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    • 牛磺酸对急性出血坏死性胰腺炎并发肺损伤大鼠的保护作用 免费阅读 下载全文 相关:牛磺酸 AHNP 肺损伤
    • 目的:研究牛磺酸对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)并发肺损伤大鼠的保护作用,并就其作用机制进行探讨。方法:将120只Wister大鼠随机分成假手术组fSO组)、AHNP生理盐水处理组、AHNP牛磺酸预防组。观察每组大鼠的死广时间,计算死亡率及平均存活时间,测定肺血管通透性。分别于术后4、8h测定每组大鼠血清PLA2、LPO及TXB2和6-keto-PGFlao称肺重量,计算肺系数;苏木精-伊红染色,光镜下观察。结果:AHNP牛磺酸预防组平均存活时间较生理盐水处理组明显延长(P〈0.05);AHNP牛磺酸预防组肺微血管壁通透性较生理盐水处理组显著降低(P〈0.05);AHNP牛磺酸预防组TXB2/6-keto-PGF1a较生理盐水处理组显著降低(P〈0.05)。牛磺酸能明显改善肺组织的病理损害,使肺水肿减轻,肺系数降低。结论:牛磺酸能减轻AHNP并发肺损伤的程度,从而减少ARDS的发生,改善AHNP的预后。
    • 环孢霉素A对老龄大鼠慢性脑灌注不足脑损害的防护作用 下载全文 相关:环孢霉素A 脑损害 脑灌注不足
    • 目的 探讨免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对老龄大鼠慢性脑灌注不足脑损害的防护作用和可能机制。方法 30只老龄大鼠持久性双侧颈总动脉结扎(2VO),其中12只接受CsA胃灌治疗。脑组织学改变采用光镜和电镜观察。CsA作用的研究为持久性2VO2月。结果 大鼠持久性2VO诱导的慢性脑灌注不足造成了大脑多发性脑梗死,进行性皮层和海马神经元退变以及脑白质损害,CsA治疗后脑损害明显减轻。结论 免疫抑制剂Cs
    • 血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖过程中呋喃二氢吡啶二羧酸酯的抑制作用 免费阅读 下载全文 相关:呋喃二氢吡啶 血管紧张素Ⅱ 抑制作用
    • 背景:血管平滑肌细胞是血管壁的主要细胞成份之一,在动脉粥样硬化中所起的病理作用已得到证实和认同。如何抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移而起到预防冠心病的作用已成为人们研究的热点问题之一。目的:观察呋喃二氢吡啶二羧酸酯对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响。设计:以体外培养的兔胸主动脉血管平滑肌细胞为研究对象进行随机对照研究。单位:一所军医大学附属医院心脏内科。材料:实验于2003-08/2004-06在第四军医大学西京医院心脏内科实验室完成,选用新西兰兔5只,将动物细胞随机分为对照组,血管紧张素Ⅱ组,血管紧张素Ⅱ+吡啶二羧酸酯组。方法:高脂喂养新西兰兔,再用球囊损伤其胸主动脉内摸,取胸主动脉分离血管平滑肌细胞进行培养,实验采用培养的兔血管平滑肌细胞,应用3H-TdR掺入法,观察在血管紧张素Ⅱ促进血管平滑肌细胞增殖过程中,呋喃二氢吡啶二羧酸酯对血管平滑肌细胞DNA合成的影响及其时间效应。主要观察指标:记录各组细胞3H—TdR掺入的放射强度,显示兔血管平滑肌细胞增殖过程中DNA的合成情况。结果:血管紧张素Ⅱ可促进兔血管平滑肌细胞DNA的合成,36h时细胞DNA的合成达到高峰,与对照组相比差异有显著性意义(358.00±49.01 vs 272.42±54.96,P<0.01)。呋喃二氢吡啶二羧酸酯对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现出明显的浓度依赖关系,即随着呋喃二氢吡啶二羧酸酯浓度的升高其血管平滑肌细胞增殖的抑制率也逐渐增加,36h时78.40μmol/L的呋喃二氢吡啶二羧酸酯与0.08μmol/L的呋喃二氢吡啶二羧酸酯相比其抑制作用明显增强(281.50±15.28 vs 349.25±32.10,P<0.05)。结论:呋喃二氢吡啶二羧酸酯可明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导的兔血管平滑肌细胞增殖,并存在一定的量效依赖关系及时间反应性,为动脉粥样硬化的一级康复预防提供了理论依据。
    • 诱导性表达Cre重组酶转基因载体的构建及鉴定 免费阅读 下载全文 相关:Cre重组酶 诱导性启动子 遗传载体
