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文献检索:
  • 光叶楮肌动蛋白基因片段的克隆及其序列分析 免费阅读 下载全文
  • 目的:克隆构树Actin基因,为在分子生物学中研究外源基因在构树中的表达提供内参,为克隆和分析桑科其它植物的actin基因提供参考。方法:根据GenBank中一桑科植物桑树Actin基因的EST序列,设计引物,提取构树叶片总RNA,通过RT-PCR克隆目标片段。结果:获得一段大小为238bp的基因片段,经测序、同源性比较,这条片段的EST序列与桑树Actin基因、巴旦杏Actin基因的核苷酸同源性分别为96%、92%;氨基酸序列的同源性则分别为100%、98.73%。结论:通过实验结果分析表明获得了构树actin基因EST序列。
  • 蒙古牛BMPR-IB基因部分cDNA的克隆和序列分析 免费阅读 下载全文
  • BMPR-IB基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用。该研究从影响卵巢生长发育和调控的BMPR-IB基因出发,以牛卵巢的RNA为模板,按照不同物种BMPR-IB基因的相似性设计特异引物,运用RT-PCR技术扩增并获得了特异片段,该片段经PCR、酶切和测序验证,证实所克隆序列为牛BMPR-IB序列,包含有953bp组成的部分cDNA序列,同源性分析结果表明,牛BMPR-IB基因序列与绵羊、山羊、人、猪、小鼠的BMPR-IB基因分别为98%、97%、92%、93%、88%的同源性。这为克隆其他物种的BMPR-IB基因提供了依据,同时牛骨形态发生蛋白的测序为更好地理解牛的生殖机理提供帮助。
  • 桑泛素延伸蛋白基因片段的克隆及序列分析 免费阅读 下载全文
  • 目的:利用3’RACE技术克隆植物泛素基因,是进一步研究其功能的基础。方法:本研究从桑树(丰驰桑)(Morus bomby-cis)幼叶中提取总RNA,反转录成cDNA,根据已报道的泛素基因序列设计1条正向引物,利用3’RACE(Rapid Amplification of cDNAEnd)技术进行扩增。结果:扩增出1条690 bp的泛素基因片段。该片段5’端为编码156个氨基酸残基的阅读框,3’末端有219bp的非翻译区。结论:同源分析表明,此cDNA序列为泛素延伸蛋白基因(Genebank登录号为DQ839403)。用Genedoc软件对该片段编码的氨基酸序列进行同源性分析的结果表明:桑树泛素延伸蛋白与马铃薯、烟草、陆地棉、黄瓜的泛素延伸蛋白以及苜蓿的核糖体S27A蛋白的同源性都在96%以上。
  • Bt菌株QCL-1中cry2Ac10基因的克隆、表达和活性研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:从高毒力Bt菌株中克隆cry2Ac10基因,并研究其表达和杀虫活性。方法:以Bt菌株QCL-1质粒为模板,利用cry2特异性引物FY2A5和FY2A3进行PCR扩增,将目的片段克隆到表达载体pET-21b(+),构建T7启动子控制的大肠杆菌重组表达质粒pET21b-cry2Ac。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测基因表达情况,然后对表达产物进行生物活性测定。结果:从菌株QCL-1中克隆出目的基因,该基因的编码框由1 872个碱基组成,编码的蛋白质由623个氨基酸组成,与已报道的Cry2Ac氨基酸同源性为97.4%-99.7%。该基因(GenBank accession EF405952)已被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry2Ac10。该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够正常表达70kDa的蛋白,表达产物对棉铃虫、粘虫和粉纹夜蛾幼虫具有高毒力,同时对甜菜夜蛾幼虫生长有抑制作用,其中对棉铃虫和粘虫初孵幼虫的LC50分别为30.0μg/g和16.7μg/g。结论:成功克隆和表达了cry2Ac10基因,并明确了cry2Ac10蛋白的活性,为该基因的研究和应用奠定基础。
  • 10kD玉米醇溶蛋白基因的克隆与植物表达载体构建 免费阅读 下载全文
