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褪黑激素对严重烧伤大鼠血管通透性的影响


□ 韩晓华

摘 要:

目的观察褪黑激素对严重烧伤大鼠血管通透性的影响。方法30只大鼠随机分为假烫对照组、烧伤对照组和褪黑激素组,每组10只。将麻醉动物背部皮肤置于沸水或37℃水中15S,造成30%Ⅲ度烫伤或假烫伤。假烫对照组和烧伤对照组术后立即腹腔注射溶剂(体积分数0.01的乙醇生理盐水),而褪黑激素组腹腔注射10mg/kg褪黑激素。烧伤后6h取血和皮肤、肝、肾、肺组织进行测定。结果严重烧伤可导致血细胞比容(HCT)增加(F:15.19,q=7.79,P%0.01),血浆总蛋白(TP)浓度下降(F=5.95,q=4.50,P%0.05),血浆丙二醛(MDA)水平升高(F=8.06,q=5.57,P%0.01)。以上改变可部分被褪黑激素所拮抗(F=5.95~15.19,q=3.44~3.81,P%0.05、0.01)。烧伤后。肾、肺和皮肤组织MDA水平均明显升高(F=11.18~66.46,q=3.95~16.25,P%0.01)。褪黑激素治疗使。肾和肺组织MDA降至假烫对照组水平(F=11.18、21.30,q=2.42~7.43,P〈0.01),使皮肤MDA降低25.4%(F=66.46,q=7.98,P%0.01)。褪黑激素还降低了肺和皮肤组织的含水量(F=9.81、14.79,q=3.18~4.66,P〈0.05、0.01)。结论褪黑激素在严重烧伤大鼠中具有很强的抗氧化作用,早期应用能显著降低血管通透性和减轻组织水肿。


【关键词】  褪黑激素;烧伤;血管;通透性;水肿;丙二醛;大鼠

  [摘要]目的 观察褪黑激素对严重烧伤大鼠血管通透性的影响。方法 30只大鼠随机分为假烫对照组、烧伤对照组和褪黑激素组,每组10只。将麻醉动物背部皮肤置于沸水或37 ℃水中15 s,造成30% ⅲ度烫伤或假烫伤。假烫对照组和烧伤对照组术后立即腹腔注射溶剂(体积分数0.01的乙醇生理盐水),而褪黑激素组腹腔注射10 mg/kg褪黑激素。烧伤后6 h取血和皮肤、肝、肾、肺组织进行测定。结果 严重烧伤可导致血细胞比容(hct)增加( f=15.19,q=7.79,p <0.01),血浆总蛋白(tp)浓度下降( f=5.95,q=4.50,p <0.05),血浆丙二醛(mda)水平升高( f=8.06,q=5.57,p <0.01)。以上改变可部分被褪黑激素所拮抗( f=5.95~15.19,q=3.44~3.81, p < 0.05、0.01)。烧伤后肾、肺和皮肤组织mda水平均明显升高( f=11.18~66.46,q=3.95~16.25,p < 0.01 )。褪黑激素治疗使肾和肺组织mda降至假烫对照组水平( f=11.18、21.30,q=2.42~7.43,p <0.01),使皮肤mda降低25.4%( f=66.46,q=7.98,p <0.01)。褪黑激素还降低了肺和皮肤组织的含水量( f=9.81、 14.79 , q= 3.18~4.66,p <0.05、0.01)。结论 褪黑激素在严重烧伤大鼠中具有很强的抗氧化作用,早期应用能显著降低血管通透性和减轻组织水肿。

  [关键词] 褪黑激素;烧伤;血管;通透性;水肿;丙二醛;大鼠

  effects of melatonin on vasopermeability in severely-burend rats

  han xiao-hua

  (department of physiology, qingdao university medical college, qingdao 266021, china)
  
  [abstract]objectiveto observe the effect of melatonin on vasopermeability in severely-burned rats. methodsthir-ty male sd rats were randomly assigned to three groups, sham control, burn control and melatonin group, with 10 rats in each group. the skin of back of the anesthetized animals was placed into boiling water or 37 ℃ water for 15 s to result in 30% full-thickness burn or sham burn. the rats in sham control and burn control groups were given intraperitoneally (i.p.) vehicle (1% ethanol in 0.9% saline), while melatonin-treated rats received melatonin at a dose of 10 mg/kg. the blood sample and tissue sam-ples (liver, lung, kidney, burned skin) were collected at six hours after the burn for detection. resultssevere burn increased hematocrit (hct) ( f=15.19, q=7.79, p <0.01), decreased concentrations of plasma total protein (tp) ( f=5.95, q=4.50, p <0.05) and elevated the level of plasma malondialdehyde (mda)( f=8.06, q=5.57, p <0.01). these alterations were partly counteracted by melatonin therapy ( f=5.95-15.19; q=3.44-3.81; p <0.05, 0.01). compared to the sham control, the mda levels of kidney, lung and skin were markedly higher ( f=11.18-66.46, q=3.95-16.25,p <0.01). melatonin decreased both kidney and lung mda to the level of sham control ( f=11.18,21.30; q=2.42-7.43; p <0.01), and declined the skin mda level by 25.4% ( f=66.46, q=7.98, p <0.01). furthermore, melatonin lowered the water content of both lung and skin ( f= 9.81 ,14.79; q=3.18-4.66; p <0.05, 0.01). conclusionmelatonin possess strong antioxidation in severely-burned rats, early application of it may markedly decrease vasopermeability and edema.

