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文献检索:
  • 细胞老化的基本特征和研究进展
  • 自20世纪60年代初发现细胞老化以来,关于细胞老化的研究有了长足的进展。“Hay-flick极限(Hayflick limit)”概念的确立不仅在细胞水平揭示了细胞寿命的重要分子机制,而且拓展了人们对于衰老(aging)的认识。近年来,越来越多的实验结果表明,细胞老化可以在体内有效阻止癌症的发生,尤其在癌症早期具有明显作用。该丈就半个多世纪以来,关于人们认知的细胞老化的基本特征、判别标准以及相关研究进展予以综述。
  • 桔梗皂苷对慢性支气管炎小鼠肺细胞中的IL-1β和TNF-α表达的影响
  • 探讨炎性细胞因子在慢性支气管炎小鼠肺细胞中的表达及桔梗皂苷(kikyosaponin,KS)治疗慢性支气管炎的作用机制。将50只健康小鼠分成正常对照组、模型组和桔梗皂苷低、中、高剂量组, 除正常对照组外, 其余四组动物均采用烟熏加浓氨水吸入法建立慢性支气管炎模型, 然后分别用药物进行治疗。实验结束后, 取各组小鼠肺组织进行石蜡制片, HE染色光镜观察支气管和肺组织病理形态的变化; 免疫组化分析肺细胞中IL-1β和TNF-α的表达。Western blot检测肺组织中IL-1β和TNF-α的表达。免疫组化检测显示, 与正常对照组相比, 模型组小鼠肺组织细胞中IL-1β和TNF-α的表达非常显著。在连续用药30天后, 与模型组相比, 各治疗组小鼠肺组织细胞中IL-1β和TNF-α的表达显著降低(P〈0.05, P〈0.01)。蛋白印迹术检测显示, 模型组小鼠肺组织细胞中IL-1β和TNF-α的表达水平明显增加, 与正常对照组比较, 差异十分显著(P〈0.01)。而连续用药30天后, 各治疗组小鼠肺组织细胞中IL-1β和TNF-α的表达量明显下降, 且呈较好的量效关系。结果表明, 桔梗皂苷对慢性支气管炎小鼠肺组织中炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的表达有明显的抑制作用。推测其作用机制可能是通过抑制肺组织中炎性细胞因子和自由基的生成而达到抗炎、止咳平喘作用的。
  • 雄激素非依赖性前列腺癌细胞中差异甲基化基因的初步筛选
  • 应用全基因组DNA甲基化芯片(Illumina Infinium HumanMethylation27 BeadChip)杂交技术以及转录组RNA测序技术, 检测了雄激素依赖性前列腺癌(androgen-dependent prostate cancer,ADPC)细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer, AIPC)细胞株LNCaP-AI(androgen independent)中的差异甲基化基因。发现与LNCaP细胞株相比, LNCaP-AI细胞株有990个CpG位点表现为高甲基化, 涉及855个基因; 2 305个CpG位点表现为低甲基化, 涉及1 970个基因。结合转录组mRNA表达结果, 筛选出6个超甲基化基因: FAM111B、RAB36、PCDH7、COL6A2、IGF1R、GULP1; 8个低甲基化基因: EPHA3、TM4SF1、IGFBP5、FAM105A、RASD1、ITPR2、CYP27B1、UBE2E3。这些差异甲基化基因涉及钙离子信号通路、Wnt信号通路等多个信号通路, 参与了细胞的基因表达、信号传导、细胞通讯、细胞运动、细胞黏附以及血管生成等功能,为探讨这些差异甲基化基因在前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中发挥的作用奠定了基础。
  • FOX03a沉默或过表达对内皮祖细胞增殖的影响
  • 观察FOXO3a(forkhead box O3a)沉默或过表达对内皮祖细胞(endothelial progenitorcells, EPCs)增殖的影响。构建了沉默型Ad-shRNA-FOXO3a和突变型Ad-TM(triple mutant)-FOXO3a重组腺病毒载体。密度梯度离心法结合荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting, FACS)分离人脐血来源的EPCs(CD133+CD34+), 并进行体外培养及免疫荧光鉴定。将上述重组腺病毒载体转染EPCs并观察转染效率与细胞形态学改变; Western blot分析FOXO3a蛋白表达变化; 细胞计数与MTT法分析FOXO3a沉默或过表达对EPCs增殖的影响。成功构建了Ad-shRNA-FOXO3a、Ad-TM-FOXO3a重组腺病毒载体并转染人脐血来源EPCs。Western blot提示, Ad-shRNA-FOXO3a转染EPCs后明显抑制了FOXO3a蛋白的表达; Ad-TM-FOXO3a转染EPCs后明显增加了FOXO3a蛋白的表达。结合细胞形态学改变、细胞计数与MTT法实验结果提示, 有效沉默FOXO3a明显促进了EPCs增殖; FOXO3a过表达明显抑制了EPCs增殖。人脐血来源的EPCs中, FOXO3a参与了细胞增殖的调节。
