • MRI活体示踪心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的移植
  • 背景:干细胞移植的疗效和安全性评估均需要对体内干细胞的存活、分布、迁徙、增殖及分化进行连续监测。目的:观察MRI示踪超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在缺血心肌组织的分布、迁徙情况。方法:直接贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,获得的细胞进行免疫鉴定。以新型超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞,体外MRI成像确定其体内示踪的可行性。标记后锥虫蓝拒染试验、MTT比色试验分别检测标记细胞的活力、增殖情况。60只SD大鼠随机分为3组,制备大鼠心肌梗死模型2周后再次开胸移植含标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液、含未标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液和等量PBS。于移植后第1天、第3周行MRI检查,动态观察移植细胞的分布、迁徙,并根据MRI图像定位选择性行CD90免疫组化检查。结果与结论:骨髓间充质于细胞标记后,普鲁士蓝染色见胞浆内蓝色铁颗粒,标记效率为99%,标记细胞与未标记细胞间锥虫蓝拒染率、MTT吸光度差异无显著性意义。体外MRI可检测到标记细胞,并在T2WI及T2W/FFE序列上呈低信号。细胞移植1d后,在T2WI及T2W/FFE序列上可见标记细胞在梗死心肌边缘呈类圆形低信号;移植3周后,移植区域信号边界模糊,范围扩大,对比度降低。CD90免疫组化检测证实移植细胞可由梗死边缘向梗死区域迁徙。结果可见新型超顺磁性氧化铁可成功对大鼠骨髓间充质干细胞进行标记,细胞标记后可被MRI检测。
  • 沉默caspase-3基因影响骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡
  • 背景:缺血缺氧的心肌微环境导致植入的细胞存活率低。目的:观察沉默caspase-3基因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。方法:构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞为转基因组,以正常细胞组和空载体组做对照,采用MTS法检测各组细胞增殖情况。建立缺血缺氧模型,real-timePCR和免疫组织化学分别检测缺血缺氧环境各组细胞的caspase-3mRNA和蛋白表达水平,应用流式细胞术检测不同缺血缺氧时间点(0,6,12,24,48h)各组细胞的凋亡率。结果与结论:重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞,且细胞增殖活性升高(P〈0.05)。缺血缺氧环境下,转基因组细胞caspase-3在mRNA和蛋白表达水平相比对照组下降(P〈0.05)。沉默caspase-3能显著降低骨髓间充质干细胞的凋亡率(P〈0.05),且随着缺血缺氧时间的延长凋亡率缓慢升高。结果提示,沉默caspase-3能加快骨髓间充质干细胞的生长速度和提高在体外缺血缺氧环境下的抗凋亡能力。
  • 腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞
  • 背景:骨髓间充质干细胞作为骨、软骨创伤缺损及退变修复的种子细胞越来越受到关注。目的:分析人骨形态发生蛋白2基因转染对白色封闭群大鼠(SD大鼠)骨髓间充质干细胞的影响。方法:分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞并体外扩增,通过腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞,分别通过荧光显微镜观察荧光表达情况及蛋白质水平来测定转染后人骨形态发生蛋白2的表达,碱性磷酸酶定量测定鉴定成骨活性及MTT法评估人骨形态发生蛋白2转染对骨髓间充质干细胞的影响。结果与结论:从SD大鼠骨髓提取物中分离培养的细胞形态为梭形,呈铺路石状、漩涡状生长,经流式细胞仪检测及多项分化能力鉴定符合骨髓间充质干细胞的特征;经转染人骨形态发生蛋白2基因后,骨髓间充质干细胞表达人骨形态发生蛋白2、碱性磷酸酶;MTT法检测转染人骨形态发生蛋白2基因后,骨髓间充质干细胞增殖能力明显增强(P〈0.05)。说明人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞后可以持续、高效表达入骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶,在体外明显促进骨髓间充质干细胞的增殖。
  • 骨髓间充质干细胞与脱细胞脑组织支架的生物相容性
