设为首页 | 加入收藏
文献检索:
  • 决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建
  • [目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI。[结果]决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽。决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员。所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确。[结论]克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础。
  • 溶藻弧菌耐药基因qnr的克隆及生物信息学分析
  • [目的]克隆溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)喹诺酮类耐药基因qnr并分析其蛋白结构,为研究该蛋白的生物学功能奠定基础。[方法]根据NCBI上公布的相关序列设计qnr基因特异性引物,利用PCR方法扩增基因序列,进行DNA测序及生物信息学分析。[结果]从溶藻弧菌染色体上获得qnr基因大小为651bp,编码216个氨基酸,进化分析可知其与副溶血弧菌有很近的亲缘关系,二级结构分析含有五肽重复序列,三维结构与大肠杆菌质粒上的qnr蛋白空间结构极为相似。[结论]通过对蛋白质序列分析和结构预测,初步确定该基因为喹诺酮耐药基因,为水产细菌的耐药机制研究奠定基础。
  • 花生FAD8基因的克隆及生物信息学分析
  • [目的]克隆重要油料作物花生中在多不饱和脂肪酸合成代谢途径发挥重要作用的脂肪酸脱氢酶FAD8基因,并对其进行生物信息学分析。[方法]以高油花生品种鲁花14为材料,电子拼接花生FAD相关EST序列并结合RT-PCR方法克隆花生Ah FAD8全长c DNA,并对其基因序列特征进行分析。[结果]花生Ah FAD8基因c DNA全长1 494 bp,开放阅读框为1 359 bp,编码453个氨基酸,分子量为51.71 k Da;蛋白序列比较发现花生FAD8与野大豆和普通大豆的相似性最高,为83%;NJ法聚类分析表明其与上述两种物种的亲缘关系最近,且支持率达96%。[结论]从花生中分离到一个新的ω-3脂肪酸脱氢酶基因,具有FAD8蛋白的保守结构域及3个富组氨酸基序,属于FAD8家族。
  • 单纯疱疹病毒gG1基因植物表达载体的构建
  • [目的]提高gG1基因中植物的表达量,研制I型单纯疱疹病毒的口服植物疫苗。[方法]PCR扩增植物组成型表达启动子CaMV35S、378bp的单纯疱疹病毒gG1基因、NOS终止子基因,将这些基因插入植物表达载体pCAM-BIA1301的多克隆位点处,将pCAMBIA1301-gG1转化至大肠杆菌DH5α,用双酶切、测序进行鉴定。最后,将其转化至农杆菌EHA105,用PCR进行鉴定。[结果]从转化农杆菌中提取pCAMBIA1301-gG1DNA中得到了预期大小的gG1基因。[结论]成功构建了单纯疱疹病毒gG1基因的植物表达载体,为转化植物奠定了基础。
  • 人骨钙素真核表达载体构建及蛋白表达纯化
  • [目的]在毕赤酵母真核表达系统中获得人骨钙素(hBGP)蛋白以便用于2型糖尿病新药研究。[方法]人工合成hBGP基因并克隆入真核载体pPIC9K,转化毕赤酵母GS115,0.5%甲醇诱导表达,优化表达时间,实现hBGP的真核表达。获得的目的蛋白经离子交换层析和分子筛等进行纯化,用Tricine—SDS—PAGE检测蛋白表达情况及纯化结果,并以Westernblot进行验证。[结果]酶切及基因测序结果显示成功构建了pPIC9K—BGP真核表达载体,经Tricine—SDS—PAGE及Westernblot测定均检测到分子量为5.8kDa的目的条带,表明hBGP在毕赤酵母中成功表达并纯化。[结论]构建的pPIC9K—BGP真核表达载体能在毕赤酵母中成功表达分子量为5.8kDa的hBGP蛋白,经纯化后目的蛋白纯度在95%以上。