    • 背景:猪在遗传上与人类相似,因此猪是研究人类疾病最好的动物模型,而对于这方面的研究在国内外报道较少。目的:建立诱导性表达Cre重组酶的转基因载体。设计、时间及地点:单一样本观察,于200710/200805在吉林大学农学部畜牧兽医学院完成。材料:DH5a菌株E.coliDH5α,质粒pcDNA3.1(+)、PET28a(+)、pClneo,重组质粒PMD—Cre和猪成纤维细胞由北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室保存;重组质粒pGC—FRT2NeoRRRR和Mx1克隆载体pGL3-Mx1由意大利Stefano教授馈赠。方法:构建的载体包括以下元件:Mx1启动子用来启动Cre的表达,Cre的作用是工具便于以后做基因敲除,BGHpolyA是一个终止信号,FRT2NeoR中的FRT是FLP酶的识别位点便于切除筛选标记,NeoR是筛选标记。通过聚合酶链反应方法分别从pGL3Mx1载体上和pcDNA3.1(+)载体上扩增猪Mx1启动予和BGHpolyA。利用重叠聚合酶链反应方法获得猪源的Cre重组酶基因,并从pGCFRT2NeoR上用XholIandSalⅠ酶切得到FRT2NeoR盒子。将上述4个片段利用SOE—PCR及酶连接的方法用T4DNA连接酶连接,然后利用原核表达载体PET28a(+)构建出Cre表达载体Mx1—Cre—BGHpolyA.FRT2neoR。主要观察指标:Cre重组酶表载体PET28a(+).Mx1—Cre.BGHpolyA—FRT2neoR的鉴定。结果:PET28a(+)-Mx1—Cre—BGHpolyA.FRT2neoR重组质粒经NheI和NotI双酶切后完全符合理论上可切出的大小片段,载体构建成功。结论:成功的构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre.BGHpolyA—FRT2neoR。
    • 大鼠股骨开放截骨模型与闭合骨折模型制作的比较 免费阅读 下载全文 相关:大鼠 动物模型 骨折愈合
    • 背景:骨折动物模型无疑是研究骨折愈合的基石,其中开放截骨模型与闭合骨折模型是较成熟的两种长骨干骨折模型。就作者所查文献,未见关于大鼠两种模型比较研究的报道。目的:比较大鼠股骨开放截骨模型与闭合骨折模型的制作过程,并通过X射线摄片比较二者的骨折愈合情况。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/05在苏州大学附属第二医院骨科实验室完成。材料:SPF级雄性SD大鼠40只,体质量(220±30)g,随机分为开放截骨模型组与闭合骨折模型组,每组20只。电动摆锯;白行改良设计的闭合骨折模型打击器。方法:开放组行开放截骨术造成股骨中段横行骨折,逆行克氏针固定;闭合组行逆行克氏针固后,使用造模支架致股骨中段闭合骨折。主要观察指标:比较两组的平均造模时间,造模成功率及术后2,3,4,8周骨折愈合的X射线情况。结果:开放截骨模型每只造模成功率90%,平均造摸时间为17min,骨折畸形愈合及不愈合率40%;闭合骨折模型每只造模成功率85%,平均造模时间12min,未见畸形愈合及不愈合。术后2,3,4周X射线评分开放组均低于闭合组(P〈0.05),8周时开放组X射线评分仍较闭合组低,但差异无显著性意义(P〉0.051。结论:开放截骨模型造模时间长,骨折畸形愈合不愈合发生率高,近中期骨折愈合明显滞后,不适于近中期骨折愈合的研究。
    • 构建四氯化碳诱导的家兔肝纤维化模型 免费阅读 下载全文 相关:动物模型 家兔 肝脏
    • 背景:四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型常用于抗肝纤维化药物的筛选和评价,但目前很少有四氯化碳诱导兔肝纤维化模型的报道。目的:建立家兔肝纤维化动物模型,并观察造模过程中动物的肝脏功能和组织病理学变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-12/2008—04存解放军成都军区昆明总医院实验动物巾心完成。材料:40只普通级日本大耳家兔,雌雄各半,体质量1.75~2.25k,用于建立家兔肝纤维化动物模型。方法:40只家兔采用随机数字表法分为实验组m=30)和对照组(n=10)。实验组腹腔注射40gm四氯化碳橄榄油溶液,对照组腹腔注射等董生理盐水。1-3周四氯化碳剂量为0.1~0.2mL/kg,根据动物的情况每周注射2次:3-6周四氯化碳剂量调整为0.3-0.4mL/kg;6~8周为0.4~0.5mL/kg。于注药后4,8,12周分别留取肝组织和血清标本,进行苏木精一伊红染色病理观察和生化检测。