  • 靶向DENN-SV基因的shRNA真核表达载体的构建
  • 该研究根据DENN-SV序列及shRNA设计原则, 设计四个靶点序列, 退火后用DNA重组技术与pRNAi-U6.1/Neo空载体连接, 转化到感受态E.coli中。扩增菌株, 抽提质粒, 进行酶切、DNA测序鉴定。将重组的真核表达载体转染人乳腺癌MCF-7细胞并使用RT-PCR及Western blot检测其抑制DENN-SV mRNA表达的效率, 以MTT法绘制生长曲线。测序结果与设计序列相同, 并已成功转染进入人乳腺癌MCF-7细胞, 可见GFP(绿色荧光蛋白)表达, 且都具有抑制作用(P〈0.01), DS-1组的抑制效果最好; MTT法绘制生长曲线结果表明, 实验组经该载体转染后细胞增殖程度显著减少(P〈0.05)。该研究应用RNAi技术成功构建了小干扰RNA重组体, 为进一步研究乳腺癌基因治疗奠定了基础。
  • GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究
  • 食管癌在中国是高发性肿瘤, 并具有较高的致死率。肿瘤细胞的持续增殖与细胞增殖失调密切相关。肿瘤细胞在增殖过程中需要合成大量蛋白质, 葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein, GRP78)作为分子伴侣, 在蛋白质的折叠、组装、修饰和错误折叠蛋白的降解过程中发挥着重要作用。该研究通过构建pGRP78-EGFP-N1重组质粒, 瞬时转染ECA-109细胞, 研究GRP78过表达对细胞增殖能力的影响; 采用RNA干扰技术, 瞬时转染靶向GRP78的siRNA, 研究敲低GRP78对细胞增殖能力的影响。该研究发现GRP78过表达后, 更多的细胞从G1期进入S期和G2/M期, 细胞增殖速率加快, 细胞克隆形成率亦明显提高; 敲低GRP78后, 细胞更多地被阻滞在G1期而无法进入S期和G2/M期, 细胞增殖速率减慢, 细胞克隆形成率降低。GRP78可能通过调节细胞周期而促进ECA-109细胞的增殖。
  • 抑癌基因NPRL2对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响
  • 抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)在人类许多正常组织中均有明显的表达, 而在人类多种肿瘤组织中的表达明显降低。该实验通过构建重组质粒pEGFP-N1-NPRL2并转染肾癌786-O细胞株, 应用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测NPRL2基因的表达情况; MTT法检测786-O细胞增殖的情况; 流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡情况。结果显示: 肾癌786-O细胞株转染重组质粒pEGFP-N1-NPRL2后, 通过荧光显微镜可以观察到绿色荧光; RT-PCR和Western blot检测到NPRL2基因的转录和蛋白质表达水平明显增加(P〈0.05); MTT法检测发现72 h时pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的细胞D490值分别为0.654±0.030、1.528±0.022和1.572±0.036, pEGFP-N1-NPRL2组细胞的增殖较其他两组受到明显的抑制(P〈0.05); 流式细胞仪检测显示pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的凋亡率分别为18.82%±0.40%、5.65%±0.12%和5.85%±0.07%, 而处于G0/G1期的细胞比例分别为69.80%±1.40%、46.24%±1.30%和47.03%±0.45%, 与其他两组相比, pEGFP-N1-NPRL2组的凋亡率显著增高而且G0/G1期细胞明显增多, 表现出G0/G1期阻滞。提示抑癌基因NPRL2的转染可以抑制786-O细胞的增殖, 并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期。
  • 创伤弧菌溶细胞素中类蓖麻毒素功能模序的细胞毒活性研究