  • 背景:骨髓间充质干细胞与细胞载体联合移植治疗中枢神经系统损伤还处于实验研究阶段。目的:评价大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脑组织支架的生物相容性,探讨脱细胞脑组织支架作为中枢神经系统组织工程材料的可行性。方法:以全骨髓法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,通过物理及化学方法相结合制各脱细胞脑组织支架。将转染携带绿色荧光蛋白基因的骨髓间充质干细胞种植到支架材料上共培养,通过倒置相差显微镜、扫描电镜、激光共聚焦显微镜等方法观察脱细胞脑组织支架的内部结构及复合支架上细胞的生长状况。结果与结论:制备的脱细胞脑组织支架材料呈三维立体网状结构。骨髓间充质干细胞可在支架上黏附生长,形态良好。大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脑组织支架具有良好的生物相容性,有望作为中枢神经系统组织工程的载体材料。
  • 基因转染脐带间充质干细胞与丝素蛋白构建组织工程脂肪
  • 背景:目前国内外构建组织工程脂肪的方法并不完善,虽然构建出了脂肪,但效果不理想。目的:探讨一种新的构建组织工程脂肪的方法,观察携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白复合后在Wistar大鼠体内构建组织工程脂肪的能力。方法:分离培养人脐带间充质干细胞,将携带重组人胰岛素基因慢病毒载体以最适MOI=10转染人脐带间充质干细胞,将转染组与未转染组(对照组)的人脐带间充质干细胞分别接种于丝素蛋白支架,移植于Wistar大鼠背部皮下。移植后12周取材,行荧光原位杂交技术鉴定、组织形态学和扫描电镜观察。结果与结论:①油红O染色显示,两组移植物均呈阳性,证明移植物己在体内合成为脂肪组织,转染组脂肪样细胞数量明显高于对照组(P〈0.01)。②苏木精一伊红染色显示,两组移植物组织结构与正常脂肪组织相似,可见明显新生血管。转染组支架材料降解明显,炎性细胞浸润明显少于对照组,新生血管数量也多于对照组。③扫描电镜观察提示,转染组移植物内脂肪样细胞聚集成团,其结构与正常脂肪组织相似;对照组脂肪样细胞散在分布于支架孔隙内。④提示胰岛素基因能明显促进人脐带间充质干细胞成脂肪化,携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白支架复合后,在Wistar大鼠体内能构建出组织工程化脂肪组织,其结构类似正常脂肪组织。
  • 构建能转染人骨髓间充质干细胞的Ad5 GM-CSF-IL-2腺病毒载体
  • 背景:如何将树突状细胞和T细胞活化因子运送至肿瘤局部是有待解决的难题之一。利用人骨髓问充质干细胞具有肿瘤趋向性和低免疫原性的特性,将树突状细胞和T细胞活化因子导入骨髓间充质干细胞后运送至肿瘤局部表达可能是解决上述难题的方案之一。目的:构建共表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2的5型腺病毒载体(Ad5GM-CSF-IL-2),感染人骨髓间充质干细胞,检测粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2的表达水平和持续时间,为体内活化树突状细胞和T细胞提供实验依据。方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,以此为模板用RT-PCR方法扩增粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2基因cDNA,PCR扩增片段分别插入pcDNA3.1/Myc-His(-)B真核表达载体中,再利用脑心肌炎病毒内部核酸进入位点(IRES)序列,构建腺病毒载体穿梭质粒pDC515GM-CSF-IRES-IL-2。采用AdMax^TMFLP重组腺病毒载体体系,将穿梭质粒pDC515GM-CSF-IRES-IL-2与pBGHfrt△E1,3FLP骨架质粒共转染至293细胞,通过重组酶位点特异性重组获得Ad5GM-CSF-IL-2。Ad5GM-CSF-IL-2感染人骨髓间充质干细胞后经v射线照射使其失去增殖能力,分别用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2ELISA试剂盒在不同的时间点检测细胞上清中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2蛋白的水平。结果与结论:经测序证实,克隆获得的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素2的cDNA序列分别与GenBank NM_000758(435bp)和GenBank NM_000586(462bp)提供的序列完全一致。用AdMax^TMFLP重组腺病毒载体可高效、快捷地获得所要包装的腺病毒载体,通过IRES连接粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2两个基因,均获得高效表达。Ad5GM-CSF-IL-2感染人骨髓间充质干细胞后可连续7d高水平地分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2。
  • 重组人骨形态发生蛋白2调节人脂肪间充质干细胞表达血管内皮生长因子
