设为首页 | 加入收藏
文献检索:

对氧磷脂酶-1基因多态性与脑梗死的相关性研究


□ 钱加强;张志坚;张萍;林经安;李秋兰

福建医科大学附属第二医院神经内科 福建省泉州362000 福建医科大学附属第一医院神经内科 福建省泉州362000 福建医科大学附属第二医院高压氧室 福建省泉州362000 福建医科大学附属第一医院中心实验室 福建医科大学附属第二医院中心实验室

摘 要:

目的探讨福建地区汉族人群动脉硬化性脑梗死患者血清对氧磷脂酶-1(PON-1)活性及其基因多态性与脑梗死的关系。方法把研究对象分为脑梗死组和对照组,用分光光度法检测这两组研究对象血清对氧磷脂酶-1(PON-1)活性,同时检测血浆氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的变化,并把这些指标与PON-1的活性作相关分析。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术检测PON-1192RR与55LL基因的多态性,用Logistic回归分析脑梗死组及对照组的基因型与其他危险因素的相关性。数据采用t检验及χ^2检验。结果脑梗死组和对照组的PON-1活性均在已报道的中国人正常范围内,与对照组相比,脑梗死组血清PON-1活性明显降低(t=2.2142,P〈0.05)。相关分析表明血PON-1活性与血OX—LDL呈负相关(r=-0.339,P〈0.01),差异具有统计学意义,血PON-1活性与HDL-C无相关性。PCR结果表明PON-1192基因的多态性在脑梗死组与对照组有明显不同,其中脑梗死组的RR基因型分布频率明显高于对照组(31.3%vs24.6%,P=0.01,χ^2=5.74),而PON-155基因的多态性在两组间差异无统计学意义(78.13%vs76.78%,P=0.29,χ^2=1.1)。分析还表明PON-1192RR基因型的PON-1活性低于其它PON-1基因型,差异有统计学意义(P〈0.001)。Logistic回归分析提示PON-1192RR基因型是脑梗死的危险因素(OR=1.8,95%CI0.16~5.08),高血压也是脑梗死的危险因素,而PON-155LL基因型可能不是脑梗死的危险因素。PON-1基因型与PON-1活性在高血压与非高血压组之间的差异无统计学意义。结论脑梗死组血清PON-1活性明显低于对照组,而且PON-1192RR基因型分布频率高与对照组,与此同时,PON-1192RR基因型的PON-1活性低于其它PON-1基因型,提示脑梗死组血清PON-1活性及PON-1192RR基因多?


  [摘要]目的 探讨福建地区汉族人群动脉硬化性脑梗死患者血清对氧磷脂酶-1(PON-1)活性及其基因多态性与脑梗死的关系。方法把研究对象分为脑梗死组和对照组,用分光光度法检测这两组研究对象血清对氧磷脂酶-l(PON-1)活性,同时检测血浆氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的变化,并把这些指标与PON-1的活性作相关分析。采用聚合酶链反应,限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测PON-1 192RR与55LL基因的多态性,用Logistic回归分析脑梗死组及对照组的基因型与其他危险因素的相关性。数据采用t检验及Y2检验。结果脑梗死组和对照组的PON-1活性均在已报道的中国人正常范围内,与对照组相比,脑梗死组血清PON-1活性明显降低(t=2.2142,P<0.05)。相关分析表明血PON-1活性与血OX-LDL呈负相关(r=-0.339,P<0.01),差异具有统计学意义,血PON-1活性与HDL-C无相关性。PCR结果表明PON-1192基因的多态性在脑梗死组与对照组有明显不同,其中脑梗死组的RR基因型分布频率明显高于对照组(31.3%w 24.6%,P=0.01,x2=5.74),而PON-155基因的多态性在两组间差异无统计学意义(78.13%w 76.78%,P=0.29,x2=1.1)。分析还表明PON-1192RR基因型的PON-1活性低于其它PON-1基因型,差异有统计学意义(P<0.001)。Logistic回归分析提示PON-1192RR基因型是脑梗死的危险因素(OR=1.8,95%CI 0.16-5.08),高血压也是脑梗死的危险因素,而PON-1 55LL基因型可能不是脑梗死的危险因素。PON-1基因型与PON-1活性在高血压与非高血压组之间的差异无统计学意义。结论 脑梗死组血清PON-1活性明显低于对照组,而且PON-1192RR基因型分布频率高与对照组,与此同时,PON-1 192RR基因型的PON-1活性低于其它PON-1基因型,提示脑梗死组血清PON-1活性及PON-1192RR基因多态性与脑梗死的发生有关,而高血压是脑梗死的独立危险因素。
  [关键词]对氧磷脂酶.1;基因多态;动脉硬化;脑梗死
  研究发现氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)是导致动脉粥样硬化的重要因素,它在泡沫细胞形成过程中起重要作用。而动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要病理基础研究,对氧磷脂酶-1(PON-1)能阻止泡沫细胞的形成及动脉粥样硬化的发生。近几年来有关PON-1与冠心病、心肌梗死及糖尿病的关系,已有较多研究,但与脑梗死的关系研究却较少。同时,Schmidt等报道PON-1基因的多态性也与脑血管疾病的发生发展密切相关,但在中国人群的情况尚未见报道。
  