  • 由于紫花苜蓿中的含硫氨基酸水平很低,采用基因工程手段将富硫蛋白基因-10kD玉米醇溶蛋白(zein)基因转入苜蓿中以提高其水平。根据该基因的保守序列设计引物,并在下游引物终止密码子前引入内质网驻留蛋白信号序列(KDEL),通过PCR技术从玉米(Zea mays L.)黄化幼苗基因组中扩增目的基因的开放阅读框(ORF)。序列测序得到全长为465bp的目的片断,该片段编码154个氨基酸,其中甲硫氨酸(M)31个占20.13%,半胱氨酸(C)6个占3.90%,含硫氨基酸共占24.03%。该基因与报道的10kD玉米醇溶蛋基因具有很高的同源性。将该基因构建到植物表达载体pCAMBIA13011上,以转化紫花苜蓿提高其含硫氨基酸的水平。
  • 重组人睫状神经营养因子突变体的构建、表达及生物活性分析 免费阅读 下载全文
  • 目的:通过对原始CNTF的突变改造,降低表达蛋白的免疫原性,同时增加其稳定性,以期能用于临床治疗肥胖症。方法:以原始CNTF为模板,去掉N端的12个氨基酸、C端的14个氨基酸,并将C端末2个氨基酸点突变为极性较强的赖氨酸,在大肠杆菌中表达,获得CNTF-T突变体。结果:基因序列分析与原设计吻合,目的蛋白表达量占全菌体的35%左右,表达蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性、DEAE-FF纯化,纯度可达95%以上,小鼠体内生物活性测定,能明显抑制小鼠体重增长,且CNTF-T的生物活性比原始序列CNTF的活性高。结论:突变的CNTF-T有望成为新一代的生物减肥制剂应用于临床。
  • 利用Gateway技术构建慢病毒载体及其在鸡囊胚细胞中的表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:建立慢病毒载体介导的外源基因在动物中表达的模式。方法:通过PCR扩增出带EGFP基因和特异性结合位点的DNA序列,并应用Gateway技术构建了带EGFP基因的pLenti6/v5-DEST慢病毒载体。利用磷酸钙介导慢病毒4质粒系统在包装细胞中转染,收集并浓缩产生的病毒颗粒,通过感染293FT细胞测定慢病毒滴度。结果:通过PCR扩增后测序分析,表明慢病毒载体构建正确。病毒滴度测定结果为2×10^7TU/mL。并用慢病毒对鸡囊胚细胞进行感染,获得了较强的表达效果。结论:慢病毒载体系统所产生的病毒颗粒对动物细胞具有较强的感染能力,为慢病毒载体在转基因家禽研究中的应用奠定了基础。
  • 小麦RCA的cDNA片断克隆和反义表达载体的构建 免费阅读 下载全文
  • 目的:试图分离和克隆小麦Rubisco活化酶cDNA片断并构建反义表达载体。方法:采用RT-PCR技术克隆cDNA片断,对序列用Blast等软件进行分析,并将该片断反向连接于植物表达载体pROK2的CaMV35S启动子下游,构建反义表达载体。结果:获得了小麦Rubisco活化酶(RCA)的cDNA片断(GenBank注册号:DQ984669);小麦RCA的cDNA片断推导的氨基酸序列与其它植物的RCA氨基酸序列高度同源。序列比较表明,用本实验所得的cDNA序列推导出的氨基酸序列与GenBank登录的大麦(AAA63163)、南极银须草(AAP83928)、水稻(AAX95414)、玉米(AAC97932)、拟南芥(NP 850321)和烟草(CAA78703)等的RCA序列的同源性分别为97%、95%、88%、83%、82%和82%;分析表明,该序列为新的小麦RCAα的cDNA序列;通过选择和引入合适的酶切位点进行载体构建,构建了小麦RCA的cDNA反义表达载体pR-AntiRCA。结论:构建成了小麦RCA的cDNA反义表达载体。
  • 血红蛋白基因在产CBHⅡ毕赤酵母工程菌中的表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:提高毕赤酵母工程菌P.pastoris-CBHⅡ液体发酵产纤维二糖水解酶(CBHⅡ)的能力。方法:分别构建了用于胞外及胞内表达透明颤菌血红蛋白(VHb)基因的毕赤酵母重组表达质粒pPICZαA-vhb与pPICZαA(-s)-vhb。通过电转化将两种质粒转化巴氏毕赤酵母重组菌体P.pastoris-CBHⅡ菌株,经过筛选分别获得可正确表达具有生物活性的VHb蛋白的重组菌株P.pastoris-CBHⅡ-vhb(胞内表达VHb)及P.pastoris-CBHⅡ-vhb(-s)(胞外表达VHb)。结果:摇瓶发酵实验表明,血红蛋白在贫氧条件下可促进CBHⅡ的分泌表达,培养液上清的CMC酶活分别从出发菌株P.pastoris-CBHⅡ的1.81U/ml提高到2.04U/ml(胞内表达VHb)与1.93U/ml(胞外表达VHb)。VHb蛋白胞内表达菌株比胞外表达菌株效果更明显。