  • 背景:重组人骨形态发生蛋白2可以促进组织工程骨血管化,但是对于其作用于人体细胞时的生物学规律不明确。目前对于重组人骨形态发生蛋白2调节人体细胞血管内皮生长因子表达的规律国内还未见相关报道。目的:从基因和蛋白水平观察比较不同时间点重组人骨形态发生蛋白2诱导下人脂肪间充质干细胞血管内皮生长因子的表达。方法:从成人脂肪组织中分离培养脂肪间充质干细胞,取第3代细胞用于实验,分为诱导组和对照组。诱导组采用终浓度为100pg/L重组人骨形态发生蛋白2诱导人脂肪问充质干细胞,分别诱导3,6,12,18,24,36,48h后收集样本,用RT—PCR和ELISA分别从基因水平和蛋白水平检测血管内皮生长因子的表达,并与空白对照组比较。结果与结论:重组人骨形态发生蛋白2调节人脂肪间充质干细胞表达血管内皮生长因子具有时间依赖性,在不同时间点血管内皮生长因子表达量不同。与空白对照组相比,3—6h时间段重组人骨形态发生蛋白2抑制血管内皮生长因子表达(P〈0.05),18—24h时间段重组人骨形态发生蛋白2促进血管内皮生长因子表达(P〈0.05),当利用重组人骨形态发生蛋白2促进组织工程骨血管化时这两个时间段应当引起特别关注。
  • 小鼠脂肪来源干细胞向成骨及软骨细胞的诱导分化
  • 背景:脂肪干细胞常从脂肪组织中分离获取,脂肪组织在全身均有分布,极易大量获得,取材时对供区损伤小。目的:进一步验证小鼠脂肪来源干细胞的体外分离、培养方法,并在特定条件下诱导其向成骨细胞和软骨细胞分化,探讨其作为组织工程种子细胞的可行性。方法:取昆明种雄性小鼠附睾处脂肪,I型胶原酶消化法和差速贴壁法获取、纯化脂肪干细胞并进行细胞表型鉴定。采用成骨诱导培养基诱导脂肪干细胞,进行钙钴法碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色检测细胞分化情况;采用软骨诱导培养基诱导脂肪干细胞,进行甲苯胺蓝染色,番红O染色,Ⅱ型胶原免疫组织化学检测细胞分化情况。结果与结论:脂肪干细胞呈梭形贴壁生长,原代7-9d可达90%融合,传至第3代后细胞形态趋向一致,传代的脂肪干细胞生长曲线呈“S”形。细胞特异性抗原测定CD29、CD44表达阳性,而CD34、CD45呈阴性表达。成骨诱导分化后细胞碱性磷酸酶染色和茜素红染色呈阳性。软骨诱导分化后细胞番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色呈阳性。证实从脂肪组织中可分离到具有分化潜能的干细胞,可在体外稳定增殖传代,经诱导后可分化为成骨细胞、软骨细胞,其具有来源广泛,取材方便等优点,可成为组织工程理想的种子细胞。
  • 信号通路对胃癌干细胞及胃癌发生的影响
  • 背景:Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路对胃癌干细胞的影响及在胃癌发生发展中的作用机制少见报道。目的:探讨Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌发生发展中的作用机制。方法:采用肿瘤球悬浮分选法从胃癌组织标本中分选胃癌干细胞。采用免疫组化SP法检测Hedgehog及Wnt/β-catnin信号通路主要分子SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的表达。Spearman相关分析各细胞因子间的相关性分析。结果与结论:SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的阳性表达率分别为74.7%,78.3%,85.5%和83.3%,均显著高于癌旁组织的阳性表达率(P〈0.05)。各细胞因子间在胃癌干细胞中的表达均呈正相关(P〈0.05)。说明在胃癌干细胞中Hedgehog及Wnt/β-catenin信号通路均被激活,二者互相作用可能参与了胃癌的发生发展,为胃癌的干细胞治疗提供了新的研究方向。
  • 酸性成纤维细胞生长因子与胚胎干细胞的造血分化
  • 背景:有研究表明,在卵黄囊造血、胎肝造血和胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,酸性成纤维细胞生长因子可强烈表达。目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胚胎干细胞造血分化的作用,在拟胚体培养阶段施加酸性成纤维细胞生长因子,验证酸性成纤维细胞生长因子对造血形成细胞产生的调控作用。方法:培养小鼠胚胎干细胞,将饲养层上生长状态良好的小鼠胚胎干细胞用胰酶消化成单个细胞后,利用悬滴法制备拟胚体,拟胚体继续悬浮培养,以1,2和50g/L酸性成纤维细胞生长因子分别培养3,5,7,9d,通过免疫荧光法检测胚胎干细胞与拟胚体中酸性成纤维细胞生长因子的表达,流式细胞术检测FIk-1^+与CD133^+阳性细胞率。结果与结论:酸性成纤维细胞生长因子在拟胚体中呈阳性表达。在5μg/L酸性成纤维细胞生长因子作用下,FIk-1^+细胞随时间增加表达增加,CD133^+细胞表达模式与FIk-1^+细胞类似。在1μg/L时,FIk-1^+细胞在7d时表达达到高峰,随后下降。CD133^+细胞表达结果类似。而在2pg/L时,5d时FIk-1^+细胞表达升高,随后下降,在9d时表达又增高。而CD133^+细胞则总体呈现升高趋势。酸性成纤维细胞生长因子可促进FIk-1^+与CD133^+细胞的产生,证明酸性成纤维细胞生长因子能够有效促进拟胚体的扩增以及成血管血液干细胞的产生与增殖。