  1 资料与方法
  
  1.1 对象
  1.1.1 脑梗死组 127例,为2002年4月至2004年2月住院治疗的动脉硬化性脑梗死患者,发病在72 h以内,经头颅CT或MRI证实。脑梗死诊断均符合1995年全国脑血管病会议制定的各类脑血管病诊断标准;均排除动脉炎、脑栓塞、肿瘤、脑炎、糖尿病及肝病等疾患,其中男68例,女59例,年龄36-88(64.1±1.02)岁,组内患有高血压者69例,高血压标准为收缩压≥140 mmHg或(和)舒张压≥90 mmHg。有吸烟者36例。
  
  1.1.2 对照组 128例,其中男62例,女66例,年龄31-84(62.7±0.91)岁,患有高血压者48例,有吸烟者31例。均为体检或外伤住院者,经体检证实均排除糖尿病、肝病。
  全部患者的血样均在使用抗氧化剂前空腹采取肘静脉血,-20℃冰箱保存,统一检测。全部研究对象均用美国贝克曼生化仪测量其血糖、肝功能、HDL-C。
  
  1.2检测指标及方法
  1.2.1 血浆OX—LDL 采用酶联免疫吸附法(ELISA),试剂盒分别由北京中联生物工程公司提供,操作均严格按说明书进行。
  
  1.2.2 血清PON-1活性 采用分光光度法测定。以酚乙酸酯(美国Sigma公司产)为底物进行检测,即血清用20 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)1:10稀释,取30μl加入3 ml预温的反应液(1mmol/L的酚乙酸酯,0.9 mmol/L的CaCl2,20mmol/L的Tris—HCI,pH 8.0),立即摇匀,采用北京瑞利分析仪器公司的紫外分光光度仪,利用动力学测量,于25℃下以波长270 nm测定3 min内吸光度的变化率,酚乙酸酯的E270为1310 mol/cm,PON-1酶活性单位定义为1 u,相当于1 ml血清在25℃、270 nm的条件下,1 min水解1肚mol酚乙酸酯底物。
  
  1.2.3 PON-1的192与55基因位点的多态性检测方法常规方法提取外周血白细胞DNA,以100 ngDNA为模板在总容积为25μl内,置于PE9600热循环仪(美国PE公司产)中进行PCR反应,PON-1的192/55基因检测的引物,根据文献[6]报道的引物序列委托上海生工公司合成。
  PCR反应参数为:94℃3 min后,按94℃60s,60℃60 s,72℃60 s,反复循环35次,最后72℃延伸7 min,结束PCR反应。各取PON-1的192和55PCR产物分别用相应的10-15 u内切酶(NewEngland BioLabs公司的酶Alw I和NlaⅢ酶),按照操作说明书进行酶切反应,消化后用2%琼脂糖(AMRESC0公司)凝胶电泳。284 bp的PON-1 192PCR产物酶切出现192和92 bp判定为RR纯合型,出现284 bp判定为QQ纯合型,284、192和92 bp判定为RQ杂合型;170 bp的PON-1 55 PER产物酶切后仍然为170bp判定为IL纯合型,170 bp酶切出现126和44bp判定为MM纯合型,同时出现170、126和44 bp判定为LM杂合型。
  
  1.3统计学方法
  计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组间均数的比较采用成组t检验;计数资料行x2。检验。PON-1与OX-LDL之间的线性关系行直线相关分析。基因型与危险因素间关系用Logistic回归分析进行分析处理。所有数据均采用SPSS 11.0统计软件计算完成,以P<0.05为差异具有统计学意义。
  
  2 结果
  
  两组受试者年龄、性别、吸烟及HDL-C等临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05),。而作为脑梗死的独立危险因素的高血压在两组问是又差别的。与对照组相比,两组受试者血清PON-1活性均在中国人正常值参考范围内(45.50-268.80 U/m1),但脑梗死组患者血清PON-1活性低于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05);而OX-LDL高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。 ......(未完,请点击下方“在线阅读”)
特别说明:本文献摘要信息,由维普资讯网提供,本站只提供索引,不对该文献的全文内容负责,不提供免费的全文下载服务。

关于我们 | 网站声明 | 合作伙伴 | 联系方式 | IP查询
金月芽期刊网 2021 触屏版 繁體版 电脑版 京ICP备13008804号-2