  • 人Notch信号通路中Jagged1基因的克隆与真核表达
  • [目的]克隆人Notch信号通路中配体Jagged1基因并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获取Jagged1基因,并克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4。经酶切、PCR和测序鉴定后,将重组质粒Jagged1-pCMV-Tag4瞬时转染HEK 293T细胞,通过Q-PCR和Western blot检测目的蛋白的表达。[结果]成功构建了真核表达质粒Jagged1-pCMV-Tag4并在HEK 293T细胞中瞬时表达。[结论]Jagged1在HEK 293T细胞中实现瞬时表达,为稳定表达和进一步研究Jagged1/Notch信号通路奠定基础。
  • 小鼠神经细胞粘附分子胞内段原核表达载体构建及表达
  • [目的]构建小鼠神经细胞粘附分子胞内段(NCAM ICD)原核表达载体,诱导蛋白表达,并进一步对蛋白进行纯化和鉴定。[方法]以小鼠脑c DNA文库为模板,采用PCR技术分别扩增NCAM跨膜亚型NCAM140及NCAM180的胞内片段,连接p JET1.2克隆载体。经DNA测序正确后,构建pET29b-NCAM140 ICD及pET29b-NCAM180 ICD原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导目的蛋白的表达,经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱纯化,以Western blot和质谱的方法鉴定表达的蛋白。[结果]成功构建了pET29b-NCAM140 ICD及pET29b-NCAM180 ICD原核表达质粒,并用Western blot及质谱法证实NCAM140 ICD及NCAM180 ICD蛋白的表达,分子量分别约为25 kDa及80 k Da。[结论]该方法成功构建小鼠pET29b-NCAM140 ICD及pET29b-NCAM180 ICD原核表达载体,实现了其蛋白表达,为进一步研究NCAM ICD的功能奠定了基础。
  • 大鼠骨髓间充质干细胞VDR和CYP27B1的表达
  • [目的]探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)中维生素受体(vitamin D receptor,VDR)和CYP27B1的表达。[方法]首先以全骨髓贴壁法分离得到大鼠BM-MSCs,通过成骨和成脂诱导分化鉴定其分化潜能,再通过RT-PCR检测大鼠BM-MSCs中VDR和CYP27B1的mRNA表达。[结果]从大鼠骨髓中分离得到具有成骨和成脂分化潜能的BM-MSCs,VDR和CYP27B1基因在大鼠BM-MSCs中有表达,其相对于β-actin的mRNA值分别为1.10和0.39。[结论]这为维生素D3在大鼠BM-MSCs的自分泌和旁分泌代谢研究奠定基础,为维生素D3治疗骨质疏松的研究提供理论依据。
  • 重叠延伸PCR法合成栀子两个糖基转移酶基因
  • [目的]糖基转移酶UGT94E5和UGT75L6催化栀子果实中西红花总苷生物合成途径的末端步骤。该研究利用重叠延伸PCR法,合成编码这两个酶的基因序列。[方法]首先将基因分段,每段两端均加上p UC57载体的多克隆位点作为接头,拼接成800 bp以下的片段,再输入到DNAWorks软件中,获得最优寡核苷酸片段组合;将合成的寡核苷酸片段混合,用作模板,进行两次PCR扩增,获得加了接头的各段序列,亚克隆到自制的p UC57 T载体上。酶切后回收插入片段,混合,用作模板,扩增全长基因,产物克隆到自制的p UC57 T载体上。[结果]成功合成了栀子Gj UGT9(编码UGT94E5)和Gj UGT1(编码UGT75L6)基因,分别长1 496 bp和1 583 bp。[结论]重叠延伸PCR法能够有效地合成栀子两个糖基转移酶基因序列,为遗传操作奠定了基础。
  • 溶藻弧菌毒力菌株SSH文库的构建