  • 血管成形与脐带干细胞移植治疗糖尿病足:3个月血管造影评价
  • 背景:目前对糖尿病继发肢体动脉闭塞尚无有效的药物治疗,最终多导致截肢,预后很差。目的:以血管成形联合人脐带间充质干细胞移植治疗糖尿病足,3个月后行血管造影评价效果。方法:确诊症状严重伴有下肢动脉不同程度病变的FontainIV期糖尿病足40例52条患肢,对照组12例患者18条患肢给予单纯介入治疗,实验组28例34条患肢给予介入联合人脐带间充质干细胞经导管灌注及溃疡周围注射治疗,随访3个月。结果与结论:治疗后患肢冷感、疼痛、麻木等临床症状持续改善,患肢皮温、踝肱指数值及跛行距离均增加。治疗3个月后复查造影,新生血管增多,溃疡逐渐愈合或缩小,输注前后未出现严重并发症和不良反应。说明采用血管成形联合人脐带间充质干细胞移植治疗糖尿病足,方法可行、安全,近期疗效满意。
  • 人工脑膜复合大鼠骨髓间充质干细胞修复心肌梗死
  • 背景:干细胞移植治疗心肌梗死拥有广泛的应用前景,寻求理想的细胞类型和有效的移植方式是提高干细胞治疗效果的关键因素。目的:探讨人工脑膜复合骨髓间充质干细胞修复心肌梗死的安全性及作用。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,取培养良好的第3代骨髓间充质干细胞经DAPI标记后接种于人工脑膜制备细胞人工脑膜复合物。构建SD大鼠心肌梗死模型,60只大鼠随机数字表法均分为假手术组、心肌梗死组、人工脑膜组、细胞脑膜复合物组。移植4周后检测心功能参数,Westernblot检测心肌组织缝隙连接蛋白43的表达,计算心肌梗死后生存率。结果与结论:构建心肌梗死模型并移植后4周,细胞脑膜复合物组心脏组织冰冻切片于荧光显微镜下可观察到心肌内少量核蓝染的细胞,表明骨髓间充质干细胞得以存活;细胞脑膜复合物组与心肌梗死组和人工脑膜组相比,左心室功能明显改善,Cx43蛋白的表达上调,生存率增加(P〈0.05)。说明人工脑膜复合骨髓间充质干细胞移植可提高心肌梗死大鼠心脏功能及生存率。
  • 间充质干细胞诱导糖尿病小型猪同种异体胰岛移植的免疫耐受
  • 背景:胰岛移植为有望根治糖尿病的一种方法,而移植排斥问题阻碍了移植的开展,诱导受体对供体移植物的免疫耐受是解决同种异体移植排斥反应的关键。目的:观察骨髓间充质干细胞输注对糖尿病小型猪同种异体胰岛移植物存活时间的影响。方法:无菌条件下抽取动物骨髓,离心弃上清。取单核细胞层,洗涤后加入L-DMEM培养基,调整细胞浓度为1×10^9L^-1。培养48h后换液去除未贴壁的细胞,依据贴壁培养法分离和扩增间充质干细胞。取第5代细胞作为移植供源,调整细胞浓度为1×10^10L^-1。四氧嘧啶制备糖尿病小型猪模型,随机分为骨髓细胞组和干细胞+骨髓细胞组,经肝门静脉分别植入胰岛细胞、骨髓细胞,胰岛细胞、骨髓细胞和骨髓间充质干细胞。结果与结论:骨髓间充质干细胞联合骨髓细胞输注较单纯骨髓细胞输注能显著延长同种异体小型猪胰岛移植物存活时间(P〈0.05),同时受体血清胰岛素能较长时间维持较高水平。提示骨髓间充质干细胞输注能显著延长猪胰岛移植物存活时间,并促进胰岛移植物正常功能的发挥。
  • 人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤
  • 背景:间充质干细胞具有免疫调节特性,脐带间充质干细胞因其特有的优势,将在急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的临床应用中有着光明的前景。目的:探讨脐带间充质干细胞移植对内毒素性大鼠急性肺损伤模型的保护作用。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机均分为正常对照组、急性肺损伤组和脐带间充质干细胞移植组。后两组采用经气管内滴注内毒素建立急性肺损伤模型。成功造模1h后,脐带间充质干细胞移植组,经气管内滴注脐带间充质干细胞混悬液,正常对照组和急性肺损伤组同法予以等量生理盐水。分别在干预后24,72h,观察肺组织病理改变,检测病理组织评分、肺组织干湿质量比、髓过氧化物酶活性及血浆白细胞介素6、白细胞介素10及肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:脐带间充质干细胞移植可以减轻内毒素诱导的急性肺损伤模型的损伤程度;脐带间充质干细胞移植组在各时间点与急性肺损伤组比较,病理损伤评分、肺干湿质量比、肺组织髓过氧化物酶活性、血浆白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平均明显降低,血浆白细胞介素10水平明显升高。说明脐带间充质干细胞对内毒素性急性肺损伤模型有保护作用;其保护机制可能为脐带间充质干细胞移植维持肺内炎性递质和抗炎递质平衡。
  • 大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养与鉴定