  • 牛促卵泡激素在毕赤酵母中的表达 免费阅读 下载全文
  • 目的:实现重组牛促卵泡激素在毕赤酵母中的表达。方法:依据毕赤酵母的密码子偏爱性设计并利用PCR方法合成了牛促卵泡激素的α亚基和带有6×his-tag的β亚基相应的DNA序列,构建表达载体pHIL-S-bFSH,转化毕赤酵母,表达蛋白进行ELISA定量和Western blot鉴定。结果:重组牛促卵泡激素的表达量为0.26mg/L,Western blot鉴定分子量为35kDa。结论:在毕赤酵母中实现了具有免疫源活性的重组牛促卵泡激素的表达。
  • 单核苷酸多态性与甜瓜抗枯萎病分子育种研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:结合单核苷酸多态性标记技术,利用甜瓜本身的抗病性以解决新疆甜瓜病害问题。方法:对新疆甜瓜抗枯萎病基因Fom-2基因进行克隆分析,并根据Fom-2基因在不同抗性甜瓜亲本的单核苷酸多态性,设计检测SNP标记的PCR扩增引物,验证其多态性;并利用F2代分析该标记与筛选获得的甜瓜抗枯萎病基因连锁的SSR标记的遗传关系。结果:在抗病与感病甜瓜品种中均扩增获得PCR条带,试验中设计单核苷酸多态性分子标记在抗病品种为显性,与筛选的和抗枯萎病基因紧密连锁的共显性标记SSR430共分离。结论:不同抗性甜瓜品种均含有Fom-2基因或其高度同源序列,SNP显性标记和共显性标记SSR430均可用于甜瓜抗枯萎病分子标记辅助育种。
  • 大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因表达条件的优化 免费阅读 下载全文
  • 目的:对已构建的含有大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的重组菌株进行鉴定和表达条件优化。方法:采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含ST1-LTB融合基因的重组质粒,同时用SDS-PAGE检测不同条件下ST1-LTB融合基因的表达情况。结果:酶切鉴定证实重组质粒pXSL1含有ST1-LTB融合基因且阅读框架正确,以IPTG为诱导剂诱导ST1-LTB融合基因表达的优化条件是:培养基pH7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.8mmol/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG,诱导时间5h,此时ST1-LTB融合蛋白表达量达35.2%。结论:实现ST1-LTB融合基因的高效表达,为大肠杆菌肠毒素双价基因工程菌苗的生产工艺研究提供了可靠的实验数据。
  • 欢迎订阅2008年《特产研究》 免费阅读 下载全文
  • 《遗传学报》和《遗传》杂志 免费阅读 下载全文
  • 银杏不同组织的总RNA提取方法的改进 免费阅读 下载全文
  • 方法:采用改进的CTAB法高效地从富含多糖、多酚类化合物的银杏的根、茎、叶和果实四个组织中提取RNA。结果:抽提的不同组织的RNA经电泳检测,可见28S和18S两条清晰的主带,且28S rRNA在亮度上均为18S rRNA的2倍,两条带之间无弥散现象;根、茎、叶、果所提的RNA的经紫外吸收检测得到A260/A230分别为1.9、1.4、2.1、1.7,测得A260/A280分别为1.8、2.0、2.3、1.8,鲜重分别达到78μg/g、69μg/g、150μg/g、90μg/g;通过RT-PCR及凝胶检测,得到了银杏看家基因18S基因的约150bp清晰的条带,从而进一步检测提取RNA的质量。结论:提取的总RNA纯度高,质量好,足以为研究提供RNA材料。
  • 六种回收纯化差异显示PCR产物方法的比较 免费阅读 下载全文
  • 目的:建立mRNA差异显示PCR产物回收纯化方法。方法:采用了6种方法对干旱东亚砂藓mRNA差异显示技术的特异PCR产物进行分离回收纯化。结果:6种不同回收方法,显示不同的结果。结论:冻融法简单、方便、经济、有效,对东亚砂藓构建的mRNA差异显示技术中特异条带进行回收,具有有效性和可靠性。