  • 创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnificus cytolysin, VVC)氨基酸序列的313-445位(Gi No. M34670)与蓖麻毒素B链(Ricinchain B, RTB)的一段高度同源, 为类蓖麻毒素。基因克隆表达创伤弧菌溶细胞素类蓖麻毒素(rRicin B), Ni2+亲和层析法及透析复性法进行纯化、复性。用纯化的rRicin B免疫日本大耳兔获得多克隆抗体, 兔抗rRicin B多克隆抗体经盐析法、分子筛纯化后, 得到较纯的IgG分子。免疫印迹结果显示, 抗rRicin B多克隆抗体与纯化抗原呈现特异性反应条带。流式细胞术结果显示, rRicin B诱导细胞凋亡呈剂量依赖关系, 多抗能够阻断其细胞毒性。至此, 该工作成功制备了兔抗rRicin B的多克隆抗体, 并证明了创伤弧菌溶细胞素结构基因的类蓖麻毒素功能域具有细胞毒活性, 能诱导Hela细胞凋亡, 且其细胞毒活性能被其多抗成功阻断。
  • 胞外DNA的研究进展
  • 胞外DNA(extracellular occurring DNA, eoDNA)是一种独立于细胞外的DNA, 广泛存在于体液中。研究发现, eoDNA的浓度水平及其特异基因的改变能很好地反映疾病的发生和发展。随着生物技术的发展, eoDNA易获得、微创伤、预测早等优点引起了许多学者的关注, 使得eoDNA成为非入侵疾病检测生物标记中的一颗新星。相对于健康人, 肿瘤患者体内eoDNA浓度明显升高, 这一特征已被研究者广泛验证, 同时, 研究还发现肿瘤患者eoDNA部分起源于肿瘤组织细胞, 且这些DNA与肿瘤组织基因组有着相似的分子特征。这些研究成果为eoDNA取代肿瘤组织早期微创诊断肿瘤发生提供了理论基础。此外, 在产检方面, 从母体血浆中获取胎儿eoDNA并用以观察胎儿健康情况也日益得到学者关注。该文从eoDNA研究背景出发就其作为肿瘤诊断、预后以及产检生物标记的可能性及应用作一简单综述, 并展望了eoDNA在临床疾病诊断的应用前景。
  • 磷脂酶A2亚型及其与男性生殖相关性研究
  • 磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)是参与细胞代谢活动、信号转导等过程的重要酶类 之一, 广泛分布于哺乳动物机体内。随着对磷脂酶A2研究的深入, 目前已有30余种磷脂酶A2亚型被逐一鉴定, 磷脂酶A2亚型与男性生殖相关性研究也有了新的发现。该文通过对磷脂酶A2的最新亚型分类及其特征、磷脂酶A2在男性生殖系统中的分布、磷脂酶A2参与精子顶体反应及其信号转导通路以及与男性生殖相关的磷脂酶A2亚型等内容进行分析, 研究磷脂酶A2在男性生殖系统中发挥的作用及其机制, 为男性不育的诊断和治疗提供理论依据和思路策略。
  • 三丁基锡引起的集成式细胞内信号应答反应
  • 海洋环境污染物三丁基锡(tributyltin,TBT)~l起的细胞内信号通路应答十分复杂,是一种集成式网络反应(integrated network—like intracelluular response)。各种细胞因子及它们之间的作用关系构成类似集成电路样网络式分子反应,组成了细胞内一个个相对独立、又互相关联的反应模块。该文综述了TBT引起的细胞内信号通路转导的集成式网络反应现象,旨在为综合评价污染物危害性提供参考。
  • 单细胞技术在干细胞研究中的应用
  • 干细胞是具有自我更新和分化潜能的异质性细胞群体。基于细胞群体水平的干细胞研究不能满足深入认识干细胞生物学本质及实际应用的需要。近年来,单细胞相关技术不断发展和成熟,并正在干细胞基础研究及其相关领域中获得迅速应用。该文以造血干细胞为主要例举,就实验研究中常用的单细胞分离、单细胞克隆分析、单细胞移植。单细胞实时定量PcR及单细胞测序等技术原理及其应用进行综述。
  • MicroRNA:线粒体功能调控的新机制
  • 线粒体是真核生物进行能量代谢的主要场所,在自由基产生、细胞凋亡、衰老等生理病理活动中也起到重要作用。线粒体功能受核基因和线粒体基因共同调控,microRNA(miRNA)介导的基因转录后调控是重要机制之一。核基因编码的miRNA~仅可以通过调控核基因编码的线粒体相关蛋白的表达影响线粒体结构和功能,而且可以进入线粒体并调控线粒体基因的表达。另一方面,线粒体基因也可能编码miRNA,直接调控线粒体基因表达或转运至胞质调控核基因的表达。
  • 调控纤连蛋白表达的信号通路
  • 纤连蛋白(fibronectin, Fn)作为细胞外基质(extracellular matrix, ECM)中重要的黏附分子之一, 通过与细胞膜上的整合素受体结合, 在调节细胞黏附、迁移、增殖等过程中发挥着重要作用。Fn的异常表达与伤口愈合、肿瘤转移、组织器官纤维化等密切相关。Fn的表达受到复杂的细胞信号通路网络调控, 其中包括MAPK、TGF-β1/Smad、PKC、JAK/STAT及JNK/NF-κB/NADPH/ROS等。该文对调控Fn表达的信号通路及分子作一综述, 旨在全面了解Fn参与机体对环境变化的适应机制及与Fn表达异常相关疾病的分子机理。