  • 背景:内皮祖细胞因其分离与培养的方法各不相同,在实验中难以重复。目的:探讨大量获取骨髓源性内皮祖细胞分离与培养的方法。方法:通过密度梯度离心法从4周龄SD大鼠骨髓中分离单个核细胞,使用EGM-2MV培养基进行诱导培养,采用形态学特征观察、摄取Dil-Ac-LDL与结合FITC—UEA-1实验、免疫荧光化学鉴定其表面抗原CD133与VEGFR2等方法对其进行鉴定,并通过管腔形成实验观察形成管腔的能力。结果与结论:①形态学观察:分离的骨髓单个核细胞经诱导培养后,在生长的早期(8d左右)、晚期(15d左右)其细胞形态有一定差异,早期以纺锤形、三角形、圆形细胞多见,晚期以圆形、短梭形细胞多见。②摄取Dil-Ac-LDL与结合FITC-UEA-1实验:显示8,21d的细胞均为阳性。⑧免疫荧光化学染色:8d的细胞表达CD133、VEGFR2。④管腔形成实验:在Matrigel基质上15h左右能够生成血管样结构。结果表明:利用密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞后以EGM-2MV进行诱导培养,经过鉴定证明获得的细胞符合内皮祖细胞的特征。这种方法能够简单、快速、可靠、大量地获取内皮祖细胞。
  • 人脐血和外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定
  • 背景:国内外有关内皮祖细胞的分离培养和鉴定方面的文章很多,但是人脐血和外周血内皮祖细胞的鉴别方面文章不多。目的:从人脐血和外周血中分离出内皮祖细胞,并对其进行培养和鉴定。方法:选取密度梯度离心法从脐血和外周血中分离获得单个核细胞,按照1×10^6/cm^2的浓度种植于预先铺有纤维连接蛋白的培养板中,用含血管内皮生长因子的M199培养基进行诱导培养。结果与结论:人脐血和外周血中存在内皮祖细胞,浓度梯度离心联合贴壁筛选获得的单个核细胞在血管内皮生长因子的诱导培养下可分化成内皮祖细胞,内皮祖细胞表达CD34、CD133、CD105、KDR和CD31,能吞噬乙酰化低密度脂蛋白,结合荆豆凝集素1,它们可作为体外分选内皮祖细胞的标志。
  • Turner综合征羊水干细胞的分离及特征
  • 背景:羊水干细胞的分离培养及生物学特性相关研究取得了明显进展,但未见45,X/46,XX(Turner综合征)羊水细胞建系的报道。目的:建立体外培养人羊水来源干细胞的方法,初步探讨羊水干细胞的生物学特性。方法:孕中期羊膜腔穿刺获得1例染色体核型异常(45,X/46,XX)羊水标本,采用梯度稀释后低密度种植的方法获得羊水干细胞,体外传代培养,倒置显微镜观察细胞的贴壁生长情况,细胞染色体检查确认核型,流式细胞仪检测羊水干细胞特异性表面标志和细胞周期,进行成骨诱导分化及碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定。结果与结论:羊水干细胞在体外培养体系中增殖迅速,核型为45,X/46,XX,流式细胞仪检测羊水干细胞表达CD29、CD44、CD90和CD105间充质干细胞表面标志,不表达造血干细胞标志CD45和CD34:大部分细胞处于G1期,增殖能力强。羊水干细胞经成骨诱导分化后,碱性磷酸酶染色和茜素红染色阳性。结果可见该实验成功分离获得45,X/46,XX(Turner综合征)羊水干细胞,其增殖能力强,表现间充质干细胞的特性。
  • 无血清神经球培养下神经干细胞的生长与分化
  • 背景:体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的神经干细胞并掌握其生物学特性是神经干细胞移植研究的前提。目的:建立大鼠神经干细胞的分离、培养、纯化方法,进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法:利用无血清悬浮神经球方法分离培养胚胎来源的神经干细胞,进行形态学观察,用免疫细胞化学方法检测神经干细胞及其分化细胞的标志物,流式细胞仪检测细胞标志物及其比例。结果与结论:无血清悬浮神经球培养下大鼠神经干细胞生长稳定,操作简单,可大量分离、纯化、扩增神经干细胞,所获细胞具有神经干细胞的一股生物学特性,流式细胞仪检测第3代神经干细胞巢蛋白达91.5%,并具有多向分化潜能,免疫化学染色及流式细胞仪示神经干细胞可分化形成神经元,神经胶质细胞和少突胶质细胞。
  • 土鳖虫含药血清干预骨髓间充质干细胞的成脂分化
  • 背景:实验拟通过土鳖虫对激素诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化的影响,解释中药土鳖虫治疗股骨头缺血性坏死的作用机制。目的:观察土鳖虫对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的干预作用。方法:通过大剂量地塞米松诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予土鳖虫含药血清干预。检测干预6d后细胞内成脂标志物三酰甘油、氧化物酶增殖物激活受体mRNA和脂肪酸相关蛋白mRNA的表达。结果与结论:土鳖虫可抑制骨髓间充质干细胞分化过程中氧化物酶增殖物激活受体基因和脂肪酸相关蛋白基因的表达,降低三酰甘油水平,说明土鳖虫药物可以逆转因大量激素导致的骨髓间充质干细胞成脂分化增加。