  • 用重叠PCR合成植物甜蛋白brazzein基因 免费阅读 下载全文
  • 目的:为在泡盛曲霉(Aspergillus awamori)中进行表达,采用重叠PCR合成了植物甜蛋白brazzein基因。方法:根据非洲热带植物Pentadiplandra brazzeana产生的天然甜蛋白brazzein的氨基酸序列及泡盛曲霉糖化酶基因glaA的密码子偏爱性,设计并化学合成了2对3’-端互补的寡聚核苷酸,通过PCR延伸获得2条末端有部分重叠的双链核苷酸片段,再通过重叠PCR扩增,合成了用于泡盛曲霉表达的植物甜蛋白brazzein基因。结果:将brazzein基因克隆到pMD18-T载体,随机挑取6个重组质粒测序,结果1个重组质粒有连续4个碱基缺失,3个重组质粒各有1个碱基缺失,2个重组质粒携带的brazzein基因核苷酸序列完全正确。结论:合成的brazzein基因大小162 bp,编码54个氨基酸,推断的氨基酸序列与Pentadiplandra brazzeana产生的天然brazzein完全一致,表明植物甜蛋白brazzein基因成功合成。
  • 应用差减杂交筛选雪莲低温特异表达基因 免费阅读 下载全文
  • 目的:获得雪莲低温特异表达基因cDNA全长片段。方法:以低温诱导雪莲为目的材料,常温诱导为对照,采用抑制差减杂交(SSH)方法,构建了雪莲的差减cDNA文库,筛选文库并得到38个cDNA片段。结果:利用GenBank数据库Blastx进行同源性搜索发现有22个非冗余克隆,其中18个已知基因4个未知基因。结论:同源分析表明冷诱导基因和磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)也在其中。所取得的结果为日后进一步对新疆雪莲抗寒机理的研究和更好地分离低温特异表达基因奠定了基础。
  • 应用实时荧光PCR技术定性定量检测改良品质的转基因小麦 免费阅读 下载全文
  • 目的:对转入高分子量谷蛋白亚基的小麦中转基因成分进行实时荧光PCR定性定量检测。方法:针对转基因小麦品系中通用的ubiquitin启动子,NOS终止子以及标记基因bar基因进行定性筛选检测,同时用已知为单拷贝的Wx012基因作为小麦物种内源特异参照基因,用单粒B73转基因小麦提取基因组DNA建立内源基因和外源基因的标准曲线,对转基因小麦样品A进行定量检测,同时优化实时荧光PCR条件反应条件。定量检测结果为5.35%。结果:研究的实时荧光PCR技术对转基因小麦中转基因成分能够快速准确地进行定性定量检测。
  • 两种测试方法对DPPH分光光度法测试结果的影响 免费阅读 下载全文
  • 目的:比较固定反应时间法和动力学监测法的准确性。方法:用固定反应时间法和动力学监测法分别测定维生素C(Vc)、二丁基羟基甲苯(BHT)对二苯代苦味酰自由基(DPPH)的清除作用,通过F检验和t检验来揭示两种方法的差异。结果:通过动力学监测法得到的测试结果更能准确的反映测试样品对DPPH自由基的清除能力。结论:建议在用DPPH分光光度法过程中使用动力学监测法。
  • 离子注入介导麻黄和甘草总DNA转化苜蓿的初步研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:探索离子注入介导麻黄和甘草总DNA转化苜蓿的方法与效果。方法:氩离子(Ar+)注入介导麻黄和甘草总DNA在2个品种的苜蓿中转化,对种子发育正常的T1代苜蓿单株进行生物碱类、黄酮类和皂苷类物质进行定性检识。结果:苜蓿种子经离子注入介导转基因处理后,T1代结荚率很低,复合DNA处理的183和283的结荚率分别为6.40%和8.33%,正常发育的种子分别为2.40%和5.83%。获得了种子发育良好的苜蓿T1代单株50株,其中6个单株根或茎的天然产物定性检识呈阳性。结论:Ar+注入介导外源DNA大分子的转化对苜蓿种子的发育具有很大影响,获得的转基因苜蓿T1代种子,为进一步开展相关化学证据和分子证据的研究提供了宝贵的材料。