  [key words] melatonin; burn; blood vessel; permeability; edema; malondialdehyde; rats
  
  烧伤后血管通透性的增加可导致体液的大量外渗,一方面使循环血量锐减和血液浓缩,诱导低血容量休克的发生;另一方面引起局部和远隔脏器的水肿,加重原有的组织损伤[1]。现已证明,过量的氧自由基是导致烧伤早期血管通透性增加的重要机制之一[2,3]。早期应用抗氧化剂(如sod、vit e等)可改善血管通透性,减少休克的发生[3,4]。褪黑激素是一种主要由松果体分泌的神经内分泌激素,具有改善睡眠、调节性腺分泌、抗衰老、抗肿瘤、抗氧化及免疫调节等多种生物学功能[5,6]。最近,sener等[7] 研究发现,褪黑激素能明显抑制烧伤后内脏组织的脂质过氧化损伤。本实验通过制备30%ⅲ度烫伤大鼠模型,进一步观察了褪黑激素的抗氧化作用及其对血管通透性的影响。

  1 材料和方法

  1.1 材料

  1.1.1动物 选用30只健康雄性sd大鼠,体质量200~250 g,由青岛市药检所动物中心提供[合格证号:scxk(鲁)20030010]。动物置于室温24 ℃左右,自由饮食。

  1.1.2药品 褪黑激素、戊巴比妥钠、磷钨酸、硫代 巴比妥酸、1,1,3,3-四乙氧基丙烷、牛血清清蛋白等为美国sigma公司产品,余试剂为国产分析纯。

  1.1.3仪器 genesys 2型分光光度计系加拿大milton roy公司产品;恒温水浴箱和ultra turrax t25型匀浆机为德国julabo labortechnik公司产品;电烤箱系德国memmer公司产品;jouan mr22型低速离心机为英国line analytics ltd公司产品;血细胞比容(hct)离心机和阅读器系美国hawks-ley公司产品。
  
  1.2 方法

  1.2.1烧伤模型制备及药物干预 30只大鼠随机分为假烫对照组、烧伤对照组和褪黑激素组,每组10只,均以50 g/l戊巴比妥钠(50 mg/kg)麻醉后背部剃毛。烧伤对照组和褪黑激素组将30%体表面积的背部皮肤浸入沸水中15 s,造成30% ⅲ度烫伤[8],伤后立即腹腔注射体积分数0.01的乙醇生理盐水或褪黑激素10 mg/kg(溶于乙醇后用100倍生理盐水稀释),30 min后两组大鼠腹腔注射15 ml生理盐水行抗休克治疗。假烫对照组除背部浸入 37 ℃水 及未补液外,其余同烧伤对照组。所有大鼠于伤后6 h进行以下操作:①心脏取血1.5 ml,抗凝,立即测定hct及制备血浆;②快速剪取部分烧伤皮肤及主要内脏(肝、肺、肾)组织,分别称取大约200 mg组织用于测定组织含水量,其余投入液氮中,-20 ℃保存。
  
  1.2.2标本制备 ①血浆:1 ml全血中加入肝素20 u抗凝,4 500 r/min离心10 min后取血浆,测定血浆总蛋白(tp)和血浆丙二醛(mda)含量。②组织标本:200 mg组织加入10倍体积的磷酸缓冲液(50 mmol/l,ph 7.4,4 ℃),高速匀浆机匀浆后离心(3 000 r/min,30 min),取上清液测定组织mda含量。

  1.2.3测定指标 ①hct:用肝素抗凝的毛细管吸取双份血样,在hct离心机中离心(6 500 r/min, 5 min )后读数,取平均值。②血浆总蛋白含量:参照biuret法测定[9]。③血清和组织mda含量:采用硫代巴比妥酸比色法测定[10]。④组织蛋白含量:按lowry法测定[11]。⑤组织含水量:取200~250 mg组织,用滤纸吸干表面的渗液及血迹,称湿质量,80 ℃烘烤72 h再称干质量,计算组织含水量。组织含水量(%)=[(湿质量-干质量)/湿质量]×100%[12]。 ......(未完,请点击下方“在线阅读”)

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