主要观察指标:实验家兔肝脏大体及病理学改变,静脉血生化指标的变化。结果:纳入口本大耳家兔40只,造模20d时,实验组家兔死广4只,原因主要为急性肝坏死及对药物的耐受性差。40d时死亡1只;50d腹腔注射因药物误入血管死亡1只。①对照组家兔肝脏外观呈暗红包,病理切片示:肝小叶结构完整,肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。实验组8周时,肝脏呈暗紫色,表面有轻微粟粒样改变,病理切片示:肝细胞点状及点灶状坏死,汇管区炎症细胞浸润,呈早期纤维化症状。12周时,肝脏呈灰褐色,有较明显粟粒样改变。病理切片示:肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,肝细胞脂肪变性,问质纤维组织增生,有炎性细胞浸润,为明显肝纤维化症状。③家兔血生化指标随着注药时间的延长,白蛋白含量及白球蛋白比值逐渐下降,球蛋白、间接胆红素、直接胆红素逐渐升高,谷丙转氨酶、谷草转氨酶前期明显升高后期又有所下降。结论:长期给予四氯化碳可导致家兔的肝纤维化形成,并有较明显的阶段性变化。
    • 骨折愈合过程中降钙素基因相关肽表达与脑损伤的影响 免费阅读 下载全文 相关:脑损伤 骨折愈合 降钙素基因相关肽
    • 背景:临床观察及实验研究发现合并中枢神经损伤的骨折愈合加速,但其具体机制尚未明确。目的:观察股骨骨折合并脑损伤大鼠骨痂中降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化,探讨脑损伤对骨折愈合的影响及作用机制。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/10在华北煤炭医学院骨科实验室完成。材料:健康12周龄雌性SD大鼠64只,建立大鼠开放骨折模型。方法:骨折造模后64只SD大鼠随机数字法分为骨折合并脑损伤组和单纯骨折组,每组32只,骨折合并脑损伤组接着制备脑损伤模型。造模后7,14,21,28d分批麻醉并处死动物,苏木精-伊红染色观察骨折愈合情况,免疫组织化学染色及原位杂交检测降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化。主要观察指标:①造模后28d大鼠右侧股骨X射线平片表现。②造模后不同时间点两组大鼠骨痂苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及原位杂交结果。结果:64只SD大鼠均进入结果分析。①X射线平片显示与单纯骨折组相比,骨折合并脑损伤组骨折端骨痂形成早,骨痂量多。②苏木精-伊红染色示单纯骨折组呈典型骨折愈合过程,而骨折合并脑损伤组骨痂形成及改造提前,骨折愈合加速。免疫组织化学染色显示骨折愈合过程中内皮细胞、骨祖细胞、软骨细胞及成骨细胞表达降钙素基因相关肽。骨折合并脑损伤组造模后各时间点阳性细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P〈0.05)。原位杂交检测示骨折合并脑损伤组造模后7,14,21d表达降钙素基因相关肽mRNA的成骨细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P〈0.05)。结论:脑损伤对骨折愈合有促进作用,可能与合并脑损伤后降钙素基因相关肽及其mRNA表达水平升高有关。
    • 以黑色素浓集荷尔蒙受体为靶点高通量筛选细胞模型的建立 免费阅读 下载全文 相关:MCHR1 MCHR2 钙流检测
    • 背景:研究表明,激活黑色素浓集荷尔蒙(melanin concentrating hormone,MCH)受体可引起细胞内钙浓度的变化,通过检测钙浓度的变化可以反映受体的功能。目的:建立以MCHR为靶点的高通量筛选细胞模型。设计、时间及地点:对比观察,于2006-09/11在中国科学院北京基因组研究所药理组实验室完成。材料:人胎脑TotalRNA购自STRATAGENE公司,经中国科学院北京基因组研究所药理组反转录为cDNA文库;人胚肾细胞系HEK293由中国医学科学院基础所细胞中心提供。方法:首先从人胎脑cDNA文库中得到MCHR1和MCHR2的全长cDNA,并将其克隆到pcDNA3.1载体中,构建人MCHR1,MCHR2基因的表达质粒,继而转染人胚肾293,通过G418筛选建立了稳定的表达人MCHR1和MCHR2的细胞株;进一步通过人MCHR的内源激动剂MCH及人MCHR1的特异性激动剂HD-01和拮抗剂ATC0175来检测细胞株的功能和稳定性。主要观察指标:通过对钙离子敏感的荧光指示剂Fluo-3,检测细胞内部反映钙离子浓度变化的荧光值,通过荧光值计算出反映受体活性的半数有效浓度EC50和半数抑制浓度IC50值,以及反映系统可靠性的Z因子。