  • 甘薯(Ipomoea batatas L.)遗传转化几个因素的研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:提高甘薯的遗传转化率,为建立快速高效的甘薯遗传转化体系奠定基础。方法:以甘薯多个优良栽培品种无菌苗茎切段为受体,利用农杆菌LBA4404/pSP10Z做介导,研究了影响甘薯转化的几个因素。结果:接种侵染时间对转化效率影响很大,以2-15min为宜,最高转化率可达32.14%;不同基因型的转化受体之间转化率差别较大;在培养过程中最后30min加入终浓度为50μmol/L AS的接种菌侵染的外植体,转化率较对照提高了2.02倍;共培养培养基中加入终浓度为50μmol/L的AS,转化率较对照组提高了6.11倍;AS终浓度为50μmol/L同时pH为4.8的共培养培养基有利于转化的发生,转化率较对照组提高了1.73倍;共培养培养基中脯氨酸的添加并不能提高转化率。结论:该研究为快速高效甘薯遗传转化体系的建立提供了依据。
  • 低功率He-Ne激光照射黑曲霉的方法与效应 免费阅读 下载全文
  • 目的:探索低功率He-Ne激光对柠檬酸生产菌黑曲霉诱变育种的简易方法。方法:应用带扩束镜的低功率He-Ne激光装置,在无菌条件下对柠檬酸生产菌黑曲霉的单孢子膜进行不同时间的垂直照射,无菌水洗脱,指示性平板筛选,液体培养,测定黑曲霉诱变菌株的柠檬酸产量。结果:不同时间的激光照射黑曲霉单孢子,其存活率与激光照射时间没有线性关系。激光照射6min,黑曲霉M2代产酸的正变率高达37.5%,而此时的存活率也高达40.0%。获得了黑曲霉柠檬酸产酸率提高了10%的突变菌株,为黑曲霉的遗传育种提供了材料。结论:这种方法便于在无菌条件下操作,保证了激光照射黑曲霉单孢子的均匀性,是一种简便易行的微生物诱变育种方法。
  • 塔里木河天然胡杨林中病灶微生物的分离与形态学初探 免费阅读 下载全文
  • 目的:从塔里木河中下游废弃上百年的河道周围选取2处样点,采集具有不同病症胡杨的茎叶,从中进行菌种分离。方法:显微镜镜检,革兰氏染色及生理生化检测。结果:通过形态观察,得到13株细菌、4株真菌。其中的7株细菌分离于病叶,其余10株分离于病变树皮。对13株细菌革兰氏染色结果表明,2株为革兰氏阴性菌,11株为革兰氏阳性菌。对真菌的孢子形态观察表明,4株均为霉菌。结论:实验首次对胡杨特殊病灶微生物进行分类统计,为解决由微生物感染引起的胡杨林退化问题积累数据。
  • 不同生长期罗汉果蛋白组图谱比较研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:分析、比较30d和60d两个不同时期罗汉果蛋白质组图谱,寻找与罗汉果发育、成熟及罗汉果甜甙生成密切相关基因,为罗汉果的开发和品种改良提供基础。方法:采用双向电泳(2-DE)技术构建30d和60d罗汉果蛋白质组图谱,应用Im-ageMaster 2D图像分析软件对所得蛋白质组图谱进行分析。结果:30d和60d两个不同时期罗汉果蛋白质组图谱有明显差别,与30d罗汉果蛋白组图谱比较,随果实发育、成熟,60d罗汉果有29个新的蛋白产生,30个蛋白消失,16个蛋白表达3倍升高和15个蛋白表达50%下调。结论:罗汉果生长、发育和成熟的不同阶段受特定基因的表达调控。
  • 天山瓦韦总黄酮成分的含量测定 免费阅读 下载全文
  • 目的:对天山瓦韦总黄酮成分进行含量测定。方法:以芦丁为标样,用分光光度法测定不同溶剂和不同时间条件下的总黄酮含量。结果:天山瓦韦中黄酮类化合物提取的最佳条件为:75%的乙醇,抽提3.5h,总黄酮含量为3.20%。
  • 心草中总黄酮含量的测定及其提取工艺研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:测定心草中的总黄酮含量并确定其提取条件。方法:采用分光光度法测定、乙醇浸提法提取心草中的总黄酮。结果:浸提的最佳条件是:A3B1C3D2,即用20倍50%乙醇在70℃下进行6h,总黄酮含量为15.675%。平均加样回收率为97.67%。结论:心草中的总黄酮含量较高,此方法简便、快速、重现性好,可作为检测心草中黄酮含量的一种手段。
  • 链霉菌Streptomyces.sp NJ0510的分离、鉴定及其抑菌活性的研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:从湖边树木下的土壤中筛选分离链霉菌并研究其抑菌活性。方法:通过对菌的形态学和生理生化特征分析确定其种属。通过滤纸片法研究其次级代谢物的抑菌谱。结果:分离得到的一株链霉菌Streptomyces.sp NJ0510,次级代谢产物能抑制G+细菌,抑菌圈可达10mm以上,而对大肠杆菌等没有抑制活性。结论:该菌代谢产物能够抗耐药的金色葡萄球菌,具有潜在的应用前景。
