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动物乳腺特异表达载体的构建及其表达特性研究


□ 孙怀昌 陈刚 张磊 宋红芹 施伟庆

扬州大学江苏省转基因动物制药工程研究中心,江苏扬州,225009

摘 要:

为了研制动物乳腺生物反应器,用中国奶山羊β-乳球蛋白基因的5′-、3′-侧翼区和β-酪蛋白基因的第1内含子构建动物乳腺特异表达载体p205C3。细胞表达试验结果显示,p205C3载体能够指导lacZ基因在SV40T基因转化的山羊乳腺上皮细胞中表达,不能指导该基因在COS-1细胞和山羊成纤维细胞中表达。将人激肽释放酶(hKLK1)cDNA克隆入p205C3载体,用获得的重组载体p205C3KLK1注射哺乳期小鼠,然后取其心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、胰腺和乳汁,酶活性测定结果显示,乳汁中的酶活性高达255.65U·mL^-1,其他组织中的酶活性与正常小鼠无差异。结果表明:p205C3载体不仅能有效地指导外源基因在山羊乳腺细胞和小鼠乳腺中表达,而且表达具有较好的组织特异性,可以用于动物乳腺生物反应器的研制。

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