  • [目的]通过构建基因文库为溶藻弧菌毒力基因的鉴定、致病机理的阐明奠定基础。[方法]应用抑制性差减杂交技术(suppression subtrative hybridization,SSH),以毒力菌株HN08155为测试子(Tester),构建了溶藻弧菌毒力菌株HN08155的SSH差减文库。[结果]文库共含有2 873个克隆;通过菌落PCR鉴定,2 786个克隆能扩增出250~1 000bp大小的目标片段;通过Southern斑点杂交,确定毒力菌株特异基因的阳性克隆347个,经测序和同源性比对分析,其中135个克隆的序列含有已知的77个基因,其中46个基因主要为代谢途径的多种酶类的编码基因,23个基因为其它基因,8个为毒力相关功能基因。[结论]这些毒力相关功能基因包括丝氨酸蛋白酶基因prk A、热休克蛋白基因dna J、趋化因子基因che W、甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis protein)基因、双组分感应子(two-component sensor)基因、Ⅳ型菌毛(typeⅣpilin Pil A)基因、生物膜相关的表面蛋白(biofilm-associated surface protein)基因和外膜蛋白(outer membrane protein)基因;该文库中还含有166个未知新基因,占文库中总基因数的68.44%,溶藻弧菌的毒力基因很可能存在于这个文库中的未知新基因中。
  • 八眉猪SLA-DRA基因第4外显子多态性分析
  • [目的]研究八眉猪SLA-DRA基因第4外显子的多态性,确定其等位基因数以及核苷酸和氨基酸变异位点,探讨其遗传特性。[方法]采用PCR-SSCP和克隆测序的方法对八眉猪SLA-DRA基因第4外显子进行多态性检测。[结果]八眉猪SLA-DRA基因第4外显子共有3种等位基因(A、B、C),形成3种基因型(AA、BB、BC),其中B为优势等位基因,BC为优势基因型。序列对比结果表明,八眉猪SLA-DRA基因第4外显子共有3个核苷酸突变位点(c.4167A〉G、c.4246A〉G和c.4282C〉T),其中4 167 bp的突变导致谷氨酰胺(Q)突变为精氨酸(R)。群体遗传学分析表明,八眉猪SLA-DRA基因第4外显子的多态信息含量为0.3953,杂合度为0.7241,且八眉猪在SLA-DRA基因第4外显子上偏离了Hardy-Weinberg平衡(p〈0.01)。[结论]八眉猪SLA-DRA基因的第4外显子属于中度多态,并呈现出杂合子优势。
  • 褐环乳牛肝菌磷酸盐转运蛋白PHO84的生物信息学分析
  • [目的]褐环乳牛肝菌作为针叶树种上重要的外生真菌,为宿主植物提供着重要的营养元素和水分,然而,对于该菌为宿主植物提供磷营养元素的机制尚不清楚。磷酸盐转运蛋白PHO84参与磷酸盐的调控系统,在磷酸盐转运过程以及细胞信号转导过程中发挥着重要作用。[方法]基于酿酒酵母中已经报道的PHO84序列,对褐环乳牛肝菌蛋白质数据库进行Blastp比对以及关键词搜索,以及生物信息学分析。[结果]该菌中存在3个PHO84,上述PHO84含有9~12不等的跨膜结构域,均为疏水性蛋白,均定位于细胞质膜上。[结论]该研究为进一步解析外生真菌为宿主植物提供磷营养的机制提供理论支持,也为进一步开展其他磷酸盐转运蛋白的研究提供理论指导。
  • 人线粒体转录延伸因子蛋白结构与功能的生物信息学分析
  • [目的]基于生物信息学方法分析人线粒体转录延伸因子TEFM蛋白的结构和功能。[方法]检索Uniprot数据库中人线粒体转录终止因子TEFM蛋白的氨基酸序列,利用生物信息学方法对人TEFM的理化性质、物种间的蛋白质同源性、跨膜区、亲水性/疏水性、亚细胞定位、蛋白质二级结构、保守结构域、蛋白质三级结构、蛋白质相互作用进行预测与分析。[结果]人TEFM全长360个氨基酸,理论等电点9.39,属于TEFM蛋白超家族,不含跨膜区,属于亲水蛋白;人TEFM含有一个保守的螺旋-发夹-螺旋(HHH_3)结构域,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三维建模空间结构与二级结构预测结果相符,进一步分析建模结果可靠。与人TEFM相互作用的蛋白质均为线粒体DNA转录因子或线粒体RNA聚合酶。[结论]人TEFM具有线粒体转录延伸因子蛋白超家族的典型结构,生物信息学分析结果对深入研究人TEFM在线粒体基因转录调控中的作用具有一定的理论指导意义。