  • 枯草芽孢杆菌SN-02发酵液的抑菌谱及稳定性研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:研究枯草芽孢杆菌SN-02发酵液的抑菌谱及稳定性。方法:以28种植物病原菌为供试菌,杯碟法测定SN-02菌发酵液的抑菌谱;以烟草靶斑病菌为指示菌,杯碟法测定发酵液的热稳定性、酸碱稳定性及传代稳定性。结果:SN-02菌发酵液对28种供试菌株的抑菌圈直径在20mm以上。将发酵液于120℃处理2.5h,-20℃处理25d抑菌活性没有明显变化;发酵液在pH 4-9时抑菌活性无明显变化,在pH 1-3和pH 10条件下抑菌活性明显下降;连续培养10代,发酵液抑菌活性没有下降。结论:SN-02菌发酵液抑菌谱较广,耐高温和低温,传代稳定性好,但在强酸和强碱条件下稳定性较差。
  • 一株产木聚糖酶菌株的分离、鉴定及其酶学特性研究 免费阅读 下载全文
  • 以木聚糖为唯一碳源,采用平板水解圈筛选和摇瓶发酵相结合的方法,从土壤中分离、筛选到一株产木聚糖酶的细菌xy-7,根据其形态和生理、生化特性,并结合16S rDNA序列分析,初步鉴定为坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis)。经测定,xy-7所产木聚糖酶的最适作用温度为60℃,最适作用pH为7.0。该酶热稳定性较好,60℃时保温2h酶活保持为原来的73%。此外,该酶的pH作用范围较广,pH 9.0时酶活仍能保持68%,属于耐碱性木聚糖酶。这些性质表明,该酶在制浆造纸等行业具有较好的应用前景。
  • 西瓜枯萎病高效拮抗菌XJUL-12的筛选与鉴定 免费阅读 下载全文
  • 目的:分离获得西瓜枯萎病高效拮抗菌,为研究西瓜枯萎病高效拮抗菌的拮抗机制奠定基础。方法:用碾碎法从新疆有毒植物麻(Urtica cannabina L.)、亚洲薄荷(Mentha asiatica Boris.)、阿尔泰藜芦(Veratrum lobelianum Bernh.)中分离内生菌,并用琼脂扩散法筛选出对西瓜枯萎病具有较强抗性的内生菌XJUL-12,通过PCR方法扩增XJUL-12的16S rDNA,并与GeneBank中已鉴定菌的16S rDNA序列对比,用N-J方法构建XJUL-12进化树,用Bootstraping法对其评估,同时结合其形态特征、生理生化检测、G+C mol%含量对XJUL-12进行鉴定。结果:XJUL-12的16S rDNA序列与Bacillus subtilisstrain CGMCC1869同源性为99%,G+C mol%含量为46.72mol%。结论:筛选获得的内生菌XJUL-12对西瓜枯萎病具有较强抗性,并将XJUL-12鉴定为枯草芽孢杆菌。
  • 高效降解石油细菌的分离鉴定及降解能力的研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:为获得高效降解原油的菌株,从石油污染严重的土壤中采样,富集分离得到原油降解菌,并初步考察它们降解原油的能力。方法:通过富集培养、多次筛选分离得到三株优势菌,编号为SWH-1、SWH-2和SWH-3。通过16S rDNA序列分析和NCBI数据库的Blast比对分析,对其鉴定到种。通过差量法测定它们在室内摇瓶中对原油的降解率。结果:经鉴定,这三株菌分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillus)、多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium multivorum)和嗜温鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium thalpophi-lum)。在0.5g/L的原油培养基内培养1w,SWH-1和SWH-2的降解率较高,分别为33.89%和46.31%。将这两株菌进行混合培养降解原油,降解率高达51.73%。结论:所筛选到的枯草芽孢杆菌和多食鞘氨醇杆菌在生物修复方面具有很好的应用潜力,而且多食鞘氨醇杆菌在石油降解方面的报道尚属首次。
  • 黑曲霉产木聚糖酶固态发酵条件及部分酶学性质的研究 免费阅读 下载全文