结果:实验建立了稳定表达MCHR1,MCHR2的高通量药物筛选细胞模型,对所建立细胞模型的功能、稳定性、特异性、高通量等特点进行检测。MCHR1细胞模型对MCH的EC50值为17.72nmol/L,对起特异性激动剂HD-01和拮抗剂ATC0175的EC50和IC50分别为37.42nmol/L和13.6nmol/L。而MCHR2细胞模型对MCH的EC50值为3nmol/L,对HD-01和ATC0175则没有反应,MCHR1和MCHR2细胞模型的第1代和25代对激动剂和拮抗剂的反应是基本一样的。MCHR1和MCHR2细胞模型的Z因子为0.61和0.73,并对筛选条件进行了优化,确定了实验系统中细胞的数量为3×10^4个/孔和二甲基亚砜的终浓度为不超过10g/L系统最佳。结论:采用钙流测定方法可成功建立稳定的MCHR1和MCHR2筛选细胞株及可靠的筛选方法,该细胞模型可同时用于人MCHR激动剂与拮抗剂的筛选。
    • 肾间质纤维化动物模型中整合素连接激酶及相关因子的表达 免费阅读 下载全文 相关:整合素连接激酶 转化生长因子β1 α-平滑肌肌动蛋白
    • 背景:在各种原因引起的进展性慢性肾脏病中,均可见到肾间质纤维化现象,其病变程度与慢性肾脏病的预后甚为密切,并可作为预测肾功能恶化的一个十分准确的指标。目的:探讨整合素连接激酶、转化生长因子β1及α-平滑肌肌动蛋白与肾间质纤维化中的关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,2007-03/2008-01在新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室完成。材料:成年雄性SD大鼠72只,体质量(200±12)g。方法:72只大鼠随机分为假手术组、模型组和正常对照组,每组24只。模型组大鼠建立肾间质纤维化模型,术后1,3,7,14d麻醉后处死各组大鼠,取梗阻侧肾做苏木精-伊红、PAS及Masson染色。主要观察指标:以免疫组织化学方法检测整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达;反转录-聚合酶链反应检测整合素连接激酶的mRNA表达。结果:整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1在正常肾组织中表达量极少,但随间质病变的加重,表达量明显增加,与正常组织比差异有非常显著性意义(P〈0.001)。其与间质纤维化程度呈正相关(r=0.841,0.892,0.854,P〈0.001),在间质中的表达量也成正相关。结论:整合素连接激酶、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1随着间质病变程度的加重而明显增加,说明与肾间质纤维化的形成有密切关系。
    • 大剂量激素诱导建立兔股骨头缺血性坏死模型 免费阅读 下载全文 相关:股骨头坏死 糖皮质激素 疾病模型
    • 背景:目前尚无能较好地反映激素诱导性股骨头缺血性坏死病理变化过程的疾病模型,从而影响了对其发病机制的进一步观察。目的:通过给予兔大剂量地塞米松诱导出股骨头缺血性坏死模型,为临床机制研究提供实验动物模型。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-06/2005-08在安徽医科大学及附属医院动物实验室完成。材料:健康成年新西兰大白兔16只,雌雄各半,体质量3.0~3.2kg。地塞米松由江苏涟水制药有限公司提供,规格5g/L。方法:将新西兰大白兔随机分为2组,模型组给予臀肌注射地塞米松2.5mg/(kg·d),对照组臀肌注射生理盐水2mL/只,共6周。主要观察指标:于应用激素前后作血脂、凝血酶原时间检测,于2,4,6周行X射线片、光镜和透射电镜观察股骨头病理变化过程。结果:与对照组相比,模型组自第2周开始胆固醇水平明显升高(P〈0.05),三酰甘油水平从第1周起明显升高(P〈0.01),凝血酶原时间从第2周起明显缩短(P〈0.05),于第4周开始出现骨密度不均匀,6周时变化为股骨头软骨下区可见不规则的囊性透亮区,有局限性骨密度增高、硬化,关节间隙正常,骨小梁毛糙、变形,股骨干周围骨皮质变薄,2周时光镜下见骨髓腔内脂肪细胞明显增多、肥大,4周以后出现典型骨坏死;电镜观察坏死骨细胞经历了变性、坏死、溶解的病理过程。结论:采用大剂量糖皮质激素成功诱导建立了兔股骨头坏死模型。
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