  • 云南和西藏四处热泉中的厚壁菌门多样性
  • [目的]厚壁菌门(Firmicutes)在热泉这一极端环境中的多样性目前还缺乏深入细致的研究,故选择国内最具代表性的云南和西藏地区的4处热泉,详细研究其中厚壁菌门的物种和遗传多样性。[方法]采用高通量测序技术、生物统计学和系统发育分析的手段。[结果]获得的728条厚壁菌门16SrRNA基因序列,可划分为184个可操作分类单元(OTUs)。梭菌纲(Clostridia)在各热泉中都为最优势类群,占到了群落结构的51%~93%;其次是芽孢杆菌纲(Bacilli),它在除洱源2号泉外的其它样点中均存在,群落比例为4%~21%。57%的OTUs与已知序列的最大相似性小于97%,其可能代表了潜在的新物种,而系统发育分析的结果发现了若干全新的高级分类单元。[结论]热泉中蕴含丰富而新颖的厚壁菌门资源。温度是影响研究样点厚壁菌门群落结构的重要因素,温度越低多样性越丰富。
  • 人17号染色体计数探针的制备及应用
  • [目的]利用PCR法(链式聚合酶反应)制备17号染色体的绿色荧光计数探针。[方法]首先通过对人类基因组17号染色体着丝粒序列分析,找出其特异性的重复序列,设计引物,通过PCR法制备绿色荧光探针,然后利用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检验所制备17号染色体计数探针质量。[结果]FISH实验结果显示,利用PCR法制备的计数探针荧光信号清晰可辨。[结论]PCR法可良好地应用于17号染色体计数探针(Chromo-some 17 enumeration probe,Cep17)的制备,制备的探针可用于相关疾病的检测。
  • 重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化
  • [目的]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化研究。[方法]选用国产肠激酶,在不同反应条件下酶切重组融合蛋白,15%的SDS-PAGE检测切割产物,并利用Ni2+亲和层析色谱联合肝素亲和层析色谱对酶切产物进行分离纯化。[结果]0.8 U的肠激酶在温度为10℃下酶切72 h能够完全裂解50μg融合蛋白。酶切产物经亲和层析色谱纯化,可获得电泳纯达99%的目的蛋白。[结论]重组融合蛋白Trx-IFN-CSP经肠激酶酶切及纯化后,可获得纯度达99%的肝靶向干扰素IFN-CSP单体,为进一步研究肝靶向干扰素的生物学活性及产业化开发奠定了基础,也为融合蛋白后处理工艺提供了技术借鉴。
  • 二烯丙基二硫化合物对食管癌Eca109细胞抑制作用
  • [目的]探究二烯丙基二硫化合物(DADS)对人食管癌细胞Eca109生长活性、增殖抑制及细胞周期的影响。[方法]以不同浓度的DADS处理Eca109细胞,MTT法检测细胞的生长曲线和增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)测定细胞周期阻滞情况。Hoechst33258染色法并在荧光显微镜下观察细胞形态变化。[结果]DADS呈时间和剂量依赖性抑制Eca109细胞生长,272μmo L/L DADS作用Eca109细胞72 h,细胞增殖抑制率达到64.3%,IC50为100μmo L/L;荧光显微镜及流式细胞术结果显示DADS促使Eca109细胞形态发现显著变化,且出现凋亡小体,同时呈剂量依赖性阻滞细胞周期进程于G2/M期。[结论]大蒜DADS抗肿瘤的机制可能是通过细胞增殖抑制促使细胞发生形态变化,并将细胞周期阻滞在G2/M期,最终导致肿瘤细胞发生凋亡。
  • 盘基网柄菌发育机制研究进展
  • 盘基网柄菌细胞与哺乳类细胞在行为、结构和信号通路方面,有很多相同或相似之处。用其作为研究发育机制的模型,为解决哺乳类发育中的一些难题可以发挥重要作用。该文详细讨论了分化诱导因子DIF-1、环磷酸腺苷c AMP、转录因子Srf A和Stk A、粘附分子gp150在盘基网柄菌发育过程中的作用及机制。关于DIF-1、c AMP和gp150信号通路间相互关系还缺乏系统研究,值得进一步深入研究。对这类问题进行深入研究可能有助于阐明多细胞动物起源及演化机制。