  • 柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞的成骨特征
  • 背景:骨碎补能在促进骨生长且取得了良好的临床疗效,其主要成分柚皮甙能否诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化?目的:用柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化。并观察柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的能力。方法:用贴壁筛选法对兔骨髓间充质干细胞进行分离培养。对生长良好的第3代骨髓间充质干细胞分别用50μg/L的柚皮甙和经典成骨诱导剂向成骨方向进行诱导,分别进行成骨鉴定。结果与结论:经典成骨诱导液、柚皮甙诱导液都能使骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,基质分泌增多,形成钙结节。用酶联免疫检测仪检测柚皮甙诱导组和经典成骨诱导组细胞吸光度值未见明显的差异。同时检测柚皮甙诱导液和L—DMEN细胞培养液的吸光度值发现两者差异无显著性意义(P〉0.05)。证实柚皮甙可成功诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,无明显毒性作用。
  • 补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用
  • 背景:干细胞移植的不断改进和对传统中医理论认识的不断深入,促进了补。肾中药干预干细胞分化的研究。目的:探讨补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用。方法:收集干细胞移植治疗疾病过程加入不同类别单味或复方补肾中药起到的促进干细胞增殖分化、诱导分化的作用等相关研究,进行实验数据分析,应用血清药理学原理评估补。肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用。结果与结论:加强补肾中药与干细胞的基础研究,在现有新理论基础上,继续深化相关的基础理论研究,使补肾中药与干细胞研究有科学的理论指导,在干细胞增殖、分化及转分化机制研究的基础上,筛选能调节干细胞不同发育阶段的补肾中药。在此初步筛选的基础上,结合临床应用中已经取得的成果,才能有针对性地选定相关的单味或复方补。肾中药,研究其对干细胞移植治疗重大疾病的干预作用。
  • 雌激素诱导干细胞成骨研究新进展
  • 背景:雌激素与人体正常骨代谢有紧密联系,并可以为干细胞诱导成骨提供有利条件。目的:文章就雌激素在多种干细胞诱导成骨中的应用情况及其作用机制、安全性、效果、优缺点、突出特性等进行综述。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed数据库,以“estrogen, bone marrow mesenchymal stem cells, adipose derived stem cells, embryonic stem cells, osteogenesis”为检索词;应用计算机检索CNKI数据库、万方数据库以“雌激素,骨髓间充质干细胞,脂肪干细胞,胚胎干细胞,诱导成骨”为检索词。结果与结论:最终纳入50篇文献进行分析。雌激素在人体中是最重要的内分泌激素,在干细胞诱导成骨的研究中是一种安全有效的诱导剂,促进干细胞增殖与成骨分化,并在不同干细胞上表现出来的作用特点不同。其主要作用机制为:直接作用于位于干细胞上的雌激素受体发挥作用,也可以诱导产生各种细胞因子间接影响细胞增殖与分化。雌激素的浓度等级、干细胞上雌激素受体基因的编码调控表达转录、构建细胞支架等尚存在一定的争议,需进一步研究。
  • SCI数据库收录的外科杂志对临床试验注册的要求
  • ·Plastic and Reconstructive Surgery(《整形与重建外科学》),SCI收录杂志,ISSN:0032—1052,2012年影响因子3.382。主要发表研究原著,技术操作,信件,病例报告,会议等类型文章。对临床试验注册的要求:杂志要求所有报道临床试验结果的文章都要在公共试验注册进行注册,这与国际医学期刊编辑委员会的要求相一致。所有临床稿件必须在投稿之前进行-临床试验注册,研究药动学和主要毒性的I期试验的稿件可免除注册。报道临床试验的稿件要在稿件单独1页陈述注册信息。注册信息包括:试验注册名称,注册标识号和网页地址。
  • 糖皮质激素促间充质干细胞的成骨效应
  • 背景:糖皮质激素是有效的免疫抑制和抗炎症药物而广泛应用于临床,然而长期服用后也会引起一些不良反应如骨质疏松症。糖皮质激素通过促进成骨细胞与骨细胞的凋亡,同时抑制间充质干细胞向成骨细胞分化,导致成骨细胞数量减少;然而在一定的条件下,糖皮质激素又能够促进间充质干细胞表达成骨细胞标志基因诱导其向成骨方向分化。目的:对以地塞米松为代表的糖皮质激素在间充质干细胞成骨分化中发挥的作用以及可能的分子机制进行综述。方法:由第一作者检索PubMed数据库1978至2012年有关地塞米松和间充质干细胞成骨分化的文献,英文关键词“Mesenchymal stem cell, dexamethasone, osteogenesis, osteoporosis, Runx2, BMP,Noggin, GILZ, glucocorticoid receptor”以不同的组合方式查找,排除重复性的研究,最终保留55篇进行归纳综述。结果与结论:地塞米松能够调节Runx2,Noggin以及亮氨酸拉链蛋白等基因调控间充质干细胞成骨分化。当糖皮质激素作用于间充质干细胞时,可能由糖皮质激素受体介导其生理作用,也可能在糖皮质激素与其受体结合之前就受到11β-羟甾类脱氢酶的调节。另外,生理剂量(10^-88mol/L)的地塞米松能促进问充质干细胞成骨分化,药理剂量(≥10^-7mol/L)有抑制作用。