  • 实验以棉粕和玉米秆为主要原料,采用单因素和正交实验方法对黑曲霉固态发酵产木聚糖酶的培养条件进行了优化,为了获得高酶活产品的发酵条件。结果表明,最适培养基组分为棉粕和玉米秆的比例为3∶2,固水比为1∶1.2,尿素的最适添加量为2%(以干重计),KH2PO4的最适添加量为0.2%。在此条件下,菌株产酶活性可达6 529U/g干曲。该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为5.0,pH稳定范围较宽,在30℃、pH 3.5-6.0范围内处理100min,酶活保持在85%以上,但耐热性不是很理想,在60℃保温30min残余酶活只有17%。
  • 红酵母产类胡萝卜素提取工艺的优化研究 免费阅读 下载全文
  • 目的:从提取溶剂及提取条件等方面对红酵母产类胡萝卜素提取工艺进行了优化研究。方法:用单因子实验对提取溶剂进行了筛选;用析因试验对提取条件进行了分析研究;通过最陡爬坡实验和中心组合设计实验,优化得到了最佳的类胡萝卜素提取条件。结果:结果表明丙酮和二甲亚砜组成的复合体系是理想的提取溶剂。溶剂添加量、提取温度、提取时间、丙酮与二甲亚砜组分比例都对红酵母产类胡萝卜素提取产生一定影响,其中溶剂添加量和丙酮与二甲亚砜组成比例的影响最为显著(P〈0.001)。最佳优化提取条件为:溶剂添加量为42.66%(V/V),丙酮与二甲亚砜组成比例为62.47%(V/V),温度为20℃,提取时间为90min,在此条件下红酵母产类胡萝卜素的最大提取量为5.51μg/ml。结论:实验得到了红酵母发酵产类胡萝卜素溶剂提取条件的一个非常合适的模型。
  • 长白大苦瓜高效再生系统的建立 免费阅读 下载全文
  • 目的:长白大苦瓜是蔬菜新品种,其高效再生系统的建立有助于蔬菜的快速生产,克服季节性、地域性对蔬菜生产的影响。方法:通过不同激素之间的配比寻找合适的种子萌发、不定芽分化和生根培养基。结果:预处理可有效提高种子萌发率,并获得长势整齐、健壮的无菌苗。添加6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L的培养基诱导的不定芽分化率较高,而激素组合6-BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L则对诱导丛生芽具有较好的效果。添加NAA 0.5mg/L能使试管苗的生根率达到50%。经过3d炼苗,移入腐叶土和泥炭土比例为1∶1的基质土壤中就可以正常生长。结论:长白大苦瓜可以建立高效的再生系统,实现试管苗的快速生产。
  • 生物肥在不同作物上的应用效果 免费阅读 下载全文
  • 通过田间小区试验和大区示范,对生物肥在大豆、水稻上的应用效果进行了探讨。小区试验结果表明,生物肥与化肥配合施用对作物生长发育产生了显著的影响。与单施氮、磷、钾化肥相比,显著提高了作物的株高、荚(穗)数、粒数、粒重,与单施化肥和不施肥对照比较,大豆分别增产6.9-7.9%和8.8-10.7%%;水稻分别增产7.1-8.7%和6.2-8.0%。大区示范结果也表明,化肥配合生物肥能够促早熟,明显增加株荚数、株粒数和百粒重而获增产,增产率为10.13%。
  • FISH技术在强化生物除磷中的应用 免费阅读 下载全文
  • 荧光原位杂交(FISH)是一种微生物生态学研究技术,在强化生物除磷(EBPR)过程中,用来鉴定系统中的优势微生物种群,直接观察其在污泥系统中的形态结构、分布状态,跟踪监测其各个阶段的动态变化,并将其量化。与DGGE/TGGE、SSCP、RFLP、DAPI染色等研究方法,可突破FISHj技术不能提供活性污泥内部种群多样性、检测“未知”微生物的研究局限,增加研究的准确性。发展探针检测水平、发现更有效的染色鉴定方法、与生理生化研究相结合将成为FISH技术在强化生物除磷过程中的发展方向。
  • 吡啶及其衍生物微生物降解研究进展 免费阅读 下载全文
  • 吡啶及其衍生物由于难降解、毒性、致畸变等特性而引发的环境污染日益得到人们的关注,受其污染的水和土壤环境的生物修复是目前环境治理领域的重要课题。该文综述了近年来国内外吡啶类化合物生物降解的研究进展,对好氧和厌氧情况下的微生物代谢路径及共代谢进行了讨论,并指出今后吡啶类化合物的研究方向。
  • [Research Papers]
    光叶楮肌动蛋白基因片段的克隆及其序列分析(李岩 李冠)