  • 茉莉酸介导丛枝菌根形成及其诱导抗病性研究进展
  • 丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi,AMF)与大多数植物共生可增强植株对病原菌的抗性,而茉莉酸(jasmonic acid,JA)在丛枝菌根(arbuscular mycorrhiza,AM)的形成以及植物对病原菌的抗性方面具有积极的作用。因此,该文旨在讨论茉莉酸介导的丛枝菌根诱导的植物抗病性可能机理,以期为抗病性应用提供尽可能多的理论支撑。首先,总结了茉莉酸与丛枝菌根的相关性;其次,对茉莉酸介导的丛枝菌根诱导的抗病性研究进展及可能机理做出归纳;最后,对未来的研究方向及方法进行了展望。
  • [论著]
    决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建(李洋洋;阿尔古丽;俞继华;吴鹏飞;许维嘉;李娟娟;刘祖碧;王万军;周嘉裕;谭睿;廖海)
    溶藻弧菌耐药基因qnr的克隆及生物信息学分析(周维[1,2];汤菊芬[1,2];甘桢[1,2];简纪常[1,2];吴灶和[2,3];丁燏[1,2])
    花生FAD8基因的克隆及生物信息学分析(李田;孙景宽;董波涛)
    单纯疱疹病毒gG1基因植物表达载体的构建(严慧深[1,2];纪剑峰;严华)
    人骨钙素真核表达载体构建及蛋白表达纯化(张磊;刘磊;李大鹏;李艳;王会岩)
    人Notch信号通路中Jagged1基因的克隆与真核表达(叶健斌;陈中标;梁来妹;杨宜;宁立军;宁云山[1,2];李妍)
    小鼠神经细胞粘附分子胞内段原核表达载体构建及表达(高月;黄睿;储成艳;马郁芳;李深)
    大鼠骨髓间充质干细胞VDR和CYP27B1的表达(何琳琳;兰飞)
    [技术与方法]
    重叠延伸PCR法合成栀子两个糖基转移酶基因(王晓云[1,2,3];雷志强;王邵华;王鹏良)
    溶藻弧菌毒力菌株SSH文库的构建(梅冰;谢珍玉;王世峰)
    八眉猪SLA-DRA基因第4外显子多态性分析(谭小音;金丽;谢德琼;李晓梅;张丽;刘丽霞)
    褐环乳牛肝菌磷酸盐转运蛋白PHO84的生物信息学分析(韩长志)
    人线粒体转录延伸因子蛋白结构与功能的生物信息学分析(杨勇琴[1,2];张晓娟;孙美涛;张海洋;李雅;熊伟[1,2])
    云南和西藏四处热泉中的厚壁菌门多样性(宋兆齐;王莉;刘秀花;梁峰)
    [开发与应用]
    人17号染色体计数探针的制备及应用(李三华[1,2];牛银银[1,2];翟晋豫[1,2];刘玲玲[1,2];刘文第;齐华[1,2])
    重组融合蛋白Trx-IFN-CSP的肠激酶酶切及纯化(卢雪梅[1,2];黄演婷[1,2];金小宝[1,2];朱家勇[1,2])
    二烯丙基二硫化合物对食管癌Eca109细胞抑制作用(王为兰;索菲娅;郑秀芬;汪胜;李林;苟萍;杨金部)
    [专题综述]
    盘基网柄菌发育机制研究进展(薛德明[1,2];刘丹丹)
    茉莉酸介导丛枝菌根形成及其诱导抗病性研究进展(赵诗阳;朱颖;刘金洋;郝林)
    《生物技术》封面

    主管单位:黑龙江省科学院

    主办单位:黑龙江省微黑龙江省科学院微生物研究所

    主  编:沙长青

    地  址:哈尔滨市道里区兆麟街68号

    邮政编码:150010

    电  话:0451-84615121

    电子邮件:swjszz@163.com swjszzxxw@163.com

    国际标准刊号:issn 1004-311x

    国内统一刊号:cn 23-1319/q

    邮发代号:14-225

    单  价:10.00

    定  价:60.00


    关于我们 | 网站声明 | 合作伙伴 | 联系方式 | IP查询
    金月芽期刊网 2019 触屏版 繁體版 电脑版 京ICP备13008804号-2