  • 自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤
  • 背景:缺血缺氧性脑损伤后的神经再生、神经功能的恢复与缺血部位新生血管的形成和重塑有着密切的关系。血管内皮祖细胞参与出生后缺血组织的血管新生及修复,促使血液循环再通和氧气等营养物质的供应,为神经功能的恢复提供微环境。目的:探讨自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤的可行性、有效性及安全性,探索改善脑损伤患者神经功能修复的新方法。方法:应用计算机检索PubMed、ScienceDirect、Springerlink、CNKI、万方等数据库近10年的相关文献。英文关键词为“EPCs、endothelialprogenitorcell、stroke”等,中文关键词为“内皮祖细胞、干细胞移植、脑卒中”等,选择内容与血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性疾病相关的文献,同一领域文献则选近期发表的或发表在权威杂志上的文章,共纳入43篇参考文献。结果与结论:脑缺血后神经再生、神经功能的恢复与缺血部位新生血管的形成和重塑有着密切的关系,内皮祖细胞参与出生后缺血组织的血管发生及修复,促进血液循环及氧气等营养物质的供应,为神经功能的恢复提供微环境。自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤是可行的、安全的、有效的,但仍需大量的生物学及动物实验为其临床应用提供客观的理论依据。
  • 骨肉瘤干细胞的分离与鉴定
  • 背景:骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤,其发生可能与骨肉瘤干细胞有关。目的:评估骨肉瘤干细胞分离、培养和鉴定方法以及其相关肿瘤标记物的表达。方法:在无血清条件下以及无血清联合抗肿瘤药物的条件下应用免疫磁珠分选法对骨肉瘤干细胞进行分离、培养,分选出Stro-1阳性、CD133阳性骨肉瘤干细胞,采用免疫荧光染色、蛋白质印迹法等检测骨肉瘤肿瘤干细胞标记物CD133、Oct3/4以及Nanog等的表达水平以及致瘤性能。结果与结论:骨肉瘤干细胞在接种培养2-10d后形成悬浮细胞球,增殖潜伏期约为24h,Stro.1阳性干细胞能够形成悬浮细胞球,Stro-1阴性细胞则不能形成悬浮细胞球。此外,骨肉瘤干细胞还能高表达Oct3/4、Nanog和CD133等,CD133阳性骨肉瘤干细胞高表达CD133分子,侵袭力更强,而CD133阴性细胞则不能表达CD133分子,侵袭力相对较弱。塞来昔布对骨肉瘤干细胞的形成具有一定程度的抑制作用,能够降低肿瘤新生血管中血管内皮生长因子的表达。
  • 间充质干细胞的分离与培养:从实验室到临床
  • 背景:间充质干细胞是多能成体干细胞,对间充质干细胞来源、分离、培养的研究无论从观念上、研究方法上还是研究结果均不尽相同。目的:综述间充质干细胞分离、培养研究的新进展。方法:由作者应用计算机检索2007至2011年PubMed数据库,在英文标题和摘要中以“mesenchymalstemcells”和“source,isolation or culture”检索,选择内容与间充质干细胞应用相关的文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章,共纳入43篇文献。结果与结论:间充质干细胞的规范化培养需要建立一套标准化的培养体系来实现间充质干细胞的分离、大量增殖。因此,需要进一步深入开展间充质干细胞的基础研究,建立体外扩增和向不同细胞定向诱导分化体系,开展间充质干细胞及转基因后移植的体内效应研究等均具有重要的意义。
  • 间充质干细胞移植修复梗死心肌的策略及效果
  • 背景:很多研究表明问充质干细胞治疗心肌梗死具有极大的潜力。目的:综述目前增强间充质干细胞治疗心肌梗死的移植策略及其移植后疗效评估方法。方法:应用计算机检索PubMed、知网、维普及康健数据库中1995年1月至2012年3月关于增强间充质干细胞移植疗效的文章,在标题和摘要中以“间充质干细胞;心功、血管新生或存活”或“Mesenchymal stem cell; Fuction. Angiogenesis or Survival”为检索词进行检索。选择文章内容与运用不同的移植策略来提高问充质干细胞移植后心功恢复、心肌血管新生及移植细胞存活率这几方面有关,同一领域文献则选择近期发表在权威杂志文章。初检得到220篇文献,根据纳入标准选择20篇文章进行综述。结果与结论:通过问充质干细胞体外扩增后诱导分化并移植是心肌梗死后重建做功心肌的具有潜力的新途径,但因其移植后心肌归巢、分化率及存活率低而应用受限。此外,采取合理方法精确评估移植疗效对后期移植策略选择也至关重要,且心脏结构功能重建、心肌纤维化减轻和毛细血管新生程度3个方面成为主要的评价标准。从心脏整体功能考虑到局部功能评估和由选择合适单成像方式成像到采取“非侵入性融合显像”是目前间充质干细胞移植疗效评价的新进步。通过采用合适的移植策略及疗效评价方法以增强问充质干细胞治疗心肌梗死疗效,值得并需要更进一步研究探讨。