    蒙古牛BMPR-IB基因部分cDNA的克隆和序列分析(董文杰 王峰 刘永斌 田春英 刘美霞 荣威恒)
    桑泛素延伸蛋白基因片段的克隆及序列分析(王利芬 陈正凯 陆小平)
    Bt菌株QCL-1中cry2Ac10基因的克隆、表达和活性研究(白雪峰 李长友 程林友 郑桂玲 周洪旭 李国勋)
    10kD玉米醇溶蛋白基因的克隆与植物表达载体构建(刘晓颖 陈芸 苗玉青 李冠)
    重组人睫状神经营养因子突变体的构建、表达及生物活性分析(应莲芳 雷清 梁凌宇 高雪峰 蒋琳)
    利用Gateway技术构建慢病毒载体及其在鸡囊胚细胞中的表达(胡雄贵 肖定福 邓缘 燕海峰)
    小麦RCA的cDNA片断克隆和反义表达载体的构建(封德顺 王洪刚 田纪春 李兴锋 高居荣)
    血红蛋白基因在产CBHⅡ毕赤酵母工程菌中的表达(余河斌 余少文 汤新 张煜 邢苗)
    牛促卵泡激素在毕赤酵母中的表达(霍向东 孙建 欧阳平凯 石玉瑚)
    单核苷酸多态性与甜瓜抗枯萎病分子育种研究(王贤磊 李群 方勇 高小明 杨艳 李冠)
    大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因表达条件的优化(朱舟 万军飞 高铭鸿 孔庆斌 刘雪霞 高凤山 许崇波)

    欢迎订阅2008年《特产研究》
    《遗传学报》和《遗传》杂志
    [Technique and Methods]
    银杏不同组织的总RNA提取方法的改进(蔡荣 许锋 陈柳吉 程水源)
    六种回收纯化差异显示PCR产物方法的比较(师帅 沙伟 李磊 王艳丽)
    用重叠PCR合成植物甜蛋白brazzein基因(陈波)
    应用差减杂交筛选雪莲低温特异表达基因(王博 艾秀莲 王志方 李芳 罗明 张学军)
    应用实时荧光PCR技术定性定量检测改良品质的转基因小麦(栾凤侠 张洪祥 白月)
    两种测试方法对DPPH分光光度法测试结果的影响(李小飞 张伟 薛淑媛 李文文 李冠)
    离子注入介导麻黄和甘草总DNA转化苜蓿的初步研究(金湘 张建军 毛培宏 徐建辉)
    甘薯(Ipomoea batatas L.)遗传转化几个因素的研究(毕瑞明 高峰)
    低功率He-Ne激光照射黑曲霉的方法与效应(马玲 金湘 毛培宏)
    塔里木河天然胡杨林中病灶微生物的分离与形态学初探(王宁 生光 邓爱华 王灵 季佳 艾尔肯·热合曼)
    不同生长期罗汉果蛋白组图谱比较研究(向秋 王建红 罗伟生 黄江 范才文 苏何玲 黄岚珍)
    天山瓦韦总黄酮成分的含量测定(阿衣木姑·阿布拉 苏力坦·阿巴白克力)
    心草中总黄酮含量的测定及其提取工艺研究(买合布白·阿不都热依木 艾克白尔 库尔班尼莎 阿不都拉·阿巴斯)
    [Development and Application]
    链霉菌Streptomyces.sp NJ0510的分离、鉴定及其抑菌活性的研究(李艳利 黎晶晶 马中良)
    枯草芽孢杆菌SN-02发酵液的抑菌谱及稳定性研究(张崇 赵秀香 宋影 高芬 魏颖颖 吴元华)
    一株产木聚糖酶菌株的分离、鉴定及其酶学特性研究(孙振涛 刘建军 赵祥颖 杜金华 黄伟红)
    西瓜枯萎病高效拮抗菌XJUL-12的筛选与鉴定(张洪涛 赵国玉 于频频 吾甫尔·米吉提 艾山江·阿布都拉 徐田枚)
    高效降解石油细菌的分离鉴定及降解能力的研究(李超敏 王加宁 邱维忠 迟建国)
    黑曲霉产木聚糖酶固态发酵条件及部分酶学性质的研究(刘成 孙中涛 田林茂 杜金华)
    红酵母产类胡萝卜素提取工艺的优化研究(罗璇 钟晓凌 王金华 谈丹)
    长白大苦瓜高效再生系统的建立(石若夫 王翔 王玮)
    生物肥在不同作物上的应用效果(郭玉华)
    [Review Articles]
    FISH技术在强化生物除磷中的应用(亢涵 王秀蘅 李楠)
    吡啶及其衍生物微生物降解研究进展(李培睿 李宗义 秦广雍)
    《生物技术》封面

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    主办单位:黑龙江省微黑龙江省科学院微生物研究所

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