  • 构建多元化的细胞生物学PBL教学模式
  • 以问题为基础的学习(problem.basedlearning,PBL)的教学方法是一种国际上广泛认同和有效的医学课程模式,它将问题作为教学的基本因素,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,这种方法在培养学生分析问题和解决问题的能力、养成终生学习习惯方面具有极大的促进作用。该文介绍了一种新的基于医学细胞生物学课程特点的PBL教学模式,它是包括病例模式、微型病例模式、核心问题模式的多元化教学模式。文章从教学框架构建、教材及病例编写、课堂教学组织、教学效果评价等多个环节进行了全方位介绍和探讨,为细胞生物学教学水平的整体提升提供了新的思路。
  • 细胞生物学实验教学改革探索
  • 细胞生物学是当代生命科学的基础学科,也是发展迅猛的前沿学科之一。为了促进学生的实践动手能力和实践创新能力,配合细胞生物学理论课教学改革的不断深化,细胞生物学实验教学改革已是大势所趋。该教研组经过多年的探索,从教学体系、教学内容和教学手段等方面对细胞生物学实验教学进行了改革,旨在充分调动学生学习的主动性和积极性,培养学生的独立思考、综合运用知识和科研创新的能力。
  • 转化医学信息
  • 转化医学作为医学研究的一个分支,从其概念的提出到现在十多年间发展迅速,引起了世界各国学者的广泛关注和重视。转化医学的核心是将医学生物学基础研究成果迅速有效地转化为可在临床实践中应用的理论、技术、方法和药物,并在实验室与病房之间架起一条快速通道,实现基础研究与临床研究的双向转化,是沟通基础医学与临床医学的桥梁,也是当前医学研究的热门话题。鉴于此,本刊推出“转化医学信息”栏目,对该领域相关报道内容进行介绍,希望对相关科研和医疗工作者有所启发。
  • 干细胞研究进展消息
  • 干细胞是人体及其各种组织细胞的最初来源,具有高度自我复制、高度增殖和多向分化的潜能。干细胞研究正在向现代生命科学和医学的各个领域交叉渗透,干细胞技术也从一种实验室概念逐渐转变成能够看得见的现实。干细胞研究已成为生命科学中的热点。介于此,本刊就干细胞的最新研究进展情况设立专栏,为广大读者提供了解干细胞研究的平台。
  • [特约综述]
    细胞老化的基本特征和研究进展(张聚[1] 刘斯奇[1] 徐宁志[2])
    [研究论文]
    桔梗皂苷对慢性支气管炎小鼠肺细胞中的IL-1β和TNF-α表达的影响(贺立立 陈勤 彭申明 曹炎贵 李杨 朱敏)
    雄激素非依赖性前列腺癌细胞中差异甲基化基因的初步筛选(秦婷婷[1] 许刚[1] 季丽丽[1] 陶志华[1,2])
    FOX03a沉默或过表达对内皮祖细胞增殖的影响(黄黎亚 王飞 曹青 刘芳 桑甜甜 陈书艳)
    靶向DENN-SV基因的shRNA真核表达载体的构建(骆振华[1] 李锦成[1] 张秀梅[2] 冯卓[1])
    GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究(丁伟超[1,2,3] 马岩岩[1,2] 邱贤秀[1,2] 王绍祥[1,2] 王莹[3] 任哲[1,2])
    抑癌基因NPRL2对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响(蒋立 唐伟)
    创伤弧菌溶细胞素中类蓖麻毒素功能模序的细胞毒活性研究(许玲 谢旦立 张刘丽 楼永良)
    [综述]
    胞外DNA的研究进展(刘景辉 王昊 徐立红)
    磷脂酶A2亚型及其与男性生殖相关性研究(谢海锋[1,2] 李坤[1] 倪崖[1,2])
    三丁基锡引起的集成式细胞内信号应答反应(刘慧刚[1] 徐立红[2])
    单细胞技术在干细胞研究中的应用(董芳 袁卫平 程涛)
    MicroRNA:线粒体功能调控的新机制(王学翔 宋艳瑞 李施施 范明杰 严庆丰)
    调控纤连蛋白表达的信号通路(李亚楠 李京宝 商澎 骞爱荣)
    [教学研究]
    构建多元化的细胞生物学PBL教学模式(方瑾 于敏 张惠丹 王桂玲 李想 李晓东 刘彤 周颖 李妍 邵阳光)
    细胞生物学实验教学改革探索(胡鑫[1] 高梅[1] 李绍军[1] 陈坤明[1] 梅莉[2])
    [转化医学信息]
    转化医学信息
    [干细胞专题]
    干细胞研究进展消息
    《中国细胞生物学学报》封面

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