  • 最美之冰凌花
    《中国组织工程研究》杂志作者首次修稿自查表
    [骨髓干细胞]
    MRI活体示踪心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的移植(华平[1] 王友于[2] 杨淞然[3] 刘家良[1] 刘立宝[1] 陶俊[1] 杨艳旗[1])
    沉默caspase-3基因影响骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡(刘家良[1] 华平[1] 杨淞然[2] 陶俊[1] 江慧琦[1] 王萌[1] 杨艳旗[1])
    腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞(尹承慧 邱俊钦 曾昭勋 陈宗雄)
    骨髓间充质干细胞与脱细胞脑组织支架的生物相容性(丁明祥[1] 林少华[1] 李亮明[1] 侯博[2] 梁朝峰[2] 龚瑾[2] 何海勇[2] 郭英[2])
    [脐带脐血干细胞]
    基因转染脐带间充质干细胞与丝素蛋白构建组织工程脂肪(刘毅 唐军 李世龙)
    [骨髓干细胞]
    构建能转染人骨髓间充质干细胞的Ad5 GM-CSF-IL-2腺病毒载体(张玉萍[1] 张璇[2,3] 郭智[2] 谭晓华[2])
    [脂舫干细胞]
    重组人骨形态发生蛋白2调节人脂肪间充质干细胞表达血管内皮生长因子(曹鑫 金格勒 杨毅 陈慧锦 殷剑)
    小鼠脂肪来源干细胞向成骨及软骨细胞的诱导分化(刘晓潭[1] 徐海斌[2] 路坦[2])
    [肿瘤干细胞]
    信号通路对胃癌干细胞及胃癌发生的影响(陈浩[1] 许浪[2])
    [胚胎干细胞]
    酸性成纤维细胞生长因子与胚胎干细胞的造血分化(许婷婷 张海萍 王跃嗣)
    [干细胞移植]
    血管成形与脐带干细胞移植治疗糖尿病足:3个月血管造影评价(秦汉林[1] 贺克武[1] 高斌[1] 季亚莉[2] 黄永翠[2] 王胜琴[2] 胡国平[2] 周学勇[2])
    人工脑膜复合大鼠骨髓间充质干细胞修复心肌梗死(马红芬[1] 张晓刚[1] 史若飞[2] 熊挺淋[1] 赵霞[1])
    间充质干细胞诱导糖尿病小型猪同种异体胰岛移植的免疫耐受(杨锐 马昭杰 陈容平 王梅 张振 蔡德鸿 陈宏)
    人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤(崔蕾[1] 雷鑫[2] 牛玉虎[2] 陈彦[1] 牛勃[3] 刘卓拉[1])
    [干细胞培养与分化]
    大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养与鉴定(卫肖艳[1] 张莉[1] 林明[2] 陈欢[1] 彭博[1] 彭园园[1] 李富运[1] 洪培馨[1] 范伊凡[1])
    人脐血和外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定(李欢欢[1] 赵丽静[1] 何旭[2] 王娟[1] 刘亢丁[1])
    Turner综合征羊水干细胞的分离及特征(龚余 骆玉梅 田霖 刘海波 陈欣洁 孙筱放 陈耀勇)
    无血清神经球培养下神经干细胞的生长与分化(赵际童 沈强 黄斐)
    [干细胞与中医药]
    土鳖虫含药血清干预骨髓间充质干细胞的成脂分化(齐振熙[1] 李树强[2] 于涛[3])
    柚皮甙诱导兔骨髓间充质干细胞的成骨特征(杨渊[1] 李小峰[1] 罗道明[2] 温超海[2])
    [学术探讨]
    补肾中药在干细胞培养与移植中的干预作用(高月彩[1] 李蒙[2] 李瑞玉[3] 孙艳孚[3])
    雌激素诱导干细胞成骨研究新进展(吕炜亮 廖毅 童庭辉)

    SCI数据库收录的外科杂志对临床试验注册的要求
    [学术探讨]
    糖皮质激素促间充质干细胞的成骨效应(董平 肖苒)
    自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤(崔立玲[1] 黄国志[1] 陈镇洲[2] 郭阳[3])
    骨肉瘤干细胞的分离与鉴定(曲绍政[1] 李书忠[1] 高甲科[1] 张金锋[2])
    间充质干细胞的分离与培养:从实验室到临床(李炳尧[1] 武晓云[2] 吴岩[1])
    间充质干细胞移植修复梗死心肌的策略及效果(陈玲玲 尹立雪)
    《中国组织工程研究》封面

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